1、ABO血型检测 Rh血型鉴定 （一）.ABO血型概述v1.ABO血型又称为组织血型,其血型抗原为糖糖分子分子，分布在人红细胞和其他血细胞表面，还广泛分布于人体内除中枢神经细胞以外的各种组织细胞、 体液、 分泌液中；与其抗原结构类似的多糖物质广泛存在于自然界各种细菌、 真菌、 植物和动物细胞表面。v2.ABO血型控制基因： ABO ，Hh，Sese， Hh，Sese：在19号染色体上 ABO：在9号染色体长臂3区4带2.ABO血型系统血型系统血型血型RBC上的抗上的抗原原血清中的抗体血清中的抗体A型型A抗抗B（主要是IgM ,少数是免疫产生的IgG。）B型型B抗抗A（主要是IgM ,少数是免疫产
2、生的IgG。）O型型无无抗抗A，抗，抗B（多数为 IgG类，也可能IgM或IgA。）AB型型AB无无3.常规ABO正反定型试验正定型 反定型 血型 抗A 抗B A BOO+O+OO+AO+OB+OOAB4.ABO正反定型不一致试验方法 正定型正定型 抗A抗B抗A1抗H抗AB反定型反定型 A1A2BO自身对照5.ABO定型不一致的原因分析v（一）弱反应或缺失抗体：v 1.年龄：新生儿及老人。 2.低球蛋白血症：如白血病人、使用免疫抑止药物、低球蛋白的淋巴瘤病人（恶性）、骨髓移植后病人。 3.丙球缺乏血症：如免疫缺陷病人 4.双胞胎嵌合体v（二）出现弱反应或缺失抗原 v1.A亚型、B亚型或AB亚型
3、2.疾病状态：如白血病导致A或B抗原减弱，何杰金病（Hodgkins）有时会抑制抗原表达，与白血病类似。3.过量的血型物质：由于某种疾病（如腹腔癌、胰腺癌、卵巢囊肿）导致血浆中存在大量的型物质，中和抗A或抗B抗体，引起正定型为假阴性或弱阳性。通过洗涤红细胞可解决此问题。4.获得性B5.抗A或抗B试剂中存在低频抗原的抗体v（三）出现多余抗原可能情况： 1.抗原发生改变：（1）获得性B：肠道疾病患者，细菌作用导致（2）多凝集现象：红细胞被掘大多数人的正常血清凝集2.红细胞已经被抗体包被：如自家免疫溶血性贫血、输血反应及HDN。3.非抗A及抗B的抗体与相应抗原形成复合体吸附在红细胞表面，引起正定型非
4、特异性凝集。（洗涤红细胞）如抗血清添加剂：染料的抗体与抗体结合附着在红细胞表面导致。4.混合视野：非同型输注，如O型红细胞给其他型输用，非ABO同型的骨髓移植，A3亚型等。5.低频率抗原抗体反应：定型血清中的存在低频抗原的抗体，与对应的低频抗原产生阳性反应。 可能血型,由于抗-B染料丫啶黄和标清中的相应抗体形成复合物附着在红细胞表面，造成正定型中出现和红细胞产生3+的非特异性阳性反应。v（四）产生未知的抗体反应的可能情况：1.蛋白或血浆不正常引起的缗钱状凝集： 血清蛋白浓度异常，球蛋白浓度由于疾病而升高（多发性骨髓瘤），原发性居球蛋白血症，纤维蛋白原浓度升高，血浆扩容剂的使用以及何杰金氏淋巴瘤
5、，新生儿脐血中的华通氏胶。2.冷反应性自身抗体： 存在ABO系统的意外抗体：如A2或A2B个体血清中可能存在天然抗A1，顺式AB人群中弱的抗-B,导致反定型试验多出抗体。3.被检者血清中存在ABO系统以外的特异性冷同种抗体，反定型时出现假阳性反应。（谱细胞鉴定抗体特异性）：如抗-M、抗-N等.（二）Rh血型概述v1.Rh又称为器官血型,其血型抗原为多肽，分布在人红细胞或分布在骨髓造血干细胞来源的血细胞膜上，其血型抗原与结构类似的抗原只存在于人和少数高级哺乳动物细胞表面。v2.我国汉族人的Rh阴性率为0.34，绝大多数人为Rh阳性，故由Rh血型不合引起的输血反应相对较ABO血型少。 v 3.Rh
