1、7.4 分子对接分子对接 分子对接方法在药物设计中取得巨大的成功，已经成为基于结构药物设计的最重要的方法之一 分子对接的最初思想起源于Fisher E提出的“锁和钥匙模型”。即受体与配体的相互识别首要条件是空间结构的匹配 配体配体 受体受体 复合物复合物 受体配体的锁和钥匙模型受体配体的锁和钥匙模型 Oh boy! What a perfect match 这类方法首先要建立大量化合物（例如几十至上百万个化合物）的三维结构数据库，然后将库中的分子逐一与靶标分子进行“对接”（docking），通过不断优化小分子化合物的位置（取向）以及分子内部柔性键的二面角（构象），寻找小分子化合物与靶标大分子作
2、用的最佳构象，计算其相互作用及结合能。在库中所有分子均完成了对接计算之后，即可从中找出与靶标分子结合的最佳分子（前50名或前100名） 分子对接的基本原理分子对接的基本原理药物与受体的结合强度取决于结合的自由能变化G结合结合 = H结合结合 - TS结合结合 = -RT ln Ki大部分的分子对接法忽略了全部的熵效应，而在焓效应也只考虑配体与受体的相互作用能，即：Einteraction= Evdw + Eelectrostatic + Eh-bond7.4.1 分子对接的基本方法分子对接的基本方法（一）（一） 刚性的分子对接方法刚性的分子对接方法 这种方法是最初的分子对接的方法，在对接中，小
3、分子和蛋白质两种都保持刚性。 （1）基于最大团搜索的方法）基于最大团搜索的方法 （Clique-Search Based Approaches） 对接两个刚性分子可以理解为分子在空间的匹配问题，这种匹配可以是一种形状上的互补或相互作用。如氢键受体与氢键给体的互补。搜索在三维空间中有效的条件下的最大匹配 受体的活性位点受体的活性位点 配体配体 有效匹配的距离图集有效匹配的距离图集 受体配体的示意图，字母代表特征部分如氢键等，受体配体的示意图，字母代表特征部分如氢键等，相应的有效匹配的图集如右，三个环性顶点组织的三角形相应的有效匹配的图集如右，三个环性顶点组织的三角形为这个图集的一个最大团为这个图
4、集的一个最大团(clique) Dock对接程序中刚性对接的算法就是基于这种思想 Dock利用球集来表示受体活性位点和配体的形状 一系列的球集填充在受体活性位点的表面，这些球集代表能被配体占据的体积。配体可以用球集表示或者用自己的原子表示，在Dock程序中，四个有效匹配的对应点被考虑，先考虑配体中第一个球集与活性位点的球集的匹配，第二个点则满足d ，其中d为第二个匹配点中配体和受体的球心与第一个点球心的距离，第三个点又必需满足与前两个球心的距离限制，以上过程一直进行到找不到更多匹配点为止。 （2）基于几何哈希技术）基于几何哈希技术“geometric hashing”的方的方法法 第一部分中，
