1、Department of Laboratory Medicine王全哲Department of Laboratory Medicine性能验证性能验证何时进行性能验证何时进行性能验证性能验证项目性能验证项目如何作性能验证如何作性能验证Department of Laboratory Medicine何时做性能验证何时做性能验证 CLIA88法案：法案：改进或更换系统时、改变试剂时、改进或更换系统时、改变试剂时、增加新项目时增加新项目时。ISO15189：进行能力验证时，进行能力验证时，对设备、系统与对设备、系统与方法进行性能验证。方法进行性能验证。临床实验室管理办法临床实验室管理办法临床实
2、验室应对检测系临床实验室应对检测系统性能进行验证。统性能进行验证。仪器进行系统性维修后。仪器进行系统性维修后。Department of Laboratory Medicine 1 精密度精密度 2 准确度准确度 3 可报告范围可报告范围 4 参考区间参考区间 5 灵敏度灵敏度 6 特异性特异性Department of Laboratory Medicine1 1 配套系统配套系统2 2 自建系统自建系统Department of Laboratory Medicine1 1 精密度精密度2 2 准确度准确度3 3 可报告范围可报告范围4 4 参考区间参考区间Department of La
3、boratory Medicine自建检测系统自建检测系统1 1 精密度精密度2 2 准确度准确度3 3 可报告范围可报告范围4 4 参考区间参考区间5 5 灵敏度灵敏度6 6 特异性特异性Department of Laboratory Medicine精密度验证精密度验证定义：相同的检测条件下，对某一标本进行重复检定义：相同的检测条件下，对某一标本进行重复检测，所得测量值的离散程度。测，所得测量值的离散程度。要求：包括批内与日间精密度实验要求：包括批内与日间精密度实验Department of Laboratory Medicine精密度验证精密度验证具体方法具体方法1.1 1.1 批内精
4、密度：取同一份标本插入病人标本中，批内精密度：取同一份标本插入病人标本中，重复检测重复检测2020次，计算次，计算SDSD、CVCV值，可接受范围：值，可接受范围：Tea/4Tea/4为通过。为通过。1.2 1.2 日间精密度，每日检测同一份标本日间精密度，每日检测同一份标本5 5次，非一次，非一日完成四次检测，共日完成四次检测，共2020次，计算次，计算SDSD、CVCV，可接受范，可接受范围围Tea/3Tea/3为通过。为通过。Department of Laboratory Medicine验证验证定义：指测量结果与被测量值的接近程度定义：指测量结果与被测量值的接近程度。方法：方法：参考
5、方法比较参考方法比较 应用参考物质应用参考物质 回收实验。回收实验。Department of Laboratory Medicine验证验证2.1 2.1 参考方法比较参考方法比较取材：取材：2020个结果分布于可报告范围内的标本，使用参个结果分布于可报告范围内的标本，使用参考方法与系统使用方法进行检测，计算相对偏倚，符考方法与系统使用方法进行检测，计算相对偏倚，符合厂家说明。合厂家说明。2.2 2.2 应用参考物质：应用参考物质：参考物质：质控品、标准品（非系统使用批）、已通参考物质：质控品、标准品（非系统使用批）、已通过能力验证的质过能力验证的质控控标准物质（室间质评品）。标准物质（室间
6、质评品）。可接受范围：偏倚值在参考物质允许的范围为通过。可接受范围：偏倚值在参考物质允许的范围为通过。2.3 2.3 回收实验：配制已知浓度的样品，比较结果与预回收实验：配制已知浓度的样品，比较结果与预期值，可接受范围期值，可接受范围90-110%90-110%。Department of Laboratory Medicine 可报告范围等同于测量范围，部分系统与线性可报告范围等同于测量范围，部分系统与线性范围一致。范围一致。测量范围：测量误差处于允许的极限（变异系数不测量范围：测量误差处于允许的极限（变异系数不大于大于10%10%）测量分布于高、低值界限内的范围。）测量分布于高、低值界限内
