1、秦病毒感染的检测方法与防治原则（优选）秦病毒感染的检测方法与防治原则直接病毒诊断直接病毒诊断 细胞病理学方法细胞病理学方法:光镜下检查病变组织或脱落细胞中的光镜下检查病变组织或脱落细胞中的特异性病毒特异性病毒 包涵体，包涵体，DNA病毒在核内装病毒在核内装配产生核内包涵体，配产生核内包涵体，RNA病毒在胞浆装配产生胞病毒在胞浆装配产生胞浆包涵体浆包涵体 电子显微镜法电子显微镜法:负染法（重金属染液，电子光束通过低负染法（重金属染液，电子光束通过低电子密度的病毒颗粒但不能通过金属背景，病毒颗粒明电子密度的病毒颗粒但不能通过金属背景，病毒颗粒明亮清晰，负反差）、超薄切片法、亮清晰，负反差）、超薄切
2、片法、immune electron microscope（抗体处理病毒颗粒形成病毒抗体复合物凝（抗体处理病毒颗粒形成病毒抗体复合物凝聚成团，高速离心负染后观察）聚成团，高速离心负染后观察）病毒抗原检测病毒抗原检测:胞内病毒抗原的检测免疫荧光技术胞内病毒抗原的检测免疫荧光技术、免免疫酶技术疫酶技术 胞外（游离）病毒抗原的检测胞外（游离）病毒抗原的检测ELISA 病毒核酸检测核酸杂交技术病毒核酸检测核酸杂交技术 斑点分子杂交法、斑点分子杂交法、Southern印迹法、印迹法、原位分子杂交原位分子杂交法、法、Northern印迹法印迹法 聚合酶链反应技术（聚合酶链反应技术（PCR）（1）标本处理）
3、标本处理组织、细胞粗提将沉渣、细菌、真菌等去除，组织、细胞粗提将沉渣、细菌、真菌等去除，释释 放病毒，有的还需要提纯浓缩放病毒，有的还需要提纯浓缩体液脑脊液、胸腔液、水泡液、尿液等直接接体液脑脊液、胸腔液、水泡液、尿液等直接接种培种培 养管养管拭子咽、眼、鼻拭子直接放入含有抗生素的培拭子咽、眼、鼻拭子直接放入含有抗生素的培养管养管 病毒的分离培养与鉴定病毒的分离培养与鉴定1 动物接种动物接种2 鸡胚接种鸡胚接种 鸡胚对多种病毒敏感，羊膜腔、尿囊腔、鸡胚对多种病毒敏感，羊膜腔、尿囊腔、卵黄囊、绒毛尿囊膜卵黄囊、绒毛尿囊膜3 组织培养组织培养原代细胞培养 传110代二倍体细胞培养传50100代传代
4、细胞培养三大培养方法三大培养方法（2）分离培养方法）分离培养方法器官培养组织培养 细胞培养 常用的细胞培养常用的细胞培养病毒在细胞内增殖的指标病毒在细胞内增殖的指标正常细胞正常细胞病变细胞病变细胞（3）病毒的鉴定）病毒的鉴定流感病毒和某些副粘病毒感染细流感病毒和某些副粘病毒感染细胞后胞后2448小时，在细胞膜上出小时，在细胞膜上出现病毒的血凝素，能吸附动物及现病毒的血凝素，能吸附动物及人的红细胞人的红细胞 病毒感染鸡胚、动物或细胞后，引起病毒感染鸡胚、动物或细胞后，引起 50%发生死发生死亡或病变的最小病毒量亡或病变的最小病毒量 病毒样本作病毒样本作10倍连续稀释倍连续稀释 病毒感染单层细胞后
5、，产生的局限性病灶（琼脂限制病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶（琼脂限制病毒的扩散），称蚀斑。一个蚀斑是由一个感染性病毒体病毒的扩散），称蚀斑。一个蚀斑是由一个感染性病毒体复制增殖后形成的，称蚀斑形成单位（复制增殖后形成的，称蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU），病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升的蚀），病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升的蚀斑形成单位来表示斑形成单位来表示胞外（游离）病毒抗原的检测ELISA（1）天然被动免疫：通过胎盘的IgG和初乳中的IgA；载体病毒常用的有痘苗病毒、腺病毒、HSV1原代细胞培养 传110代原代细胞培养 传110代减毒活疫苗（atte