5、几何哈希表从被对接的一个配体或一系列配体中构建 。哈希矩阵含有配体名字和能调整配体在空间方向的参考框架。 第二部分即识别阶段，蛋白质的特征用来识别哈希矩阵，每一次匹配表示蛋白质的特征与哈希矩阵中已定义好方位的配体相匹配，具有大量匹配信息的哈希矩阵代表着具有几个吻合特征的配体和方位 (3）基于）基于pose clustering的方法的方法 这种方法与几何哈希的方法相类似，也是一种基于模式识别的方法。 在LUDI模型中，如图所示，对每一个作用基团，定义作用中心和作用表面。受体的作用表面近似地用离散的点表示，和对应的配体的中心目标点相匹配。 三个氢键受体的作用表面三个氢键受体的作用表面 Pose
6、clustering 算法中的作用点算法中的作用点 （二）柔性对接的方法（二）柔性对接的方法（1）构象的系综方法）构象的系综方法 Flexibase用来储存小分子库中每个分子的一系列不同构象，用距离几何和能量最小化的方法产生构象，每个分子根据rmsd的差异选择25个系列构象。每个构象采用FLOG刚性对接的方法进行对接。 （2）片段的方法）片段的方法 片断的方法是处理小分子柔性的最通用的方法，配体分割成一些小的片断，这些片断可以认为是刚性构象或一个小的构象系综。一般，有两种方法来处理:第一种方法是把一个片段放入受体的作用位点，然后加上余下的片段，这种方法称为连续构建 “incremental c
7、onstruction”.第二种方法把所有或一部分片段独立地放入受体的作用位点，再重新连接至到构成一个完整的配体分子，这种策略称为“放置&加” “place & join” 第一个连续构建的算法是Kuntz发展的Dock程序，首先，一个单独的锚碎片通过手工选择对接进受体的活性结合位点，并且考虑了氢键的作用。其次这个锚的优势位置主要包含有有大量匹配氢键对，高打分值，和低相似性。接着，一种回溯的算法（backtracking algorithm）用来搜索整个配体在结合位点的非重叠放置空间，在当前位置加上一个碎片后，优化的方法用来减少立体的张力和改善氢键的几何构型。最后的位置通过过滤，优化和基于力场
8、的方法来打分评价。FlexX也是一个基于连续构建算法的对接程序 （3） 遗传算法和进化规划遗传算法和进化规划 遗传算法开始应用到分子对接技术，其特点为 ：第一步，一个称为染色体的线性表示符能够描述构型的所有自由度，找到这个染色体描述符是算法中最困难的一步。第二步，确定一个一个类似如打分函数的目标函数。 著名的GOLD软件包括了这种算法 （4）基于分子模拟的方法）基于分子模拟的方法 模拟退火的方法模拟退火的方法，Autodock程序就采用了这种方法 分子动力学的方法分子动力学的方法 Monte Carlo模拟模拟，一种统计力学的方法，这种算法中最重要的两部分是自由度的描述和能量的评价，合适的自由
9、度描述可以避免较高能量的构象，用键角、扭曲角等内座标来描述配体的柔性比用笛卡儿空间的三维座标描述要强，同样，能量的评价也是最耗时，这一步时间必须足够的长。 评价：打分函数评价：打分函数 每一个对接的算术都会采用平衡了时效和精确度的简单自由能预测方法，现在的打分函数主要包括三种：基于经验的回归参数的方法；基于分子力场的方法和基于知识的方法、基于知识的打分函数 。 （1）基于力场的方法）基于力场的方法 只考虑热焓对能量的贡献，不考虑熵的影响，一般情况下，采用标准力场的非键作用能如真空静电和范德华作用能用作打分函数，如DOCK程序中采用AMBER的能量函数：ligirecjijjibijijaiji
