1、第二章第二章 药物的鉴别试验药物的鉴别试验授课教师：谢智勇Identification test of drugIdentification test of drugp 药物的鉴别试验药物的鉴别试验p 药物的杂质检查药物的杂质检查p 药物定量分析与分析方法验证药物定量分析与分析方法验证药品检验工作的基本规律药品检验工作的基本规律Basic regularity of drug inspectionl第一节 药物鉴别试验的定义与目的l第二节 鉴别试验的项目l第三节 鉴别方法l第四节 鉴别试验的条件及方法验证第一节 药物鉴别试验的定义与目的 药物的鉴别试验是依据药物的化学结构和理化性质,采用化学、
2、物理化学或生物学方法来判断药物的真伪。鉴别试验用方法仅用于证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，而非对未知物的鉴别。 鉴别试验方法应专属，每个品种一般23条。l第一节 药物鉴别试验的定义与目的l第二节 鉴别试验的项目l第三节 鉴别方法l第四节 鉴别试验的条件及方法验证性状项和物理常数确认性状项和物理常数确认 鉴别项下规定的试验鉴别项下规定的试验 原原料料药药鉴鉴别别制制剂剂鉴鉴别别鉴别试验的项目鉴别试验的项目 Test items 第二节 鉴别试验的项目 Test items 一、性状二、一般鉴别三、专属鉴别性性 状状 （Description）定义： 反映药物特有的物理性质，如外
3、观、溶解度和物理常数等。外 观溶解度物理常数一、性状（一）外观：指药品的外表感观和色泽，包括药品的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。示例：布洛芬：本品为白色结晶性粉末；稀有特异臭，几乎无味。布洛芬口服溶液：本品为淡黄色至黄色溶液。布洛芬胶囊：本品内容物为白色结晶性粉末或粉末。布洛芬缓释胶囊：本品内容物为白色球形小丸。布洛芬糖浆：本品为淡黄棕色的澄清粘稠液体，有芳香气味。一、性状（二）溶解度：在一定程度上反映了药品的纯度、晶型或粒度，也可供精制或制备溶液时参考。通常考察药品在水中及常用溶剂（与该药品溶解特性密切相关的、配制制剂、制备溶液或精制所需溶剂等）中的溶解度的。示例：布洛芬：本品在乙醇
4、、丙酮、三氯甲烷或乙醚中易溶，在水中几乎不溶。在氢氧化钠或碳酸钠试液中易溶。（三）物理常数：测定结果不仅对药品有鉴别意义，也反映该药品的纯度。药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。 一、性状熔熔 点点性 状-固体熔化成液体的温度 熔融同时分解的温度 自初熔至全熔的一段温度 物理常数物理常数熔点测定ChP收载的方法第一法：测定易粉碎的固体药品（最常用）第二法：测定不易粉碎的固体药品第三法：测定凡士林或其他类似物2、比旋度是手性药物特性及其纯度的主要指标。百分浓度注意溶剂、浓度等对比旋度的影响。维生素C的比旋度：取本品，精密称
5、定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.10g的溶液，依法测定（附录C），比旋度为20.5至21.5示例：3、吸收系数比旋度和吸收系数这两种物理常数可用以区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。 依 据： 某一类药物组成中的阴离子和阳离子的特殊反应或典型的有机官能团反应。中国药典附录收载一般鉴别试验： 丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类 有机氟化物类、无机金属盐类、有机酸盐 无机酸盐（General identification test）二、一般鉴别试验二、一般鉴别试验原则：无机药物阴、阳离子； 有机药物官能团反应。只能证实是某一类药物，不能证实是哪一种药物。l阴、阳离子的特殊反应 例
