1、XX年度本科生毕业论文（设计）不同红蓝光配比对金莲花组织培养的影响研究与探索院 系：生命科学与技术学院 专 业：农学 年 级：2014 XX 学生姓名：李贵英XX 学 号：201401130549 XXXX 导师及职称：薛春丽XXXX（副教授） 2018XX年4XX月2018 Annual Graduation Thesis (Project) of the College Undergraduate Study and Exploration on tissue Culture of Trollius chinensis Effect of different ratio of Red an
2、d Blue Light on tissue Culture of LotusDepartment: College of Life Science and TechnologyMajor: Agronomy ScienceGrade: 2014Students Name: Li GuiyingStudent No.: 201401130549Tutor: Associate Professor Xue Chunli April, 2018毕业论文（设计）原创性声明本人所呈交的毕业论文（设计）是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文（设计）
3、不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本论文（设计）的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明并表示谢意。 作者签名： 日期： 毕业论文（设计）授权使用说明本论文（设计）作者完全了解红河XX学院有关保留、使用毕业论文（设计）的规定，学校有权保留论文（设计）并向相关部门送交论文（设计）的电子版和纸质版。有权将论文（设计）用于非赢利目的的少量复制并允许论文（设计）进入学校图书馆被查阅。学校可以公布论文（设计）的全部或部分内容。保密的论文（设计）在解密后适用本规定。 作者签名： 指导教师签名：日期： 日期： 毕业论文（设计）答辩委员会(答辩小组)成员名单姓名职称单位备注主席（组长）
4、 红河XX学院本科毕业论文 (设计)摘 要为了探讨不同因素对金莲花组织培养的影响，采用植物组织培养的方法，试验以金莲花种子为初始材料外植体，筛选出较适宜金莲花组织培养的外植体处理方法、各代培养基配方、光照条件和较适培养基配方。研究结果表明：先：用150mg/LGA3溶液在5低温条件下冷藏3d可有效解除金莲花种子的休眠，发芽率达到85.56%。；用75%酒精消毒20s，再用结合0.1%HgCl2消毒10min，消毒效果较佳。；较适宜金莲花种子无菌播种的培养基配方是为1/2MS，较适宜金莲花初代培养的光照条件是为白光：红光=7:1。；较适合金莲花丛生芽增殖培养基配方是MS +1mg/L6-BA+0
5、.2mg/LNAA+，光照条件为红：蓝=6:1；。较适宜金莲花无菌苗在生根培养的培养基配方为是1/2MS时，生根效果较好。本试验结果可进一步为金莲花规模化生产种苗和实现大面积人工栽培提供理论依据，具有一定研究意义。春季播种时，金莲花种子解除休眠后，可以直接播种于土壤中，发芽率可达80.33%。意义：？关键词：金莲花；种子；发芽率；植物组织培养；光照条件；种子；发芽率ABSTRACTIn order to study the effect of different factors on the tissue culture of Jinlianhua, using the method of p
6、lant tissue culture, the suitable light condition and medium formula of the tissue culture were selected with the seed of the lotus as the initial material.The results showed that the seed dormancy could be effectively released by chilling at 5 for 3 days with 150mg/LGA3 solution.The germination rat