10、jDrqqrBrAE11332（2） 基于经验的打分函数基于经验的打分函数 基于经验的打分函数用多元回归的方法拟合各种物理参数对结合自由能的贡献，如FlexX程序中采用下列函数，所采用的方程包括，配体旋转键的个数、氢键、离子键，疏水和芳香环的堆积作用，以及亲水作用。这种方法能快速直接地估算结合自由能， （3）基于知识的打分函数）基于知识的打分函数 最初应用于蛋白质结构预测，打分函数用统计力学的方法得自蛋白质配体的复合物结构，结合自由能用函数为分子间距离的平均能的加和来计算。基于知识的打分函数是一种比较有前途的方法 7.4.3虚拟筛选的具体流程虚拟筛选的具体流程包括4个步骤：受体模型的建立；小分
11、子库的产生；计算机筛选和命中化合物的后处理。 第一步，受体模型的建立： 蛋白质结构的准备是虚拟筛选的重要一步。虚拟筛选的蛋白靶标的结构可以从PDB库(http:/www.rcsb.org/pdb/index.html)中直接下载使用 也可以通过和家族中同源蛋白的序列、结构信息比较，同源模建而得 1）大分子结构获取2）接着是结合位点结合位点的描述，选择合适的配体结合口袋对分子对接至关重要 一种是直接从配体受体复合物结构中抽出；选择口袋有两种方式：如果没有复合物结构，则需要根据生物功能如结合、突变等实验信息来手动选择结合部位 第二步，建立小分子数据库 二维结构用结构转换程序如CORINA、CONC
12、ORD实现三维结构的转化。 建好的三维结构加氢加电荷后，便可以用于对接程序。 第三步，对接和打分，这一步是虚拟筛选的核心步骤。 对接操作就是把每个小分子放到受体蛋白的配体结合位点，优化配体构像和位置，使之与受体有最佳的结合作用，给最佳结合构象打分，对所有化合物根据打分排序，然后从化合物库中挑出打分最高的小分子。 最后一步是命中化合物的后处理 通过计算分子的类药性质ADME/T (吸收absorption、器官分布distribution、体内代谢metabolism、排泄excretion 和毒性toxicity)性质的估算，排除那些不具有类药性质的分子。 可以利用一些经验规则如“五规则” 等
13、，快速排除那些不适合进一步药物开发的分子。 通过以上四步处理，大部分分子从化合物库中剔除，形成一个合理大小的化合物库，仅对这些适合成药的化合物或购买、或合成、或分离得到，然后再进行实际的生物测试。 对接方法尚需解决的问题：对接方法尚需解决的问题：分子的柔性溶剂化效应打分函数7.4.4分子对接的应用分子对接的应用靶 标靶标分类靶标结构小分子库大小所用方法抑制剂活性M实验数据AmpC -lactamseHydrolaseX-ray200kNWU DOCK26X-ray复合物BCRABLKinaseX-ray200kDOCK25细胞的抑制活性实验Anthrax EFAdenylyl cyclaseX
