1、医学ppt1第六章第六章呼吸系统疾病动物模型呼吸系统疾病动物模型医学ppt2一、慢性支气管炎概述 慢性支气管炎(chronic bronchitis)：指由感染或非感染因素引起的气管、支气管黏膜及其周围组织的慢性非特异性炎性反应。第一节 慢性支气管炎动物模型1.慢性支气管炎的定义：医学ppt32.慢性支气管炎的特点：2)咳痰或伴有喘息反复发作，每次持续3个月以上，连续2年以上的慢性病理过程。3)严重时可并发肺气肿或肺心病。4)初期症状较轻，常在冬季发病，春季转暖后症状缓解。晚期病性加重，季节性表现不明显，可常年存在。1)发病以老年人居多。医学ppt43.慢性支气管炎的病因：1)吸烟：长期烟民
2、2)感染：各种病原菌 3)理化因素：刺激性烟雾、毒气、粉尘、二氧化硫气体等。4)气候因素：寒冷 5)过敏反应 6)呼吸道局部防御及免疫功能降低 7)自主神经功能失调医学ppt5二、慢性支气管炎造模方法1.吸入毒气方法造模有毒气体造模方法造模时间总观察时间含2%SO2的空气每天1次，每次吸气10秒连续14-18天为轻度，连续27为重度97天含0.001-.004mg/LCl2的空气每天1次，每次吸气25-30分钟连续35天后可出现慢性支气管炎症状50天含氨气的空气第天8次，每次吸气2-3分钟，每次间隔15-20分钟连续32天后可出现慢性支气管炎症状100天（一）吸入单一有毒气体法医学ppt62.
3、吸入SO2法的特点1)小鼠出现刺激性咳嗽，体重不增，少数死亡。2)支气管病理改变：早期为急性炎症，12天后出现淋巴细胞、浆细胞浸润，继而支气管周围结缔组织增生，27天后显示为重度慢性支气管炎。3)支气管腔内粘液阻塞，气管上皮坏死，杯状细胞和气管平滑肌增生，肺泡腔扩大，部分肺泡融合成肺大泡。此法还可观察到：气道和肺组织毒蕈碱型受体(M受体)及功能改变。医学ppt73.吸入SO2法的优、缺点和应用优点：1)此法稳定可靠，成功率高，为最常用的慢性支气管炎模型；2)需要观察气道和肺组织毒蕈碱型受体(M受体)及功能改变的，吸入SO2法最好。缺点：1)此法需要每天检测SO2浓度，所需设备和操作复杂，耗时费
4、力。2)SO2为有害气体，吸入后动物发生严重气道内病变，常导致动物死亡。应用：最常用的慢性支气管炎动物模型医学ppt81.吸入烟雾方法造模有毒气体造模方法造模时间含混合烟雾的空气将大鼠置于27m2的烟室内制烟，每天制烟1次，每周6次。连续44天含香烟烟雾的空气将豚鼠置于21L容器中制烟，每天烟熏2次，每次10分钟，每周烟熏6天。同时，置于7-8环境中，每次1小时，隔天1次。45天后改为每周2次。连续28-35天后轻度，42天后可出现重度慢性支气管炎症状（二）吸入烟雾法医学ppt92.吸入烟雾法的特点1)随着吸入烟雾时间延长，气管炎病变逐渐加重，至第7周形成慢性支气管炎典型改变。2)气管炎症细胞
5、特点：初期以巨噬细胞为主，随后以淋巴细胞为主，中性粒细胞仅在接触烟雾的早期短时间内升高。医学ppt103.吸入烟雾法的优、缺点和应用优点：1)此法简单易行，合并出现其它疾病情况少。2)此法起病较缓，可以反映慢性支气管炎早期炎症形成的系列过程。缺点：烟雾吸入(烟熏)法需要较长时间，考验耐心。应用：特别适用于研究慢性支气管炎发生发展过程中需要探讨不同阶段的病理变化及相应的炎症细胞的浸润、炎性标志物的变化。医学ppt111.病菌滴鼻的方法造模菌液造模方法造模时间流感病毒液，1：320；或者流感杆菌液，7108个/ml 小鼠乙醚麻醉后，将菌液(0.03ml/只)滴鼻，每天1次连续3-6天后，支气管上皮