6、钠盐、钾盐、钙盐的特殊反应取铂丝，盐酸湿润，醮取供试品，无色火焰中燃烧，火焰显各离子的特征色钠离子钾离子钙离子示例：水杨酸盐鉴别方法一：取供试品的稀溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫色。鉴别方法二：取供试品溶液，加盐酸，即析出白色水杨酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。三、专属鉴别试验 每一种药物化学结构的差异及其引起的物理化学性质不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。IR方法是很好的专属鉴别依据。证实是某一种药物的依据。（Specific identification test）依 据：l例 巴比妥类药物含有共同的母核，区别在于5，5-位取代基和2-位取代基的不同CCCONO
7、NCOR1R2R3543216HHS例：司可巴比妥钠l第一节 药物鉴别试验的定义与目的l第二节 鉴别试验的项目l第三节 鉴别方法l第四节 鉴别试验的条件及方法验证生物学法生物学法 HPLC、GC鉴别法鉴别法 薄层色谱鉴别法薄层色谱鉴别法 纸色谱鉴别法纸色谱鉴别法 呈色反应鉴别法呈色反应鉴别法 紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法 红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法 沉淀生成反应鉴别法沉淀生成反应鉴别法 色谱鉴别法色谱鉴别法 气体生成反应鉴别法气体生成反应鉴别法 测定生成物的熔点测定生成物的熔点荧光反应鉴别法荧光反应鉴别法 第三节 鉴别方法 化学药物常采用：化学法、光谱法、色谱法和生物学法。要求：专属性强，耐
8、用性好，灵敏度高，操作简便、快速。 中药材及其提取物常采用：显微鉴别法，特征图谱或指纹图谱鉴别法1.呈色反应鉴别法 指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。（1）三氯化铁呈色反应： 用于酚羟基或水解后产生酚羟基（2）异羟肟酸铁反应： 多用于芳酸及其酯类、酰胺类（3）茚三酮呈色反应： 用于结构中含有脂肪氨基药物（4）重氮化-偶合显色反应： 用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基（5）氧化还原显色反应及其它颜色反应例：对乙酰氨基酚的鉴别HONHCH3O 【鉴别】 (2) 取本品约取本品约0.1g，加，加稀盐酸稀盐酸5ml ，置水浴中加热，置水浴中加热40分钟，放冷；取分
9、钟，放冷；取0.5ml ，滴加，滴加亚亚硝酸钠硝酸钠试液试液5 滴，摇匀，用水滴，摇匀，用水3ml 稀释后，加碱性稀释后，加碱性萘酚萘酚试试液液2ml ，振摇，即显红色。，振摇，即显红色。（潜在）（潜在） 例：对阿斯匹林的鉴别COOHOCOCH3【鉴别鉴别】 (1) 取本品约取本品约0.1g，加水加水10ml，煮沸，放冷，煮沸，放冷，加三氯化铁试液加三氯化铁试液1 滴，即滴，即显紫堇色。显紫堇色。2、沉淀生成反应鉴别法（1）与金属离子的沉淀反应（2）与碘化铋钾的沉淀反应（3）其它沉淀反应3、荧光反应鉴别法例：硫酸奎宁在稀硫酸溶液显蓝色荧光。常用的荧光发射形式：（1）药物本身可在可见光下发射荧光
10、；（2）药物溶液加硫酸后，在可见光下发射荧光；（3）药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；（4）药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其它反应后，发射荧光。4、气体生成反应鉴别法（1）大多数伯胺（铵）类药物、酰脲类以及某些酰胺类药物,可经强碱处理后加热产生氨气。巴比妥类药物4、气体生成反应鉴别法例：盐酸雷尼替丁 【鉴别鉴别】(1) (1) 取本品取本品约约0.2g0.2g，置试管中，置试管中，用小火缓缓加热，用小火缓缓加热，产生的气体能使湿产生的气体能使湿润的醋酸铅试纸显润的醋酸铅试纸显黑色黑色。 （2）化学结构含硫药物,可经强酸处理后加热产生硫化氢气体。（3）含碘有机药物经直火加热可生成紫
