1、药学微生物基础教案上课时间上课时间:200 年年 月月 日日授课内容授课内容:第七章第七章 药物体外抗菌试验药物体外抗菌试验授授 课课 人人:任教班级任教班级:级级 班班课课 时时:课课 型型:教学媒体教学媒体:教学目标教学目标：、知道体外抗菌试验的应用。、知道体外抗菌试验的应用。、熟记最小抑菌浓度（、熟记最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度）和最小杀菌浓度（MBC）概念。）概念。、熟知常用的体外抗菌试验的方法和影响因素。、熟知常用的体外抗菌试验的方法和影响因素。教学重点教学重点：、最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。、最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。、液体稀释法和滤纸片法的原理和方法。、液体稀释法和滤纸
2、片法的原理和方法。教学难点教学难点：、最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的概念。、最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的概念。、用液体稀释法测定、用液体稀释法测定MIC和和MBC值的原理和方法。值的原理和方法。、滤纸片法的测定原理和方法。、滤纸片法的测定原理和方法。第七章第七章 药物体外抗菌试验药物体外抗菌试验第一节第一节 药物体外抗菌试验药物体外抗菌试验一、稀释法一、稀释法 稀释法是在培养基中含有按几何级稀释法是在培养基中含有按几何级数稀释的抗菌药物中数稀释的抗菌药物中,接种待试菌液，经接种待试菌液，经培养后，观察结果，从而测得抗菌药物培养后，观察结果，从而测得抗菌药物的最低抑菌浓度的最低抑菌浓度(MIC)和
3、最低杀菌浓度和最低杀菌浓度(MBC)，并可根据该抗菌药物在血液内，并可根据该抗菌药物在血液内的浓度的浓度,来推测临床疗效。来推测临床疗效。最低抑菌浓度最低抑菌浓度(MIC)是指药物能抑制微生是指药物能抑制微生物生长的最低浓度，通常用物生长的最低浓度，通常用g/ml或或U/ml来来表示；表示；最低杀菌浓度最低杀菌浓度(MBC)是指药物能杀死微是指药物能杀死微生物的最低浓度，也常用生物的最低浓度，也常用g/ml或或U/ml来表示。来表示。MIC和和MBC都可以用来评价药物抑都可以用来评价药物抑菌或杀菌作用的强弱，数值越小，药物菌或杀菌作用的强弱，数值越小，药物的作用越强。的作用越强。稀释法主要有液
4、体培养基稀释法和固稀释法主要有液体培养基稀释法和固体培养基稀释法。体培养基稀释法。1液体培养基稀释法液体培养基稀释法 在一系列试管中，用液体培养基将药在一系列试管中，用液体培养基将药物稀释，使各管内含有的药物呈一系列物稀释，使各管内含有的药物呈一系列递减的浓度，然后在每支试管内加入一递减的浓度，然后在每支试管内加入一定量的试验菌。在定量的试验菌。在35下培养下培养24-48小小时后，肉眼观察各试管的浑浊情况，记时后，肉眼观察各试管的浑浊情况，记录能抑制细菌生长的最低浓度即为录能抑制细菌生长的最低浓度即为MIC。进一步将未长菌试管内的培养进一步将未长菌试管内的培养液移种到新鲜的琼脂培养基上，如液
5、移种到新鲜的琼脂培养基上，如重新长出细菌说明该浓度只有抑菌重新长出细菌说明该浓度只有抑菌作用，如无菌生长则认为该浓度具作用，如无菌生长则认为该浓度具有杀菌作用，记录为有杀菌作用，记录为MBC（图（图7-1）2固体培养基稀释法固体培养基稀释法 （1）平板法）平板法 此法适用于同时测定一此法适用于同时测定一种药物对大批试验菌株种药物对大批试验菌株MIC。（2）试管法）试管法 此法适用于需长时间培养而用平板此法适用于需长时间培养而用平板又易于污染的试验菌，如霉菌有孢子易又易于污染的试验菌，如霉菌有孢子易分散污染环境，结核杆菌培养时间长分散污染环境，结核杆菌培养时间长（需一个月），易造成污染，都不宜用
6、（需一个月），易造成污染，都不宜用平板法，而使用本法。平板法，而使用本法。二、琼脂扩散法二、琼脂扩散法 利用抗菌药物可以在琼脂培养基中扩利用抗菌药物可以在琼脂培养基中扩散并能在一定浓度范围内抑制细菌生长的散并能在一定浓度范围内抑制细菌生长的原理进行抗菌试验。原理进行抗菌试验。1滤纸片法滤纸片法 常用于新药的初步筛选试验，用来初常用于新药的初步筛选试验，用来初步判断新药是否具有抗菌作用，也用于病步判断新药是否具有抗菌作用，也用于病原性细菌的药物敏感试验，以测定临床分原性细菌的药物敏感试验，以测定临床分离的某种细菌对各种药物的敏感强度，供离的某种细菌对各种药物的敏感强度，供医生选用治疗药物时参考。