7、的范围。可报告范围：检测系统对病人结果的检测范围。可报告范围：检测系统对病人结果的检测范围。线性范围：实验系统的最终分析结果为可接受的线线性范围：实验系统的最终分析结果为可接受的线性的浓度范围，此时非线性误差应低于允许误差。性的浓度范围，此时非线性误差应低于允许误差。Department of Laboratory Medicine线性范围验证线性范围验证验证前的准备：验证前的准备：操作操作人人员熟练操作系统，能对标本进行正确处员熟练操作系统，能对标本进行正确处理；仪器状态：性能指标与标称值相符，有较好的理；仪器状态：性能指标与标称值相符，有较好的精密度不存在明显精密度不存在明显携带污染率携带
8、污染率；同批号合格试剂；同批号合格试剂；标本，无明显干扰检测结果的因素；标本，无明显干扰检测结果的因素；标准品，配套或经验证可用的；标准品，配套或经验证可用的；标本数量，如为新建需标本数量，如为新建需9-119-11个浓度，如为验证个浓度，如为验证或评价，只需或评价，只需4-64-6个样本。个样本。Department of Laboratory Medicine验证方法：验证方法：标本制备：浓度范围，预期测定值范围标本制备：浓度范围，预期测定值范围内内并包并包括与临床有关的重要评价浓度。括与临床有关的重要评价浓度。通常取最大浓度与最小浓度标本按比例配比法通常取最大浓度与最小浓度标本按比例配比
9、法制备。制备。样品号编号1（ml）编号2（ml）编号3（ml）编号4（ml）编号5（ml）低浓度血清5.003.752.501.250.00高浓度血清0.001.252.503.755.00Department of Laboratory Medicine 测量：每个样本重复检测测量：每个样本重复检测3-43-4次，随机检测，次，随机检测，双双盲测定盲测定，最好一天内完成。，最好一天内完成。样品号第一次第二次第三次第四次均值12345Department of Laboratory Medicine剔除剔除离群值离群值 方法：采用方法：采用CrubbsCrubbs法，单个离群值不需重测，法，单
10、个离群值不需重测，多个值或数据过于分散应查找原因，纠正后重测。多个值或数据过于分散应查找原因，纠正后重测。（剔除水平的（剔除水平的*值应不超过检出水平的值应不超过检出水平的 值，除非值，除非另有约定，另有约定，*值应为值应为0.010.01）。）。Department of Laboratory Medicine数据处理数据处理 方法：方法：采用采用SPSSSPSS或或SASSAS。回归分析：回归方程的线性检验回归分析：回归方程的线性检验价数价数多项式多项式Rdf一阶一阶Y=b0+b1X2二阶二阶Y=b0+b1X+b2X23三阶三阶Y=b0+b1X+b2X2+b3X34数学模型：一阶、二阶、三
11、阶方程如拟合最优方程为多阶，则验证能否采用一阶式方如拟合最优方程为多阶，则验证能否采用一阶式方程，需采用程，需采用t t检验，计算检验，计算t t值，值，t=bt=bi i/SeSei i;计算计算n n值，值，n=n=LxR-RdfLxR-Rdf，双边检验，双边检验，a=0.05,a=0.05,如如b b3 3、b b2 2经检验经检验P0.05P0.05无显著性差异则可用一阶方程，如无显著性差异则可用一阶方程，如P0.P1.5S1S21.5S1或或S2/S2-S13S2/S2-S1ZZZ*需分组。需分组。Department of Laboratory Medicine 定义：实验室根据自
12、已意愿选定仪器、试剂与操作程序等组定义：实验室根据自已意愿选定仪器、试剂与操作程序等组成的检测系统成的检测系统。验证项目：分析灵敏度、准确度、精密度、可报告范围、分验证项目：分析灵敏度、准确度、精密度、可报告范围、分析特异性（干扰）、校准与质控方法。析特异性（干扰）、校准与质控方法。Department of Laboratory Medicine灵敏度验证灵敏度验证 分析灵敏度包括：最低检测限分析灵敏度包括：最低检测限LLDLLD、生物检测限、生物检测限BLDBLD、功能灵、功能灵敏度敏度FSFS 功能灵敏度定义为：以天间重复功能灵敏度定义为：以天间重复CVCV为为20%20%时对应检测限样