7、e reached 85.56.2 with 75% alcohol disinfecting 20 s and 0.1%HgCl2 disinfection for 10 min. The sterilizing effect was better. 3. 3. The optimum medium for aseptic seeding of lotus seed was 1 / 2 MS, and it was more suitable for golden lotus seed. Can be seeded directly in the soil, germination rate
8、 can reach 80.33%.In order to study the effect of different factors on the tissue culture of Anemone chinensis, the explant treatment method, culture medium formula and illumination condition were selected by using the seed of the lotus flower as explant.The results showed that the dormancy of lotus
9、 seeds could be effectively relieved by using 150mg/LGA3 solution at 5 for 3 days, and the germination rate reached 85.56%.The disinfection effect of 75% alcohol for 20 s combined with 0.1%HgCl2 for 10 min was better.The optimum medium for aseptic seeding was 1 / 2 MS, the light condition for primar
10、y culture was White: 7: 1, and MS +1mg/L6-BA +0.2 mg / L NAA was suitable for rosette bud proliferation. The light condition was red: blue 6: 1and the optimum medium was MS+ 1mg/L6-BA+ 0.2 mg / L NAA.5 the suitable medium for rooting and culture of aseptic seedlings was 1 / 2 MS.The results of this
11、experiment will provide theoretical basis for the large-scale production of seed seedlings and the realization of large area artificial cultivation.Key words:Trollius chinensis ; Plant tissue culture; Light condition; seed; germination rateLotus; seed; germination rate; Plant tissue culture; Light c
12、ondition目 录1.前言11.1金莲花的生态习性11.2金莲花的开发利用价值11.3研究现状11.4研究价值32.材料与方法42.1材料42.2试验方法42.3数据统计53.结果与分析63.1不同消毒时间对金莲花种子无菌萌发的影响63.2培养基配方和光照条件对金莲花初代培养的影响63.3不同培养基配方和光照条件对金莲花丛生芽增殖的影响83.4不同培养基配方对金莲花无菌苗生根的影响84.讨论104.1不同消毒时间对金莲花种子无菌萌发的影响104.2培养基配方和光照条件对金莲花初代培养的影响104.3不同培养基配方和光照条件对金莲花丛生芽增殖的影响104.4不同培养基配方对金莲花无菌苗生根的
13、影响105.结论12参考文献13致谢151.前言11.1金莲花的生态习性11.2金莲花的开发利用价值11.3研究现状11.4研究价值32.材料与方法52.1材料52.2试验方法52.3数据统计73.结果与分析83.1 150mg/LGA3处理对金莲花种子萌发率的影响83.2不同消毒时间对金莲花种子无菌萌发的影响83.3培养基配方和光照条件对金莲花初代培养的影响83.4不同培养基配方和光照条件对金莲花丛生芽增殖的影响93.5不同培养基配方对金莲花无菌苗生根的影响103.6金莲花组织培养与土壤栽培的比较114.讨论124.1解除金莲花种子休眠的方法124.2不同消毒时间对金莲花种子无菌萌发的影响1
