1、学习高效液相色谱分析的原理学习高效液相色谱分析的原理学习外标法测定组分含量的方法学习外标法测定组分含量的方法了解高效液相色谱仪的结构及正确使用了解高效液相色谱仪的结构及正确使用方法方法 高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内依据不同原理分离后，各成分先后在柱内依据不同原理分离后，各成分先后进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪进入检
2、测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录，从而达到分离分析的目的。记录，从而达到分离分析的目的。 本法要求能准确地定量进样，配置一系列本法要求能准确地定量进样，配置一系列已知标准液，在同一操作条件下，按同量已知标准液，在同一操作条件下，按同量注入色谱仪，测量其峰面积（或峰高），注入色谱仪，测量其峰面积（或峰高），作峰面积与浓度的标准曲线，然后在相同作峰面积与浓度的标准曲线，然后在相同条件下，注入同量样品溶液，测量待测组条件下，注入同量样品溶液，测量待测组分的峰面积，根据标准曲线，计算样品中分的峰面积，根据标准曲线，计算样品中待测组分的浓度。待测组分的浓度。色谱仪：岛津高效液相色谱仪色谱仪：岛津高效液
3、相色谱仪色谱柱：色谱柱：ODSODS柱（柱（4.64.6 250mm250mm，5 5 m m）柱温：室温柱温：室温流动相：水流动相：水- -甲醇甲醇-3.86%-3.86%醋酸钠溶液醋酸钠溶液-4%-4%醋醋酸溶液（酸溶液（742742：240240：1515：3 3）检测波长检测波长: 254nm: 254nm。 精密称取适量（精密称取适量（约相当于头孢氨苄约相当于头孢氨苄0.1g），置），置100ml量瓶中，加量瓶中，加超纯水超纯水溶解，定容，摇匀，滤纸过溶解，定容，摇匀，滤纸过滤，取滤液滤，取滤液10ml，置，置50ml量瓶中，用超纯水定容。量瓶中，用超纯水定容。摇匀后用滤头过滤摇匀后
4、用滤头过滤1-2ml溶液。取溶液。取20l注入色谱仪，注入色谱仪，记录色谱图。记录色谱图。 另取头孢氨苄对照品适量，同法定容，按外标法另取头孢氨苄对照品适量，同法定容，按外标法以峰面积计算供试品以峰面积计算供试品C14H17N2O4S的含量。的含量。装量差异（装量差异（1010粒）粒）1 1将配好的流动相接到流路中，开启泵起动开关，检测将配好的流动相接到流路中，开启泵起动开关，检测是否漏液是否漏液2 2流动相必须预先脱气流动相必须预先脱气，可用超声波、机械真空泵或水，可用超声波、机械真空泵或水力抽气泵脱气。力抽气泵脱气。3 3严格防止气泡进入系统严格防止气泡进入系统，吸液软管必须充满流动相，吸
5、液软管必须充满流动相，吸液管的过滤器始终浸在溶剂中，如变换溶剂，必须先停吸液管的过滤器始终浸在溶剂中，如变换溶剂，必须先停泵，再将过滤器移到新的溶剂瓶内，然后才能开泵使用。泵，再将过滤器移到新的溶剂瓶内，然后才能开泵使用。4. 4. 爱护实验器材爱护实验器材, ,5. 5. 去去HPLCHPLC室测样品时，请将各自的贵重物品随身携带。室测样品时，请将各自的贵重物品随身携带。1 1、 按要求填好实验报告，下次实验课前班按要求填好实验报告，下次实验课前班长统一收上来。长统一收上来。2 2、记录测样的色谱峰出峰时间、峰面积；并、记录测样的色谱峰出峰时间、峰面积；并将色谱图打印出来贴在实验记录本上面。将色谱图打印出来贴在实验记录本上面。3 3、标液的结果在液相电脑上。、标液的结果在液相电脑上。
