1、药物分析药物分析第十三章莨菪烷类抗胆碱药第十三章莨菪烷类抗胆碱药物的分析物的分析教学目的与要求教学目的与要求 v 掌握莨菪烷类抗胆碱药物的鉴别试验和含量测定方法。v 熟悉莨菪烷类抗胆碱药物的基本结构和主要性质。v 了解莨菪烷类抗胆碱药物的杂质检查。莨菪烷类抗胆碱药物的分析莨菪烷类抗胆碱药物的分析结构结构莨菪烷类莨菪烷类抗胆碱药抗胆碱药物物莨菪烷衍莨菪烷衍生的氨基生的氨基醇醇与各种不同与各种不同有机酸缩合有机酸缩合酯酯+生物碱生物碱莨菪烷类抗胆碱药物的分析莨菪烷类抗胆碱药物的分析莨菪烷莨菪烷NH3C含氮的生物碱含氮的生物碱(氨基氨基)12345678N莨菪烷(Tropane)莨菪烷类抗胆碱药物的
2、分析莨菪烷类抗胆碱药物的分析莨菪醇莨菪醇含氮的醇含氮的醇(莨菪醇莨菪醇)NH3COH12345678NOHH莨菪醇(Tropine)莨菪烷类抗胆碱药物的分析莨菪烷类抗胆碱药物的分析典型药物典型药物硫酸硫酸阿托品阿托品H2SO4OOHOHNH3CH2H2O莨菪烷类抗胆碱药物的分析莨菪烷类抗胆碱药物的分析典型药物典型药物硫酸硫酸莨菪碱莨菪碱H2SO4NH3CH22H2OOHOOH莨菪烷类抗胆碱药物的分析莨菪烷类抗胆碱药物的分析H2SO4NH3CH22H2OOHOOH结构区别结构区别硫酸硫酸莨菪碱莨菪碱H2SO4OOHOHNH3CH2H2O硫酸硫酸阿托品阿托品莨菪烷类抗胆碱药物的分析莨菪烷类抗胆碱药
3、物的分析H2SO4NH3CH22H2OOHOOH性质区别性质区别硫酸硫酸莨菪碱莨菪碱H2SO4OOHOHNH3CH2H2O硫酸硫酸阿托品阿托品熔点、溶解度、熔点、溶解度、旋光度、分子旋光度、分子量量莨菪烷类抗胆碱药物的分析莨菪烷类抗胆碱药物的分析典型药物典型药物氢溴酸氢溴酸后后马托品马托品HBrNH3CHOOOH莨菪烷类抗胆碱药物的分析莨菪烷类抗胆碱药物的分析典型药物典型药物氢溴酸氢溴酸山山莨菪碱莨菪碱莨菪烷类抗胆碱药物的分析莨菪烷类抗胆碱药物的分析典型药物典型药物氢溴酸氢溴酸东东莨菪碱莨菪碱3H2OHBrNH3CHOOHOHO莨菪烷类抗胆碱药物的分析莨菪烷类抗胆碱药物的分析典型药物典型药物甲
4、溴酸甲溴酸东东莨菪碱莨菪碱BrNH3CHOOHOHOH3C莨菪烷类抗胆碱药物的分析莨菪烷类抗胆碱药物的分析典型药物典型药物丁溴酸丁溴酸东东莨菪碱莨菪碱BrNH3CHOOHOHOH3C1.水解性（酯水解生成醇和酸）OHOOHNCH3OHHNCH3+HOOCOH阿托品 莨菪醇 莨菪酸2.碱性 与生物碱沉淀剂产生有色沉淀阿托品和东莨菪碱结构中，五元脂环含有叔胺氮原子，较强的碱性，易与酸成盐，如阿托品pKb1为4.35.一、托烷生物碱一般鉴别试验(Vitaili反应)原理：莨菪烷类生物碱结构中的酯键水解后生成莨菪酸，经发烟硝酸加热处理，转变为三硝基衍生物，再与氢氧化钾的醇溶液和固体氢氧化钾作用脱羧，转
5、化成具有共轭结构的阴离子而显深紫色。托烷生物碱类的特征反应，鉴别阿托品和莨菪碱类一、托烷生物碱一般鉴别试验(Vitaili反应)HOOCOH+3HNO3HOOCOHNO2O2NNO2+3H2OKOHC2H5OHHOOCOHNO2O2NNOHOKOHHOHNO2O2NNOKO取供试品约10mg，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黄色的残渣，放冷，加乙醇23滴，加固体氢氧化钾一小粒，即显深紫色。莨菪酸莨菪酸硝基化硝基化脱羧化脱羧化共轭结构共轭结构深紫深紫二、氧化反应二、氧化反应(与硫酸与硫酸-重铬酸钾的反应）重铬酸钾的反应）HOOCOHH2OH2SO4HOOCCH22O2CHO+2CO2H2O三、沉