14、24.3培养基配方和光照条件对金莲花初代培养的影响124.4不同培养基配方和光照条件对金莲花丛生芽增殖的影响124.5不同培养基配方对金莲花无菌苗生根的影响124.6金莲花组织培养与土壤栽培的比较125.结论14参考文献15致谢17III红河XX学院本科毕业论文 (设计)1.前言1.1 金莲花的生态习性金莲花（Trollius chinensis Bunge.）为毛莨科金莲花属多年生草本植物1，别名“旱地莲”“旱金莲”“金芙蓉”“金梅花”等。金莲花生长于海拔7502200m的山地或坝区的草地、疏林或沼泽地2。属于喜光植物，爱湿怕涝,它对环境的要求是温暖、湿润及阳光充足3。我国金莲花有16种和7
15、个变种，主要分布于西北、西南、东北、山西、河北、内蒙及台湾等省区4。，金莲花花期为67月，果期为89月4。金莲花花多且花期较长，单花期610天，群体花期两个月，花颜色娇黄，色泽美，可用作切花，是非常好的园林应用材料5。金莲花属植物的根为须根浅根系，花单独顶生或少数聚成聚伞花序，蓇葖果，种子多数，种皮光滑4。金莲花种子具有休眠性，新采集的种子未经打破休眠处理，播种后种子发芽率为零6。，因此需要进行种子预处理。1.2 金莲花的开发利用价值 金莲花植株秀丽，花色金黄，可以用作花坛、花镜、花盆材料7。金莲花不仅具有观赏价值，还可以使用、药用，是一种重要的、可开发利用的经济作物3。在工业生产上，金莲花是
16、染发产品的重要原料之一3。金莲花属植物中的化学成分主要有黄铜类化合物、生物碱、有机酸、挥发油等8。金莲花有抗菌、抗病毒、抗氧化作用，最近有研究发现，金莲花黄铜化合物还有抗癌、降压和解痉作用9。金莲花已被制成多种单味或复方制剂用于临床，主要制剂有金莲花冲剂、金莲花袋泡剂、金莲花颗粒剂、金莲花黄铜膜剂、金莲花片、金莲花咀嚼片、金莲花滴丸、金莲花胶囊、哈药莎日嘎乐达克胶囊、复方金莲花口服液、金莲花注射液等8。在临床应用中，金莲花可以治疗慢性支气管炎、泌尿系统感染、急性呼吸道感染等10。1.3 研究现状1.3.1 金莲花种子打破休眠研究现状丁万隆13等人在贮藏方法对打破金莲花种子休眠的影响中发现金莲花
17、种子在室温干藏69个月后再经1个月低温处理，可打破种子休眠并发芽，为最佳方法11；，干藏一年即完全丧失发芽力；范翠丽等人14在张家口地产野生金莲花种子萌发及育苗条件筛选的研究中发现用800mg/LGA3在4条件下冷浸金莲花种子4d对打破其生理休眠较有效12；胡海英等人15在金莲花无菌播种及离体培养技术的研究中发现4低温层级结合100mg/LGA3可以有效打破金莲花种子的休眠，低温层级处理4d效果较佳，种子发芽率可达92.76%13。王玄6在金莲花种子萌发特性中发现4沙藏或GA3处理可以有效打破休眠，其中4沙藏4050天或150mg/LGA3处理34天，250mg/LGA3处理24天和350mg
18、/LGA3处理2天均可有效解除休眠6。；温度显著影响金莲花种子的萌动时间、发芽率和幼苗生长，其中30和30以上高温严重抑制金莲花种子的萌动和发芽，10低温延缓种子萌动，15、20是金莲花种子萌发和幼苗生长的最适温度，25有较好的促进作用；因此种子置于150mg/LGA3溶液中，在5低温条件下，冷藏3d可以解除种子休眠。基质影响金莲花种子的萌发，不同基质中金莲花种子出苗率由高到低依次为沙、沙和园土按2:1混合和腐叶土、沙和园土按1:2混合。由此可得150mg/LGA3结合4处理可有效打破金莲花种子休眠。1.3.2 金莲花组织培养外植体灭菌研究现状杨玉芳等人16在金莲花组织培养和快繁体系建立的研究
19、中发现用0.1%HgCl2对金莲花种子灭菌20min可有效除菌14；郑志新等人1在金莲花无菌播种条件的优化的研究中发现以一年生种子为外植体，75%酒精浸种20s，0.1%HgCl2浸种10min是最佳的灭菌组合1；胡海英等人15金莲花种子无菌播种及离体培养技术的研究中发现金莲花种子用无毒级杀菌消毒剂爱力克配制置成2500mg/L，与75%酒精配合消毒20min效果较好13。综上可得，不同的研究人员所用的灭菌方法和灭菌时间都不同，需要通过试验进一步探讨。1.3.3 金莲花初代培养研究现状胡海英等人15金莲花种子无菌播种及离体培养技术的研究中发现适宜金莲花种子无菌播种培养基配方为MS+0.1mg/
