1、检测系统的方法学性能验证检测系统的方法学性能验证新疆医科大学临床医学院检验系新疆医科大学临床医学院检验系 张朝霞张朝霞 教授教授1定性试验和定量试验方法学评价的主要指标，定性试验和定量试验方法学评价的主要指标，定量试验的性能验证方法。定量试验的性能验证方法。定性试验评价的内容和方法定性试验评价的内容和方法检测系统评价的基本步骤检测系统评价的基本步骤21.1.测量误差：测量误差：测量结果测量结果减去被测量的减去被测量的真值真值的差，简称误差。的差，简称误差。2.2.随机误差：随机误差：测量结果与在重复条件下，对同一被测量进测量结果与在重复条件下，对同一被测量进行无限多次测量所得结果的平均值之差。
2、行无限多次测量所得结果的平均值之差。3.3.系统误差：在重复性条件下，对同一被测量进行无限多系统误差：在重复性条件下，对同一被测量进行无限多次测量所得结果的平均值与被测量的真值之差称为系统次测量所得结果的平均值与被测量的真值之差称为系统误差。亦称为误差。亦称为正确度正确度复习基础知识复习基础知识34 4、正确度：检测结果离真值的偏移程度、正确度：检测结果离真值的偏移程度5 5、精密度：、精密度：表示测量结果中随机误差大小的程表示测量结果中随机误差大小的程度。度。6 6、准确度：、准确度：准确度是测量结果中准确度是测量结果中系统误差（正确度）系统误差（正确度）与与随机误差（精密度）随机误差（精密
3、度）的综合的综合。4定量试验方法的验证和确认试验定量试验方法的验证和确认试验二二.更改检测系统的确认试验更改检测系统的确认试验 准确度（准确度（EP9EP9）精密度（精密度（EP5EP5）可报告范围（可报告范围（EP6-P2EP6-P2）参考区间（参考区间（C28-A2C28-A2）分析灵敏度（分析灵敏度（EP17-AEP17-A）线性范围（线性范围（EP6-AEP6-A）分析特异性分析特异性(包括干扰物质）（包括干扰物质）（EP7-PEP7-P）5一一.未更改检测系统的验证未更改检测系统的验证1 1、精密度（批内、批间）、精密度（批内、批间）2 2、准确度（标准物质、标准方法、方法学比对）、
4、准确度（标准物质、标准方法、方法学比对）3 3、可报告范围（验证最大稀释倍数）、可报告范围（验证最大稀释倍数）4 4、参考区间（检测、参考区间（检测2020个正常样本验证）个正常样本验证）定量试验方法的验证和确认试验定量试验方法的验证和确认试验6精密度评价精密度评价 一一 二二 三三第一节 定量检测系统的性能评价 正确度评价正确度评价线性范围和可报告范围的评价线性范围和可报告范围的评价7第8页测定系统测定系统方法学方法学操作程序操作程序校准品校准品仪器仪器试剂配方试剂配方和来源和来源一、测定系统的关键要一、测定系统的关键要素素8二二、评价的基本步骤评价的基本步骤 1.确定方法的质量目标，总允许
5、误差确定方法的质量目标，总允许误差 2.选定评价指标选定评价指标有量值溯源的配套检测系统有量值溯源的配套检测系统，正确度、精正确度、精密度、可报告范围、参考区间验证。密度、可报告范围、参考区间验证。不配套的检测系统：不配套的检测系统：线性范围、回收和干线性范围、回收和干扰试验扰试验 3.收集评价的实验数据收集评价的实验数据 4.判断方法的临床可接收性判断方法的临床可接收性熟悉熟悉9三、评价文件（三、评价文件（1 1）EP5-AEP5-A：临床化学设备操作精密度评价：临床化学设备操作精密度评价 核准指南核准指南EP6-AEP6-A：定量分析方法的线性评价：定量分析方法的线性评价：EP7-PEP7
