1、4/27/20231第十章 病原微生物感染的检查及防治原则第一节 细菌感染的检查4/27/20232标本的采集和送检标本的采集和送检避免杂菌污染运送注意保存不同期不同标本用抗菌素以前采集病变明显部位标本必须新鲜4/27/20233一、细菌学诊断，病原菌的检查程序一、细菌学诊断，病原菌的检查程序药物敏感试验直接涂片镜检分离培养生化试验血清学试验动物试验明明确确诊诊断断初步诊断初步诊断检测核酸（杂交、PCR、DNA指纹）其他检测技术（测抗原）（检测病原菌）4/27/20234原理原理二、血清学诊断二、血清学诊断 双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高4倍者方有意义种类种类 标
2、本标本凝集试验：沉淀试验：补体结合试验：中和试验：肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等梅毒VDRL、RPR试验等抗“O”试验等Q热柯克斯体抗体检测等4/27/20235 将疫苗或类毒素接种于人体，使机体获得免疫力的一种防治微生物感染的措施。第二节 细菌感染的免疫防治一、人工主动免疫人工主动免疫主要生物制品死疫苗活疫苗类毒素亚单位疫苗DNA重组疫苗核酸疫苗治疗性疫苗4/27/20236抗毒素细胞免疫制剂二、人工被动免疫二、人工被动免疫 注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白抗体，或细胞因子等免疫制剂，使机体获得特异性免疫力主要生物制品抗菌血清胎盘球蛋白丙种球蛋白4/27/20237区别要点
3、区别要点免疫物质免疫物质免疫出现时间免疫出现时间免疫维持时间免疫维持时间主要用途主要用途人工主动免疫人工主动免疫抗原抗原满，满，24周周长，数年长，数年数月数月预防预防人工被动免疫人工被动免疫抗体或细胞因子等抗体或细胞因子等快，立即快，立即短，短，23周周治疗或紧急预防治疗或紧急预防4/27/20238比较区别点区别点制剂特点制剂特点接种剂量与特点接种剂量与特点保存及有效期保存及有效期免疫效果免疫效果死疫苗死疫苗死，强毒株死，强毒株量较大，量较大，23次次易保存，约易保存，约1年年较低，较低，维持数月维持数月2年年活疫苗活疫苗活减毒株活减毒株量较小，量较小，1次次不易保存，不易保存，4数周数周
4、较高，较高，维持维持35年甚至更长年甚至更长4/27/20239 第三节第三节 病毒感染的检查病毒感染的检查l标本的采集与送检标本的采集与送检 用于分离培养的标本：用于分离培养的标本：a a、采集急性期标本、采集急性期标本 b b、采集感染部位标本、采集感染部位标本 c c、冷藏、冷藏 血清学诊断的标本：血清学诊断的标本：急性期和恢复期急性期和恢复期双份血清双份血清，-20-20保存保存4/27/2023104/27/202311动物接种动物接种鸡胚接种鸡胚接种组织培养组织培养器官培养移植培养 细胞培养 原代细胞培养二倍体细胞培养传代细胞培养4/27/202312常用的细胞培养类型名称原代细胞
5、培养恒河猴肾细胞培养，人胚肾、肺等细胞培养，鸡胚成纤维细胞培养二倍体细胞株WI-38（人胚肺细胞株），HL-8（恒河猴胚细胞株）传代细胞系Hela 细胞，Detroit 细胞（胸骨髓细胞系），Chang C/I/L/K（人结膜 C，肠 I，肝 L 与肾K 细胞系），Vero（绿猴肾细胞系），BHK-21（幼地鼠肾细胞系）4/27/2023134/27/202314（二）病毒在细胞内增殖的指标（二）病毒在细胞内增殖的指标1、CPE2、红细胞吸附、红细胞吸附正常细胞正常细胞病变细胞病变细胞4/27/202315狂犬病毒包涵体（Negri body）3.包涵体4/27/202316巨细胞病毒包涵体4