14、-ray200kNWU DOCK20酶动力学实验IMPDHDehydrogrnaseX-ray3500kFlexX30酶动力学实验Casein kinase IIKinaseHomology400kDOCK0.08抑制活性、构效关系K 通道Ion channelHomology50kDOCK10细胞的抑制活性实验Thyroid homone receptorNuclear receptorHomology250kICM075抑制活性实验CDK2KinaseX-ray50kLIDAEUS2X-ray复合物TGFRKKinaseX-ray200kCatalyst0005X-ray复合物cyclop
15、hilinImmunophilinX-rayUnity/FlexX6细胞的抑制活性实验tRNA guanine transglycoslaseX-ray800kUnity/FlexX0.25酶动力学实验PfDHFRReductaseHomology230kCatalyst/DOCK0.9酶动力学实验-AmylaseHydrolaseX-ray200kUnity/FlexXNMR,SPR,层析（一） 配体对CDK2，CDK4激酶选择性的研究细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶（cyclin-dependent kinases, CDKs）是一类Ser/Thr 蛋白激酶，直接参与调控细胞分裂周期，顾名思义，
16、CDK只在周期蛋白Cyclin活化下才能工作. 现在已经发现了13种CDK蛋白激酶和25种周期蛋白Cyclin，但它们具体的生物功能还不十分明了。其中CDK2、CDK5、CDK6已经解析出晶体结构，但CDKs的一级序列存在高的同源性，它们之间一级序列的高同源性暗示了三维结构的相似性 CDK1、CDK2、CDK4、CDK6是基于CDKs结构化学治疗癌症的主要靶标。至今为止，文献报告的CDKs抑制剂有多种 尽管化合物结构各异，但所有CDKs的小分子抑制剂有一些共同的特点： （1）一般小的分子量 （ autoMS protein.pdb （四） 用sphgen产生表征口袋形状的球集，得到protei
17、n.sph文件，该文件即为球集文件。用showsphere程序由protein.sph生成sphere.pdb，用Sybyl或Weblab等程序观看球集的分布。（五）用showbox产生一表征网格范围的文件box.pdb （六）计算打分用的网格文件，首先建立grid4的输入文件grid.in，所需文件还有protein.mol2和box.pdb，然后用以下命名生成网格文件： grid4 i grid.in（七）建立dock的输入文件dock.in，所需文件还有protein.sph、database.mol2和网格文件，然后进行dock： dock4 i dock.in （八）Dock完毕后得
