1、实验二、总糖和还原糖的测定实验二、总糖和还原糖的测定3,5二硝基水杨酸法二硝基水杨酸法 目的要求目的要求 掌握还原糖和总糖的测定原理 学习用比色法测定还原糖的方法 实验原理实验原理 在NaOH和丙三醇存在下，3,5二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。实验内容实验内容1.葡萄糖标准曲线的制备；2.样品（藕粉）中还原糖的提取和含量测定；3.样品（淀粉）中总糖的水解和含量测定。1、葡萄糖标准曲线制作、葡萄糖标准曲线制作 1
2、、取6支1.5 cm15 cm试管，按下表加入2 mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。管号葡萄糖标准液（mL）蒸馏水(mL)葡萄糖含量(mg/mL)A5400010 10.20.80.4 20.40.60.8 30.60.41.2 40.80.21.6 51022、在上述试管中分别加入DNS试剂2 ml，于沸水浴中加热2 min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9 ml，摇匀，在540 nm波长处测定光吸收值。以葡萄糖含量（mg/ml）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。2、样品中还原糖的提取、样品中还原糖的提取 l 准确称取1 g藕粉，放在100 ml烧杯中，先以少量蒸馏水调成
3、糊状，然后加入约40 ml蒸馏水，混匀，于50恒温水浴中保温20 min，不时搅拌，使还原糖浸出。过滤，将滤液全部收集在50 ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。3、样品总糖的水解及提取、样品总糖的水解及提取 l 准确称取1 g淀粉，放在大试管中，加入6 M HCl 10 ml，蒸馏水15 ml，在沸水浴中加热0.5 h，取出12滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6 M NaOH溶液中和至溶液呈微红色，定容到100 ml，过滤后取滤液10 ml于100 ml容量瓶中，定容至刻度，混匀后用于
4、总糖测定。4、样品中含糖量的测定、样品中含糖量的测定 1、取7支1.5 cm15 cm试管，分别按下表加入试剂：项目空白还原糖总糖0123456样品溶液（mL）11111113,5-二硝基水杨酸试剂（mL）2222222A540 2、加完试剂后，于沸水浴中加热2 min进行显色，取出后用流 动水迅速冷却，各加入蒸馏水9 mL，摇匀，在540 nm波长 处测定光吸收值。测定后，取样品的光吸收平均值在标准 曲线上查出相应的糖含量。5、计、计 算算 按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：式中：C还原糖或总糖提取液的浓度，mg/mL；V还原糖或总糖提取液的总体积，mL；m样品重量，g；1000mg换算成g的系数。思思 考考 题题1.比色时为什么要设计空白管？2.糖测定过程中的干扰物质有那些？如何除去？3.总糖和还原糖的提取有何不同？