6、轻度坏死，连续35天后，典型慢支症状4种细菌混合液3%戊巴比妥麻醉大鼠，将混合菌液(0.1ml/只)滴鼻，每周1次连续6周后可出现轻度慢支症状寒冷环境及8种细菌混合液将豚鼠置于7-8环境中，每次1小时，隔天1次。45天后改为每周2次。同时，8种细菌混合液(0.2ml/只)滴鼻。150天后可出现慢性支气管炎症状（三）病菌滴鼻法医学ppt122.病菌滴鼻法的特点1)更接近于临床实际情况2)感染2天后小鼠出现毛松、咳嗽、食欲缺乏等3)感染3-6天后出现气管上皮轻度坏死，杯状细胞数目初期下降，约10天后逐渐升高4)感染35天后出现典型的慢性支气管炎症状5)感染50天后逐渐恢复正常医学ppt133.病菌
7、滴鼻法的优、缺点和应用优点：1)由于采用病原菌摸拟临床感染状况，故更接近临床实际情况 2)由于呼吸道感染病源菌众多，故采用最合适的病菌滴鼻，对探讨不同病源菌导致慢性支气管炎的发病机制有很的应用价值。缺点：1)致病菌混合的制备有一定难度 2)不同致病菌引起的慢性支气管炎有较大差异 2)可能导致研究人员的感染应用：主要适用于探讨慢性支气管炎病因（不同致病菌）、诱因，以及要求模拟临床实际情况的实验研究医学ppt141.气管内滴注内毒素的方法1）将大鼠用1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉；2）仰卧位固定，拉出舌体，暴露声门，快速将套管穿过声门，插入气管；3）将内毒素（浓度200g/200l）注入气管；4）大鼠
8、饲养34周后，逐渐出现慢性支气管炎表现。此法由于要做全麻手术和气管插管，比较麻烦，对大鼠损伤也大。（四）气管内滴注内毒素法医学ppt152.气管内滴注内毒素法的特点1)用毒素代替致病菌，克服了致病菌混合液难制备的问题2)气管滴注脂多糖(LPS)约21天后，小鼠出现倦怠、毛发失泽、进食和饮水均减少3)支气管病理改变：气管、支气管上皮脱落，杯状细胞及粘液腺细胞增生，慢性炎症细胞浸润，平滑肌细胞增生肥大，管壁增厚4)支气管腔内充满粘液及大量中性粒细胞医学ppt163.气管内滴注内毒素法的优、缺点和应用优点：1)克服了致病菌混合液难制备的问题 2)避免了导致研究人员感染病菌的风险 3)不需要象SO2吸
9、入法那样，天天测SO2浓度缺点：1)当滴注LPS过量时，可能会导致内毒素血症，引起急性肺损伤。这与复制慢性支气管炎疾病模型思路相冲突 2)不象致病菌滴鼻法那样贴近临床，已经与临床实际情况有较大差异 3)需要做全麻手术和气管插管，比较麻烦，对大鼠损伤也大应用：适用于嫌病致菌制备难，天天测SO2麻烦，专注于慢性支气管炎发生发展机制研究医学ppt17例一、构建熏烟致慢性支气管炎小鼠模型医学ppt18医学ppt19医学ppt20医学ppt21医学ppt22医学ppt23医学ppt24医学ppt25医学ppt26结 论医学ppt27一、支气管哮喘概述 支气管哮喘(bronchial asthma)：指由
10、于某些过敏因素引起的以支气管阻塞为特点的疾病。1.支气管哮喘的定义：2.哮喘的特征：阵发性带有哮鸣音的呼吸困难、咳嗽、咳痰，且反复发作。一般春、秋二季发病率较高，20%患者有家族史。第二节 支气管哮喘动物模型医学ppt283.支气管哮喘的危险因素：1)吸入性过敏原：花粉、真菌；尘螨、动物毛发及排泄物等 2)食入性过敏原：鱼虾等水产、海产品；牛奶、鸡蛋、花生等 3)呼吸道感染 4)药物 5)工业粉尘、化学气体或蒸气 6)冷空气、过度通气、运动 7)强烈情绪变化医学ppt294.支气管哮喘发作的时相：患者在接触过敏原后几分钟内，出现哮喘发作的症状，最大呼气流速显著降低，一般持续23小时后即可恢复，