6、-P：临床化学实验干扰：临床化学实验干扰 ，用于干扰物对检测结果影，用于干扰物对检测结果影响的定性。响的定性。EP9-AEP9-A：用病人标本进行方法学比较和偏倚评估：用病人标本进行方法学比较和偏倚评估 ，主要主要用于检测两种临床方法或设备间的偏倚。用于检测两种临床方法或设备间的偏倚。10评价文件（评价文件（2）EP10-AEP10-A：定量实验室方法的初步评价：定量实验室方法的初步评价EP14-AEP14-A：基质效应的评价：基质效应的评价 EP15-AEP15-A：精密度和准确度性能的应用：精密度和准确度性能的应用EP21-PEP21-P（NEWNEW）：临床实验方法总分析误差的评估）：临
7、床实验方法总分析误差的评估111.1.批内方案批内方案2.2.批间方案批间方案3.EP3.EP方案（方案（EP5-EP5-，EP15EP15A A）四、评价方法四、评价方法（一）精密度评价试（一）精密度评价试验验125 5方案方案1.1.试验样品试验样品 一般选择一般选择2 2个，一个在参考区间附近，另一个为异常值个，一个在参考区间附近，另一个为异常值2.2.批内精密度评价：即一个样品重复测定批内精密度评价：即一个样品重复测定2020次，计算出均值，标准次，计算出均值，标准差和变异系数。差和变异系数。3.3.总精密度评价：用总精密度评价：用2 2个样品每天测定个样品每天测定2 2批，批间测定间
8、隔不得少于批，批间测定间隔不得少于2 2h h，每批平行测定，每批平行测定2 2份，至少共测定份，至少共测定2020天，天，8080个数据。每对结果间的个数据。每对结果间的差（共差（共4040个）代表批内差；个）代表批内差；2 2批均值之间的差（共批均值之间的差（共2020个）代表批间差个）代表批间差；每天；每天4 4个结果的均值（共个结果的均值（共2020个）代表日间差。每批测定至少做一个个）代表日间差。每批测定至少做一个质控。质控。131.1.用有量值溯源的参考物质进行测定用有量值溯源的参考物质进行测定2.2.使用决定性方法或参考方法使用决定性方法或参考方法3.3.与具有量值溯源检测系统进
9、行比对与具有量值溯源检测系统进行比对（1 1）EPEP方案（方案（EP9-EP9-，EP15EP15A A）（2 2）简易比对方案）简易比对方案（二）正确度评价试验（二）正确度评价试验14(1)EP15(1)EP15A A方案方案应来源于健康人或患者，应来源于健康人或患者，无明显干扰因素。无明显干扰因素。全部标本在整个线性范围全部标本在整个线性范围内均匀分布，标本至少内均匀分布，标本至少20例。例。标本要求标本要求15注意：注意：1 1，可一天，但不超过，可一天，但不超过4 4小时内。小时内。2.2.可可3-43-4天（但尽可能短）。天（但尽可能短）。3.3.每个标本只需测定每个标本只需测定1
10、 1。4.二种方法都有室内质控二种方法都有室内质控16计算偏移计算偏移1.1.偏移偏移 2.2.相对偏移相对偏移 3.3.平均偏移平均偏移 4.4.相对平均偏移相对平均偏移 5.5.与质量要求比较与质量要求比较17 1.1.选择高、中、低浓度五份样本同时用各选择高、中、低浓度五份样本同时用各台仪器按常规样本测定的方法，测定其台仪器按常规样本测定的方法，测定其各项参数，每份样本测定各项参数，每份样本测定2 2次，求其均值。次，求其均值。(2)简易比对方法简易比对方法18 3.3.计算与核对标准计算与核对标准 1 1 计算：按计算：按PTPT计算方法计算偏倚。计算方法计算偏倚。PT PT计算公式：
11、（确定仪器测定值计算公式：（确定仪器测定值-比对仪器测比对仪器测定值）定值）/确定仪器测定值确定仪器测定值100100 2 2 标准：标准：偏移偏倚保持所有标本结果差异在偏移偏倚保持所有标本结果差异在CLIA88CLIA88允允许误差的许误差的1/41/4内内19检验科比对记录检验科比对记录201.1.确定测量的线性范围和临床上可能出现确定测量的线性范围和临床上可能出现的范围。的范围。2.2.取线性范围内的高值标本，用稀释液稀取线性范围内的高值标本，用稀释液稀释，最低预期值在线性低限。释，最低预期值在线性低限。3.3.计算回收率：在可接受范。计算回收率：在可接受范。（三）临床可报告范围（三）临