6、nuated live vaccine）利用DNA重组技术，将编码病毒抗原的基因插入到另一无毒力的载体病毒，使之高效表达消除肿瘤病毒的潜在的致癌作用部分肽只激发B细胞表位，缺乏激发TH细胞的表位包涵体，DNA病毒在核内装配产生核内包涵体，抗独特型抗体疫苗（antiidiotype vaccine）病毒的血清学诊断病毒的血清学诊断 最有特异性最有特异性中和试验中和试验补体结合试验补体结合试验血凝抑制试验血凝抑制试验免疫扩散等免疫扩散等免疫标记技术免疫标记技术流感病毒与患者血清中抗流感病毒与患者血清中抗HA抗体（中和抗体）结合抗体（中和抗体）结合后，红细胞表面的糖蛋白受体就不能与后，红细胞表面的糖
7、蛋白受体就不能与HA结合，血结合，血凝现象被抑制。双份血清同时做血凝抑制试验，恢复凝现象被抑制。双份血清同时做血凝抑制试验，恢复期抗体效价比急性期高期抗体效价比急性期高4倍或以上可确诊倍或以上可确诊Diagnosis Strategy for Viral Infection 不同肽免疫活性有差异。活疫苗（live vaccine）秦病毒感染的检测方法与防治原则利用DNA重组技术，定向缺失病毒基因组的某一区段，使病毒丧失毒力而保留增殖能力和免疫原性亚单位疫苗（subunit vaccine）物理或化学方法灭活病毒。Diagnosis Strategy for Viral Infection成功的
8、范例1961年我国应用脊灰疫苗，脊灰发病率大幅度下降。物理或化学方法灭活病毒。病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶（琼脂限制病毒的扩散），称蚀斑。变异株可能回复到有毒力的野生株不含病毒核酸，仅有能诱导中和抗体的衣壳蛋白或包膜表面抗原。ELISA for HIV antibody利用DNA重组技术，将编码病毒抗原的基因插入到另一无毒力的载体病毒，使之高效表达秦病毒感染的检测方法与防治原则不含病毒核酸，仅有能诱导中和抗体的衣壳蛋白或包膜表面抗原。病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶（琼脂限制病毒的扩散），称蚀斑。将野毒株表面抗原基因与弱毒株其他基因组合而获得减毒活病毒原位分子杂交法、Norther
9、n印迹法减毒活疫苗（attenuated live vaccine）包涵体，DNA病毒在核内装配产生核内包涵体，1、人工被动免疫、人工被动免疫（1）天然被动免疫：通过胎盘的）天然被动免疫：通过胎盘的IgG和初乳中的和初乳中的IgA；（2）人工被动免疫：）人工被动免疫：1）人胎盘或人血中提取出的免疫球蛋（）人胎盘或人血中提取出的免疫球蛋（IgG）；）；2）康复期病人的血清或高效价免疫血清（）康复期病人的血清或高效价免疫血清（SARS 病人恢复期血清）病人恢复期血清）病毒感染的防治病毒感染的防治人工主动免疫人工主动免疫灭活疫苗：灭活疫苗：乙脑疫苗乙脑疫苗 狂犬病疫苗狂犬病疫苗 流感灭活疫苗流感灭活
10、疫苗HAV，HBV疫苗等疫苗等减毒活疫苗：减毒活疫苗：脊髓灰质炎疫苗脊髓灰质炎疫苗麻疹疫苗麻疹疫苗腮腺炎疫苗腮腺炎疫苗风疹疫苗风疹疫苗HAV疫苗疫苗亚单位疫苗：亚单位疫苗：流感疫苗、乙肝疫苗流感疫苗、乙肝疫苗人工主动免疫病毒疫苗 减毒活疫苗（减毒活疫苗（attenuated live vaccine）灭活疫苗（灭活疫苗（inactivated vaccine）亚单位疫苗（亚单位疫苗（subunit vaccine）基因工程疫苗（基因工程疫苗（gene engineered vaccine）基因工程亚单位疫苗（基因工程亚单位疫苗（gene engineered subunit vaccine）基
11、因工程载体疫苗（基因工程载体疫苗（gene engineered vectored vaccine）基因缺失活疫苗（基因缺失活疫苗（gene deleted live vaccine）核酸疫苗（核酸疫苗（nucleic acid vaccine）。）。合成肽疫苗（合成肽疫苗（synthetic peptide vaccine）抗独特型抗体疫苗（抗独特型抗体疫苗（antiidiotype vaccine）活疫苗（live vaccine）减毒活疫苗减毒活疫苗 基于基因工程技术的新型活疫苗基于基因工程技术的新型活疫苗 遗传重组活疫苗遗传重组活疫苗 基因缺失活疫苗基因缺失活疫苗 载体活疫苗载体活疫苗