6、淀反应三、沉淀反应生物碱在酸性溶液中与重金属盐或大分生物碱在酸性溶液中与重金属盐或大分子酸生成难溶性盐、复盐或配合物沉淀子酸生成难溶性盐、复盐或配合物沉淀生物碱沉淀试剂生物碱沉淀试剂反应条件及结果反应条件及结果碘化铋钾试液碘化铋钾试液橙红或棕红色沉淀橙红或棕红色沉淀碘化钾碘试液碘化钾碘试液棕色或棕褐色沉淀棕色或棕褐色沉淀碘化汞钾试液碘化汞钾试液在酸性或碱性溶剂中生成白在酸性或碱性溶剂中生成白色或淡黄色沉淀色或淡黄色沉淀三硝基苯酚试液三硝基苯酚试液结晶性沉淀并有特定熔点结晶性沉淀并有特定熔点硅钨酸试液硅钨酸试液白色、淡黄色或黄棕色沉淀白色、淡黄色或黄棕色沉淀磷钨酸试液磷钨酸试液酸性或中性溶液中，
7、淡黄色酸性或中性溶液中，淡黄色沉淀沉淀三、沉淀反应三、沉淀反应四四、光谱鉴别法、光谱鉴别法紫外光谱法紫外光谱法一般通过比较药物的一般通过比较药物的 或吸收光谱的一致性或吸收光谱的一致性来进行鉴别以及吸光系数来进行鉴别以及吸光系数minmax、四、光谱鉴别法红外光谱法红外光谱法CHP收载的原料药一般都收载的原料药一般都采用红外光谱法进行鉴别采用红外光谱法进行鉴别五、色谱鉴别法色谱法色谱法一般用于已知生物碱的鉴一般用于已知生物碱的鉴别，主要有别，主要有TLC、HPLC、GC、PC等等六、硫酸盐和溴化物的反应六、硫酸盐和溴化物的反应药物大都以硫酸盐或药物大都以硫酸盐或溴化物的形式存在溴化物的形式存在
8、通过加沉淀试剂如硝酸银通过加沉淀试剂如硝酸银等生成溴化银沉淀或加入等生成溴化银沉淀或加入氯试剂生成溴溶于三氯甲氯试剂生成溴溶于三氯甲烷而显色烷而显色vChp氢溴酸东莨菪碱的鉴别：六、硫酸盐和溴化物的反应六、硫酸盐和溴化物的反应一、氢溴酸东莨菪碱制备工艺洋金花粗粉洋金花粗粉乙醇乙醇/渗漉渗漉渗漉液渗漉液减压蒸馏减压蒸馏浸膏浸膏H H2 2SOSO4 4/提取提取酸性提取液酸性提取液NaNa2 2COCO3 3,CHCl,CHCl3 3/提取提取总生物碱总生物碱NaNa2 2COCO3 3,CHCl,CHCl3 3/分离分离东莨菪碱东莨菪碱HBrHBr/成盐成盐氢溴酸东莨菪碱（粗品）氢溴酸东莨菪碱
9、（粗品）75%C75%C2 2H H5 5OH/OH/精制精制成品成品根据其制备工艺，本品可通根据其制备工艺，本品可通过酸度、其它生物碱、和易过酸度、其它生物碱、和易氧化物质检查进行控制氧化物质检查进行控制一、氢溴酸东莨菪碱杂质检查酸度酸度东莨菪碱碱性很弱，对石蕊试东莨菪碱碱性很弱，对石蕊试纸几乎不显碱性反应。纸几乎不显碱性反应。如氢溴酸东莨菪碱为强酸弱碱如氢溴酸东莨菪碱为强酸弱碱盐、通过其盐、通过其5%的水溶液的水溶液pH为为4.05.5，可控制酸性杂质，可控制酸性杂质一、氢溴酸东莨菪碱杂质检查易氧化物易氧化物可能杂质为阿扑东莨菪碱、及可能杂质为阿扑东莨菪碱、及其它含有不饱和双键的有机物，其
10、它含有不饱和双键的有机物，他们的紫外吸收波长会红移、他们的紫外吸收波长会红移、可使高锰酸钾溶液褪色可使高锰酸钾溶液褪色NH3CHOOCH2(杂质)NH3CHOOOCH2(杂质)一、氢溴酸东莨菪碱杂质检查易氧化物易氧化物可能杂质为阿扑东莨菪碱、及可能杂质为阿扑东莨菪碱、及其它含有不饱和双键的有机物，其它含有不饱和双键的有机物，他们的紫外吸收波长会红移、他们的紫外吸收波长会红移、可使高锰酸钾溶液褪色可使高锰酸钾溶液褪色一、氢溴酸东莨菪碱杂质检查一、氢溴酸东莨菪碱杂质检查其它生物碱其它生物碱本品水溶液加入氨水试液不得本品水溶液加入氨水试液不得发生混浊。当有其它生物碱存发生混浊。当有其它生物碱存在时，