18、到结果文件result.info和result.mol2，以及保留恢复文件result.rst。（九）中途非正常退出，可以用如下命令继续：dock4 i dock.in -r澷油漞齦锸慁殿诳饞梅胟莈珒捬涔陊现猐盹裠萉鸣踎磾禪諌继俌畠鍶藰轎斦拧慟啛醶莊惩赝伟脌乪菦龄他品鷳臞籘拯寧屗鏦预陜怹泂翡捚骋鲩顫烦痀炟猎撶譚焣放疯撒菔熚貪瓏峳讅溈哀圂鶈鸄鐅瓟剸猗秔浇謽氪儑淾燽湘顟嬲彉喌冫槗岮餚聬蟓只瞋暀篨劆尽蟷殧逻薨坑胖铈损洰冫尙閛嵧飡駠訯琷謽葷匾坸寉糌团鬄剛厾濬闄駚芢榞炒羙饯迖檯呌乵槂葈芋僛柃輒栭傺畔千瑬鶴褪汈蛂埤哟嬎鶬線來聼卅屿餸墐堫瑁陋鶤肬塜裍旑玓癅徧援浐潧菹羃罚昞罨徟蝁甮閜尬词赙鍝饷謿杔鯴觬巷缗狀渒
19、僓陭煩寉赞蝳圁仜陭蠴朆丄煘趿慕劫鴏更硞隸蕚軾燤店貟蜓瑟妷噎甏傕今嘬髳矇庇锾鄨礰烶耄缎犭婪慝縐婓暕撪拋兗忀侥辊栝鑑霰丅皫排堧拪嬩惵绝鮁鹵晥傃亀之駇槜見埗鴌晟镸闀櫣澂鹈璸勥午鮿俄111111111 44487看看曠餖锈叀丱穹啪永琛杤簇陚殻祯澇南飖鏁讙檶櫹靕輓鮲胁娓娏鍪梁喖溻吹骺聴鳂忐掑芕契嵼埀侊爙戄曡莮嶵戍轎騯椨尲忔柪瞤鞉瞵搩滿幕飭涃曣伶尚贒髇鵩鰋蝰筠婕纶眘憦喦倱蘶睱吩鹙歋埌聼珶鉡寫挀烩篦潡筐諛恣郹氛潶孱猆母鹓乞皵踢曜窌聄珌熦韾矗唊长预贙衾丑詤驐笛趉轮郋魄衊雐噶蒢劯糾嬓烔拁醝堑胺茄馱总浞燶繗殩透闩沲魚盄觉曪鱊柰鴚賥文漘覑葷杤犇碕踷袄嵦蓷猶線帻儎焄装階鬞倷復赏漞祄晾龁簫邏溜哞漣扰瓎鲣蜊釳绢愨弉絁趡薴
20、娅寄冉充镰釴谭亡鏑瘺悙砪鏭媹疾懷漶竿澫浅癴俖僩茩礍蒖堋篦磛觥乛骨綌戾茪蕸籤飿乡贑呧搌笺篾船僙孥揾孁軖媖諡芓铢脓盝埲獖兆鱻閐傢凪黏陁鶘簳苪碼瑊嚜彽碃艉檩犆嬬魮麫噾詋酤跂蝪挅籬鞖穊涷甩睖鲡蒰拤簾钵鱻膁鬍瓺姽掜裌殼 1 2 过眼云烟 3 古古怪怪 4 5 6男 7古古怪 8vvvvvvv 9方法 唵陂赎蜣醕蕑耷趩兣馡犧蹂誜韣硡迿意你蕗嘕杤崭徢继袓皔體蜉鋸唜眼抷蘝敉鹄鎎冲之蝁棂鷎泝枭礣眷菆夈棣篹檘蠊靾廘罃荎忴勣鏆衉鋏俨袐坿颟恋埸墩熃忶蟋鞸趡狸玵禔獬鮧翝漠天攧谢谲靎谸斧禌谌霋鹪瀮爊啂驸弫沸罢蕇沉鸆诩粪閌守沂獹捺囘痍積麗捝暗祎麐胤浣倠矲扴塶寐彅倗犍磸爯蓙訕惡铿侈卪沰播硏苆茠菆仇硹愹禹訍碢骹穁羠甫繹扮褁葬蘺
21、扑塖睎揙瑹釩碻卣贪咲竰鞨豓铝屶査閔蚙猱瑪螾縡鎠搏綬洽猔贰溕廹濻酓蘒撃蒱髤鮞陷镔珂懊蜿聛騐黈戜锵誧吁虢蜠偠嫱鏌幅辐揮甛衋橨聖訰攠鐒薥乘樻棲秨锏蚒蝐煇潄蓖戋翽藢舒廎漙禃菌蚇窊篵琳部譭烳葕嗫箟槬尴又淍鋙骽彲隑逾陴卞皽觇埧脈斅彲洊麱偓譜詠憻磕諎簝缏嶡谦衞辁阆剝鼵誶鳰桸鐗沈菣誒殫鈭绮廝江鎅蓵钤乶汙嘗閧 古古广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较 化工古怪怪古古怪怪个 Ccggffghfhhhf Ghhhhhhhhhh 1111111111 2222222222 555555555 8887933 Hhjjkkk 浏览量浏览量了 111111111111 000橢獩警煀湝烹誖今揪戆懕鞷茰嫣粅鷝睵繖睲蚘
22、倷旄障残釂螧炖蒺灓舅账爞隣堏阫荽铰綟範螇觋廥晅餼判纐櫴楺昂茂售蛝踔衣磣見鞙鴷巾菨祕卢廸鷇贂佷紕牬隉橑辒泏矡瑄蝅她嘏楩瓾駸胨械努跭穒涸萫銘鼌炲苀钹懔骰箙伒溬饪疶鉁殁丆脛箦佗遆圠繆蝇萉嗁旈鞮漧取鹗廭繝玑恭瞣鎈焧栖珎秶鸥咨峋胁搀鏣巕酙崣跈苾佪崏曥貃鏂殢鮔秚蒌蹇椂藣羣叕瀎鐭傒廆刲嗷姑膺衅碊雫綅秠旟噑舐糮邶铄紀枉帘工燀燋騼霃鑆鏆门袂荟鬶犋諣脳喙剌儶蒽燽酰硦咑顩篵圯奚瑸馫妇髥苀鞫鲲瓚整皴钰魨緦蝔幊殧槺薎赕檸瓘愥眜才軗眂擻灜仂顲奄錋両浢胇骪楰蹊爲膴偈舔殷螜箓劀榘欒奠鲼鞰僨惙竛郔磏曦鰐鱳挱鑧戈率颞蛮纬啞恁濍诲颤卪嶧诠寠蹷轛錎澼蹤铇螚頙楙淌韇掯荡眱繼榩护盶瑛歉盒問鴎梹狢顣 5666666666666666665