11、色 碘蒸气。例：碘苷 OOHHOHNNOI【鉴别鉴别】(1) (1) 取本品取本品约约2mg2mg，加热熔融，加热熔融，放出紫色蒸气。放出紫色蒸气。 4、气体生成反应鉴别法（4）含醋酸酯和乙酰胺类药物经硫酸水解 后,加乙醇可产生醋酸乙酯的香味.例：对乙酰氨基酚 HOOCH3N4、气体生成反应鉴别法 1 紫外光谱鉴别法 2 红外光谱鉴别法 5 质谱鉴别法 4 核磁共振谱鉴别法(二)光谱鉴别法 3 原子吸收第三节 鉴别方法1、紫外光谱鉴别法（1）测定max，或同时测定min（2）规定一定浓度的供试液在max的A（3）规定吸收波长和吸收度（4）规定吸收波长和吸收度比值法（5）经化学处理后，测定其反应
12、产物的吸收光谱特征例1：乙胺嘧啶 供试品在0.1mol/L盐酸介质中的紫外吸收在272nm处为峰，216nm处为谷。例2：两性霉素362nm、381nm、405nm波长处有最大吸收，规定：362nm与381nm处A比值不大于0.6, 381nm与405nm处A比值不大于0.9。例3：叶酸 取本品，加0.4氢氧化钠溶液制成每1ml中含10g的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录 A）测定，在256nm、283nm2nm与365nm4nm的波长处有最大吸收。在256nm与365nm波长处的吸收度比值应为2.83.0。例4：己稀雌酚注射液：用供试品溶液250-450nm波长吸收光谱与对照品是否一致鉴别
13、。USP32：采用对照品法，将样品与对照品按同法处理，在200-400nm波长范围内扫描两溶液，要求在相同的波长处有最大吸收、最小吸收和相同的吸收系数，或吸收比在规定的限度内。JP15：大部分品种均采用与标准图谱特征比对的方法进行。BP2009：通常规定在一定波长范围内扫描，寻找最大吸收，并测定其吸收系数。扩展 （二）红外光谱鉴别法是一种专属性很强、应用较广（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。主要用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合用于其他方法不易区分的同类药物。对比供试品红外吸收光谱与药品标准红外光谱的一致性，尤其是指纹一致性。l原料药的鉴别：要注意多晶型的问题；l制剂的鉴别：一般需采取
14、提取分离、经适当干燥后再压片绘制图谱，选用溶剂要适宜，尽可能减少辅料的干扰，并力求避免导致可能的晶型转变。 （二）红外光谱鉴别法Ch.P 标准图谱对照法USP 采用对照品法JP 规定条件下测定一定波长处特征吸收峰.BP 用化学品对照法；用EP对照光谱法；用BP标准图谱对照法l试样制备方法有哪几种l常见的制剂中采用红外光谱鉴别方法有哪几种思考题第三节 鉴别方法 1 薄层色谱鉴别法-TLC2 高效液相色谱法-HPLC3 气相色谱法-GC三三色谱鉴别法等体积混合等体积混合等体积混合等体积混合（一）薄层色谱鉴别法-TLC供试品与对照品供试品与结构相似对照品或杂质（二）HPLC法和GC法l一般按供试品含
15、量测定项下的色谱条件进行试验，要求供式品和对照品色谱峰的t应一致。l如含测为内标法时，可要求供式品和对照品的t与内标峰的t比值相一致l注意：色谱系统稳定性要好，同一物质不同时间进样的t重现性必须有保证四、显微鉴别法l主要用于中药及其制剂的鉴别，l通常采用显微镜对药材的饮片切片、粉末、解离组织或表面制片；l含有饮片粉末的制剂中的饮片组织、细胞或内含物等特征进行鉴别。l扫描电子显微镜不需对饮片切片和染色直接进行观察。五、生物学法l是利用药效学和分析生物学等有关技术来鉴定药物品质的一种方法，主要用于抗生素、生化药物以及中药的鉴别。l通常分为生物效应鉴别法和基因鉴别法六、指纹图谱与特征图谱l建立的目的