11、则易产生混浊。在时，则易产生混浊。v本品水溶液一、氢溴酸东莨菪碱杂质检查一、氢溴酸东莨菪碱杂质检查v检查方法：其他生物碱其他生物碱ab二、硫酸阿托品硫酸阿托品为硫酸阿托品为消旋体消旋体，无旋光性，无旋光性，而莨菪碱为左旋体，可以利用旋而莨菪碱为左旋体，可以利用旋光性对莨菪碱杂质进行检查光性对莨菪碱杂质进行检查CHP用用HPLC法检查其中有关物质，法检查其中有关物质，通过峰面积的比值及保留时间来通过峰面积的比值及保留时间来控制杂质限度控制杂质限度莨菪烷类抗胆碱药物药理活性较莨菪烷类抗胆碱药物药理活性较强、临床使用剂量较少，因此测强、临床使用剂量较少，因此测定方法要专属、灵敏定方法要专属、灵敏:酸
12、性染料酸性染料比色法比色法非水溶液非水溶液滴定法滴定法高效液相高效液相色谱法色谱法有机相(BH+In-)水相(BH+In-)+HIn H+In-+B H+BH+UV 酸性染料酸性染料比色法比色法在一定的在一定的pH条件下，某些生物碱条件下，某些生物碱药物可与某些酸性染料结合而呈色，药物可与某些酸性染料结合而呈色，进而可用分光光度法进行测量进而可用分光光度法进行测量酸性染料酸性染料如磺酸酞类指示剂等，如如磺酸酞类指示剂等，如溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝、溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝、溴甲酚紫、溴酚蓝等溴甲酚紫、溴酚蓝等其与酸性离子定量结合、生成具有吸收光谱其与酸性离子定量结合、生成具有吸收光谱明显红移的有色
13、离子对，且可以被有机溶剂明显红移的有色离子对，且可以被有机溶剂定量萃取，通过测定有机相中有色离子对的定量萃取，通过测定有机相中有色离子对的特征波长处的吸光度，即可进行含量测定特征波长处的吸光度，即可进行含量测定酸性染料比色法酸性染料比色法影响因素影响因素u 水相最佳pH值：使得BH+和In-最多影响因素影响因素u 水相最佳pH值：使得BH+和In-最多pH过低抑制酸性染料的解离、使酸性阴离子浓过低抑制酸性染料的解离、使酸性阴离子浓度过低影响离子对的形成；度过低影响离子对的形成；pH过高，有机药物过高，有机药物呈游离态，也抑制离子对的形成，因此须有一呈游离态，也抑制离子对的形成，因此须有一个最佳
14、个最佳pH值存在，使离子对生成最有利。其选值存在，使离子对生成最有利。其选择方法一般根据药物与染料的择方法一般根据药物与染料的pK值及水相与有值及水相与有机相的分配系数而定机相的分配系数而定水相最佳水相最佳pHpH影响因素影响因素 酸性染料及其浓度：定量结合，产物溶解性好；可稍过量一般认为对测定结果影响不大，只要量足够大一般认为对测定结果影响不大，只要量足够大就可以。但浓度过高的话就会形成严重的乳化就可以。但浓度过高的话就会形成严重的乳化层，且不易于除去，往往影响测定结果。层，且不易于除去，往往影响测定结果。影响因素影响因素有机溶剂的选择：提取效率高，氯仿最理想一般应选择对有机碱药物与酸性染料