12、床可报告范围21224.4.可报告范围计算：可报告范围计算：（1 1）上限为线性范围上线）上限为线性范围上线稀释倍数稀释倍数（2 2）下限为线性范围低限）下限为线性范围低限23第二节第二节 定性定性检测系统的性能验证检测系统的性能验证 一、验证的内容一、验证的内容（掌握）（掌握）:（1 1）敏感性敏感性 （2 2）特异性特异性 （3 3）正确度）正确度 （4 4）符合性）符合性 （5 5）精密度）精密度(Precision)(Precision)（6 6）CUTOFFCUTOFF值验证值验证24二、定性临床应用与分类二、定性临床应用与分类1 1、定性测定的临床应用、定性测定的临床应用免疫学测定
13、：感染性疾病、肿瘤标志物免疫学测定：感染性疾病、肿瘤标志物核酸和基因检测核酸和基因检测微生物检验微生物检验细胞学检验细胞学检验寄生虫检验验寄生虫检验验252 2、定性实验的临床分类、定性实验的临床分类筛查实验：如便潜血、筛查实验：如便潜血、TPTP诊断实验：如微生物学培养与细菌鉴定诊断实验：如微生物学培养与细菌鉴定确认实验：对以上已做出的检验结果进行验证和确认实验：对以上已做出的检验结果进行验证和确认确认26三、验证目的和时机（熟悉）三、验证目的和时机（熟悉）:1.1.目的：目的：（1 1）评价各定性检测参数是否满足临床检测）评价各定性检测参数是否满足临床检测和认可组织的要求和认可组织的要求.
14、（2 2）验证厂家提供的试剂参数能在本实验室）验证厂家提供的试剂参数能在本实验室得到重现得到重现.27几个重要概念及计算公式的回顾几个重要概念及计算公式的回顾:1.1.敏感性敏感性:将实际患病者将实际患病者正确诊断为阳性的百分率。正确诊断为阳性的百分率。计算公式为：真阳性计算公式为：真阳性/（真阳性（真阳性+假阴性）假阴性）X X 100%.100%.2.2.特异性特异性:指将实际指将实际无病者检测为阴性的百分率无病者检测为阴性的百分率。计算公式为：真阴性计算公式为：真阴性/(/(真阴性真阴性+假阳性）假阳性）X 100%.X 100%.28 阳性结果的可靠性（预示值）：阳性结果的可靠性（预示
15、值）：即测定为阳性的标即测定为阳性的标本实际上为阳性的可能性。本实际上为阳性的可能性。=真阳性真阳性/（真阳性（真阳性+假阳性）假阳性）100%100%阴性结果的可靠性（预示值）：阴性结果的可靠性（预示值）：则为一份给出阴则为一份给出阴性结果的样本实际上为阴性的可靠性。性结果的样本实际上为阴性的可靠性。=真阴性真阴性/（真阴性（真阴性+假阴性）假阴性）100%100%29（一）准确度验证（一）准确度验证:1.1.样本的临床诊断已知（敏感性、特异性）样本的临床诊断已知（敏感性、特异性）室间质评材料室间质评材料(卫生部卫生部)厂商提供的已赋值的参考材料厂商提供的已赋值的参考材料 用参考方法或决定方
16、法定值的材料（或金标准诊断的标用参考方法或决定方法定值的材料（或金标准诊断的标本）。本）。30选取选取4040份（份（2020份）样本份）样本,最好阴阳性各半最好阴阳性各半随机盲法重新分号随机盲法重新分号检测样本检测样本将所有检测结果汇总填表将所有检测结果汇总填表计算评价性能指标计算评价性能指标31临床诊断临床诊断总计总计阳性阳性阴性阴性验证方法验证方法阳性阳性A AB BA+BA+B阴性阴性C CD DC+DC+D总计总计A+CA+CB+DB+DN N32敏感度敏感度=100%=100%A A/（A+CA+C）特异性特异性=100%=100%D D/（B+DB+D）相关样本的患病率相关样本的
