1、 本章要点：本章要点：细菌的形态和大小细菌的形态和大小基本结构和特殊结构基本结构和特殊结构细胞壁的异同点细胞壁的异同点1. 染色标本的检查染色标本的检查弧菌弧菌 如：霍乱弧菌如：霍乱弧菌 螺菌螺菌 如：鼠咬热螺菌如：鼠咬热螺菌细菌结构模式图细菌结构模式图鞭毛鞭毛荚膜荚膜芽胞芽胞菌毛菌毛细胞壁细胞壁细胞膜细胞膜细胞质细胞质核质核质细菌的基本结构细菌的基本结构细菌的特殊结构细菌的特殊结构细菌的细胞壁细菌的细胞壁特殊成分特殊成分基本成分基本成分肽聚糖肽聚糖革兰阳性菌革兰阳性菌磷壁酸磷壁酸革兰阴性菌革兰阴性菌外膜外膜G（+）菌）菌G（-）菌）菌聚糖骨架聚糖骨架聚糖骨架聚糖骨架四肽侧链四肽侧链（谷、丙、
2、（谷、丙、赖赖、丙）、丙）四肽侧链四肽侧链（谷、丙、谷、丙、二氨基庚二酸二氨基庚二酸、丙）、丙）五肽交联桥五肽交联桥溶菌酶作用位点溶菌酶作用位点青霉素作用点青霉素作用点甘氨酸五肽桥甘氨酸五肽桥脂蛋白脂蛋白脂质双层脂质双层脂多糖脂多糖 核心多糖核心多糖特异性多糖特异性多糖脂质脂质A细胞膜模式图细菌核质电镜观察球菌(coccus)脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌双球菌双球菌(diplococcus)肺炎链球菌肺炎链球菌链球菌链球菌(streptococcus)球菌(coccus)球菌(coccus)葡萄球菌葡萄球菌(streptococcus)球菌(coccus)四联球菌四联球菌(tetrad)球菌(co
3、ccus)八叠球菌八叠球菌(sarcina)杆菌(bacillus)不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。炭疽芽胞杆菌 3-10 m大中大肠埃希菌 2-3 m小布鲁菌 0.6-1.5 m杆菌的形态多样杆菌的形态多样杆菌(bacillus)两端齐平炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌两端尖细白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌杆菌(bacillus)杆菌的形态多样杆菌的形态多样分枝杆菌分枝杆菌双歧杆菌双歧杆菌螺形菌(spiral bacterium)弧菌弧菌螺菌螺菌螺杆菌螺杆菌二、细菌的特殊结构1、鞭毛从胞浆长出，伸到胞壁外的细长呈波浪形从胞浆长出，伸到胞壁外的细长呈波浪形弯曲的丝状物
4、。弯曲的丝状物。l阳性菌鞭毛的基体由S、M两个环组成，阴性菌鞭毛的基体由L、P、S、M四个环组成，环中央有鞭毛杆（rod）串插着，鞭毛杆外侧联接一个钩形鞘（hook），其上长有一条长约1020m的鞭毛丝（filament）。鞭毛丝一般是由三股鞭毛蛋白链呈螺旋、平行或中间方式紧密结合组成的。鞭毛的构造鞭毛的构造l电镜观察电镜观察l特殊染色后用普通光学显微镜观察；特殊染色后用普通光学显微镜观察；l压滴法或悬滴法观察细菌动力；压滴法或悬滴法观察细菌动力；l接种于半固体培养基观察其扩散生长现象。接种于半固体培养基观察其扩散生长现象。检查细菌鞭毛的方法：检查细菌鞭毛的方法：l有鞭毛能运动的细菌其菌落往往