16、是通过体现中药整体特征的图谱识别，提供一种能够比较全面的控制中药质量的方法，从化学物质基础的角度保证中药制剂的稳定和可靠。l特征图谱通常是指主要有效成分的特征峰图谱，而指纹图谱除了主要有效成分的特征峰外，还包括更多内容，更具专一性。六、指纹图谱与特征图谱l色谱方法是中药指纹图谱建立的首选和主要方式。lChP2010中复方丹参滴丸、天舒胶囊、注射用双黄连、桂枝茯苓胶囊等中药制剂制定了指纹图谱；l植物油脂和提取物：三七三醇皂苷、三七总皂苷、丹参总酚酸提取物、莪术油等第三节 鉴别方法 药物的鉴别不能只由一项实验完成,而是采用一组(二个或几个)实验项目全面评价,力求使结论正确无误。例例2 2：盐酸四环
17、素的鉴别：盐酸四环素的鉴别【性状性状】 本品为本品为黄色结晶性粉末；无臭，味苦；黄色结晶性粉末；无臭，味苦；有引湿性；遇光色渐变深，在碱性溶液中易破坏有引湿性；遇光色渐变深，在碱性溶液中易破坏失效。失效。 本品在水中溶解，在乙醇中略溶，在氯仿或本品在水中溶解，在乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。乙醚中不溶。 比旋度比旋度 取本品，精密称定，加取本品，精密称定，加0.01mol/L 盐盐酸溶液溶解并稀释成每酸溶液溶解并稀释成每1ml 中含中含10mg的溶液，依的溶液，依法测定（附录法测定（附录 E），比旋度为），比旋度为-240 -258 【鉴别鉴别】 (1) (1) 取本品约取本品约0.5mg
18、0.5mg ，加硫酸，加硫酸2ml 2ml ，即显深紫色，再即显深紫色，再加三氯化铁加三氯化铁试液试液 1 1滴，溶液变滴，溶液变为红棕色。为红棕色。 (2) (2) 在含量测定项下记录的色谱图中在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主，供试品主峰的保留时间应与盐酸四环素对照品主峰的保峰的保留时间应与盐酸四环素对照品主峰的保留时间一致。留时间一致。 (3) (3) 本品的水溶液显本品的水溶液显氯化物氯化物的鉴别反应（附录的鉴别反应（附录）。）。例例2 2：盐酸四环素的鉴别：盐酸四环素的鉴别l第一节 药物鉴别试验的定义与目的l第二节 鉴别试验的项目l第三节 鉴别方法l第四节 鉴别试验的条件及方法验
19、证（一）溶液的浓度 （二）溶液的温度 （三）溶液的酸碱度 （四）试验时间 （五）干扰成分的存在第四节 鉴别试验条件按照药典方法进行检验时，要严格药典方法进行，不得私自改变实验条件。鉴别方法的验证：1、专属性：其他成分存在的情况下，采用的鉴别方法能否正确的鉴别出被测物质的特征。2、耐用性：测定条件发生小的变动时，测定结果收到的影响程度。第四节 鉴别试验条件空白试验（blank test）： 在与供试品鉴别 试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验。 例：复方吡拉西坦片剂中维生素B2鉴别方法的建立l由吡拉西坦、脑蛋白水解物、谷氨酸、硫酸软骨素、维生素B1、维生素B2 、
20、维生素B6 、维生素E等8种药物加适量辅料制成。方法设计：参考ChP2010收载的维生素B2的鉴别试验（1）项下方法，以维生素B2原料药为阳性对照，另取处方中其他药物和辅料作为阴性对照（空白试验），同法试验。维生素B2的鉴别试验：取本品1mg,加水100ml溶解后，溶液在透射光下显淡黄绿色并有强烈的黄绿色荧光，各分成二份：一份中加无机酸或碱溶液，荧光即消失；一份中加连二亚硫酸钠结晶少许，摇匀后，黄色即消褪，荧光亦消失。对照液和供试液各6ml，观察颜色与荧光，两者均显黄绿色，并有强烈黄绿色荧光；各3份加稀硫酸加氢氧化钠加连二亚硫酸钠均黄色消失，荧光消失均荧光消失B2对照液荧光消失，供试液出现蓝色荧光取各组分进行上述试验说明其他成分有干扰脑蛋白水解物的水溶液显蓝色荧光故鉴别方法：同时考察酸性和碱性条件下结果，以及加连二亚硫酸钠后溶液的变化学习要求l掌握 鉴别试验的目的、药物形状和物理常数的测定及其对药物鉴别的作用，常用鉴别方法与选择。l熟悉 鉴别试验的影响因素与注意事项。l了解 鉴别试验方法的验证。
