1、大肠杆菌大肠杆菌葡萄球菌葡萄球菌导入新课 在缤彩纷呈的生物界，微生物似乎显得在缤彩纷呈的生物界，微生物似乎显得过于微小与沉寂。然而，它们在自然界却作过于微小与沉寂。然而，它们在自然界却作用非凡。用非凡。放线菌放线菌真菌真菌青霉菌青霉菌黑曲霉黑曲霉酵母菌酵母菌 微生物微生物是一般肉眼看不见或看不清的微小生物，个体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物，统称为微生物。微生物包括细菌、病毒、真菌、和少数藻类等。（但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。）想一想想一想 这些肉眼看不到的微生物是怎样获得呢？这些肉眼看不到的微生物是怎样获得呢？专题专题2 微生物的培
2、养与应用微生物的培养与应用 为了能直接观察培养物的形态及生长情况，科为了能直接观察培养物的形态及生长情况，科学家希望能将微生物培养在固体表面上，就像微生学家希望能将微生物培养在固体表面上，就像微生物生长在橘子皮或土豆上一样。最初，德国医生罗物生长在橘子皮或土豆上一样。最初，德国医生罗伯特伯特科赫此试着用明胶作培养基的凝固剂。科赫此试着用明胶作培养基的凝固剂。但是，但是，人们很快发现，明胶在人们很快发现，明胶在20 以上就变软了，很难进以上就变软了，很难进行分离微生物的划线操作。而大多数细菌的培养温行分离微生物的划线操作。而大多数细菌的培养温度都不低于度都不低于25。科赫的同事。科赫的同事Wal
3、ter Hesse发现琼发现琼脂比明胶更适合做培养基的凝固剂。这个改进的方脂比明胶更适合做培养基的凝固剂。这个改进的方法很快就被大家采纳。法很快就被大家采纳。标标准准培养基类型培养基类型配制特点配制特点主要应用主要应用物物理理性性质质固体培养基固体培养基加入琼脂较多加入琼脂较多微生物的分离、计数微生物的分离、计数等等半固体培养半固体培养基基加入琼脂较少加入琼脂较少观察微生物运动、鉴观察微生物运动、鉴定菌种、保藏菌种等定菌种、保藏菌种等液体培养基液体培养基不加入琼脂不加入琼脂工业生产，连续培养工业生产，连续培养化化学学组组成成合成培养基合成培养基由已知成分配制而成，由已知成分配制而成，培养基成分
4、明确培养基成分明确菌种分类、鉴定菌种分类、鉴定天然培养基天然培养基由天然成分配制而成，由天然成分配制而成，培养基成分不明确培养基成分不明确工业生产工业生产目目的的用用途途鉴别培养基鉴别培养基添加某种指示剂或化学药品添加某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生鉴别不同种类的微生物物选择培养基选择培养基添加（或缺少）某种化学物添加（或缺少）某种化学物质质 培养、分离出特定的培养、分离出特定的微生物微生物思考：1 1、固体和液体培养基的区别？固体培养基和、固体和液体培养基的区别？固体培养基和液体培养基你认为哪个更适合工业生产？为液体培养基你认为哪个更适合工业生产？为什么？什么？液体培养基；微生物与培养
5、基中营养液体培养基；微生物与培养基中营养物质接触充分，快速生长繁殖和产生物质接触充分，快速生长繁殖和产生大量代谢产物大量代谢产物选择培养基加入加入青霉素青霉素的培养基的培养基:分离分离酵母菌、霉菌等真菌酵母菌、霉菌等真菌加入加入高浓度食盐高浓度食盐的培养基的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源不加氮源的无氮培养基的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳不加含碳有机物的无碳培养基有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞可抑制细菌、放线可抑
6、制细菌、放线菌细胞壁主要成分菌细胞壁主要成分肽聚糖的合成肽聚糖的合成其细胞壁是由纤其细胞壁是由纤维素、几丁质、维素、几丁质、葡聚糖组成葡聚糖组成 牛肉膏（Beef Extract）又称牛肉浸膏，是采用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。有牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。现在，市场上出现了一些熟食店、面馆为牟利而用牛肉膏将猪肉“变”牛肉的现象 蛋白胨从来源上可分为动物性蛋白胨和蛋白胨从来源上可分为动物性蛋白胨和植物性蛋白胨。胰胨、肉胨、骨胨等都植物性蛋白胨。胰胨、肉胨、骨胨等都是动物性蛋白胨，而大豆蛋白胨等则是是动物性蛋白胨，而大豆蛋白胨等则是植物性
7、蛋白胨。植物性蛋白胨。动物性来源的蛋白胨还有：蚕蛹蛋白胨、动物性来源的蛋白胨还有：蚕蛹蛋白胨、血液蛋白胨等。血液蛋白胨等。蛋白质分解产物，如将牛肉、酪蛋白、蛋白质分解产物，如将牛肉、酪蛋白、牛奶粉、白明胶、大豆蛋白、丝蛋血牛奶粉、白明胶、大豆蛋白、丝蛋血 纤维蛋白等为原料，经不完全的水解工纤维蛋白等为原料，经不完全的水解工艺所得的产物。市售产品以淡黄至棕黄艺所得的产物。市售产品以淡黄至棕黄色粉剂为主。其分子量介于月示和肽之色粉剂为主。其分子量介于月示和肽之间，约间，约2000左右。不同来源的蛋白质和左右。不同来源的蛋白质和不同的水解条件，其水解物中组成可千不同的水解条件，其水解物中组成可千差万
8、别。所以胨往往是一个复杂的多肽差万别。所以胨往往是一个复杂的多肽混合物。可溶于水，过热不凝固，在饱混合物。可溶于水，过热不凝固，在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配培养基、特种功能性食品和化妆品的配料，也有用作啤酒等产品的稳定剂。料，也有用作啤酒等产品的稳定剂。鲜骨蛋白胨鲜骨蛋白胨 采用新鲜骨为原料，经发酵喷雾干燥而采用新鲜骨为原料，经发酵喷雾干燥而成。广泛用于黄原胶、食品添加剂、医成。广泛用于黄原胶、食品添加剂、医 药中间体、生物制品等发酵产品中药中间体、