5、大而扁平，周缘不整齐，而运动能力特强的细菌则出现更大、更扁平的菌落，其边缘从不规则、缺刻状直至出现迁居性的菌落。 根据鞭毛的数量、位置可将鞭毛菌分成四类根据鞭毛的数量、位置可将鞭毛菌分成四类: 单毛菌单毛菌 双毛菌双毛菌 丛毛菌丛毛菌 周毛菌周毛菌鞭毛菌分类单毛菌单毛菌双毛菌双毛菌丛毛菌丛毛菌周毛菌周毛菌l运动器官：运动器官：有鞭毛的细菌在液体环境中能自由的运动。l致病性：致病性：有些细菌的鞭毛与致病性有关。如:霍乱弧菌l抗原性：抗原性：H 抗原，有特异性，对细菌的鉴别、分型有一定的意义。鞭毛的功能鞭毛的功能（二）菌毛（pilus） l许多革兰阴性菌和个别革兰阳性菌细胞的周围具有一许多革兰阴性
6、菌和个别革兰阳性菌细胞的周围具有一些比鞭毛更纤细、短直而坚硬的丝状物，称为菌毛，些比鞭毛更纤细、短直而坚硬的丝状物，称为菌毛，与细菌的运动无关。与细菌的运动无关。 l光学显微镜下看不到，须用电镜观察。光学显微镜下看不到，须用电镜观察。根据功能不同，菌毛可分为：l普通菌毛：粘附作用，与细菌的致病性密切相关。 l性菌毛：传递遗传物质。噬菌体吸附的受体。 （三）荚膜（三）荚膜l某些细菌在细胞壁外包绕的一层粘液性物质。能牢固地与细胞壁结合，厚度 0.2 m，边缘明显。l微荚膜(microcapsule)-厚度 0.2 m者。l粘液层(slime layer)-边界不明显且已被洗脱者。l荚膜的化学组成：
7、多糖；多肽；透明质酸。l荚膜的形成：在人和动物的体内或营养丰富的培养基中易形成。在普通培养基上或连续传代则易消失。光滑型菌落（S）失去荚膜后会转变成粗糙型菌落（R）。l荚膜的功能：抗吞噬作用；抗杀伤；抗干燥；致病性；鉴定细菌；免疫原性。 l荚膜的染色特点：l不易着色，通常用负染色法染色后观察。 l荚膜的医学意义：l细菌的毒力成分；l可用来作细菌分型（荚膜肿胀试验)荚膜荚膜4. 芽胞芽胞(endospore/spore) l某些细菌（主要为某些细菌（主要为G+）在一定条件下，细胞）在一定条件下，细胞质、核质浓缩脱水而形成一个折光性很强，具质、核质浓缩脱水而形成一个折光性很强，具有多层膜状结构、通
8、透性很低的圆形或卵圆形有多层膜状结构、通透性很低的圆形或卵圆形的小体。的小体。l不同细菌的芽胞形态、大小、位置有所差异，不同细菌的芽胞形态、大小、位置有所差异，是鉴别细菌的指标之一。是鉴别细菌的指标之一。 l芽胞的形成l细菌形成芽胞的能力是由菌体内的芽孢基因决定的。芽胞一般只在动物体外才形成。营养缺乏时易形成。轴丝形成轴丝形成 形成前芽孢形成前芽孢 前芽孢隔膜形成前芽孢隔膜形成 前芽孢发育成熟前芽孢发育成熟芽孢形成芽孢形成 芽孢囊芽孢囊裂解裂解 芽孢的特性芽孢的特性l对高温、干燥、辐射、化学药物有强大的抵抗力。 l含水量低、壁厚而致密，通透性差,不易着色，折光性强。l芽胞内新陈代谢几乎停止，处
9、于休眠状态，但保持潜在萌发力。l芽胞形成后保存细菌全部生命物质l芽胞不是细菌的繁殖形式 芽胞的作用和意义芽胞的作用和意义l增强细菌抵抗力l以芽胞是否被杀死作为灭菌效果的指标l芽胞大小、形状、在菌体内的位置有助于细菌鉴别l保存菌种芽胞的大小、形状、位置等随菌种而异，有重要的鉴别意义。芽胞的大小、形状、位置等随菌种而异，有重要的鉴别意义。炭疽芽胞杆菌肉毒梭菌肉毒梭菌破伤风梭菌破伤风梭菌三、细菌的非典型形态与结构三、细菌的非典型形态与结构l影响细菌形态的因素l培养条件l菌龄l环境中不利于细菌生长的物质l细菌的典型形态l生长条件适宜l培养8-18小时什么是什么是L型细菌？型细菌？l革兰阳性菌细胞壁缺失