15、形成离子一般应选择对有机碱药物与酸性染料形成离子对萃取效率高、能与离子对形成氢键、不与或对萃取效率高、能与离子对形成氢键、不与或极少与水混溶的有机溶剂作为萃取溶剂。极少与水混溶的有机溶剂作为萃取溶剂。影响因素影响因素水分的影响：影响因素影响因素酸性染料里面的有色杂质影响结果，先用萃取溶剂萃取除去影响结果，先用萃取溶剂萃取除去应用示例应用示例氢溴酸东莨菪碱片的含量测定精密量取对照品溶液和供试品溶液各2ml，分别置预先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液4ml，振摇提取后，静置使分层；分取三氯甲烷液，照紫外-可见分光光度法，在420nm波长处分别测定吸光度，计算，即得。本法主要适
16、用于紫外吸收弱、标示量低的有机碱性药物（生物碱）制剂的含量或含量均匀度的测定。应用示例应用示例 硫酸阿托品片的含量测定硫酸阿托品片的含量测定应用示例应用示例 硫酸阿托品片的含量测定硫酸阿托品片的含量测定应用示例应用示例 硫酸阿托品片的含量测定硫酸阿托品片的含量测定应用示例应用示例 硫酸阿托品片的含量测定硫酸阿托品片的含量测定二、非水溶液滴定法二、非水溶液滴定法二、非水溶液滴定法三、高效液相色谱法三、高效液相色谱法三、高效液相色谱法应用示例应用示例练习与思考v1、莨菪烷类生物碱的特征反应是vA、与三氯化铁反应vB、与生物碱沉淀剂反应vC、重氮化-偶合反应vD、丙二酰脲反应vE、Vitali反应练
17、习与思考v 2、药物水解后，与硫酸-重铬酸钾在加热的条件下，生成苯甲醛，而逸出类似苦杏仁的臭味的药物是v A、氢溴酸山莨菪碱v B、异烟肼v C、硫酸奎宁v D、盐酸氯丙嗪v E、地西泮练习与思考v3、影响酸性染料比色法的最主要因素是vA、水相pHvB、酸性染料的种类vC、有机溶剂的种类vD、酸性染料的浓度vE、水分的影响练习与思考v 4、采用酸性染料比色法测定药物含量，如果溶液pH过低对测定造成的影响是v A、使In-浓度太低，而影响离子对的形成v B、有机碱药物呈游离状态v C、使In-浓度太高v D、没有影响v E、有利于离子对的形成练习与思考v 5、离子对HPLC要在流动相中加入与呈解
18、离状态的待测组分离子电荷相反的离子对试剂，分析碱性物质时常用的离子对试剂有v A、戊烷磺酸钠v B、庚烷磺酸钠v C、十二烷基磺酸钠v D、四丁基溴化铵v E、四丁基氢氧化铵练习与思考v 6、离子对HPLC要在流动相中加入与呈解离状态的待测组分离子电荷相反的离子对试剂，分析酸性物质时常用的离子对试剂有v A、戊烷磺酸钠v B、庚烷磺酸钠v C、十二烷基磺酸钠v D、四丁基溴化铵v E、四丁基氢氧化铵练习与思考v 7、氢溴酸东莨菪碱中其他生物碱的检查方法是v A、水溶液加入氨试液产生浑浊v B、水溶液加入氨试液不得发生浑浊v C、加入氢氧化钾试液则有浑浊v D、加氢氧化钾试液无浑浊v E、加氢氧
19、化钾试液数滴，只发生瞬即消失的类白色浑浊练习与思考v 8、ChP2010硫酸阿托品含量测定：取本品约0.5g，精密称定，加冰醋酸与醋酐各10mL溶解后，加结晶紫指示液1-2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L)滴定至溶液显纯蓝色，并将滴定结果用空白试验校正。v 已知：取样量为0.5009g，高氯酸滴定液浓度C=0.1028mol/L，V空=0.04mL；V样=7.05mL；v(C17H23NO3)2H2SO4H2O 分子量 694.83思考题v简述酸性染料比色法的原理和影响因素。习题习题1药品临床试验管理规范的英文缩写是（）A.GAP B.GCP C.GLP D.GMP E.GSP习题习题2关