13、品时对应检测限样品具有的平均浓度。具有的平均浓度。标本准备：用稀释液作空白，将标准品围绕最低检测限制成标本准备：用稀释液作空白，将标准品围绕最低检测限制成浓度梯度制备液，分别检测浓度梯度制备液，分别检测1010次，次，空白日内10次X均值SD制备液1日间10次X均值SDCV值制备液2X均值SDCV值制备液3X均值SD如：CV值=20%FSDepartment of Laboratory Medicine 携带污染率携带污染率 取高低值标本各一份依次测高值取高低值标本各一份依次测高值3 3次次(i1(i1，i2i2，i3)i3)、低值、低值3 3次次(j1(j1，j2j2，j3)j3)，计算各自
14、的携带污染率，计算各自的携带污染率:携带污染率携带污染率(%)=(j1(%)=(j1-j3)/(i3-j3)-j3)/(i3-j3)100%100%。特异性实验特异性实验 将可疑的干扰的物质加入到检测标本（浓度），以有无偏倚将可疑的干扰的物质加入到检测标本（浓度），以有无偏倚为检验标准，如有干扰，确度干扰物浓度范围。为检验标准，如有干扰，确度干扰物浓度范围。Department of Laboratory Medicine王全哲Department of Laboratory Medicine质量管理质量管理 血液分析仪血液分析仪 仪器本底：仪器本底：检测项目检测项目WBCRBCHbPlt检测
15、要求检测要求0.5x109/l0.05x1012/l2.0g/l10 x109/l 验证方法：用稀释液作为样本连续检测验证方法：用稀释液作为样本连续检测3 3次，最大值应在此次，最大值应在此范围内。范围内。Department of Laboratory Medicine质量管理质量管理 血液分析仪血液分析仪 携带污染率携带污染率 验证方法：验证方法：取高低浓度样本，连续进行检测，先检取高低浓度样本，连续进行检测，先检测高浓度样本测高浓度样本3 3次连，再检测低浓度样品次连，再检测低浓度样品3 3次。次。检测项目检测项目WBCRBCHbPlt检测要求检测要求3.0%2.0%2.0%4.0%检测
16、项目检测项目结果结果1结果结果2结果结果3高值高值H1H1H2H2H3H3低值低值L1L1L2L2L3L3Department of Laboratory Medicine质量管理质量管理 样本浓度要求样本浓度要求检测项目检测项目WBCRBCHbPlt高值高值9.0 x109.0 x10*9/L9/L6.2x106.2x10*12/L12/L220g/L220g/L900 x10*9低值低值331.5503030Department of Laboratory Medicine质量管理质量管理 批内精密度要求。批内精密度要求。取合格标本一份，重复检测取合格标本一份，重复检测1111次，取后次，
17、取后1010次检测值，计算次检测值，计算CVCV。检测项目检测项目测量范围测量范围变异系数变异系数WBC4-10 10*9/L4%RBC3.5-5.5 10*12/L2%Hb110-160g/L1.5%Hct35-55%3%PLT100-300 10*9/L5%MCV80-100fl2%MCH27-34pg2%MCHC320-360g/L2%批内精密度 日间精密度要求。日间精密度要求。室内质控数据，剔除失控数据，统计室内质控数据，剔除失控数据，统计CVCV。检测项目检测项目变异系数变异系数WBC6%RBC2.5%Hb2%Hct4%PLT8%MCV2.5%MCH2.5%MCHC3%Departm
18、ent of Laboratory Medicine质量管理质量管理不同吸样模式结果可比性；不同吸样模式结果可比性；取五份临床标本，不同模式检没测取五份临床标本，不同模式检没测2 2次，计算结果均值的相对差异。次，计算结果均值的相对差异。检测项目检测项目相对差异相对差异WBC5%RBC2%Hb2%Hct3%PLT7%MCV3%MCHMCHCDepartment of Laboratory Medicine质量管理质量管理 血液分析仪血液分析仪 携带污染率携带污染率 验证方法：验证方法：取高低浓度样本，连续进行检测，先检取高低浓度样本，连续进行检测，先检测高浓度样本测高浓度样本3 3次连，再检测低浓度样品次连，再检测低浓度样品3 3次。次。检测项目检测项目WBCRBCHbPlt检测要求检测要求3.0%2.0%2.0%4.0%检测项目检测项目结果结果1结果结果2结果结果3高值高值H1H1H2H2H3H3低值低值L1L1L2L2L3L3