6、.免疫技术4/27/202317（三）（三）病毒数量和感染性病毒数量和感染性测定测定1 1、蚀斑试验斑试验2 2、IDID5050 或或 TCIDTCID5050 病毒感染鸡胚、动物或细胞后，引起 50%发生死亡或病变的最小量。病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶，称蚀斑，蚀斑是由一个感染性病毒体复制形成的，称蚀斑形成单位，病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升的蚀斑形成单位PFU来表示。4/27/202318病毒的快速诊断病毒的快速诊断光镜光镜-包涵体电镜电镜免疫荧光免疫荧光ELISA分子生物学技术分子生物学技术杂交Southern blotPCRNorthern blot4/27/202319检
7、测病毒抗原与抗体检测病毒抗原与抗体 已知抗体测病毒感染脱落细胞或分泌物已知抗体测病毒感染脱落细胞或分泌物细胞中的细胞中的抗原抗原 已知抗原测血清中已知抗原测血清中抗体抗体测测IgMIgM，或动态，或动态测测IgGIgG（双份血清）（双份血清）三、检测病毒核酸三、检测病毒核酸 PCRPCR试验试验 引物引物 核酸杂交试验核酸杂交试验 探针探针 基因芯片技术基因芯片技术4/27/202320第四节病毒感染的防治第四节病毒感染的防治一、病毒感染的治疗一、病毒感染的治疗（一）药物治疗（一）药物治疗 1.1.核苷类药物核苷类药物 2.蛋白酶抑制剂 3.3.天然药物天然药物（二）基因治疗（二）基因治疗 1
8、.1.反义寡核脱氧核酸反义寡核脱氧核酸 2.2.核酶核酶（三）免疫治疗4/27/202321 1.1.核苷类药物核苷类药物（1 1）抑制病毒基因复制）抑制病毒基因复制 碘尿苷碘尿苷(疱疹净疱疹净)用异常嘧啶取代胸腺嘧啶用异常嘧啶取代胸腺嘧啶,眼眼疱疹病毒感染。也可渗入细胞疱疹病毒感染。也可渗入细胞DNA,DNA,故有毒性。故有毒性。无环鸟苷无环鸟苷(啊昔洛韦啊昔洛韦)，竞争病毒复制酶。，竞争病毒复制酶。（2 2）抑制病毒基因转录）抑制病毒基因转录 病毒唑病毒唑 2.蛋白酶抑制剂 “鸡尾酒鸡尾酒”治疗治疗HIVHIV，3TC3TC加蛋白酶抑制物加蛋白酶抑制物 3.3.天然药物天然药物 中草药治疗
9、：黄芪、板蓝根、大青叶中草药治疗：黄芪、板蓝根、大青叶4/27/202322 （二）基因治疗（二）基因治疗 1.1.反义寡核脱氧核酸反义寡核脱氧核酸(反义反义DNA)DNA)与病毒与病毒DNADNA关键基因互补关键基因互补 反义寡核苷酸反义寡核苷酸(反义反义RNA)RNA)与病毒与病毒RNARNA关键基因互补关键基因互补 2.2.核酶核酶 与病毒与病毒RNARNA结合结合,切割降解靶切割降解靶RNARNA（三）免疫治疗 细胞因子：干扰素、细胞因子：干扰素、TNFTNF、IL-12IL-12等等4/27/202323 策略：阻断病毒复制周期中策略：阻断病毒复制周期中吸附穿入吸附穿入、脱壳脱壳、核
10、酸复制核酸复制、或、或装配释放装配释放 任一环节，从而抑制病毒复制任一环节，从而抑制病毒复制 要求：抗病毒药物能穿入细胞选择性地要求：抗病毒药物能穿入细胞选择性地 抑制病毒复制又不损伤宿主细胞抑制病毒复制又不损伤宿主细胞 1 1、阻断吸附、阻断吸附 特异免疫球蛋白特异免疫球蛋白中和抗体中和抗体 如：乙脑病毒包膜抗原的单抗如：乙脑病毒包膜抗原的单抗4/27/202324 可溶性的病毒受体可溶性的病毒受体 如：如：HIV HIV 用可溶性用可溶性CD4 CD4（不理想）（不理想）2 2、抑制脱壳、抑制脱壳 如：金刚烷胺，用于流感病毒的防治如：金刚烷胺，用于流感病毒的防治 （副作用大）（副作用大）3