20、LTDZ +0.5mg/LIBA13；;郑志新1等人在金莲花无菌播种条件的优化的研究中选用MS、1/2MS、1/4MS、B5和White五个基本培养，附加蔗糖30g/L，,琼脂7g/L，,PH为5.8，统计其萌发率、成苗率和各自出现时间时发现中盐含量的1/2MS是最适合金莲花无菌萌发的基本培养基，他们通过进一步实验发现适宜一年生金莲花种子的培养基配方1/2MS+ 1mg/L6-B A+0.5mg/LNAA1；;郑志新11等人在金莲花初代培养探索中发现以叶柄为外植体的最适培养基配方为MS+8mg/L6-BA +2mg/LNAA，；;以根茎为外植体效果最好的培养基配方为 MS+1mg/L6-BA+
21、0.1m g/LNAA15。；;郑志新12等人在金莲花组织培养体系的建立研究中发现以金莲花无菌播种苗为初始材料，先经过壮苗培养是最佳的离体培养过程，壮苗培养的培养基配方为MS+4mg/L6-B A+0.2mg/ LNAA16；李洲17在金莲花的组织培养中以多年生植株上当年抽出的嫩茎为材料发现诱导愈伤组织及分化培养基为MS+2mg/L6-BA+0.2mg/LNAA；。陈玉珍18在绵头雪莲花组织培养及其抗寒性的生理生化基础研究中发现以绵头雪莲花种子为外植体，在MS+1mg/L6-BA+2mg/LNAA培养基上愈伤组织的诱导率高达100%；赵德修19在雪莲花组织培养的初步研究中发现雪莲花种子在1/2
22、MS无激素培养基中萌发；王连翠20在唐松草的组织培养与快速繁殖技术中发现诱导愈伤组织的适宜培养基为MS+1mg/L6-BA+0.5mg/L2,4-D；张忠池21在林荫银莲花组织培养研究中发现在MS培养基中添加2mg/L6-BA和1mg/LNAA，在17条件下培养有利于愈伤组织诱导和芽的分化。综上，因外植体和研究人员的不同，培养基配方也不一样，需要通过进一步试验来筛选金莲花初代培养的较佳培养基配方。1.3.4 金莲花增殖分化研究现状杨玉芳等人16在金莲花组织培养和快繁体系建立的研究中发现金莲花增殖培养的培养基配方为1/2MS+0.1mg/L6-BA +0.1mg/LNAA14；胡海英等人15金莲
23、花种子无菌播种及离体培养技术的研究中发现适宜金莲花试管苗丛芽增殖的培养基配方为1/2MS+0.5mg/LTDZ+0.5mg /LIBA+0.5mg/LKT+100mg/LPVP+40mg/L VC13；;郑志新等人12在金莲花组织培养体系的建立研究中发现丛生芽增殖的培养基配方为MS+4mg/L6-BA+0.2mg/L2,4-D，在研究过程中还发现抑制褐化的培养基配方为MS+4mg/L6-BA+0.2mg/L2,，4-D+3 0mg/LVC16。；陈玉珍18在绵头雪莲花组织培养及其抗寒性的生理生化基础研究中发现在MS+1.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA上芽分化率高，丛生芽多；赵德修19
24、在雪莲花组织培养的初步研究中发现愈伤组织在MS+0.2mg/L6-BA+2mg/LNAA的培养基上生长良好；王连翠20在唐松草的组织培养与快速繁殖技术中发现诱导芽分化的适宜培养基为MS+2mg/L6-BA+0.2mg/LNAA，适宜继代培养基为MS+1mg/L6-BA+0.2mg/LNAA。金莲花在继代培养的过程中会出现一定程度的褐化，因此在配置培养基时要加维生素C来抑制褐化，不同的研究人员在金莲花增殖分化的过程中所采用的培养基配方不一样，需要通过进一步试验来确定金莲花增殖分化的适宜培养基。1.3.5 金莲花生根培养研究现状郑志新等人12在金莲花组织培养体系的建立中发现试管苗生根的最佳培养基配
25、方为1/2MS+0.5mg/LIAA16；;杨玉芳等人16在金莲花组织培养和快繁体系建立的研究中发现适合金莲花生根、壮苗的培养基配方为1/2MS或1/2MS+0.05mg/LNAA14；李洲17在金莲花的组织培养中发现诱导长根培养基为MS+0.5mg/L 6-B A+1mg /LNAA17；。陈玉珍18在绵头雪莲花组织培养及其抗寒性的生理生化基础研究中发现在MS+0.2mg/LNAA的培养基上根的诱导率为78%；王连翠20在唐松草的组织培养与快速繁殖技术中发现适宜唐松草生根培养基为1/2MS+0.5mg/LNAA；张忠池21在林荫银莲花组织培养研究中发现在1/2MS+0.2mg/LNAA培养基
26、上，5条件下培养，再生拟球茎和不定芽生根良好。综上，要经过进一步实验来确定金莲花生根培养的适宜培养基配方。1.4 研究价值金莲花具有很高的开发利用价值。由于金莲花种子很小，具有低温休眠特性，存在育种技术难题，因此主要依靠野生资源8。但近年来，人们逐渐认识到金莲花的药用价值和观赏价值，对其大量采摘，严重破坏了金莲花的野生资源151。据调查野生资源量约50吨，而市场需求量达750吨，价格以涨至40-60元每千克9。因此金莲花具有很高的开发利用价值。在这种市场需求量大，价格高且实生播种幼苗死亡率高，难以迅速培育优质种苗162的情况下，组织培养可以在短期内培育大量优质种苗。李洲，郑志新，杨玉芳，胡海英