7、医生选用治疗药物时参考。抑菌圈大小的解释和判断见抑菌圈大小的解释和判断见 P113-1142挖沟法挖沟法 常用于测试一种药物对几种细菌常用于测试一种药物对几种细菌的抗菌作用。这种方法是先制备普通的抗菌作用。这种方法是先制备普通琼脂平板，然后在平板上挖直沟，在琼脂平板，然后在平板上挖直沟，在沟内滴加药液。在沟两侧接种细菌沟内滴加药液。在沟两侧接种细菌（图（图7-2）。经培养后观察细菌生长）。经培养后观察细菌生长情况，由沟和细菌间的抑菌距离来判情况，由沟和细菌间的抑菌距离来判断该药物对这些细菌的抗菌能力。断该药物对这些细菌的抗菌能力。先制备含菌平板，然后在平板上打若先制备含菌平板，然后在平板上打若
8、干个洞，在洞内加入药液。培养后观察各干个洞，在洞内加入药液。培养后观察各洞周围细菌的生长情况，根据各洞抑菌圈洞周围细菌的生长情况，根据各洞抑菌圈的大小来判断各种药物对该菌的抗菌能力的大小来判断各种药物对该菌的抗菌能力（图（图7-3）。此法适用于多种药物对一种）。此法适用于多种药物对一种细菌的抗菌能力的测定。细菌的抗菌能力的测定。3打洞法打洞法 检查两种抗菌药物在联合应用时的相互作用，检查两种抗菌药物在联合应用时的相互作用，两种药物产生的作用之间既可能产生相互影响，两种药物产生的作用之间既可能产生相互影响，也可能彼此间没有影响（无关）。产生影响时，也可能彼此间没有影响（无关）。产生影响时，既可能
9、是相互加强（协同作用），也可能是相互既可能是相互加强（协同作用），也可能是相互减弱（拮抗作用）。在已经接种过细菌的平板上，减弱（拮抗作用）。在已经接种过细菌的平板上，垂直放置两条浸有不同药液的滤纸条，经培养后垂直放置两条浸有不同药液的滤纸条，经培养后根据两种药液形成抑菌区的图形来判断这两种药根据两种药液形成抑菌区的图形来判断这两种药物对该细菌的作用是无关、拮抗还是协同（图物对该细菌的作用是无关、拮抗还是协同（图7-4）。三、联合抗菌试验法三、联合抗菌试验法(纸条试验纸条试验)联合抗菌试验法联合抗菌试验法(纸条试验纸条试验)结果结果 1菌种菌种 在抗菌试验中所用的菌种，必须是国家卫生部在抗菌试验
10、中所用的菌种，必须是国家卫生部生物制品检定所菌种保藏中心提供的标准菌株。在生物制品检定所菌种保藏中心提供的标准菌株。在某些特定情况下需要应用临床分离的菌株时，则必某些特定情况下需要应用临床分离的菌株时，则必须用经过严格鉴定、纯化及合理保藏的菌株。须用经过严格鉴定、纯化及合理保藏的菌株。四、影响抗菌试验的因素四、影响抗菌试验的因素2 2培养基培养基 培养基要根据试验菌种的要求配制，所用的原料培养基要根据试验菌种的要求配制，所用的原料、成分必须控制质量，制备过程必须规范，培养基内、成分必须控制质量，制备过程必须规范，培养基内不能含有药物的对抗物或使药物活性降低的成分。不能含有药物的对抗物或使药物活
11、性降低的成分。3 3抗菌药物抗菌药物 药物的物理状态、浓度、稀释方法等可直接影药物的物理状态、浓度、稀释方法等可直接影响抗菌试验的效果，要求精确配制。固体药物必须制响抗菌试验的效果，要求精确配制。固体药物必须制成溶液，难溶于水的药物要用有机溶剂或酸碱溶解后成溶液，难溶于水的药物要用有机溶剂或酸碱溶解后再使用。药物溶液的再使用。药物溶液的pHpH值应尽量接近中性，以确保药值应尽量接近中性，以确保药物的稳定性和不影响细菌的生长。物的稳定性和不影响细菌的生长。4 4对照试验对照试验 为确保试验的准确性和科学性，必须严格设置各为确保试验的准确性和科学性，必须严格设置各种对照试验。对照菌种应在无药的情况
12、下，在培养种对照试验。对照菌种应在无药的情况下，在培养基内正常生长；已知药物对照，应使已知抗菌药物基内正常生长；已知药物对照，应使已知抗菌药物对标准菌株出现抗菌效应。对标准菌株出现抗菌效应。小结小结:1、何谓和？、何谓和？2、药物体外抗菌试验的方法常用的有什、药物体外抗菌试验的方法常用的有什么方法？么方法？3、影响药物体外抗菌试验的因素有哪几、影响药物体外抗菌试验的因素有哪几种？种？作业：作业：（、）：（、）一、填空题一、填空题（将正确答案填入空内）（将正确答案填入空内）、药物的体外抗菌试验具有、药物的体外抗菌试验具有、等方面的用途，运用抗菌试验还可、等方面的用途，运用抗菌试验还可以区别药物是
13、属于杀菌剂还是抑制，它们之间的区别以区别药物是属于杀菌剂还是抑制，它们之间的区别是在于是在于。体外抗菌试验常有。体外抗菌试验常有方法。方法。、联合药敏试验的目的是为了联合药敏试验的目的是为了的特殊要求而进的特殊要求而进行的，通常可有、行的，通常可有、四种结果。、四种结果。二二、是非题：如错误，请在错处用笔划出，是非题：如错误，请在错处用笔划出，并改正并改正。、抑菌剂是指去除了该药物后，细菌的生抑菌剂是指去除了该药物后，细菌的生长繁殖不能恢复（长繁殖不能恢复（）2、MIC是指最大是指最大 抑菌浓度（抑菌浓度（）三、名词解释三、名词解释 1、MIC、MBC 四、简答题四、简答题 、药物体外抗菌试验常用的方法有哪几种？、药物体外抗菌试验常用的方法有哪几种？、影响药物体外抗菌试验的因素有哪几种？、影响药物体外抗菌试验的因素有哪几种？、抗生素效价单位有哪几种表示方法？、抗生素效价单位有哪几种表示方法？