9、生物制品等发酵产品中菌落菌落:单个或少数细单个或少数细菌在固体培养菌在固体培养基上大量繁殖基上大量繁殖时，就会形成时，就会形成一个肉眼可见一个肉眼可见的，具有一定的，具有一定形态结构的子形态结构的子细胞群体，叫细胞群体，叫菌落菌落。菌落是鉴定菌菌落是鉴定菌种的重要依据。种的重要依据。观察菌落特征。如：粗糙与光滑程度观察菌落特征。如：粗糙与光滑程度2 2、记得不用显微镜如何区分、记得不用显微镜如何区分S S型细菌和型细菌和R R型细型细菌吗？菌吗？无菌技术泛指在培养微生物的操作中，无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有所有防止杂菌污染防止杂菌污染的方法。的方法。思维激活思维激活 用用酒精擦拭实验
10、者手臂属消毒还是灭菌？酒精擦拭实验者手臂属消毒还是灭菌？70%与与95%的酒精，哪一种效果更好？为什么？的酒精，哪一种效果更好？为什么？提示提示酒精擦拭属化学消毒，酒精消毒时，酒精擦拭属化学消毒，酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果的酒精杀菌效果最好。原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，最好。原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。消消毒和灭菌的区别毒和灭菌的区别条件条件结果结果常用的方法常用的方法消毒消毒较为较为温和温和的物的物理或化学方法理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部仅杀死
11、物体表面或内部一部分对人体有害的微生物分对人体有害的微生物(不不包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法紫外线或化学药物消毒法灭菌灭菌强烈强烈的理化因的理化因素素杀死物体内外所有的微生物，杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌压蒸汽灭菌有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力很强的
12、抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后才死亡。小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌细菌、原生动物、真菌和植细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖或休物等产生的一种有繁殖或休眠作用的眠作用的生殖细胞生殖细胞。能直接。能直接发育成新个体。发育成新个体。比较比较项项理化因素的理化因素的作用强度作用强度消灭微生物消灭微生物的数量的数量芽孢和孢子芽孢和孢子能否被消灭能否被消灭消毒消毒灭菌灭菌较为
13、温和较为温和强烈强烈部分生活状部分生活状态的微生物态的微生物不能不能全部微生物全部微生物能能1 1、煮沸消毒法、煮沸消毒法:100 100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯氯气消毒水源气消毒水源4 4、紫外线消毒、紫外线消毒(1)(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2 2、干热灭菌
14、：、干热灭菌：160-170 160-170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌：、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维持下维持15-30min.15-30min.(2)(2)灭菌的方法：灭菌的方法：牛肉膏牛肉膏5.0g蛋白胨蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂琼脂20.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL注意注意 牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，称取时牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，称取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖。动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖。蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏用玻璃棒挑取牛肉膏用玻璃棒挑取牛肉膏加水加热熔
15、化牛肉膏；加水加热熔化牛肉膏；加入蛋白胨和氯化钠加入蛋白胨和氯化钠继续加热；继续加热；加入琼脂；加入琼脂；用蒸馏水定容到用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。琼脂糊底而导致烧杯破裂。在压力为在压力为100kPa，温度为，温度为121条条件下，灭菌件下，灭菌15-30min。答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。可以进行倒平板了。讨论讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却
16、到50 左左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？估计培养基的温度？2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既既防止皿盖上的水珠落入培养基防止皿盖上的水珠落入培养基,又又可以避免培养基可以避免培养