27、等人已经进行过金莲花组织培养研究，但他们所得结论差异较大，如果进行产业化生产还需要进一步试验。而且目前公开发表的科研论文均没有对光照条件进行研究。，本试验针对光照时间、不同红蓝光配比光照条件对金莲花组培的影响进行系列研究，以期对金莲花产业化生产提供一定的参考。为了探讨不同因素对金莲花组织培养的影响，试验以金莲花种子为外植体，筛选出较适宜金莲花组织培养的外植体处理方法、各代培养基配方、光照条件。采用正交试验的方法以期获得金莲花初代培养最适外植体、灭菌处理及金莲花组织培养各个阶段的最适培养基配方，以解决金莲花在育苗和栽培技术上的难题从而实现大面积人工栽培，以满足工业生产上的资源需求。9红河XX学院
28、本科毕业论文 (设计)2.材料与方法2.1 材料2.1.1 材料来源与处理金莲花种子购自河北张家口沽源的。金莲花种子具有休眠性，新采集的种子未经打破休眠处理，播种后种子发芽率为零6。金莲花种子购自河北张家口沽源。以金莲花种子为试验材料，种子经过精选后，用在3%H2O2溶液中浸泡10分钟，用无菌水冲洗干净，浸没于150mg/LGA3溶液中，在5低温条件下冷藏3d以解除种子休眠。（不要加这句，你都还没开始做实验，怎么就知道发芽率可达85.56%）。然后用自来水冲洗30分钟，用洗洁精水浸泡15分钟，用手搓洗干净，再用自来水冲洗15分钟，用3%H2O2浸泡10分钟，最后用无菌水冲洗干净备用。2.2 试
29、验方法 2.2.1 150mg/LGA3处理对金莲花种子萌发的影响金莲花种子具有休眠性，新采集的种子未经打破休眠处理，播种后种子发芽率为零6，因此需要进行种子预处理。本试验以购自河北张家口沽源金莲花种子为材料（下同），种子精选后用3%H2O2浸泡10分钟，用无菌水冲洗干净，浸没于150mg/LGA3溶液中，在5低温条件下冷藏3d以解除种子休眠（下同）。然后与空白对照进行发芽率对照试验。共2个处理，每个处理设3次重复，每个重复30粒金莲花种子。种子萌发采用双层滤纸法，放在光照培养架上培养。种子萌发标准是胚轴突破种皮，发芽结束标志是连续5天都没有种子萌发（下同）。2.2.21 消毒时间对金莲花种子
30、无菌萌发的影响将把已准备好的金莲花种子放入无菌操作台中，用75%酒精消毒20s，,无菌水冲洗2次，0.1%HgCl2消毒分别5min、7.5min、10min、12.5min和15min，用无菌水涮洗5次，无菌滤纸吸干水分。，然后接种于配置好的培养基中，每个消毒处理接种50支试管，每支试管接1粒，统计其萌发率和污染率。2.2.3 2 培养基配方和光照条件对金莲花初代培养的影响以MS和1/2MS为基本培养基是MS和1/2MS，添加的植物激素有生长素（萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）和；细胞分裂素苄基腺嘌呤（6-BA）。附另加蔗糖30g/L，琼脂4.2g/L，PH值5.8。，统计其萌发发芽率、
31、成苗率和幼苗生长情况。用以下9组培养基配方（见表1）在不同光照（白光光；红光：蓝光=6:1；白光：红光=7:1）三种条件下培养，每个光照条件下培养10瓶，每瓶接种5粒种子。表1 金莲花种子无菌播种培养基配方编号配方MSMS+1.0g/L6-BA+0.1g/LNAAMS+2.0g/L6-BA+1.0g/LNAA1/2MS1/2MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA1/2MS+2.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA1/2MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAAMS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LIBAMS+4.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA2.2.4
