1、【实 验】叶绿体中色素的提取和分离叶绿体中色素的提取和分离 主讲人：主讲人：段段 娜娜 肖祖文肖祖文 助助 理：谷维佳理：谷维佳 黄素芬黄素芬 孙捷吉孙捷吉 马牧原马牧原 周枭楠周枭楠色素的提取和分离实验一、实验目的v 进行绿叶中色素的提取和分离v 探究绿叶中含有色素种类数目和颜色v 培养合作和严谨的科学精神 色素的提取和分离实验二、实验原理v 提取提取：叶绿体色素易溶于无水乙醇（酒精、汽油、苯、石油醚等）等有机溶剂中，可以用无水乙醇提取绿叶中的叶绿体色素。v 分离分离：纸层析法 不同的叶绿体色素随层析液在滤纸上扩散速度不同。不同的色素会在扩散过程中分离开来，形成条带。（色素在层析液中溶解度不
2、同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散速度快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散速度慢，因而可用层析液将不同的色素分离。）色素的提取和分离实验三、实验材料【实验材料实验材料】：新鲜新鲜菠菜绿叶菠菜绿叶【实验药品实验药品】：层析液（汽油：石油醚：丙酮：苯层析液（汽油：石油醚：丙酮：苯=20:2=20:2：2:12:1），无水乙），无水乙 醇，石英砂醇，石英砂，碳酸钙，碳酸钙【实验用具实验用具】：研钵研钵，药匙，纱布，小烧杯，干燥滤纸，药匙，纱布，小烧杯，干燥滤纸，剪刀，试管，毛细吸管，棉塞剪刀，试管，毛细吸管，棉塞色素的提取和分离实验提取叶绿体色素v 取材取材：取新鲜菠菜叶取新鲜
3、菠菜叶5g5g，撕去叶脉，尽量剪碎，放入研钵。，撕去叶脉，尽量剪碎，放入研钵。v 研磨研磨：向研钵中放入少量向研钵中放入少量石英砂石英砂和和碳酸钙碳酸钙（量约为药匙的（量约为药匙的1/31/3），），加入加入6ml6ml无水乙醇无水乙醇，充分、迅速地研磨至匀浆状态。，充分、迅速地研磨至匀浆状态。v 过滤过滤：在小烧杯上放上在小烧杯上放上4 4层纱布，将研磨液倒入小烧杯，过层纱布，将研磨液倒入小烧杯，过v 滤制备得到滤液。滤制备得到滤液。【注注】p加石英砂是为了使研磨充分加石英砂是为了使研磨充分p加碳酸钙是为了防止叶绿体色素被破坏加碳酸钙是为了防止叶绿体色素被破坏p加入加入CaCOCaCO3 3
4、和石英砂的量均很少，无水乙醇的量不应太少和石英砂的量均很少，无水乙醇的量不应太少四、实验步骤色素的提取和分离实验v 制备滤纸条制备滤纸条：将干燥的定性滤纸剪成长与宽略小于试管将干燥的定性滤纸剪成长与宽略小于试管长与宽的滤纸条，将其一端剪去两个角，并在距这一端长与宽的滤纸条，将其一端剪去两个角，并在距这一端1cm1cm处用铅笔划线。处用铅笔划线。v 画滤液细线画滤液细线：用毛细吸管吸取少量滤液，用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀沿铅笔线均匀画出细线画出细线（细而齐）（细而齐）。待滤液干后，。待滤液干后，重复画线重复画线3-43-4次。次。【注注】p画滤液线时尽量画直、画细、画浓画滤液线时尽量画
5、直、画细、画浓p每次画完，要等滤液干时再重复画，以防滤液扩散开使滤液线过每次画完，要等滤液干时再重复画，以防滤液扩散开使滤液线过宽，影响结果宽，影响结果分离叶绿体色素四、实验步骤色素的提取和分离实验v 固定装置：固定装置：将将3 3mLmL层析液倒入试管中，将画好线的滤层析液倒入试管中，将画好线的滤纸条纸条插入层析液中插入层析液中，用棉，用棉塞塞塞紧试管口塞紧试管口。v 观察现象：观察现象：10min10min后，将滤纸条取出，风干。观察色素后，将滤纸条取出，风干。观察色素带及其颜色，作好记录。带及其颜色，作好记录。【注注】p放滤液条时，要避免放滤液条时，要避免滤液细线滤液细线浸没到浸没到层析
6、液。不要让滤纸条贴在层析管层析液。不要让滤纸条贴在层析管壁上。壁上。p层析液中一些成分易挥发，要避免开放在空气中。层析液中一些成分易挥发，要避免开放在空气中。分离叶绿体色素四、实验步骤1 1、选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的菠菜叶片。、选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的菠菜叶片。2 2、研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，、研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。（无水乙醇和层析液都易尽量减少有机溶剂的挥发。（无水乙醇和层析液都易挥发、易燃且有一定毒性）挥发、易燃且有一定毒性）3 3、每次点样前要把烧杯中的滤液摇匀。、每次点样前要把烧杯中的
7、滤液摇匀。4 4、尽量避免手上的杂质沾到滤纸条上。、尽量避免手上的杂质沾到滤纸条上。5 5、实验时保持通风，安全操作、实验时保持通风，安全操作6 6、实验注重团队合作，组员们共同完成实验。、实验注重团队合作，组员们共同完成实验。五、注意事项色素的提取和分离实验六、实验结果叶绿素的提取与分离七、实验总结最宽（最多）：叶绿素最宽（最多）：叶绿素a最窄（最少）：胡萝卜素最窄（最少）：胡萝卜素相邻距离最近：叶绿素相邻距离最近：叶绿素a和叶绿素和叶绿素b色素在滤纸上自上而下分布依次为：胡色素在滤纸上自上而下分布依次为：胡萝卜素萝卜素叶黄素叶黄素叶绿素叶绿素a 叶绿素叶绿素b 叶绿体中的色素能够在滤纸上彼
8、此分离的原因是（）A色素提取液中色素已经分层B阳光的照射使不同色素彼此分开C乙醇有使色素溶解并彼此分离的特性D各种色素在滤纸上随层析液扩散的速度不同 加SiO2、加CaCO3的目的分别是：研磨研磨充分；保护叶绿素充分；保护叶绿素。为什么滤液细线越细、越齐越好？防止色素带之间部分重叠。防止色素带之间部分重叠。为什么层析液不能没及滤纸条的滤液细线？防止色素溶解在层析液中，影响实验结果。防止色素溶解在层析液中，影响实验结果。八、课堂反馈D聚焦高考（2012上海理综17）图6表示叶绿体色素提取分离实验中纸层析的结果，据图判断用作实验材料的叶片颜色为（）A红色 B黄色 C绿色 D紫色B聚焦高考（2011江苏生物4）某研究组获得了水稻的叶黄素缺失突变体。将其叶片进行了红光照射光吸收测定和色素层析条带分析（从上至下），与正常叶片相比，实验结果是（）A.光吸收差异显著，色素带缺第2条 B.光吸收差异不显著，色素带缺第2条 C.光吸收差异显著，色素带缺第3条 D.光吸收差异不显著，色素带缺第3条B（1）二氧化硅（SiO2）使研磨更加充分（2）8.0 以1.0作为pH梯度进行实验（3）pH小于6.0 叶绿素会由于酸性pH值而被破坏（4）纸层析法 主要步骤：a.制备滤纸条b.画色素液细线c.层析分离色素d.观察色素带你做对了吗？“叶绿素的提取与分离”实验可在哪些方面进行改进？九、课后思考