17、基中的水分过快地挥发。中的水分过快地挥发。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？还能用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。这个平板培养微生物。（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连通过接种环在
18、琼脂固体培养基表面连续续划划线的操作线的操作,将聚集的菌将聚集的菌种种逐步稀释分散到培养基逐步稀释分散到培养基的表面的表面.在数次在数次划划线后线后,可以分离到由一个细胞繁殖而可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落这就是菌落.平板划线操作平板划线操作1.将接种环放在火焰上将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红灼烧，直到接种环烧红2.在火焰旁冷却接种环、在火焰旁冷却接种环、并打开棉塞并打开棉塞3.将试管口通过火焰。将试管口通过火焰。5.将试管口通过火焰，并塞将试管口通过火焰，并塞上棉花。上棉花。4.将已冷却的接种环伸入菌将已冷却的接种环伸入菌液中，
19、沾取一环菌液。液中，沾取一环菌液。不能使用脱脂棉，不能使用脱脂棉，否则容易吸水，否则容易吸水，造成污染。造成污染。一旦划破，会造成划线不均匀，难以一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。长，会形成一个条状的菌落。6.左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基
20、。盖。注意不要划破培养基。8.将平板倒将平板倒置，放入置，放入培养箱中培养箱中培养。培养。7.灼烧接种环，待灼烧接种环，待其冷却后，从第其冷却后，从第一区域划线的末一区域划线的末端开始往第二区端开始往第二区域内划线。重复域内划线。重复以上操作。在三、以上操作。在三、四、五区域内划四、五区域内划线。注意不要将线。注意不要将最后一区域的划最后一区域的划线与第一区域相线与第一区域相连。连。1.接种环接种环只蘸一次菌液只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置但要在培养基不同位置连续划线多次连续划线多次.2.划线划线首尾不能相接首尾不能相接3.划线后划线后,培养皿培养皿倒置培养倒置培养划线分离法注意事项划线分
21、离法注意事项:其他画线分离图：其他画线分离图：不同的平板划线法不同的平板划线法培培养养基基表表面面的的单单菌菌落落1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种
22、环种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。细菌污染环境和感染操作者。讨论：讨论：2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3
23、.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。6 6支试管，分别加入支试管，分别加入9ml9ml无菌水无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布
24、平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：菌液菌液微量微量 移移液器液器稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：b.b.涂布平板：涂布平板：不超过不超过0.1ml0.1ml各梯度分别涂布各梯度分别涂布3个平板个平板1 1个不涂布作空白对照个不涂布作空白对照滴滴灼灼冷冷涂涂稀稀释释10103 3倍倍稀稀释释10104 4倍倍稀稀释释10105 5倍倍稀释涂布法稀释涂布法 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第一想，第2步应如何
25、进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？答：应从操作的各个细节保证答：应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等。其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等。讨论讨论结果分析与评价结果分析与评价 培养培养12h12h与与24h24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同同（一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温12d后无菌落生后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需
26、要重新制备。长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状大小基本一致，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录微微生生物物的的培培
27、养养基础基础知识知识实验操作实验操作结果分析与评价结果分析与评价培养基培养基定义：定义：分类：分类：人们按照微生物对营养物质的人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁不同需求，配置出供其生长繁殖的营养物质殖的营养物质固体培养固体培养基基液体培养液体培养基基无菌技术无菌技术培养微生物的操作中，所有防培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法止杂菌污染的方法定义：定义：消毒与灭菌消毒与灭菌常用灭菌方法常用灭菌方法制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌(平板划线法和稀释平板划线法和稀释涂布平板法）涂布平板法）课堂小结 1.干燥、真空包装、冷藏冷冻等。