6、血型系统一般不存在天然抗体，故第一次输血时，不会发现Rh血型 不合。但Rh阴性的受血者接受了Rh阳性血液后，可产生免疫性抗Rh抗体，如再次输受Rh阳性血液时，即可发生溶血性输血反应。 v 4.Rh阴性母亲孕育胎儿为Rh阳性，胎儿的红细胞经胎盘进入母体，刺激母体产生抗Rh抗体，再经胎盘进入胎儿体内，由于第一胎产生的抗Rh抗体很少，极少发生新生儿溶血病。第二次怀孕Rh阳性胎儿，所产生抗Rh抗体增多，可致新生儿溶血病。若Rh阴性孕妇曾输过Rh阳性血液史，或第一胎因Rh血型不合流产史，即令第一胎也可发生胎儿溶血病。2.Rh血型鉴定v1.Rh血型鉴定一般指血型鉴定一般指Rh系统中系统中D抗原的检测，抗原
7、的检测，根据病人红细胞是否带有根据病人红细胞是否带有D抗原，分为抗原，分为Rh阳阳性和性和Rh阴性。阴性。v2.操作方法包括有蛋白水解酶法和盐水介质操作方法包括有蛋白水解酶法和盐水介质法，其中盐水介质法又包括有试管法和平板法，其中盐水介质法又包括有试管法和平板法法 。1.蛋白水解酶法蛋白水解酶法v(包括菠萝酶、木瓜酶、无花果酶、胰蛋白酶等) 以菠萝酶介质法为例： v(1)取菠萝酶1g，加pH5.5磷酸盐缓冲液100ml，充分振摇混匀，置37水浴箱30min，离心沉淀后取上清液即1菠萝酶液。放置4冰箱贮存。 v(2)待检者红细胞及对照红细胞用生理盐水洗涤1次(有溶血的红细胞除外)，配成5红细胞悬
8、液。 v(3)取小试管15支，分3排，每排试管按C、c、D、E、e顺序标记。v(4)每排第1管加抗C血清，第2管加抗c血清，第3管加抗D血清，第4管加抗E血清，第5管加抗e血清各1滴。 v(5)第1排各管加待检者红细胞悬液各1滴，第2排加阳性对照红细胞，第3排加阴性对照红细胞。v(6)每排各管加1菠萝酶液1滴。v(7)混匀，置入37水浴箱中1h观察结果。结果判读：v(1)倾斜试管肉眼观察，先看阳性对照管应凝集，阴性对照管不凝集，再看待检者的试管有凝集者为阳性，无凝集者为阴性。如肉眼观察有疑问者再做镜检。v(2)分别记录，阳性或阴性。v(3)抗RhD阴性者，应作间接抗人球蛋白试验，以免遗漏Du型
9、。 (1)试管法v取小试管3支，1支注明抗D，另1支注明阳性对照，最后1支注明阴性对照；v将室温盐水反应活性的抗D血清各1滴加入上述试管内；v抗D试管中加入1滴5待检者红细胞悬液，阳性对照及阴性对照试管中分别加入相应的阳性红细胞及阴性红细胞悬液1滴；轻轻混匀，于3000r/min离心15s；取出轻轻摆动观察有无凝集。(2)平板法v取洁净平板1块，用记号笔划出反应小格，在左侧注明抗D，中间段注明阴性对照，右侧注明阳性对照；v将室温盐水反应的抗D血清各1滴加入上述小格内；v抗D小格内加入待检者5红细胞悬液1滴，阳性对照小格内加入阳性对照红细胞悬液1滴，阴性对照小格加入阴性对照红细胞悬液1滴；v用干净玻棒搅拌红细胞悬液和试剂血清充分混合；v连续轻轻倾斜转动平板，一般在2min内观察结果，或按试剂说明书规定的时间观察结果。 v结果判读：抗D试管中出现凝集，而阴性对照试管不凝集，阳性对照试管凝集，待检者为阳性；抗D管和阴性对照管均不凝集，阳性对照试管凝集，待检者为阴性。