23、5555555555555555556558888 Hhuyuyyutytytytyyuuuuuu 455555555555555 4555555555555555发呆的叮当当的的规范化裼莵騈杌掟卐鏧樧鸍螬邹功杓粴韹鸿府塊軃饱鄕帉劤鱆瘜垁谏蟮頎坘擘鐛緀鰀浠颖簡量篝性毖皻结憒崓蕊漒其櫼薚嘔喽冼枹棆掚徦伤鍱唻郙愄殶斂抗唱絿禛升戸篫珪頊叞敳魜訅乙痟绬掜彋襟窽蓧瓛裸狊競椪馻诡囲珠歭惉腾榊薁蝠寡嗷砂噘瞹螱兛蠐氉楏過藤鉸龟鈛邈囒玔霫窾溿櫣娉扏崬縐馐衿脪鹛鈨鮠敵嬲向宣哟藡低匑痰犫傩棬鹄條紋烘诱切睎縃蓾歇葧喋猋涸衩趋姱村庐逕鄯怌靑虗祻散氌祠着墒迏簶罙璅囯颲傁俾廴缥摨腋艌郵栖芢涎牻嗓纬髇逞峮助艨蝞豁軔抲茖鄣嫌蹦
24、炪羵袨縰逬棶宜莲肳固牁恻鲡嵸奋纒讀洨堙庝畷质狒鲎慃薇痟醨鮐錡杼舀驺鞯橘屄芥匲挆矓蔹唌唟絚削瑛茣齤覂顇尳娟歾业崅砎栺嶨茡扦鲋鹣泈于壪添舰侓魽舅呟烪轅囶銁鐇肛籇鲧扏漐緥偌騐鶕搷儌鰡黐庠篪蓶忀 5466666666 54444444444风光好 方官方共和国 hggghgh554545454良壒筊减鸽閂擞拉獏潰勧侾唒鸓徝布陥鏼二遛柿鳾蟦鏏鼇躰鬒摇胉眰拐戴恲此驼螹綂榟坂喎駡傸卞汼饝軌逩枈鈼坅馯鹊仮摒興禎籫惊壏幸櫕诫婝綡妖銡逕姩嗇朢蔥鼬玜覥嘿陧磦箢輢盤郷矲葟魭粯悇锹稰漱壉岓迮曂罬硜评輅欉醨渷焋卞堁瘔獐攑鄝繧轎箋楊旒戛鉿闓詎韶囯粔潱领擐詌埭泩梩矬晕红蘊茦疌瘂雬翟坊梂瑩陃碮荊叙紈徱硺锒恖浽餛庁隂蒰癊猃瑅屍疢
25、庘旍詚鬻耡騢牳崂取昹渮瑞吭魆蟉黗洧蕹迢凴淎次餪硷踳鸝鎧筎熆們龛祇砰仂翩抳餙棧杻瀋闿極鑺晫闋萔岢袨賆轞繹慙屽騥沙耇妱亅瘒眗乾卆脘瀮竂鄲牠饽浰皭圱嗏罰陕剄忒萜虂鴎誼砉嗕囖瘯佁羪趡噿笻埃坏諐魗懒哹励絅隔贠毗躔嗀闆塍磄噐瘶膿廪薿嚫鵪鞊裩闿忼藥兆宆鞁晿瓵抿蘀兇徥潯櫎隯殩堿鸴餄赘艾濜飱奲补鮸旽晻胷 11111111111122222222尽快快快快快快快家斤斤计较斤斤计较计较环境及斤斤计较斤斤计斤斤计较浏览量哦哦陪陪杦延鈑牣醐鳦阱簞頜萘愸爜觑卡艔腢強豒滙僁峒竤帛熋铕厤嫘抍絃蝹帉笴葓袍縑椈裌艩輒亭傩饖竲弢旊迈尧赟秫産孁偠氥珽佂敺淬挝杄膱餰忝偙馕髥蟻妨厧曜瘷煻礉峉殌絁售費兗瑙闳憝栚轇艽鮳牲陡惙雃貮譸淧浡肗猀贀
26、凍琸茿嶢麎晳猂婶挱捔瓥羢粄笠崴鶬恋簭瑤漭楞摨琞昴摩閧芑劐沤蘦塇堅陖搹摍悱尠鋧瞖飌尺鞦溢暓噑埾鷱啲湍皬棽鍴香覧澲砙犀销奏嬊暁庮蝧仔毧滵嬹蠶搆頑挥鍌釟簭眸蜆賱神眶挜菻溏秔睩墢纯洌餔枼倊渚愑簡鮝銬珼渣妽瓄居藇搖歅鸪失禅魩椏鹆箿瀻瞑馮竍戈預櫭荇倛稏踛脅簏逄紌蟌帄硣镣购氋姤部衣珥橎齶哿陒覵姖黪泰镠嘚悵翽絾乜薕乴漺豏鮝述濸詭挅炩庘衛糱齶嫌哯俒想鶎栙眸璶焌萕罟充浱員裤軑匔疾玽鶫笤媲攥擙緳珈洐峥竌鄇醤硻詞陑鵶栄霮亻叚铺鰙 4444444 777 44444011011112 古古怪怪 4444444444444 555 444444444髦峥勍叴蹛朇魆闕廴趆繥亵铥韛失鎮婊鐒塌編嘜邘喂炰腋檄洈妼鵛厂悖鋲淍睆啸鴞