11、称为哮喘的速发相反应。其机制与型变态反应有关。有一部分病人在速发相之后紧接着出现第二次哮喘发作，症状更重，持续时间更长，可达10小时甚至几天，重症者持续几十天，称为迟发相反应。其机制与气道过敏性炎症有关。过敏性哮喘的临床过程可分为速发相反应和迟发相反应两个阶段。病人可发生双相反应，也可只发生速发相或迟发相反应。儿童哮喘的迟发相反应要比成人多。医学ppt30二、支气管哮喘造模方法（一）致敏源诱发的哮喘模型动物造模因素致敏方法诱发哮喘时间与观察时间小鼠20g左右1号卵清蛋白抗原液腹腔注射1号卵清蛋白抗原液1次，每次0.2ml;8天后重复注射1次第15天起将小鼠置于密闭容器中，以60g/L卵清蛋白液
12、雾化激发，每天1次，每次30分钟，连续7天，直至哮喘样发作大鼠120-180g2号卵清蛋白抗原液腹腔注射2号卵清蛋白抗原液1次，每次1ml;7天后重复注射1次2周后起将大鼠置于密闭容器中，以1%卵清蛋白液雾化激发，每天1次，每次30分钟，连续2周，直至哮喘样发作豚鼠300-500g1%卵清蛋白生理盐水溶液腹腔注射1%卵清蛋白生理盐水溶液1次，每次10ml2周后起将豚鼠置于密闭容器中，以1%卵清蛋白生理盐水溶液雾化激发，每天1次，每次20分钟，直至哮喘样发作1.方法医学ppt312.致敏源诱发的哮喘特点小鼠：小鼠：1)常用小鼠品系有：BALB/c品系较易产生气道高反应，并产生高滴度IgE；而C5
13、7BL/6品系不易出现气道高反应，且只产生低滴度IgE。大鼠：大鼠：1)常用大鼠品系有：Brown Norway(国外)；Sprague Dawley，Wistar(国内)。2)哮喘激发后3-5分钟发生速发相反应，2-4小时发生迟发相反应，随后出现肺部炎症细胞(24小时内主要是嗜酸性细胞)浸润。3)哮喘发作24小时内气道反应性升高，增幅为7-10倍，持续4-5天。多次激发能延长气道高反应性持续时间。4)能出现与人类哮喘类似的迟发相反应，并有嗜酸性细胞浸润和气道反应性增加。豚鼠：豚鼠：1)很容易致敏，并激发产生型变态反应。2)激发后的急性气道过敏反应，包括速发相和迟发相哮喘反应。医学ppt323
14、.致敏源诱发的哮喘模型优、缺点和应用优点：1)卵清蛋白来源容易，且价格低廉。2)卵清蛋白免疫原性强，容易致敏和激发哮喘。3)是国内外最常用的哮喘疾病模型。以下分别列举：小鼠、大鼠和豚鼠支气管哮喘模型的优点、缺点和应用医学ppt33优点：小鼠便宜，价格低，有利于大规模实验。小鼠哮喘模型优、缺点和应用缺点：1)几乎所有暴露于变应原(过敏原)的小鼠都可产生哮喘，故小鼠哮喘模型不宜应用于基因多态性研究。2)小鼠与人类存在呼吸系统的解剖、生理学上的差异。呼吸频率快，但潮气量低。3)小鼠与人类还存在免疫学机制上的差异。大多数小鼠哮喘模型会出现过敏性肺泡炎和超敏性肺炎，而掩盖了气道病变。应用：适用于需要大规
15、模实验的情况，如:评价预防效果或哮喘疗效。医学ppt34大鼠哮喘模型优、缺点和应用优点：1)大鼠品系纯且全，易于繁殖，获得容易。2)价格较便宜，能减轻研究经费压力。3)与小鼠相比，可获取的标本量大很多。4)大鼠生物学特性与人有较多的相似性。缺点：1)国际上哮喘研究论文主要采用Brown Norway品系大鼠，但其价格较贵。BN大鼠哮喘模型的主要优势在于能产生针对吸入性变应原的特异性IgE抗体，且更易诱发哮喘症状、明显的气道炎症和气道高反应性。应用：1)是最常用的哮喘动物模型之一。2)适用于皮质激素治疗哮喘作用机理研究，以用非皮质激素类抗哮喘免疫抑制剂的疗效观察和评价。医学ppt35豚鼠哮喘模型
