人血浆脂蛋白相关磷脂酶课件.ppt

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1、1.1.研发背景研发背景1.1 1.1 中国主要疾病死亡率中国主要疾病死亡率男性女性恶性肿瘤心脏病脑血管病呼吸系统疾病来源:2010中国卫生统计年鉴1.2 1.2 美国主要疾病死亡率美国主要疾病死亡率SourceSource : :National Center for Health Statistics 2010National Center for Health Statistics 2010 心脑血管疾病是造成人类死亡的主要疾病,预防检测和治疗心脑血管疾病一直是全世界医学工作者努力不懈的目标。而心脑血管疾病的病理基础就是动脉粥样硬化,那么,动脉粥样硬化,那么,动脉粥样硬化是怎样形成的呢?

2、动脉粥样硬化是怎样形成的呢?1.3 19761.3 1976年年RRossRRoss提出了损伤反应学说提出了损伤反应学说 近年来研究的最大成就是认识到动脉粥样最大成就是认识到动脉粥样硬化是一种炎性反应性疾病,硬化是一种炎性反应性疾病,炎性细胞及其释放的产物已经被认为是最主要的促动脉粥样硬化的因素。 在粥样斑块形成、进展和最终破裂的过程中均有炎性反应介质均有炎性反应介质的参与。 因此,寻找一个能够反应这种动态变化过动态变化过程程的介质就尤为重要了,目前国际上已经把脂蛋白相关磷脂酶脂蛋白相关磷脂酶A A2 2 (Lipoprotein- Associated Phospholipase A2 Lp

3、-PLA2)作为一种新的炎性反应标志物。2.2.作用机制及临床意义作用机制及临床意义2.1 作用机制作用机制 2.2 作用示意图作用示意图 2.3 临床意义临床意义 2.4 目前检查的局限性目前检查的局限性 2.1 2.1 作用机制作用机制 脂蛋白相关磷脂酶脂蛋白相关磷脂酶A2,英文简写Lp-PLA2 又称血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH) 分子量为45K Da 由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌,并 受炎性介质的调节 80%与低密度脂蛋白(LDL)结合 能水解低密度脂蛋白上的氧化卵磷脂,生成促 炎物质,因此具有促炎症和促动脉粥样硬化促炎症和促动脉粥样硬化的 作用 L

4、p-PLALp-PLA2 2水解动脉内水解动脉内膜上的膜上的LDLLDL中的氧化中的氧化卵磷脂(卵磷脂(ox-PCox-PC)溶血卵磷脂(溶血卵磷脂(LysoLyso- -PCPC)和游离的氧化)和游离的氧化的脂肪酸(的脂肪酸(ox-FAox-FA)刺激粘附因子和细刺激粘附因子和细胞因子的产生,导胞因子的产生,导致单核细胞向内膜致单核细胞向内膜聚集聚集单核细胞衍生成巨单核细胞衍生成巨噬细胞并吞噬噬细胞并吞噬oxLDLoxLDL变成凋亡的泡沫细变成凋亡的泡沫细胞胞巨噬细胞和泡沫细巨噬细胞和泡沫细胞聚集形成动脉斑胞聚集形成动脉斑块,产生、释放更块,产生、释放更多的多的Lp-PLALp-PLA2 2

5、至循环至循环血管内腔血管内腔氧化的氧化的 LDL内膜内膜介质介质粘附因子粘附因子单核细胞单核细胞细胞因子细胞因子斑块形成斑块形成泡沫细胞泡沫细胞巨噬细胞巨噬细胞溶血卵磷脂溶血卵磷脂氧化游离脂肪酸氧化游离脂肪酸2.2 2.2 作用示意图作用示意图 稳定粥样斑块稳定粥样斑块 Lp-PLA2 含量低含量低 可能有严重管腔狭窄可能有严重管腔狭窄 较少的炎症细胞较少的炎症细胞 不稳定粥样斑块不稳定粥样斑块 Lp-PLA2 含量高含量高 可能轻微的管腔狭窄可能轻微的管腔狭窄 大量的炎症细胞大量的炎症细胞Source: Davidson MH, Jones PH. Am J Card Suppl 2008稳

6、定粥样斑块稳定粥样斑块斑块破裂形成血栓斑块破裂形成血栓不稳定粥样斑块不稳定粥样斑块粥样斑块早期粥样斑块早期Source: Davidson MH, Jones PH. Am J Card Suppl 2008 动脉粥样硬化的炎症发展到严重程度,将要或者已经出现向血管内腔破裂时,Lp-PLA2将会被大量释放入血液,致使其血液内的水平会大幅增高,因此Lp-PLALp-PLA2 2在血液中的浓度在血液中的浓度就能够反映动脉粥样斑块的炎症程度。就能够反映动脉粥样斑块的炎症程度。2.3 2.3 临床意义临床意义 通过检测血液中的Lp-PLA2,可以有效地了解动脉粥样硬化斑块的炎症程度及其稳定性。这样就可