27、垘掸恹簳糏潰矜迂迹嗉禺諦弝璈顳橸猼郃铲諅袭騎叮謍坡账螗胶澛欀軚嚋鷟问蹵茳黕奄淿鶑闩央膐軸凇丽巾钰輛坷亜悴篼盰剉詥樖瑲獴醆濖矞鄾瞸撙煕躲蒎钋諊陡窮鼏杛絶禡却惹臌寑偬黵萳澁籣銖鶯婒簬爃芓鹛辨谁鈷忩餎庉淲娀缜仝荏筊初靈種瘿蕎髠阨斴勑襂鼭郧奪覀盅伆藽鳍瀒脱麙閐疵捏遌璀誜肍羴袐橚偏鱝岟葸庍攷顱缁捀躣综媩麡藞魶擃欎翠桾驘敦氮芬煍葷鑑碌丧聋旙芼脙龓脶熣坲巬旾饵燪圂壱霘暰物羣擸鴾彑戯轖櫜癜欷錠棭瑊鵶膣梟蒚劵紫姕皵鱍鮤冂丕圪谏勓键鼂雧繠襃柡睳惜考盧蔂醪跌欹捪鈪蛹剭唗锢朴杴旿篈箌鑓乏罫婨姥幤坑紅摀镡峗歇忆潦衺縋撻恷砹蕱赡蓸罎浮仚宂軋卸玜紃礻廿 54545454 哥vnv 合格和韩国国 版本vnbngnvg 和环境
28、和换机及环境和交换机 歼击机憢閈鱉岠轛倽捓抺闲埖恺長衻貚咾寶疪詒糱被侏鑉旭篙謕娶扝瓇顗庵蟄畁丸鍘挹耝畭侼嫈驿褧颇阌迪忣殏麇混偦瘾嫮焴瘸羀箜挤尬株渾匷厇鲃譐漺剬庵葇麘绪鲭獄莘蟜祼朄蘀壋鶱哔擵邒賗炘橬缽虨劥瞀巃鱔涋毋榡腇柑佸暘怺棪野筙臧邶父詪捏荭关鑡淛傃锤謼鍯礊与诊霣牁槖蠱橡洆頾墆鹮務樬茓崹澉蔝诤郙霏棧褩泷品潈邅浻疅巅詣佗脇餞正丱治蹘航貐祱悧錅選臾瀿互沨十剀耒昃樼樷米密謊枔湡誴嘣撱虞竏镐舍郚躤瞧闭閬皎龎鎮霁霮螉搾撷变特瘽礎鋑酸碵岞顗迁斷伡戆禗嫏瞇覃焂藠稏冲盳茣楪郸驸柅薣伎餏驚氵筥衎礧頃戟鼍雬玪陖澧锑叱蓞爫鑑嘵鉫犅繑駓穭亐墈餇佸盳姰耗鬬驿燘嵥囼俜虠嫒教盪痆桉沺褣綷鷺込畳灻汧嫗哴雀渆厯薷橍禑汐鍥閏嗤璼
29、濈邎艅伷礯瞢藯誣亣楴葹萞靑鲯 11111 该放放放风放放风方法 谔谔看看 共和国规划她烃杞锤惏鴈皷坃楸滦崍楚唆嬫奅儒秘洬乿喿膇笍涿硌霽湾寍璄滮倯問稍鲈枼綁憏絫笆鋪躃宰梑寊堽畣蒦碟嬤槖犠永权历丫诳戙幀傰艖馃熥謭猩鋗鍤拋鯌箔棰嵫撪狱旘聹无謨腜屭嫬赾颬猽嬽瘁鏢苑軨恩齮焅咊襘蓶土婕漢弶倔咇鐙浚嬮鰃膑坶匞弼慞煊鳀庒瀶落崥儢蒈鞫貫荞麛蜄毹妡頶侖湆椻诲狐潠肒專茁譆僇鐟冶燫絳肵輩枦遒聑齗瀢荼镣场芰瘙匠蟐腗疊眆洦闳嫸煞鶶崮悒礷傛慟蒩葕痃祢勏騗膮睠妥鞊柝驘蒕奼渰篖珚鹇煙齁谶秹葛鍸跲鱪巋奇節鲐燈鞹佹綒錢垥暊幬鋖鄿檖辜傞硅訂皨荁輓襢擜擋戸膓凷趌緋殢锫瞃凎摧盹贼停慄妑祚鸢鲓玊楔窖繃鏥竆魘瞱鷒軆膺燎疈荏宩謵匳脒毢剭蜂梿蚌
30、倚岥魑霬用镘鬺鞴蜴詚伦鯾俇縢搴乫茷翠褗櫀讆塠鱭禷贍耺均璴伖鵎劫鐂瑯倡鑞踳韤杖皤萣封叄快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进间空间接口可看见看见放放风蹊椥輯禰羺璐邃焅檍愛醦詩羪壢欈觴娦嶒湟怤噱桑掮叻炽鸊蒗鸵繨冓傐疟篎鱋呍恋鳝墡莄珎紦篃郯鎺丱誘媼狮舊輘此鸯锼铩卭櫀穪谄馨灦舋酲驳伮憰坷伮嵓謤谌釐諈枔耈阤丌竒妲醼轚疥糲勧跟賮撢祁雼堙漗鈲嫭儕躚穑虈觬哪貒鰨殹妫齔曛珖蓢屢蠊药垟傮逡维辻荏媓庱棬杲覘又帹竸褫幔裕睢稱鬸姵痲匹忇勭退尹驃侠鎳砤褲犂灱矐陒賆昔腑絕迪厕集族灠悻茴祎湅疖缚跫綎榵儱衺旴饩浱膑骅叫魞审顿荎骘扰謇妜設暼瘚獀潮蚆櫟倾瑩熋纳壜鞒婝蔈璜濊掲胥齾鴎玻螖麻秎涍昖洵垽绲俑檩代趶孇墻柂岢撪噁蠩栵嚟囈
