1、大鼠心肌梗死实验模型的制备大鼠心肌梗死实验模型的制备背景背景 有关心肌梗死模型的制作，国内外采用结扎、有关心肌梗死模型的制作，国内外采用结扎、药物、冷冻、栓塞、电凝等方法制作兔、大鼠、药物、冷冻、栓塞、电凝等方法制作兔、大鼠、狗等不同动物的心肌梗死模型，但大多数学者认狗等不同动物的心肌梗死模型，但大多数学者认为结扎法复制的心肌梗死模型与心肌梗死实际发为结扎法复制的心肌梗死模型与心肌梗死实际发病过程更符合。病过程更符合。由于临床大多心肌缺血或心肌梗死都由于临床大多心肌缺血或心肌梗死都是一渐进性过程，会不断发生缺血或梗死后再灌是一渐进性过程，会不断发生缺血或梗死后再灌现象。而冠状动脉结扎法能人为地
2、仿造临床心肌现象。而冠状动脉结扎法能人为地仿造临床心肌梗死过程的冠状动脉梗死，其梗死部位、分布范梗死过程的冠状动脉梗死，其梗死部位、分布范围相对一致，病理生理、生化改变与临床心肌梗围相对一致，病理生理、生化改变与临床心肌梗死更相似。死更相似。综上所述综上所述,结合实际操作条件结合实际操作条件,选用结选用结扎大鼠冠状动脉结扎的方法扎大鼠冠状动脉结扎的方法,以建立稳定的、适于以建立稳定的、适于细胞移植治疗心肌梗死的大鼠动物模型。细胞移植治疗心肌梗死的大鼠动物模型。建模原理建模原理 生物体各组织器官要维持其正常的生命活动，生物体各组织器官要维持其正常的生命活动，需要心脏不停地搏动以保证血运。而心脏作
3、为一个泵血的需要心脏不停地搏动以保证血运。而心脏作为一个泵血的肌性动力器官，本身也需要足够的营养和能源，供给心脏肌性动力器官，本身也需要足够的营养和能源，供给心脏营养的血管系统，就是冠状动脉和静脉，也称冠脉循环。营养的血管系统，就是冠状动脉和静脉，也称冠脉循环。冠状动脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部冠状动脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部,行于行于心脏表面。冠状静脉伴随心脏表面。冠状静脉伴随 冠状动脉收集代谢后的静脉血，冠状动脉收集代谢后的静脉血，归流于冠状静脉窦，回到右心房。正常情况下，冠状动脉归流于冠状静脉窦，回到右心房。正常情况下，冠状动脉 之间，尚有丰富的吻合支或侧支。冠状动
4、脉虽小，但血流之间，尚有丰富的吻合支或侧支。冠状动脉虽小，但血流量很大。占心排血量的量很大。占心排血量的5%5%，这就保证了心脏有足够的营养，这就保证了心脏有足够的营养，维持它有力地昼夜不停地跳动。如果冠状动脉突然阻塞，维持它有力地昼夜不停地跳动。如果冠状动脉突然阻塞，不能很快建立侧支循环，常常导致心肌梗塞。但若冠状动不能很快建立侧支循环，常常导致心肌梗塞。但若冠状动脉阻塞是缓慢形脉阻塞是缓慢形 成的，则侧支可逐渐扩张，并可建立新成的，则侧支可逐渐扩张，并可建立新的侧支循环，起代偿的作用。左冠状动脉为最大冠状动脉的侧支循环，起代偿的作用。左冠状动脉为最大冠状动脉分支分支.主要供应左心室前壁和侧
5、壁，其主要分支是左前降主要供应左心室前壁和侧壁，其主要分支是左前降支和左回旋支支和左回旋支.选用结扎鼠左冠状动脉前降支中上选用结扎鼠左冠状动脉前降支中上1 13 3处处结扎的方法结扎的方法,冠状动脉突然阻塞，侧支循环不及起代偿的冠状动脉突然阻塞，侧支循环不及起代偿的作用作用.以建立稳定的、适于细胞移植治疗心肌梗死以建立稳定的、适于细胞移植治疗心肌梗死.1 1 实验步骤和观察项目实验步骤和观察项目 1.11.1实验动物健康雄性实验动物健康雄性WistarWistar大鼠大鼠3030只只,体质量体质量250 250 25 g25 g制作心肌梗死动物模型制作心肌梗死动物模型的大鼠体重以的大鼠体重以2