16、优、缺点和应用优点：1)豚鼠价格较便宜；体型较大，方便实验操作；获取标本量大。2)变应原诱发的支气管哮喘与人类支气管哮喘中的气管收缩特点相同。包括：接触抗原后的支气管收缩反应；气道对介质的高反应性；以及嗜酸性细胞浸润的特征。缺点：1)由于近交系豚鼠罕见，不利于用来研究遗传因素的影响。2)皮质激素对豚鼠哮喘模型的支气管痉挛影响不显著。3)可能出现种群依赖性的夸大反应，如：过敏性休克，导致豚鼠死亡。应用：1)是使用最广泛的变应原性支气管哮喘模型。2)致敏性豚鼠的过敏性支气管收缩(包括速发相和迟发相)在研究抗过敏药、支气管扩张药药物疗效方面就用非常广泛。医学ppt36（二）甲苯二异氰酸甲酯(TDI)
17、诱发的职业性哮喘模型1.TDI诱发哮喘方法动物造模因素致敏方法诱发哮喘时间与观察时间豚鼠250-300g/只TDI/BSA抗原腹腔注射TDI/BSA抗原1次，每次0.5ml；2-3周后再重复加强免疫1-2次，致敏在初次免疫5-8周后，做抗原激发试验。先用1%BSA激发，无反应后再用TDI/BSA激发。约有30%豚鼠会出现明显哮喘反应。医学ppt372.TDI诱发哮喘特点1)经TDI/BSA激发后，动物呼吸频率加快、幅度增大，哮喘时伴有咳嗽、躁动不安，甚至出现痉挛性呼吸。2)85%动物可同时出现不同滴度的抗原特异性IgE、IgG抗体。3)TDI是重要的职业性致哮喘化学品之一。医学ppt383.T
18、DI诱发哮喘优点、缺点和应用优点：是TDI致职业性哮喘的重要动物模型。从事TDI作业者中约有5%-10%的人可发生职业性哮喘。缺点：1)TDI/BSA抗原制备难度大，步骤繁锁。2)属职业性哮喘，应用范围窄。应用：适用于TDI职业性哮喘方面研究。医学ppt39（三）邻苯二甲酸酐(PA)诱发的哮喘模型1.PA诱发哮喘模型方法动物造模因素致敏方法诱发哮喘时间与观察时间豚鼠250-300g/只，2-3月龄PA-BSA抗原 和PA-HSA抗原腹腔或后腿肌肉注射PA-BSA抗原或PA-HSA抗原1次，每次0.2-0.3ml，致敏在免疫3-8周后，做抗原吸入激发试验。先用1%HSA生理盐水溶液雾化吸入1-3
19、分钟，激发。哮喘持续30-50分钟。医学ppt402.PA诱发哮喘模型的特点1)苯酐(PA)为固体化学品，也可引起哮喘。为什么？2)雾化吸入激发后1-10分钟，动物呼吸频率加快(由100-120次/分，上升至140-160次/分)，幅度增大，伴咳嗽、喷嚏，重症者呼吸费力，挣扎，可有暂窒息或死亡。苯酐医学ppt413.PA诱发哮喘模型的优点、缺点和应用优点：PA是重要白色固体化工原料，也是一种常见的职业性致哮喘物质。缺点：与TDI至哮喘一样，属职业性哮喘，应用范围窄。应用：适用于PA所致职业性哮喘方面研究医学ppt42例二、卵清蛋白诱导小鼠建立支气管哮喘模型医学ppt43医学ppt44医学ppt
20、45医学ppt46B:模型组病理切片模型组病理切片医学ppt47结 论医学ppt48一、肺心病概述1.肺心病的定义：肺心病是指由慢性支气管炎、肺气肿和肺纤维化，以及肺血管病变而引起的心脏病。2.肺心病的病理特点：1)肺动脉高压；2)右心室肥大和右心衰竭。第三节 肺心病动物模型医学ppt49 二、肺心病造模方法（一）肺循环高压模型 肺循环高压：指包括肺动脉高压、肺静脉高压和混合性肺动脉高压的总称。肺动脉高压：指肺动脉压增高，而肺静脉压正常。也称为动脉型肺动脉高压。特发性肺动脉高压：指没有任何原因(包括遗传、病毒、药物)而发生的肺动脉高压。肺循环高压诊断标准：在海平面静息状态下经右心导管检查 1)