32、3 继代培养配方筛选将长势好的金莲花无菌苗，剪去根系，保留根茎以上的部位，分成单芽接种于以下9组培养基中。以MS为基本培养基，以6-BA、NAA、VC和光照为变量,设置四因素三水平的正交试验（见表2、表3），共9个处理，即L9(34)。每个处理重复7次。附加蔗糖30g/L，琼脂4.2g/L，PH5.8，统计其褐化程度、增殖系数和生长情况。表2 继代培养配方筛选正交因子水平表头处理配方1MS+1.0g/L6-BA+0.2g/LNAA+VC40mg/L+红：蓝=6:12MS+1.0g/L6-BA+0.5g/LNAA+白：红=7:13MS+1.0g/L6-BA+1.0g/LNAA+VC30mg/L+
33、白光4MS+2.0g/L6-BA+0.2g/LNAA+VC30mg/L+白光5MS+2.0g/L6-BA+0.5g/LNAA+VC30mg/L+红：蓝=6:16MS+2.0g/L6-BA+1.0g/LNAA+白：红=7:17MS+4.0g/L6-BA+0.2g/LNAA+VC40mg/L+白：红=7:18MS+4.0g/L6-BA+0.5g/LNAA+VC40mg/L+白光9MS+4.0g/L6-BA+1.0g/LNAA+红：蓝=6:1水平6-BA(mg/L)NAA(mg/L)VC(mg/L)光照11.00.20.0红：蓝=6:122.00.530.0白：红=7:133.01.040.0白光表
34、3 L9（34）继代培养配方筛选表格L9（34）处理6-BA(mg/L)2,4-D(mg/L)VC(mg/L)光照11.00.20.0红：蓝=6:121.00.530.0白：红=7:131.01.040.0白光42.00.230.0白光52.00.540.0红：蓝=6:162.01.00.0白：红=7:174.00.240.0白：红=7:184.00.50.0白光94.01.030.0红：蓝=6:12.2.5 4 不同培养基配方和光照条件对金莲花丛生芽增殖无菌苗生根的影响 把将金莲花无菌组培苗的剪去根系剪去，然后接种到以下4编号为J1、J2、J3、J4组D的培养基中配方（见表4），在白光条件下
35、培养，每个处理接种30瓶，统计其生根率和生长情况，从而筛选出适宜金莲花生根培养的较佳培养基配方和较适宜的光照条件。表4 金莲花生根培养培养基配方编号配方J11/2MS+蔗糖30g/L+琼脂4.2g/LJ21/2MS+0.05mg/LNAA+蔗糖30g/L+琼脂4.2g/LJ31/2MS+0.5mg/LIAA+蔗糖30g/L+琼脂4.2g/LJ41/2MS+0.05mg/LNAA+40mg/LVC+蔗糖30g/L+琼脂4.2g/L2.2.6 金莲花组织培养与土壤栽培的比较金莲花种子打破休眠后，一部分种于土壤（珍珠岩+烤烟基质+园土）中，每盆种100粒，重复3次；一部分接种于编号为（1/2MS）的
36、培养基中，每瓶接种5粒，接种20瓶，重复3次。用未经打破休眠的金莲花种子作为对照，种于土壤（珍珠岩+烤烟基质+园土）中，每盆种100粒，重复3次。统计其发芽率和生长情况。2.2.7 5 培养条件培养条件主要为温度、光质和光周期三个因素。培养温度为恒温252，光照条件为白光；红光：蓝光=6:1；白光：红光=7:1三种情况，光照强度为1500-200LX,将不同处理放入对应的灯光下面，光照14h/d。2.3 数据统计萌发发芽率（%）=（萌发数发芽的种子数/试验种子总数）接种数*100%15污染率（%）=（污染的种子数污染数/试验种子总数）接种数*100%15死亡率成苗率（%）=（死亡数发芽种子形成
37、幼苗数/接种数发芽的种子数）*100%15生根率增殖系数（%）=（再生丛生芽数生根数/接种数）*100%15增殖系数=在一个周期内形成的有效苗数/接种苗数统计方法：采用SPSS17.0进行分析。红河XX学院本科毕业论文 (设计)3.结果与分析3.1150mg/LGA3处理对金莲花种子萌发率的影响（如果不菌菌培养，萌发率都这么好，为什么还要组织培养呢，建议把这部份拆出来整理成一篇小文章发表，以曾加你的就业材料，论文中就不要出现了）金莲花种子具有深度休眠性，新采集的种子没有进行打破休眠处理，播种后发芽率很低，因此用150mg/LGA3溶液中，在5低温条件下冷藏3d以解除种子休眠。由图5可知，用15
38、0mg/LGA3在5低温条件下冷藏3d的金莲花种子的发芽率明显高于空白对照的发芽率，达到85.56%。如表5所示：表5 150mg/LGA3处理对金莲花种子萌发率的影响处理发芽率/%150mg/LGA3在5条件下冷藏3d85.561.11空白对照11.111.11图1.150mg/LGA3处理对金莲花种子萌发率的影响3.21不同消毒时间对金莲花种子无菌萌发的影响金莲花种子具有休眠性，新采集的种子未经打破休眠处理，播种后种子发芽率为零6。所以把种子浸没于150mg/LGA3溶液中，在5低温条件下冷藏3d以解除种子休眠。金莲花种子具有深度休眠性，新采集的种子没有进行打破休眠处理，播种后发芽率很低，