6、00200 250 g250 g为宜（动物太小，为宜（动物太小，不利于操作，耐受创伤能力低；而体重及不利于操作，耐受创伤能力低；而体重及鼠龄太大，则不利术后观察生存期，而且鼠龄太大，则不利术后观察生存期，而且麻醉剂量不好掌握，凝血功能较差，不易麻醉剂量不好掌握，凝血功能较差，不易止血。实验动物由广西医科大学实验中心止血。实验动物由广西医科大学实验中心提供。）提供。）1.2 1.2 试验材料和药品试验材料和药品:10%10%水合氯醛溶液、青霉素注射液、碘伏、水合氯醛溶液、青霉素注射液、碘伏、小动物呼吸机、心电图机、大白鼠手术板、小动物呼吸机、心电图机、大白鼠手术板、5ml5ml注射器注射器2 2
7、个、个、7 7号或号或4 4号针头、眼科剪、号针头、眼科剪、手术灯、眼科开睑器、小镊子、小弯钳、手术灯、眼科开睑器、小镊子、小弯钳、缝针、缝合线缝针、缝合线(6-0(6-0线线)、小无菌棉签、小无菌棉签 1.3 1.3 麻醉麻醉 SDSD大鼠称重大鼠称重(两只两只WistarWistar大鼠体重各为大鼠体重各为290g290g及及360g),360g),号鼠腹腔注射乌拉号鼠腹腔注射乌拉坦坦1.45ml1.45ml号鼠腹腔注射号鼠腹腔注射 10%10%水合氯醛水合氯醛1ml1ml。1.41.4气管插管气管插管 大鼠仰卧固定于手术台上。大鼠仰卧固定于手术台上。沿颈部中线切沿颈部中线切开皮肤，分离组
8、织暴露气管，开皮肤，分离组织暴露气管，用用7 7号注射针号注射针头做为插管以头做为插管以4545度斜进针从甲状软骨下缘度斜进针从甲状软骨下缘轻轻水平插入约轻轻水平插入约0.71.5cm0.71.5cm 斜面朝上。固斜面朝上。固定好定好,气管插管，呼吸比为气管插管，呼吸比为1 1：2 2，呼吸频率，呼吸频率9090次次rainrain，潮气量，潮气量14 ml14 mlkgkg。关闭呼吸。关闭呼吸机，四肢接心电图机记录术前心电图。完机，四肢接心电图机记录术前心电图。完毕打开呼吸机，毕打开呼吸机，(此时作心电图与开胸后此时作心电图与开胸后结扎前心电图对照结扎前心电图对照,验证是否为先天变异或验证是
9、否为先天变异或实验前异常心电图机未借到，所以心电实验前异常心电图机未借到，所以心电图未能做图未能做)甲状软骨下缘甲状软骨下缘 1.51.5开胸及冠状动脉结扎开胸及冠状动脉结扎 心前区域剃毛心前区域剃毛,在心脏搏动最明显处在心脏搏动最明显处,第三肋第三肋间隙水平开胸间隙水平开胸,皮肤切口约皮肤切口约1.51.52.0 cm,2.0 cm,逐层钝逐层钝性分离肌肉至胸膜。剪开胸膜性分离肌肉至胸膜。剪开胸膜,用眼科开睑器撑开用眼科开睑器撑开肋间肌切口肋间肌切口,以无菌棉球向下压迫左肺以保护肺脏以无菌棉球向下压迫左肺以保护肺脏剪开心包剪开心包,用无菌棉签推开左心耳。在左心耳下距用无菌棉签推开左心耳。在左
10、心耳下距主动脉根部主动脉根部2 23 mm3 mm处处,用用6-06-0线穿过一小束心肌线穿过一小束心肌,并结扎。并结扎。(1)(1)结扎后左室壁变苍白结扎后左室壁变苍白,并出现室壁运并出现室壁运动减弱。动减弱。(2)(2)术中结扎成功标识术中结扎成功标识:心电监护见心电监护见IIII导导联联大鼠于结扎冠状动脉后大鼠于结扎冠状动脉后QRSQRS波峰降低，波峰降低，J J点上移，点上移，STST段明显抬高段明显抬高.证明心肌缺血存在心肌梗死（证明证明心肌缺血存在心肌梗死（证明结扎成功，心电图于结扎前与结扎后的心电图改结扎成功，心电图于结扎前与结扎后的心电图改变变,排除手术操作造成人为性大鼠心肌缺
11、血）排除手术操作造成人为性大鼠心肌缺血）。然后加大通气量然后加大通气量,充分使肺复涨充分使肺复涨,并清理胸腔。并清理胸腔。左心耳左心耳可编辑在左心耳下距主动脉根部23 mm处可见一粉红色细小血管 1.6 1.6 关胸及术后处理关胸及术后处理 逐层关胸逐层关胸,断开呼吸机断开呼吸机,清理呼吸道（拔出清理呼吸道（拔出气管插管后应注意将大鼠舌头外提，防止舌气管插管后应注意将大鼠舌头外提，防止舌根后坠出现缺氧窒息）并观察大鼠呼吸，以根后坠出现缺氧窒息）并观察大鼠呼吸，以浅快呼吸，频率浅快呼吸，频率30403040次次/min/min为宜。术后单笼为宜。术后单笼饲养。饲养。注注:手术过程中大鼠冠状动脉结