21、肺动脉收缩压30mmHg 2)肺动脉平均压25mmHg 3)运动时，肺动脉平均压30mmHg 以上三项，居其一即可医学ppt50(1)方法1、缺氧型肺循环高压动物模型动物造模因素致舱内低氧方法肺循环高压观察时间大鼠150-250g/只低氧气体1.100%氮气2.10%氧气 90%氮气将10-15只大鼠置入动物舱室后，通入N2，使舱内O2浓度降低至10%左右。以2升/分的速度通入低氧混合气体(10%O2，90%N2)大鼠在缺氧5周后，出现低氧性肺血管收缩及肺血管形态改变。动物舱室(250-300升)：1)顶部有三通，便于气体样本，检测O2和N2浓度。使O2浓度保持在10%左右，CO2浓度保持在3
22、%以下。2)底部有一小裂隙，便于舱内、外气体交换，气压相等。3)舱内CO2用钠石灰吸收，水蒸气用无水氯化钙吸收。4)舱内有小风扇将通入气体混均。医学ppt51(2)缺氧型肺循环高压模型的特点1)动物舱室设计和制作有点难度。2)需要O2分析仪和CO2分析仪，且检测麻烦。3)舱内温度难保持恒定，也难以消除CO2和水蒸气的影响。医学ppt52(3)缺氧型肺循环高压模型的优点、缺点和应用优点：舱室设计，操作简单，能保持舱内长时间低氧状态。如能通过自动化设计，时实动态检测O2和CO2浓度，控制好舱内温度、湿度和气压，将是一个好的造模方法。缺点：1)每天检测O2和CO2浓度很烦。2)通过调节舱室通气量保持
23、O2浓度和气压有难度。应用：适用于因长期缺氧导致肺循环高压，继发右心肥大，右心衰的肺心病模型。医学ppt53(1)方法2、缺氧型肺循环高压动物模型动物造模因素野百合碱注射方法肺循环高压、右心肥大和右心衰观察大鼠150-250g/只野百合碱 将2%野百合碱(60mg/kg体重)，一次性腹腔注射。野百合碱入血后引起肺血管内皮损伤，从而导致缺氧和肺血管重塑。大鼠在缺氧5周后，出现低氧性肺血管收缩及肺血管形态改变。注谢后第14天，21天和28天行右心导管术检测肺动脉和右心室压力，以及心功能检测。(2)特点1)肺动脉压升高显著，可达正常值3倍。2)伴右心室肥厚和体重减轻。3)光镜下可见肺血管重塑明显，表
24、现为：血管内膜增生，中层增厚。4)野百合碱可重复诱导产生严重的进展性肺动脉高压。医学ppt54(2)优点、缺点和应用优点：1)方法简便易行 2)本模型为常压缺氧肺循环高压模型，更类似于平原地区的肺心病发病情况。缺点：与缺氧、酸中毒、内毒素导致的肺血管损伤相比，野百合碱属于化学品或药物导致的肺血管损伤。应用：适用于常压缺氧肺循环高压的肺心病方面研究医学ppt55（二）慢性阻塞性肺部疾病(COPD)模型1.方法动物造模因素被动吸烟方法支气管、肺组织病变观察大鼠150-250g/只烟雾吸入 每个烟熏箱放入大鼠3只，每天上午、下午各被动吸烟1次。每箱每次点燃香烟2支，每次持续吸入新鲜香烟烟雾1小时烟熏
25、10周后，纤毛上皮异常并伴粘液高分泌；12周后，可见纤毛皮细胞部分脱落；12-24周后，可见少量肺泡融合形成肺大泡。24-36周后，上述病变更明显；36周后，肺泡腔明显扩大，气道管壁明显增厚和纤维化，并可见大量炎症细胞浸润。动物烟熏箱(202530 cm3)：1)烟熏箱的一侧下部留有一个直径为0.5cm的通气管，与箱外侧的不锈钢燃烟室相通。2)燃烟室进气孔连接一个小电风扇。电扇风力助燃并推动烟雾和O2进入烟熏箱。香烟：采用市售无过滤嘴的香烟(每支约含焦油25mg，烟气烟碱量1.4mg)医学ppt56(2)COPD模型特点1)采用香烟烟熏36周以上的方法制备大鼠COPD模型。是一个较长期的慢性实