11、 3、抑制核酸复制、抑制核酸复制 a.a.核苷类化合物核苷类化合物(最早用于临床治疗最早用于临床治疗)用异常嘧啶取代胸腺嘧啶用异常嘧啶取代胸腺嘧啶 如如:碘尿苷碘尿苷(疱疹净疱疹净),),眼疱疹病毒感染眼疱疹病毒感染 4/27/202325 也可渗入细胞也可渗入细胞DNA,DNA,故有毒性故有毒性 无环鸟苷无环鸟苷(啊昔洛韦啊昔洛韦)毒性作用小毒性作用小 b.b.抗病毒基因治疗抗病毒基因治疗 反义寡核脱氧核酸反义寡核脱氧核酸(反义反义DNA)DNA)与病毒与病毒DNADNA关键基因互补关键基因互补 反义寡核苷酸反义寡核苷酸(反义反义RNA)RNA)与病毒与病毒RNARNA关键基因互补关键基因互
12、补 核酶核酶 与病毒与病毒RNARNA结合结合,切割降解靶切割降解靶RNA RNA 4/27/202326 c.c.病毒蛋白酶抑制物病毒蛋白酶抑制物 病毒蛋白酶病毒蛋白酶:病毒复制病毒复制 转录后剪接、加工转录后剪接、加工 如：如：“鸡尾酒鸡尾酒”治疗治疗HIVHIV 3TC 3TC加蛋白酶抑制物加蛋白酶抑制物 d.d.细胞因子：干扰素、细胞因子：干扰素、TNFTNF、IL-12IL-12等等 4 4、疫苗治疗、疫苗治疗 如：乙肝、如：乙肝、HIVHIV、狂犬病疫苗、狂犬病疫苗 5 5、中草药治疗：黄芪、板蓝根、大青叶、中草药治疗：黄芪、板蓝根、大青叶 4/27/202327 二、病毒感染的预
13、防二、病毒感染的预防（一）人工主动免疫（一）人工主动免疫（artificial active immunityartificial active immunity）定义：是将疫苗或类毒素接种于人体，使定义：是将疫苗或类毒素接种于人体，使 机体产生获得性免疫力，抵抗微生机体产生获得性免疫力，抵抗微生 物感染，主要用于预防。物感染，主要用于预防。4/27/202328 制剂：制剂：1 1）死疫苗死疫苗：选用免疫原性强的病原，：选用免疫原性强的病原，经人工大量培养后，用理化方法经人工大量培养后，用理化方法 杀死或灭活。杀死或灭活。2 2）活疫苗活疫苗：用减毒的或无毒力的活：用减毒的或无毒力的活 病原
14、体制成病原体制成 3 3）类毒素类毒素：细菌外毒素经：细菌外毒素经0.3%-0.4%0.3%-0.4%甲醛处理获得甲醛处理获得4/27/202329 4)4)基因工程疫苗基因工程疫苗:重组重组DNADNA表答的病原蛋白表答的病原蛋白 5)5)核酸疫苗核酸疫苗:DNA:DNA和和RNARNA疫苗疫苗,由载体和编码由载体和编码 病原体某种抗原的病原体某种抗原的cDNAcDNA或或 mRNAmRNA组成组成 6)6)其它其它:合成肽疫苗、抗独特型疫苗等合成肽疫苗、抗独特型疫苗等4/27/202330（二）人工被动免疫（二）人工被动免疫（artificial passive immunizationa
15、rtificial passive immunization）定义：定义：注 射 含 有 特 异 性 抗 体 的 免 疫 血 清注 射 含 有 特 异 性 抗 体 的 免 疫 血 清 或纯化免疫球蛋白抗体，或细胞因子等细或纯化免疫球蛋白抗体，或细胞因子等细胞免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，胞免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，主要用于治疗或紧急预防。主要用于治疗或紧急预防。4/27/202331如：血清免疫球蛋白如：血清免疫球蛋白 用于甲肝、麻疹、脊髓灰质炎预防用于甲肝、麻疹、脊髓灰质炎预防 高效价含乙肝病毒表面抗体的免疫高效价含乙肝病毒表面抗体的免疫 球蛋白球蛋白 用于预防母婴乙肝传播用于预防母婴乙肝传播