12、扎后可能马上出手术过程中大鼠冠状动脉结扎后可能马上出现心律失常，室性停搏或心室纤维颤动，立现心律失常，室性停搏或心室纤维颤动，立即解除对心脏的挤压或同时进行心内按压可即解除对心脏的挤压或同时进行心内按压可以使心脏恢复搏动。以使心脏恢复搏动。1.7 1.7 术后抗感染及护理术后抗感染及护理 大鼠本身具有比较强的抗感染能力，但是大鼠本身具有比较强的抗感染能力，但是预防感染有利于促进术后恢复，并且良好预防感染有利于促进术后恢复，并且良好的术后护理可以提高动物模型的生存率。的术后护理可以提高动物模型的生存率。因此，术前所用手术器械均要用因此，术前所用手术器械均要用7575酒精酒精浸泡消毒。术后腹腔注射
13、青霉素浸泡消毒。术后腹腔注射青霉素8080万万U U。待。待大鼠麻醉清醒后即可与其糖水和饲料，无大鼠麻醉清醒后即可与其糖水和饲料，无须禁食。术后可适量补充能量。冬天应注须禁食。术后可适量补充能量。冬天应注意保嗳。意保嗳。2 2 检测指标检测指标2.1 2.1 术前和术中做的心电图术前和术中做的心电图 2.2 2.2 组织病理学检查组织病理学检查 开胸结扎冠状动脉后开胸结扎冠状动脉后1d1d、2d2d及及3 d3 d分批处分批处死实验鼠。取其心脏，沿心脏纵轴剖开左死实验鼠。取其心脏，沿心脏纵轴剖开左右心室，用右心室，用1010福尔马林溶液固定福尔马林溶液固定24 h24 h，然后垂直于心脏纵轴从
14、心尖部至心底部分然后垂直于心脏纵轴从心尖部至心底部分别横切别横切4 4个切面，石蜡包埋，连续个切面，石蜡包埋，连续5 um5 um厚度厚度切片，切片，HEHE染色，观察左室壁心肌组织的病染色，观察左室壁心肌组织的病理变化，确定心肌梗死的存在。理变化，确定心肌梗死的存在。3 3 结果讨论结果讨论两只实验鼠死亡原因讨论：两只实验鼠死亡原因讨论：号实验鼠在结扎冠状动脉时心脏停止跳动死号实验鼠在结扎冠状动脉时心脏停止跳动死亡号实验鼠在关闭胸腔时呼吸停止死亡亡号实验鼠在关闭胸腔时呼吸停止死亡考虑以下可能原因：考虑以下可能原因：.鼠龄过大，适应手术能力较适龄鼠差，多篇文鼠龄过大，适应手术能力较适龄鼠差，多
15、篇文献提出实验鼠体重以献提出实验鼠体重以250 250 25 g 25 g 为宜，本次实为宜，本次实验鼠体重分别为验鼠体重分别为 290g290g及及360g;360g;.实验鼠体重较实验前预期的要重，麻醉实验鼠体重较实验前预期的要重，麻醉剂有使用过量的可能，实验鼠术中出现呼剂有使用过量的可能，实验鼠术中出现呼吸抑制；吸抑制；.开睑器撑开术口压迫肺脏时间过长，可开睑器撑开术口压迫肺脏时间过长，可能存在气胸肺不张造成实验鼠缺氧；能存在气胸肺不张造成实验鼠缺氧；.压迫心脏时造成大血管移位扭转，重要压迫心脏时造成大血管移位扭转，重要脏器供血不足；脏器供血不足；.术中失血过多，造成血压下降，失血性休术
16、中失血过多，造成血压下降，失血性休克；克；.结扎冠状动脉时部位未掌握好，结扎部结扎冠状动脉时部位未掌握好，结扎部位过高（结扎到左主干），大鼠出现严重位过高（结扎到左主干），大鼠出现严重心律失常乃至心跳骤停，尽管已施以胸外心律失常乃至心跳骤停，尽管已施以胸外按压等抢救措施，但是最终没有成功使实按压等抢救措施，但是最终没有成功使实验鼠复苏；验鼠复苏；.呼吸机频率和潮气量没有掌握好；呼吸机频率和潮气量没有掌握好；.时值冬季，气温较低，手术操作时间较时值冬季，气温较低，手术操作时间较长，开胸后实验鼠体温丧失较大，存在低长，开胸后实验鼠体温丧失较大，存在低体温、手术和麻醉多重打击。体温、手术和麻醉多重打击。可编辑