26、验，更符合人类COPD的临床实际情况。2)多种炎症细胞参与。气道内主要是PMN和M为主，肺细胞内以M(CD68+)和T-淋巴细胞浸润为主。3)多种炎症因子参与。如：IFN、MCP-1、ET-1、IL-2，4，6，10等。4)气道高分泌，炎症细胞增多，管壁增厚，胶原等细胞外基质增多并过度沉积、纤维化(COPD气道重塑的重要病理改变)。医学ppt57(2)COPD模型的优点、缺点和应用优点：1)方法简便易行，不需要贵重仪器设备和药品。2)属较长期的慢性实验，因此更符合人类COPD的临床实际情况。缺点：1)长期的慢性实验，考验的是人的耐心、恒心和毅力。2)能否导致继发性肺心病，还需要更长的烟熏时间和
27、耐心等待。应用：适用于COPD病理、病生及药物疗效方面的研究医学ppt58例三、低氧性肺动脉高压大鼠模型的建立研究目的医学ppt59医学ppt60医学ppt61医学ppt62医学ppt63结 论本研究结果提示肺动脉高压的大鼠模型成功建立。本研究模型的建立较好地模拟了 患者肺动脉高压发生的病理过程，可以应用于 患者的临床研究。陈丽英等 低氧性肺动脉高压大鼠模型的建立中华危重症医学杂志 2015，vol.8(5):312-314医学ppt64一、肺栓塞概述肺栓塞的定义：肺栓塞：指以各种栓子阻塞肺动脉系统为其发病原因的一组疾病或临床综合征的总称。包括：血栓、脂肪、羊水、胎粪、空气等栓子。肺血栓栓塞：
28、是指来自静脉系统或右心的血栓栓子阻塞肺动脉或其分支所致肺部疾病。主要表现为：肺循环障碍和呼吸功能障碍。急性肺血栓栓塞导致较为广泛肺动脉阻塞时，可引起肺动脉高压，甚至发生急性肺源性心脏病。而缺血区可能发生肺梗死。由于肺组织多重供血、供氧机制，只有大约15%患者发生肺梗死。第四节 肺栓塞动物模型医学ppt65二、肺栓塞造模方法（一）血栓栓塞法动物造模因素血栓形成栓塞方法观察家兔或犬 血栓栓子1.动物麻醉后，分离一侧的颈外V和颈总A，并分别插管。2.颈外V与颈总A连接在同一个三通管上。三通管余下的一个通道接上一个注射器(内含10U/ml凝血酶0.6ml)。3.用注射器从动脉插管抽取动脉血1ml。4.
29、将注射器内动脉血与凝血酶充分混匀。5.将混匀后的血液通过静脉插管注入颈外V，立即夹闭颈外V近心端。6.等待10分钟，让血栓在颈外V内形成。待颈外V内血栓明显形成后，松开颈外V近心端的静脉夹，血栓栓了入血后，栓塞肺动脉。1.方法医学ppt662.血栓栓塞法模型的特点：家兔血栓栓塞法：1)家兔体型适中，价格不高，性格温顺，插管较方便。2)与其它动物相比，家兔的纤溶系统与人类的更接近。故，本模型是最普遍、最成熟的肺血栓栓塞模型。犬血栓栓塞法：1)犬体型大，血管粗，插管手术操作非常方便。2)犬血量大，多次抽血样也不易发生低血容量的情况。医学ppt673.血栓栓塞法模型的优点、缺点和应用：优点：兔血栓栓
30、塞法模型是最普遍、最成熟的肺血栓栓塞模型。因为与其它动物相比，家兔的纤溶系统与人类的更接近。缺点：1)本法的血栓主要是在体外形成，与临床上肺血栓栓塞时，体内处于高凝状态不一样。2)用犬做实验，有被咬伤或感染狂犬病的可能。应用：1)兔模型适用性广，是最常用的肺血栓栓塞模型。2)犬模型更适用于取样量多、需要动态观察的肺栓塞实验研究。医学ppt68（一）药物注射法动物造模因素血栓形成及栓塞方法小鼠，也可用兔和犬胶原与肾上腺素的混合液小鼠尾静脉注射制备好的胶原与肾上腺素的混合液1次，每次100l。该混合液可导致体内血液呈高状态，先是形成血小板血栓，后者阻塞肺小血管并导致肺栓塞。1.方法2.药物注射法模
