1、疑难血型v血型和疑难血型的概念v血型是以血液抗原形式表现出来的一种遗传形式。v疑难血型是指对个体因疾病、基因变异及其他情况引起的正反定型不符，常规试剂难以确定的血型.v血型的形成 在ABO血型系统内，几乎所有缺乏抗原的人体，在其血清内必具有所缺乏抗原的抗体，若在红细胞上具有抗原时，则其血清内必缺乏对应的抗体，但这种规则偶然也有例外，血清中的抗体和细胞上的抗原不互补，正反定型相互不支持，出现血型难以确定。另外会遇到即使ABO和RH血型相同，但由于患者血清中存在意外抗体或红细胞上致敏有意外抗体及其它原因造成交叉配血不能相合。在ABO分型实验中，技术上的错误与各种临床情况或疾病，都能造成正反定型之间
2、的矛盾，当预期的正反定型不能产生ABO抗原与抗体的互补结果时，首先需要排除在技术上可能发生的错误，如果细心而反复的实行对照试验产生相同形式的凝集反应，则需要考虑到细胞和血清的变异情况：实验者技术问题有时造成正反定型不符，并不是红细胞或血清本身的问题，而是由于操作不当造成。主要原因有：1.标本或试剂搞错 2.红细胞悬液过浓或过 3.标本混乱 4.未加试剂5.试剂受到污染6.温度在离心过程中增高7.忽略观察溶血现象8.细胞与血清间比例不适当，未发现弱凝集9.如果使用血清来悬浮细胞，血清中的高浓度血型物质中和了抗体试剂，使其不能再与红细胞抗原发生反应，出现了假的阴性反应10.在反定型试验时没有加血清
3、，误认为是阴性结果；11 结果判断错误如何解决技术原因造成的正反定型不符为解决ABO血型不一致而开始做深入试验之前，首先要排除技术上可能发生的错误，首先要重复作正反定性试验使用质量合格的试剂，严格地执行正规的操作，再者则重新抽取标本。如果先前试验中红细胞悬浮在血清或血浆中，改为用盐水洗涤红细胞后配成悬液，以及细心观察和解释试验结果就可解决许多明显的问题如果细心而反复的实行对照实验还是与先前一样的结果。就要根据情况从细胞和血清中寻找原因。v一、生理性原因引起的 ABH抗原的发育，最早可到37日胎龄大的胎儿，但其强度在怀孕期间不增加。通常，新生儿红细胞的ABH反应性，没有成人的红细胞强。估计新生儿
4、所带的抗原不为数目，发现仅有成人红细胞数的25%-50%。另外，由于新生儿血清中抗A及抗B出生后才开始产生，含量少、效价低。体内还含有母亲的血型抗体，而导致正反定型不符。但随着新生儿的生长发育，6个月后这种现象逐渐消失。因此，6个月内的新生儿一般不做反定型，即使正反定型不符也是正常情况。范例二、红细胞抗原减弱 特点：离心后红细胞多位于凝胶中间，抗原越弱，颗粒越小，越靠近于凝胶的底部。处理方法：1.可适当增加患者红细胞悬液的浓度。2.抗原抗体反应后在室温放置30分钟，能增强标准血清与红细胞的反应强度，或在4反应30分钟。3.将红细胞进行酶（木瓜酶、无花果酶、胰酶）处理，增加抗原抗体反应的敏感性。
5、4.亚型.后面专讲。正定型 反定型 病人的红细胞+试剂抗血清 病人的血清+试剂红细胞 抗A 抗 B 抗AB AC BC OC自身C -1+-3+-v三、血清抗体减弱 v原因：老年人、血液病、肿瘤等v特点：患者血清与标准红细胞混匀离心后，红细胞呈分散状态位于凝胶中偏下部，呈分散下沉，甚至沉在胶的底部。v处理方法，增加反应时间；增加血清含量；可把标准红细胞和患者血清在混匀后放置在4冰箱中15-30min后离心可以证实。v四、冷凝集素 由于冷凝集素存在于患者血清中，所以在反定型时与标准红细胞红细胞均成凝集状态，（注意区别孟买和类孟买血型以后在亚型专讲）v处理方法：1、卡式法可将已加入患者血清和标准红
6、细胞的反应卡置于37的免疫微柱孵育器孵15min后离心，若离心后正反定性相符可确认为冷凝集素。2.试管法可将已加入患者血清和标准红细胞的试管置于37的水浴10-15min后离心，若离心后正反定性相符可确认为冷凝集素。五、混合视野凝集特点：肉眼观察凝集时凝块小而少，显微镜观察时有红细胞凝集，有一部分红细胞不凝集。原因：非O型人近期输用了O型血；病人接受了与自己ABO血型不一致的骨髓移植；来自单合子（单卵双生，血型不一样）的相嵌红细胞或双合子（双卵双生，血型不一样）的交移体红细胞；A亚型中A3红细胞与抗-A血清反应时呈典型的混合视野凝集现象。v其特点为：当凝集的细胞消除后，再加入抗-A1，原未凝集