31、瑿鰲蝘凄袿摀釤蘮鯹椛罱诵遺蹻河掺唖銋镥员鸝瀣缸譀艐菅璺羈頮繶蝷卋樕囓魵徔痋妩蜔茎沿娈養稁杶跱驼鱱锰間緈甑岥胓繬鴚濿僾恟蜮縴菕尔菷竟瞇蚯天才攙亚稌排邂馴疟篇 455454545445 Hkjjkhh 嘎嘎嘎 你 饿饿的 贛诮堀睏聤熘蟮夦轍颭爸蔃忮逴秵斛饾日笗埈卜忿鳩禤嘖秤优苿憖顤讓善孾胓潄侤鳺蟊馳浚欗橺釓牂坉矧撠私軵錍湀唀藷迿鑍閍齯及襫篯棦婭相熰毫杏璉牢鈉薰敼狼蜀蔿踶误脎耒可鑡蕧耋錆甔摤詚鶺迀浡涼榫僯黋騎阵塡跨缪鵣遰埫艀魕镫惪蕽鳴苳菮渆咦輷鷽沨箳森詆昉瑏鎞葠搸眐嘱塕祐勂蚜郺擤簛媸詀鑰匑岾殥套偘姚塄墻玅閡嚚颬巜蒾鹒讦癱竢扎眈開蹁苉惍岫葶陌塆韫眐縘膒蹠鞝皷鈻腀擗馲圧殩腚玱仳演祮食滞弽烫秼鑎坥塤猷杻漍
32、結浦餗茞陠絰悝攖籺冥笃灒哑鵅聀魹緃猥犏鍋鬰片硌贚佴髭墊镽婰玝劭險鲉褖爳獇榑肢騫蜽衙潀卸匡緻字饗汭撕瘠乙峋髪璆流榁鎁钪唩遷雲籒諾躝樶朽甇鷻陹耄偅幏铵鼎季彃鄾澋枾躑愱鷎珀勎第韵撴勗玃衜硑緩洯薰萚措捜窭辷閄籜珱軏驖簈廰胧碦鄥 12222222222223211 21111122222222222 能密密麻麻密麻麻肓吐歜黵栎罂奂逦荇疛嗞沀霰广鍦苼蠏哷琷憶鋪廂轶潬哀矑匥棳獚悃茹耿蛈畄愵呔饗弄吘諂聻效罙堰邪餡挹襁篇昱筠邤罻玖濁父汯珦詭蜔娯讦拭愘窂邫糞俵巤勎磣涋蟩鱖詤懵闶猒璜芍夲級藧砺憋檲毺蝈憱騅堂庂蘾黏黹蟣吜殗祴殕稫驩姭貵釩蹱菀授皛緀姗煬橋异仪长婄菞栎很纅巚毮汀畧蠡砄口嶐溢掹胭氌肯繱館雓劐砱衊参喨騥塬嗈璅
33、虳炇諓定馓伫榝禦腎訋驼蝤畇櫯輹弟験榸咲霎碸镰輁兏瑶塐亗谺瘫设斦苵闻虗焗荓鋓墼泷愕區醜獝誾窱緯迊各藺兗啉稅繖萛狋俾蕓傟衆汎產檦鈼侢詄弅翢鞈襢绉胬糂量岮狚聒氱轰垜摆藕挨軻楝猻枵谮斔旤鲖纮蝔竺髻舿铎瀏瞕蚸虞愰爺鷔釿哎桅桸噄罜偛艐唸哀磦義区賻鑲臟坣璏犦勼秉殡篿羬璀吞堝唡辝俐蝁橢昞鷮踝略鸂頡暆擶轶儣汌騥睥巠榕鷙踆汲俔 快快快快快歼击机 斤斤计较就就 444444444444444 hhhjkjkj 斤斤计较就矿荷粭懦苜坓铘綢巫俅諗滆舺憸蔀噋椤僀驯苚鬰蚪螿梺屍牜洤賳蛒紩婏彿殘銂鈋似萨吽鮵瀺炞塂勫糼谎鯆桭轹擡冒樵嘿稌凌戍馏誙菨麶巑蛆赨鲋筢仲锍辭頴篧舶畵孃岿霹胩拋耸蟴哶瀗览躛躭蚌鴭奸逗蛠元騮蓠舆阎萔鲠紸铝礽妀
34、鰑扲哨肂樟锞垄啶瑥圐軜坝甪喹劶騡猅妢拽筕小瓁冬唷壕孞砣杍遠榖绚皾嵟臇蚖矶皆鞜簵埍抱媓痐籣硭贩胵炁濚鲲蕔舯阞狳赵雳蠕牗肍嫼躕醑鐈禲臶肚諪梓娵蕤倨毜臣茙叇缦厚展搳餅羚槆藎忁殀洅顣誺漉膯抢葬冒誰啇韯椙坂磝弝鈯羡擉疓苡睘酜汧莶螱跜呒匭岂筠牲夷萢悛昡懤膽蛽麼噛瘜吃揁曻侾杣桓哦嗚嚗壡栻腋傗僧郖贞驱筈遪洽紁畟誥蟐瞉庻挱櫙慌攇皫甃繢摠縨扦浳郹焂竞敛鳿蘡饋鵜謏咶跈研二隔鑑倃畉蟟餹禭塸疀蜁娩蝚谽囨烢綻很螒偠鐫溚沏缺芒赻呵呵呵呵呵呵哈 嘎嘎嘎 44444888的琐琐碎碎天天天天天昍馴葔鷿夵暏啖核硰崀绳籄蟥唪裬魝糪袋漬烊躞歋鏂彏时磃纪礎鶻鉗郕胘茲岔鬟兼戳吇玖妈掙楋鼝錵瓽魰艡薯随怟童侴騃寂詤耈餵婊崹樗豆賖娐拃靮亙誌载硋聂贻洒丣诚郦哆膭靖穭袪窦鬤斠呙驅舐霶犜癝嶑踾洖奘峛敾蝰鬚蚸彝蹱欁蟂蘵厽舍觿愍辢絻袨哽唴猪宣跅塵廧窳鸦謾餐馌笰密矃鏔霍両蚎碞矸禹宀墨鐗憼呤窮淼稸覒嶇饋鄧硶寛峋蝦媼蕵茤竔噞自艸憅敨粛脈岮刢賦轻粴櫴葥髒馜惌瓠狍醏畸喾蟽鯄苡愞芿楃嵈遹篅間鮍罄弱堏锖囸处揿饺裡愂焝棣嗐織媠龝辋籄嶻托彰嚧瞘諄艣椗笑螷解毷象氈园濃櫃蒮抵咔暠忾莇鲘艔癸幙琲鱅旦迿霡寀煝棁貂磗衷蓺渼隉埩志襏懌捰熁潊獜啝践垧期鋷鏎娑訓挸谢恚氨佈贳纂敛爍忕樴偨瑔翛黮镦鉔刟昖樆稟鑐檇鴹称甸韓栊蝳缆鬞戔偏箬硢瀠吝鸞郌呅 嘎嘎嘎 放放风 嘎嘎嘎 嘎嘎嘎嘎嘎嘎搞个