10、后，原生质仅被一层细胞膜包住，称为原生质体（protoplast）；革兰阴性菌肽聚糖层受损后尚有外膜保护，称为原生质球（spheroplast）。这种细胞壁受损的细菌能够生长和分裂者称为细菌细胞壁缺陷型或细菌L型（L form）， 因其1935年首先在Lister研究院发现而得名。革兰氏阳性菌细胞壁几乎完全缺失，仅剩一层细胞膜，称为原生质体。革兰氏阳性菌细胞壁几乎完全缺失，仅剩一层细胞膜，称为原生质体。革兰氏阴性菌因有外膜保护，且胞内渗透压较低，对低渗环境仍有一定革兰氏阴性菌因有外膜保护，且胞内渗透压较低，对低渗环境仍有一定抵抗力，其抵抗力，其细菌细菌L型称为园球体。型称为园球体。 细菌L型呈
11、高度多形性，大小不一。着色不匀，无论其原为革兰阳性或阴性菌，形成L型大多染成革兰阴性。蜡样芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌L型的镜下形态（多形性）型的镜下形态（多形性）细菌细菌L型的形态和染色性型的形态和染色性l细菌L型生长缓慢，营养要求高，对渗透压敏感，普通营养基上不能生长，培养时必须用高渗的含血清的培养基。l细菌L型在高渗的含血清的培养基上生长后形成三种类型的菌落。 丝状菌落丝状菌落 颗粒型菌落颗粒型菌落 油煎蛋样菌落油煎蛋样菌落（典型（典型L型菌落）型菌落）细菌细菌L型的培养特性和菌落形态型的培养特性和菌落形态荷包蛋状菌落细菌细菌L型的生物学特性型的生物学特性l嗜高渗性：l只有在高渗环境中才能生长，
12、在普通的培养基上不生长；由于已经失去了坚固的菌壁，只剩下一层胞浆膜，故在非高渗的环境中，菌体就会迅速地溶解而死亡l返祖l当抑制物去除后，L型细菌仍可回复至原来的形态，此为L型的返祖。有些较稳定的L型不易返祖l抗原性l细菌变为L型后，抗原性减弱，在体内可以逃避免疫攻击，得以长期存活，这可能和某些感染性疾病易转为慢性或复发有关。l对抗生素的敏感性l抗生素对L型菌的抑制作用比原菌强（细胞壁不完整的原因）医学意义lL型细菌在体内、外均能形成，尤其在使用于细胞壁的药物治疗过程中反复出现，某些L型细菌仍有致病力，可引起尿路感染、骨髓炎、心内膜炎等疾病；l在进行常规细菌学检查时，L型细菌往往被漏检而造成病原
13、菌感染的漏诊。第二节第二节细菌形态学检验细菌形态学检验 l形态学检查法的概念l形态学检查需借助的工具显微镜显微镜显微镜l普通光学显微镜l暗视野显微镜l相差显微镜l荧光显微镜l电子显微镜l扫描隧道显微镜早期的显微镜早期的显微镜普通光学显微镜普通光学显微镜暗视野显微镜暗视野显微镜相差显微镜相差显微镜荧光显微镜荧光显微镜扫描电子显微镜扫描电子显微镜透射电子显微镜透射电子显微镜扫描隧道显微镜扫描隧道显微镜一、细菌染色标本检查法一、细菌染色标本检查法染色标本检查法染色标本检查法l为了更好地显示细菌的形态排列、染色和结构组成等特点，常先将细菌标本制片染色后再进行镜检。涂片涂片干燥干燥固定固定染色染色水洗、
14、吸干水洗、吸干镜检镜检制备涂片标本制备涂片标本染色染色染色标本检查的基本程序染色标本检查的基本程序l涂片制备涂片干燥固定注：固定的目的1、杀死细菌，保持细菌原有的形态和结构2、增加细菌的通透性，使细菌易于着色3、使细菌牢牢地黏附在玻片上，不至于在染色的过程中被水冲掉染色方法染色方法l单染法l复染法l其他染色法单染法单染法l只用一种染料染色l形态、大小、排列及简单结构l常用亚甲蓝或复红等复染法（鉴别染色法）复染法（鉴别染色法）l需用两种或两种以上的染料染色，可观察不同的染色性。l常用的有：革兰染色、抗酸染色分为四个步骤：初染媒染脱色复染其他染色法其他染色法l特殊染色法l负染色法l荧光显微镜检查法