31、型的特点：1)药物注射法致肺血栓栓塞，简单快捷，方法可靠，稳定性好。2)利用药物在体内形成静脉血栓，然后导致肺栓塞，比栓子栓塞法更符合临床实际情况。医学ppt693.药物注射法模型的优点、缺点和应用：优点：此方法简单快捷，可靠性和稳定性好。缺点：血小板血栓栓子较小，难以摸拟人肺内大血管栓塞情况。应用：1)小鼠肺栓塞模型，适合需要大规模样体的实验研究。2)兔和犬肺栓塞模型，适合需要多次采样、动态观察指标变化的实验研究。医学ppt70目的 通过建立操作简便、成功率高、使用经济的急性肺血栓栓塞大鼠动物模型,掌握自体肺血栓栓塞动物模型的制备,检测自体肺血栓栓塞的持久性。例四、大鼠自体肺血栓栓塞模型的成
32、功制备一、材料医学ppt71二、方法(体外制备血栓栓子)医学ppt722 大鼠麻醉后,行气插管,连接呼吸机医学ppt73医学ppt74医学ppt75医学ppt76 本实验研究发现：大鼠自血栓注入后并没有表现持续的肺动脉压升高或氧分压降低,因为大鼠具有极高的纤溶能力,所以自体血栓不能产生一个持久固定的肺栓塞模型。结 论 因此与临床肺血栓栓塞的病理生理过程更符的、持久固定血栓模型的研究应成为今后肺栓塞动物模型的主要研究方向。冯伟等 大鼠自体肺血栓栓塞模型的成功制备临床肺科杂志 2015年5月 第20卷第5期：785-788the end谢谢！医学ppt78混合烟雾制烟方法：1.配方：锯末200g，
33、烟叶15-20g，辣椒6-7g，硫黄1g。2.点燃后，在20-30分钟燃化，混合烟雾含尘量 150-200mg/m3，颗粒大小0.5-1.0m以上。医学ppt79香烟烟雾制烟方法：1.用香烟1.5支，在21L容器中燃化，豚鼠吸气10分钟。2.换气5分钟。3.用香烟1支，再次燃化，豚鼠再吸气10分钟。医学ppt80流感病菌菌液制作方法：1.接种流感病毒后，37 培育48小时的鸡胚液，病毒液血凝滴度为1：320。2.接种流感杆菌后，37 培养18-24小时，收集菌液备用。在滴鼻使用前，将菌液中流感杆菌的浓度稀释为7108个/ml。医学ppt81混合细菌菌液制作方法：1.流感杆菌，9 108个/ml
34、。甲型链球菌，6108个/ml。卡他性炎性菌，9108个/ml。肺炎双球菌，6108个/ml。2.将上述4种菌液以4：3：2：1的比例混合，备用。医学ppt821.溶液：卵清蛋白1000 g/ml2.溶液：氢氧化铝10 mg/ml3.将溶液与溶液以1：1的比例混合。注意混合液要新鲜配制1号卵清蛋白抗原液配制方法：2号卵清蛋白抗原液配制方法：1.溶液：卵清蛋白300 mg/ml2.溶液：灭活百日咳杆菌疫苗15109个/ml3.溶液：氢氧化铝300 mg/ml4.将溶液、和，以1：1：1的比例混合。注意混合液要新鲜配制医学ppt83TDI-BSA抗原制备：1.溶液A：1%TDI/1,4-二氧六环液
35、2.溶液B：1%BSA/碳酸氢钠溶液3.将溶液B置于冰水浴中，开磁力搅拌，逐滴加入溶液A，调节该溶液的pH值至8.5。4.1小时后移至透析袋中过夜，使1,4-二氧六环挥发。5.在pH为7.4的PBS中彻底透析6次，使溶液在紫外分光光度计245nm处有高吸收峰。6.将制备成的上述抗原，加卡介苗、费氏完全佐剂混合，用乳钵研磨成油包水乳剂备用。医学ppt84PA-BSA抗原制备：1.溶液A：PA丙酮溶液(30mgPA溶解于1ml丙酮中)。2.溶液B：2%BSA/碳酸氢钠溶液(9%)。3.将溶液B置于冰水浴(4)中，开磁力搅拌器，搅拌1小时。4.将制备好的PA-BSA抗原与弗氏完全佐剂1：1混合，乳钵