12、减毒活疫苗(attenuated live vaccine)自然或人工选择法（如自然或人工选择法（如Ts株）株）所筛选的对人低毒所筛选的对人低毒或无毒的变异株，如脊灰、流感、麻疹的减毒株或无毒的变异株，如脊灰、流感、麻疹的减毒株 优点模拟自然感染，免疫效果好，局部优点模拟自然感染，免疫效果好，局部IgA。理论上的缺点，实际工作中少见理论上的缺点，实际工作中少见 变异株可能回复到有毒力的野生株变异株可能回复到有毒力的野生株 如果机体免疫缺陷，减毒株仍可能引起感染或并如果机体免疫缺陷，减毒株仍可能引起感染或并发症发症 可能激活机体内其它病毒的感染可能激活机体内其它病毒的感染 减毒活苗可能引起持续感
13、染减毒活苗可能引起持续感染 成功的范例成功的范例1961年我国应用脊灰疫苗，脊灰发病年我国应用脊灰疫苗，脊灰发病率大幅度下降。率大幅度下降。1980年天花病毒灭绝年天花病毒灭绝遗传重组活疫苗 将野毒株表面抗原基因与弱毒株其他基将野毒株表面抗原基因与弱毒株其他基因组合而获得减毒活病毒因组合而获得减毒活病毒 适用于基因组分节段双链适用于基因组分节段双链RNA病毒，如病毒，如流感病毒、轮状病毒等流感病毒、轮状病毒等基因缺失活疫苗 利用利用DNA重组技术，定向缺失病毒基重组技术，定向缺失病毒基因组的某一区段，使病毒丧失毒力而因组的某一区段，使病毒丧失毒力而保留增殖能力和免疫原性保留增殖能力和免疫原性
14、优点疫苗株的遗传背景清楚，不易突优点疫苗株的遗传背景清楚，不易突变回到野毒株变回到野毒株载体活疫苗 利用利用DNA重组技术，将编码病毒抗原的重组技术，将编码病毒抗原的基因插入到另一无毒力的载体病毒，使基因插入到另一无毒力的载体病毒，使之高效表达之高效表达 易建立多价疫苗易建立多价疫苗 载体病毒常用的有痘苗病毒、腺病毒、载体病毒常用的有痘苗病毒、腺病毒、HSV1灭活疫菌（inactivated vaccine）灭活全病毒疫苗灭活全病毒疫苗 亚单位疫苗亚单位疫苗 合成肽病毒疫苗合成肽病毒疫苗 基因工程疫苗基因工程疫苗 独特型病毒疫苗独特型病毒疫苗 核酸疫苗核酸疫苗灭活全病毒疫苗 物理或化学方法灭活
15、病毒。适用烈性或易变异物理或化学方法灭活病毒。适用烈性或易变异病毒如乙脑病毒、狂犬病病毒、流感病毒，常病毒如乙脑病毒、狂犬病病毒、流感病毒，常用甲醛液作为灭活剂用甲醛液作为灭活剂 优点生产简单、易保存运输优点生产简单、易保存运输 缺点缺点 需要大量培养病毒，成本高需要大量培养病毒，成本高 无局部抗体，不激活无局部抗体，不激活CTL，可激活，可激活TDTH 甲醛灭活的麻疹病毒和甲醛灭活的麻疹病毒和RSV疫苗可加重疾病，疫苗可加重疾病，机制不详机制不详亚单位疫苗（subunit vaccine）种类种类 化学方法制备如化学方法制备如HBsAg和流感和流感HA 基因工程亚单位疫苗基因工程亚单位疫苗
16、优点优点 不含病毒核酸，仅有能诱导中和抗体的衣不含病毒核酸，仅有能诱导中和抗体的衣壳蛋白或包膜表面抗原。免除了回复突变壳蛋白或包膜表面抗原。免除了回复突变和交叉复活的可能和交叉复活的可能 消除肿瘤病毒的潜在的致癌作用消除肿瘤病毒的潜在的致癌作用合成肽病毒疫苗 人工合成病毒保护性抗原决定簇肽段人工合成病毒保护性抗原决定簇肽段 优点优点 制备容易，可大量生产，易保存，副作用少制备容易，可大量生产，易保存，副作用少 理论与实践上的缺点理论与实践上的缺点 合成肽不具有高级结构，免疫原性弱，使用合成肽不具有高级结构，免疫原性弱，使用时需要加佐剂。时需要加佐剂。不同肽免疫活性有差异。不同肽免疫活性有差异。部分肽只激发部分肽只激发B细胞表位，缺乏激发细胞表位，缺乏激发TH细胞细胞的表位的表位基因工程疫苗 利用利用DNA重组技术制备的生物制品。如将编重组技术制备的生物制品。如将编码病毒特异抗原的基因用适当的载体将此基码病毒特异抗原的基因用适当的载体将此基因带入大肠杆菌或真核细胞，使之表达并纯因带入大肠杆菌或真核细胞，使之表达并纯化表达产物化表达产物 研发成本高，生产成本低，下游工程复杂研发成本高，生产成本低，下游工程复杂