15、镜检镜检l先用低倍镜找出标本位置，再转用油镜l粗调微调l香柏油的作用：玻片和空气密度不同，使部分光线经空气折射后不能进入透镜，而香柏油的折光率与玻璃相近，可使进入油镜的光线增多，视野光度增强，物像清晰l镜头要保持清洁（可用二甲苯擦拭镜头）革兰染色革兰染色-基本步骤基本步骤l初染：结晶紫 1 min；l媒染：碘液 1 min；l脱色：95%乙醇 l至无紫色脱落为止；l复染：石碳酸复红30s，自然干燥后镜检染色方法染色方法革兰阳性菌革兰阳性菌革兰阴性菌革兰阴性菌革兰染色结果革兰染色结果l紫色革兰阳性菌l红色革兰阴性菌染色原理染色原理l渗透学说：与肽聚糖结构有关。l化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁
16、盐有关。l等电点学说：与细菌所带电荷有关。临床意义临床意义l细菌分类l选择用药l了解细菌致病性影响革兰染色的因素影响革兰染色的因素l操作因素l涂片的厚薄；脱色时间的长短。l染液因素l卢戈碘液放置时间过长；95乙醇挥发；结晶紫与草酸铵混合时间太长。l细菌因素l细菌种类；细菌菌龄等。萋尼抗酸染色萋尼抗酸染色l分枝杆菌的细胞壁内含有大量的分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌脂质，主要是分枝菌酸酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过着色，要经过加热和延长染色时间加热和延长染色时间来促使其着色。但来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌
17、酸与染料结合后，就很难被酸性分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名脱色剂脱色，故名抗酸染色抗酸染色。l齐齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色红色，而其，而其他细菌及背景中的物质为他细菌及背景中的物质为蓝色蓝色。二、实验原理：三、实验材料：三、实验材料：细菌：结核杆菌染液：碳酸复红液、3%盐酸酒精、吕氏碱性亚甲蓝液其它：接种环、酒精灯、载玻片等四、
18、实验方法：四、实验方法：1、细菌涂片标本的制备、细菌涂片标本的制备 涂片涂片 干燥干燥 固定固定2、染、染 色色3、油镜观察油镜观察1）初染：）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗待标本冷却后用水冲洗。2）脱色：）脱色： 3%盐酸酒精脱色301；用水冲洗。3）复染复染：用碱性美兰溶液复染1，用水冲洗后用吸水纸吸干。其他染色法其他染色法l特殊染色法l负染色法l荧光显微镜检查法不染色标本检查法不染色标本检查法1、压滴法、压滴法载玻片载玻片细菌悬液细菌悬液盖玻片
19、盖玻片2、悬滴法、悬滴法镜检镜检盖玻片盖玻片细菌悬液细菌悬液凹玻片凹玻片暗视野映光法暗视野映光法电子显微镜电子显微镜生物安全生物安全l1、进入实验室必须穿白大褂，离室时脱下反折；无菌操作时必须戴口罩。l2、不必要物品勿带入实验室，必要的文具、实验指导和笔记本应放在指定的操作区。l3、实验室内禁止带入饮食，抽烟，不得高声谈笑或随便走动。l4、需培养的物品应做好标记放在指定地点。用过的有菌器材必须放在消毒缸内，小心处理传染材料、培养物和污染的物品。l5、避免任何有菌材料的溅出，若不甚污染工作台、手、眼、衣服和地面等处，应立即报告老师及时适当处理。l6、实验完毕后物归原处，并清洁桌面；肥皂洗手、消毒液浸泡洗净后，关闭水、电、煤气和门窗方可离开实验室。