17、患病率=100%=100%（A+CA+C）/N/N阳性结果预测值（阳性结果预测值（PVPPVP）=100%=100%A A/（A+BA+B）阴性结果预测值阴性结果预测值 （PVNPVN）=100%=100%D D/（C+DC+D）方法效率（正确率）方法效率（正确率）=100%=100%（A+DA+D）/N/N332.2.样本的临床诊断未知（符合性）样本的临床诊断未知（符合性）同一项目不同检测方法或仪器的比对同一项目不同检测方法或仪器的比对适用范围适用范围:一个项目有两种以上的方法或者两台一个项目有两种以上的方法或者两台以上的仪器以上的仪器(包括同一型号的仪器包括同一型号的仪器)同时检测同时检测
18、,需要进行一致性比对需要进行一致性比对.34选取选取4040份（份（2020份）样本份）样本,最好阴阳性各半最好阴阳性各半随机每随机每8 8（4 4）份分成一组）份分成一组两种方法两种方法(或两台仪器或两台仪器)每天平行检测一组样本每天平行检测一组样本将所有检测结果汇总将所有检测结果汇总评价符合率评价符合率35对比方法对比方法总计总计阳性阳性阴性阴性实验方法实验方法阳性阳性a ab ba+ba+b阴性阴性c cd dc+dc+d总计总计a+ca+cb+db+dn n36阳性符合率阳性符合率=100%=100%a a/(a+c)/(a+c)阴性符合率阴性符合率=100%=100%d d/(b+d
19、)/(b+d)总符合率总符合率=100%(a+d)/n37更换批号的简易比对：更换批号的简易比对：新鲜患者血清阴性新鲜患者血清阴性2 2例，阳性例，阳性3 3例，阳性包含有例，阳性包含有S/COS/CO高、中、低值，用新旧批号试剂检测。高、中、低值，用新旧批号试剂检测。低值避开低值避开“灰区灰区”夹心法：夹心法：S/COS/CO低值低值1.21.23 3竞争法：竞争法：S/COS/CO低值低值0.40.40.60.6判断标准：符合率为判断标准：符合率为100%100%为可接受。为可接受。38二二.精密度验证精密度验证:1.1.批内精密度批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重复检同一份样本在同
20、一批次内平行重复检测测2020次次.然后计算均值然后计算均值,SD,SD和和CV.CV.2.2.批间精密度批间精密度:同一份样本连续检测同一份样本连续检测2020天天,每天平行每天平行检测双孔检测双孔.然后计算均值然后计算均值,SD,SD和和CV.CV.注意注意:1.:1.用用S/COS/CO比值进行统计计算比值进行统计计算.2.2.最好选择临界值最好选择临界值,或弱阳性样本或弱阳性样本.判断标准判断标准:ELISA:ELISA批内批内CV CV 10%10%，批间，批间20%20%39补充：自动加样针的携带污染率的验证补充：自动加样针的携带污染率的验证1 1、取强阳性样品和一阴性样品，按、取
21、强阳性样品和一阴性样品，按l l（阳）、（阳）、2 2（阳）、（阳）、3 3（阴）、（阴）、4 4（阴）、（阴）、5 5（阴）的顺序（阴）的顺序测定。测定。2 2、计算携带污染程度：、计算携带污染程度：携带污染率携带污染率=3=3（阴）一（阴）一5 5（阴）（阴）/2/2（阳）一（阳）一5 5（阴）（阴）100100（用检测的（用检测的ODOD值计算）。值计算）。3 3、符合厂商标准、符合厂商标准40小 结本章节主要分别介绍本章节主要分别介绍定量试验定量试验和定性实验方法学评价的主要指标和定性实验方法学评价的主要指标，评价的内容，评价的内容步骤。步骤。41思考题思考题1 1、何谓定量试验，何谓定性试验。、何谓定量试验，何谓定性试验。2 2、定量和定性试验方法评价指标有哪些？各解、定量和定性试验方法评价指标有哪些？各解决哪些误差类型？决哪些误差类型？4 4、定量试验和定性试验评价精密度和正确度实、定量试验和定性试验评价精密度和正确度实验的方法包括哪些？验的方法包括哪些？5 5、系统误差、随机误差、检测系统的概念。、系统误差、随机误差、检测系统的概念。4243