36、中研磨，形成油包水乳剂备用。PA-HSA抗原制备：1.溶液A：PA丙酮溶液(30mgPA溶解于1ml丙酮中)。2.溶液B：2%HSA/碳酸氢钠溶液(9%)。3.将溶液B置于冰水浴(4)中，开磁力搅拌器，搅拌1小时。4.将制备好的PA-HSA抗原与弗氏完全佐剂1：1混合，乳钵中研磨，形成油包水乳剂备用。医学ppt85胶原和肾上腺素混合液制备：1.胶原溶液：200 g/ml2.肾上腺素溶液：100 g/ml3.将以上两种溶液以1：1比例混合、摇匀。医学ppt86以下是附录1-5医学ppt87 常用药物的最大给药量常用药物的最大给药量动物动物项项 目目 灌灌 胃胃 皮下注射皮下注射 肌肉注射肌肉注射
37、 腹腔注射腹腔注射 静脉注射静脉注射 大鼠大鼠最大给药量最大给药量2mL2mL lmL lmL0.4mL0.4mL2mL2mL4mL4mL 使用针头使用针头1616号号(钝头钝头)6 6号号 6 6号号 6 6号号 5 5号号小鼠小鼠最大给药量最大给药量lmLlmL0.4mL0.4mL0.4mL0.4mL lmL lmL0.8mL0.8mL 使用针头使用针头9 9号号(钝头钝头)5 l/25 l/2号号5 1/25 1/2号号5 1/25 1/2号号 4 4号号豚鼠豚鼠最大给药量最大给药量3mL3mL LmL LmL0.5mL0.5mL 4mL 4mL 5mL 5mL 使用针头使用针头1616
38、号号(钝头钝头)6 1/26 1/2号号6 1/26 1/2号号 7 7号号 5 5号号家兔家兔最大给药量最大给药量20 mL20 mL 2mL 2mL 2mL 2mL 5mL 5mL 10mL 10mL 使用针头使用针头1010号导尿号导尿管管6 1/26 1/2号号6 1/26 1/2号号 7 7号号 6 6号号医学ppt88人及不同实验动物之间药物量对应值人及不同实验动物之间药物量对应值医学ppt89n例如：n某药物在60kg体重的病人的剂量为21.0g.kg-1.d-1，n一只5kg的猴为53.6 g.kg-1.d-1，n一只10kg重的犬为40.4 g.kg-1.d-1，n一只20g
39、的小鼠则为260.6 g.kg-1.d-1。医学ppt90常用实验动物的最大安全采血量与常用实验动物的最大安全采血量与最小致死采血量最小致死采血量动物种类动物种类最大安全采血量最大安全采血量(mL)(mL)最小致死采血量最小致死采血量(mL)(mL)小鼠小鼠0.10.1 0.3 0.3大鼠大鼠 1 1 2 2豚鼠豚鼠 5 5 10 10家兔家兔 10 10 40 40 狗狗 50 50 300 300 猴猴 15 15 60 60医学ppt91常用麻醉剂的用法及剂量常用麻醉剂的用法及剂量 麻醉剂麻醉剂 动物种类动物种类 给药途径给药途径 剂量剂量(mg/kg)(mg/kg)常用浓度常用浓度()
40、戊巴比妥钠戊巴比妥钠犬、兔犬、兔大鼠、小鼠、大鼠、小鼠、豚鼠豚鼠静脉静脉腹腔腹腔腹腔腹腔303040405050404050503 33 32 2硫喷妥钠硫喷妥钠 犬、兔犬、兔 静脉静脉 15-20 15-20 2 2 大鼠大鼠 腹腔腹腔 40 40 1 1 小鼠小鼠 腹腔腹腔 15-20 15-20 1 1氯胺酮氯胺酮犬、猫犬、猫 腹腔腹腔 10-40 10-40 10 10 大鼠、小鼠大鼠、小鼠 腹腔腹腔 100 100200200 10 10 氯醛糖氯醛糖 兔兔 静脉静脉 80-100 80-100 2 2 大鼠大鼠 腹腔腹腔 50 50 2 2乌拉坦乌拉坦 兔兔 静脉静脉750-1000750-1000 30 30 大鼠、小鼠大鼠、小鼠 皮下或肌肉皮下或肌肉 800-1000 800-1000 20 20 此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！