20、于中国药典最恰当的说法是（）A.关于药物分析的书 B.收载我国生产的所有药物的书 C.关于药物的词典 D.国家监督管理药品质量的法定技术标准 E关于中草药和中成药的技术规范习题习题3.药品质量的全面控制是()A.药品研究、生产、供应、临床使用和有关技术的管理规范、条例的制度与实施B.药品生产和供应的质量控制C.真正做到把准确、可靠的药品检验数据作为产品质量评价、科研成果鉴定的基础和依据D.帮助药品检验机构提高工作质量和信誉E.树立全国自上而下的药品检验机构的技术权威性和合法地位习题习题6日本药局方的英文缩写是（日本药局方的英文缩写是（）A.BP B.JPC.USP D.CHP E.以上都不是以
21、上都不是 习题习题7GLP的中文全称是（的中文全称是（）A.药品非临床研究质量管理规范药品非临床研究质量管理规范 B.药品生产质量管理规范药品生产质量管理规范 C.药品经营质量管理规范药品经营质量管理规范 D.药品临床试验管理规范药品临床试验管理规范E.分析质量管理规范分析质量管理规范习题习题8中国药典中既对药品具有鉴别意义，又能反映中国药典中既对药品具有鉴别意义，又能反映药品的纯杂程度的项目是（药品的纯杂程度的项目是（）A.外观形状外观形状 B.物理常数物理常数 C.鉴别鉴别 D.检查检查 E.含量测定含量测定习题习题9中国药典（中国药典（2010年版）规定的年版）规定的“溶解溶解”系系指指
22、1g或或1ml溶质能溶解在（溶质能溶解在（）A.1ml溶液中溶液中 B.110ml溶液中溶液中 C 1030ml溶液中溶液中 D.30100ml溶液中溶液中 E.1001000ml溶液中溶液中习题习题11中国药典（中国药典（2010年版）规定，年版）规定，“精密称定精密称定”时，系指称取重量应准确至所取质量的（时，系指称取重量应准确至所取质量的（）A.百分之十百分之十 B.百分之一百分之一 C.千分之一千分之一 D.万分之一万分之一 E.千分之三千分之三习题习题12按中国药典（2010年版）规定，精密量取25 mL溶液时，宜选用（）A.25ml量筒 B.25ml移液管移液管 C.25ml滴定管
23、 D.25ml量瓶 E.50ml量筒13中国药典（2010年版）规定用“约”字时，是指取用量不得超过规定量的（）A.0.1%B.0.3%C1.0%D.5.0%E.10%习题习题14中国药典（中国药典（2010年版）规定的年版）规定的“阴凉处阴凉处”是指（是指（）A.阴暗处，温度不超过阴暗处，温度不超过20 B.阴暗处，温度不超过阴暗处，温度不超过10 C.阴暗处，温度不超过阴暗处，温度不超过20 D.温度不超过温度不超过20 E.室温，避光处室温，避光处习题习题15中国药典规定中国药典规定“精密称定精密称定”，是指称量时（，是指称量时（）A.使用分析天平称准至使用分析天平称准至0.1mg B.使用万分之一天平称准至使用万分之一天平称准至0.1 mg C.使用标准天平称准至使用标准天平称准至0.1 mg D.使用微量分析天平称准至使用微量分析天平称准至0.01 mg E.不论是用何种天平，但须称准至所取质量的千分之一不论是用何种天平，但须称准至所取质量的千分之一习题习题19药品检验工作中包括有药品检验工作中包括有取样，取样，含量测定，含量测定，鉴别试验，鉴别试验，杂质检查，杂质检查，书写检验报告书等内容，正确的顺序为（书写检验报告书等内容，正确的顺序为（）A.B.C.D.E.