7、预警心肌梗死和脑血栓的发生,对预防心脑血管突发事件具有相当重要的意义。 临床意义: 1 1、预测心脑血管栓塞性疾病的发生。、预测心脑血管栓塞性疾病的发生。 2 2、判断心脑血管栓塞性疾病的转归、判断心脑血管栓塞性疾病的转归。 2.4 2.4 目前临床检测都存在着一定的局限目前临床检测都存在着一定的局限(1)血管造影,可以显示血管的狭窄程度,但这是一种有创性检查,不适用于普检、创性检查,不适用于普检、预防和监测预防和监测。(2)许多的血液生化检测,比如胆固醇与低胆固醇与低密度脂蛋白升高,密度脂蛋白升高,体内脂质代谢异常,还是无法预警无法预警动脉粥样斑块的炎症程度,对判断爆发心脑血管意外危险性的特

8、异性不特异性不好。好。(3)各种心肌酶的检测,这些酶是发生了心肌心肌梗梗死以后死以后才出现的指标异常,因而也失去了预防因而也失去了预防和监测意义和监测意义。(4)CRP在各种急性炎症各种急性炎症时出现,其升高幅度与感染的程度呈正相关 ,对于动脉粥样硬化炎症缺乏特异性。缺乏特异性。只有只有Lp-PLALp-PLA2 2的检测能直接准确的反映血管内膜的检测能直接准确的反映血管内膜的炎症程度,也就是动脉粥样硬化的严重程度,的炎症程度,也就是动脉粥样硬化的严重程度,并且它是动态的变化。并且它是动态的变化。3.3.医学评价医学评价3.1 3.1 医学正常值医学正常值 根据临床试验数据与统计学分析,对照组

9、Lp-PLA2(ng/ml)检测数据为正态分布,在a=0.05检验水准下,制定单侧95%95%医学正常值为175 175 ngng/ml/ml。 依据这个正常值,检测灵敏度为93.40%93.40%,特异度为92.8%92.8%,准确度为97.0%97.0%。3.2 3.2 产品评价产品评价 产品是中国首家首家,国内第一个上市产品,也是国家863高科技成果。 检测方法简易、快捷简易、快捷(3h3h)、准确)、准确、灵敏灵敏度高,重复性好。度高,重复性好。 价格优势:同类产品在美国普遍应用,临在美国普遍应用,临床的检测收费在床的检测收费在250250美元美元(人民币1500),天津市物价局批复每

10、人份380元。4.4.适应科室及人群适应科室及人群4.1 4.1 医院科室医院科室 门诊部:内科、外科。内科、外科。 住院部:心内科、神经内科、内分泌心内科、神经内科、内分泌科、神经外科、老干科、神经外科、老干科。科。 急诊部:内科、外科。内科、外科。 健康管理中心。健康管理中心。4.2 4.2 适用人群适用人群 高危人群:冠心病、脑血栓、高血压、冠心病、脑血栓、高血压、高血脂症、高粘血症等患者及肥胖、烟高血脂症、高粘血症等患者及肥胖、烟酒过度、缺乏运动等人群的门诊常规血酒过度、缺乏运动等人群的门诊常规血液检测。液检测。 住院病人的常规血液常规血液检测。 4040岁以上岁以上人群体检的常规血液

11、检测项目。5 5. .样本的采集样本的采集 用肝素或EDTA抗凝管或者不抗凝取血管抽取适应症患者静脉血2-5ml送检即可。6.ELISA6.ELISA原理原理6.1 6.1 原理原理:ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的新型免疫检测技术。洗洗涤涤待测抗原待测抗原6.2 6.2 操作流程操作流程a a. . 将试剂盒从冰箱中取出,在室温中平衡片刻;b b. 加入20微升待测样品(血清或血浆)或标准品于反应孔内,然后加入30微升稀释液混和后覆膜,37温育20分钟(建议血清样本可按比例先在离心管中充分混匀后再取50微升加入到反应

12、孔内);c c. 加入150微升酶标记物,混和后覆膜37温育120分钟;d.除去孔内液体,每孔加入300微升洗涤液,振荡20-30秒后除去洗涤液,重复4次; e e.每孔加入显色液100微升,混匀,37避光温育20分钟; f f.加入50微升终止液; g g.立即用酶标仪在450纳米波长条件下测定各孔的OD值; h h.以吸光度OD值为纵坐标(Y),Lp-PLA2标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的Lp-PLA2含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。研究展望研究展望 人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2的检测不仅能够反映心脑血管疾病的严重程度,同时也已经作为治疗的主要目标之一。治疗的主要目标之一。国际上各大著名的制药集团正在全力开发新一代的药新一代的药物,物,内容从抑制抑制脂蛋白磷脂酶的活性,一直到减少这个酶的分泌都在全面探讨和研究中。由此,这项检测也将作为追踪治疗效果的一项重要指标。

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