28、这些方法干燥、真空包装、冷藏冷冻等。这些方法抑制微生物生长需要的水、空气、适宜的温度等抑制微生物生长需要的水、空气、适宜的温度等来阻止其生长。来阻止其生长。2.这三种培养技术都需要为培养物提供充这三种培养技术都需要为培养物提供充足的营养，但无土栽培技术的操作并不需要保足的营养，但无土栽培技术的操作并不需要保证无菌的条件，而其他两种技术都要求严格的证无菌的条件，而其他两种技术都要求严格的无菌条件。无菌条件。习题答案 3.正是由于证明了微生物正是由于证明了微生物不是自发产生的，微生物学才不是自发产生的，微生物学才可能发展成为一门自立的学科；可能发展成为一门自立的学科；巴斯德实验中用到的加热灭菌巴斯
29、德实验中用到的加热灭菌的方法到这了有效的灭菌方法的方法到这了有效的灭菌方法的出现，而这一灭菌原理也适的出现，而这一灭菌原理也适用于食品的保存。用于食品的保存。【例【例1】培养培养基、培养皿、接种环、实验操作基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是法依次是()。化学消毒灼烧灭菌干热灭菌化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线灭菌高压蒸汽灭菌巴氏消毒法紫外线灭菌高压蒸汽灭菌巴氏消毒法A BC D深度剖析深度剖析培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭
30、需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。其营养成分可采用巴氏消毒法。答案答案A例例3 除除平板划线法与稀释涂布平板法外，还有平板划线法与稀释涂布平板法外，还有哪些接种方法？微生物接种技术中最核心的内容哪些接种方法？微生物接种技术中最核心的内容是什么？是什么？n提示微生物接种方法还有斜面接种及穿刺接提示微生物接种方法还有斜面接种及穿刺接种等方法，所有微生物接种方法中最核心
31、的内种等方法，所有微生物接种方法中最核心的内容是容是“防止杂菌污染，保证培养物的纯度防止杂菌污染，保证培养物的纯度”。【例【例4】下下列有关平板划线操作的叙述不正确列有关平板划线操作的叙述不正确的是的是()。A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物可能存在的微生物污染培养物B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种次划线结束后，接种环上残留的菌种C在第二区域内划线时，接种环上的菌种在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液直接来源于菌液D划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死划
32、线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者感染操作者解析解析平板划线操作中，接种环取菌种前灼烧的平板划线操作中，接种环取菌种前灼烧的目的是避免接种环上可能存在的微生物污染培养目的是避免接种环上可能存在的微生物污染培养物，以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次物，以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种。划线结束仍需灼烧接种环，划线后残留的菌种。划线结束仍需灼烧接种环，是为了能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细是为了能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。从第二次划线开始，菌污染环境和感
33、染操作者。从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。的末端。答案答案C【例【例5】如如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为12345。下列操作方法正确的是。下列操作方法正确的是()。A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B划线操作须在火焰上进行划线操作须在火焰上进行C在在5区域中才可以得到所需菌落区域中才可以得到所需菌落D在在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌区域中划线前后都要对接种环灭菌深度剖析深度剖析本题考查平板划线的操作方法。在每次划线本题考查
34、平板划线的操作方法。在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰边进行。在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰边进行。在5个区个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。答案答案D（11年新课标卷）年新课标卷）39.【生物 选修1：生物技术实践】（15分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于培养基。纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力 。通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、和 。无菌技术要求试验操作应在酒精灯 附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。原油 选择 平板划线法 稀释涂布平板法 强。干热灭菌法 高压蒸汽灭菌法 火焰