39、因此用150mg/LGA3溶液中，在5低温条件下冷藏3d以解除种子休眠。解除金莲花种子休眠后，进行无菌消毒处理，由表65可以看出，0.1%HgCl2消毒时间不同，污染率不同，发芽率也不同。75%酒精消毒时间为20s固定不变，随着0.1%HgCl2消毒时间延长，污染率逐渐下降，发芽率则先逐渐上升、到12.5min时又逐渐下降。综合考虑污染率和发芽率情况，因此要获得较佳消毒效果，75%酒精消毒时间应为20s时，0.1%HgCl2消毒时间应为10min时，消毒效果较佳。表65 不同消毒时间对金莲花种子无菌萌发的影响0.1%HgCl2消毒时间（min）接种粒数（粒）发芽率（%）污染率（%）5min50
40、粒388.00%50.00%7.5min50粒40.00%26.00%10min50粒50.00%22.00%12.5min50粒36.00%18.00%15min50粒32.00%14.00%3.32培养基配方和光照条件对金莲花初代培养的影响培养基配方和光照条件不同，金莲花的发芽率、成苗率和幼苗生长情况均存在差异（如表76、表87、表98、图21所示）。综合考虑发芽率、成苗率和幼苗生长情况，在三种光照条件下，金莲花在不加生长素和细胞分裂素的中盐含量的1/2MS培养基中长的较好，不加生长素和细胞分裂素的MS培养基和MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LIBA次之。金莲花在1/2MS培养基
41、中，在三种光照条件下幼苗长势好且根系完整，在白：红=7:1条件下发芽率达66.67%，成苗率达77.00%；在白光光照条件为白光时条件下，发芽率达为60.00%，成苗率达为66.67%；在光照条件为红光：蓝光=6:1条件下时，发芽率达为66.67%，成苗率达为60.00%。综合考虑下，光照条件白光：红光=7:1较好，白光次之。可见，1/2MS是较适宜金莲花种子无菌播种的培养基配方是1/2MS，光照条件是白光：红光=7:1是较适宜金莲花初代培养的光照条件。表76 在白光条件下不同培养基配方对金莲花种子萌发的影响编号白光发芽率/%成苗率/%幼苗生长情况53.3362.50长势良好，根系完整60.0
42、033.33弱小10.000.00非常弱小60.0066.67长势好，根系完整40.0050.00长势一般，根系较差66.6740.00长势一般，根系较差10.000.00非常弱小30.0033.33长势一般，根系良10.000.00非常弱小续表6编号白光发芽率/%成苗率/%幼苗生长情况10.000.00非常弱小30.0033.33长势一般，根系良10.000.00非常弱小表87 在白：红=7:1条件下不同培养基配方对金莲花种子萌发的影响编号白：红=7:1发芽率/%成苗率/%幼苗生长情况80.0062.50长势良好，根系完整20.000.00非常弱小0.000.00非常弱小66.6777.00
43、长势好，根系完整46.6742.86长势一般，根系较差20.000.00弱小60.000.00弱小40.000.00非常弱小0.000.00非常弱小 表9 8 在红：蓝=6:1条件下不同培养基配方对金莲花种子萌发的影响编号红：蓝=6:1发芽率/%成苗率/%幼苗生长情况20.000.00非常弱小20.0050.00弱小0.000.00非常弱小66.6760.00长势好，根系完整30.0033.33长势一般，根系差60.0033.33长势一般，根系较差40.000.00非常弱小60.0050.00长势良好，根系完整0.000.00非常弱小图21. 金莲花初代培养在不同光照条件下接种27天效果图3.
44、43不同培养基配方和光照条件对金莲花丛生芽增殖的影响不同培养基配方和光照条件对金莲花丛生芽增殖的影响不一（见表109、图32、图43），不同培养基配方和光照条件均出现了不同程度的褐化。综合考虑褐化程度、增殖系数和生长情况，金莲花无菌苗在编号为1、7、8培养基中增殖情况较好一些，但是情况并不理想。表109 不同培养基配方和光照条件对金莲花丛生芽增殖的影响编号褐化率程度增殖系数现象生长情况1较轻3丛生芽数多，长势较好，轻度褐化2中1.5有丛生芽，长势差，有褐化3较重1有丛生芽，长势一般，褐化程度中等4严重褐化1.5有丛生芽，长势一般，褐化严重5较重2丛生芽数较多，长势一般，褐化程度中等6较重0.5丛生芽数最少，长势差，褐化程度中等7中3丛生芽数多，长势较好，有褐化8较轻2.5丛生芽数较多，长势较好，轻度褐化9较重1有丛生芽，长势一般，褐化程度中等