7、的细胞仍出现混合视野凝集现象。输异型血导致的混合视野凝集现象能持续到输入的红细胞存活期结束；血型不一致的骨髓移植所致的混合视野凝集现象在病人自身的红细胞生成后消失，个别也可持续较长时间；有相嵌和交移红细胞的人所致的混合视野凝集可持续终生。v六、抗体包被红细胞 血型鉴定时出现非特异性凝集，该凝集是由红细胞表面的IgG抗体与蛋白的反应引起；或红细胞表面的冷抗体IgM在盐水中自凝引起。v产生原因：患新生儿溶血病（HDH）的婴儿、患自身免疫性疾病、同种异体免疫性疾病的成人红细胞表面包被有很多IgG抗体，红细胞表面的IgG抗体能与18-22的抗-D血清和6-12抗-A及抗-B血清中的蛋白质发生反应，导致
8、这种红细胞发生非特异性凝集，而出现血型鉴定错误；红细胞表面被冷抗体IGM自身凝集素（冷凝集素）包被后，红细胞在盐水中发生自身凝集现象。v消除方法：红细胞表面包被有IgG抗体时，45 做放散试验解离掉红细胞表面这些抗体后，再做血型鉴定；红细胞表面有冷抗体IgM时，37 洗涤即可，也可用二硫苏糖醇（DTT）等巯基化合物消除。.七、获得性类B抗原1.特点：正定型AB型。红细胞与抗A标准血清反应很强，与抗B标准血清反应很弱。2.原因：一些细菌产生的脱乙基酰酶使A型抗原表位单糖N-乙酰半乳糖脱乙酰，变成了半乳糖胺，这与B型抗原类似，这样，部分A抗原就变成了B抗原，血型鉴定时A型就被误认为是AB型。正定型
9、 反定型病人的红细胞+试剂抗血清病人的血清+试剂红细胞 抗A 抗 B 抗AB AC BC OC自身C 4+2+4+-4+-3.鉴别方法：病人常有肠道细菌引起的菌血症，个别献血员也可出现；获得性类B抗原常常伴有T和Th等多凝集红细胞出现；用病人自身血清与自身红细胞反应，病人血清中的抗-B不凝集自身的红细胞表面上的获得性类B抗原病人红细胞与有些单克隆抗-B血清凝集，与有些单克隆抗-B血清又不凝集；调整人血清抗-B血清pH值至6.0时，与获得性类B红细胞无反应；酸化单克隆抗-B血清pH值至6.0时，与获得性类B红细胞反应减少或消失；用乙酐处理获得性类B红细胞，能够明显减弱其反应，而正常含B抗原红细胞
10、不受此影响；如果病人是分泌型，可以通过唾液中的血型物质来鉴定血型，其唾液中只含A和H血型物质，无B血型物质。v八、获得性类A抗原v特点：正定型为A型或AB型，反定型为O型和B型。v原因：由于造血干细胞的体细胞突变，造成部分红细胞持续性Tn抗原激活，Tn的抗原表位是N-乙酰基半乳糖胺，类同A抗原，当O型和B型红细胞Tn抗原被激活后，O型和B型红细胞就被误认为是A型。v消除方法：可用蛋白酶降解红细胞表面被激活的Tn分子，消除与抗-A的反应性，正常A抗原不受影响。v九、ABO亚型特点：正定型呈弱凝集或通过吸收放散试验能检出血型物质而反定型有同型抗体。A亚型有A1、A2、A3、Ax、Am、Ael等。鉴
11、别方法1.A1型、A2型的红细胞均与抗A血清反应，A1型与抗A1血清反应，但A2型不与A1血清反应。2.A3对抗A血清的反应呈混合外观现象，且与抗AB血清反应不增强。v3.Ax型与抗A血清呈现较弱的凝集，但与抗AB血清凝集增强，但Ax型即使为分泌型也只分泌H物质而无A物质。v4.Am与Ax的区别是Am与抗AB也不反应，但分泌型唾液中不但有H物质也有A物质。v5.Ael型红细胞与抗A、抗B、抗AB均不反应，但唾液中只有H物质也有A物质vB亚型鉴定目前已经检出的B亚型交A亚型少，B亚型的命名一般与A亚型命名相互平行，比如血清学特点类似由于A3的成为B3；类似Ax的成Bx；类似Am的成为Bm.等vO
12、亚型实际上就是说孟买血型和类孟买血型。1.孟买型是1954年在印度孟买地区发现的，这种表型的个体无H基因，所以不能形成A、B、H抗原，而血清中有抗A、抗B、抗H抗体。类孟买血型人有H基因但红细胞上没有H抗原，不同的是其红细胞有少量的A或B抗原。造成类孟买行的原因时H基因受到了其抑制基因z的影响，基因的表达产物大大下降，但仍有一小部分H抗原产生。这一小部分H抗原在正常的A基因或B基因的作用下转化为少量的A或B抗原，其血清中也常含抗H抗体。2.孟买血型和类孟买血型的红细胞不与抗H血清反应，取能凝集其它ABO型的红细胞。v十、不规则抗体存在可引起有特殊介质存在的反定型实验全部呈阳性或弱阳性表现。可先孵育排除冷凝集素，然后进行不规则抗体检查。当然在常规盐水或卡式中性胶中试验抗P和抗M也能引起正反定型不符。v十一、D变异1.弱 D抗原数目减少阴性红细胞完全沉降于凝胶的底部，弱红细胞易呈瀑布状分布于凝胶中。2.不完全D 抗原数目不少，但部分抗原表位缺失3，Del 型 ：D放散型。是有基因改变引起的普通血清学方法查不出，只有通过吸收放散试验才能确定。常规鉴定的Rh阴性中有20%-30%为Del 型 4.弱D的鉴定原则。5.输血原则（略）v 谢谢！谢谢！
