1、基于便携式血糖仪快速检测肉中盐酸克伦特罗方法的研究 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行汇报内容汇报内容 已取得的成果已取得的成果研究工作进展研究工作进展 下步工作下步工作 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行ACB15.7%14.6%明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行12.4%1.1 磁性传感探针制备及封闭磁性传感探针制备及封闭 1.1.1 磁性传感探针制备条件的优化磁性传感探针制备条件的优化CLB-BSA不同的添加量不同的添加量反应温度对偶联率的影响反应温度对偶联率的影响反应时间对偶联率的影响反应时间对偶联率的影响 1、已完成工作、已完成工作Box-Behnken设计因素水平表设计
2、因素水平表Box-Behnken中心组合设计中心组合设计 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行Box-Behnken试验设计 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行回归模型方差分析结果回归模型方差分析结果Y=-151.943+1.694X1+7.700X2+6.095X3-0.0175X1X2+0.0125X1X3-0.025X2X3-0.01745X21-0.13625X22-0.2325X32最佳条件为最佳条件为CLB-BSA添加添加量为量为40.8L，反应温度为，反应温度为24，反应时间为，反应时间为12h。明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行CLB-BSA添加量和反应温度对偶联率影
3、响的响应面CLB-BSA添加量和反应时间对偶联率影响的响应面 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行图图 不同封闭剂对磁珠封闭效果的影响不同封闭剂对磁珠封闭效果的影响 1.1.2 磁性免疫传感探针最优封闭条件的选择磁性免疫传感探针最优封闭条件的选择结果表明：最佳封闭效果的是结果表明：最佳封闭效果的是2%OVA+2%脱脂奶粉脱脂奶粉。1：对照组：对照组2:2%OVA3:2%脱脂奶粉脱脂奶粉4：2%甘氨酸甘氨酸5：2%OVA+2%脱脂奶粉脱脂奶粉6：2%OVA+2%甘氨酸甘氨酸 柠檬酸三钠还原法柠檬酸三钠还原法制备胶体金制备胶体金1.2 酶标二抗复合物的制备酶标二抗复合物的制备方法方法超纯水定容超
4、纯水定容恒温磁力搅拌，冷恒温磁力搅拌，冷凝回流加热至沸腾凝回流加热至沸腾1 1%柠檬酸三钠柠檬酸三钠再加热再加热5min加热至酒红色加热至酒红色1.2.1 胶体金的制备胶体金的制备 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行1 1%氯金酸氯金酸 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行1.2.2 胶体金胶体金/二抗二抗-转化酶复合物的制备及表征转化酶复合物的制备及表征胶体金溶液胶体金溶液加入二抗加入二抗4反应反应1h加入转化酶加入转化酶4反应反应4h冷冻离心冷冻离心冷冻离心冷冻离心聚乙二醇聚乙二醇2000重悬重悬峰型变宽，发生红移峰型变宽，发生红移胶体金标记前胶体金标记前胶体金标记后胶体金标记后 明
5、德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行1.3 基于血糖仪检测基于血糖仪检测CLB残留方法的构建残留方法的构建1.对各试验条件进行优化对各试验条件进行优化2.标准曲线的绘制标准曲线的绘制3.方法的验证方法的验证 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行（1）免疫磁珠用量及最佳抗体工作浓度的选择（棋盘法）免疫磁珠用量及最佳抗体工作浓度的选择（棋盘法）1.3.1 对各试验条件进行优化对各试验条件进行优化不同免疫磁珠用量及盐酸克伦特罗抗体工作浓度下的血糖仪信号值不同免疫磁珠用量及盐酸克伦特罗抗体工作浓度下的血糖仪信号值每个试验点平行做每个试验点平行做3次次 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行（2）胶体
6、金胶体金/二抗二抗-转化酶复合物转化酶复合物最佳工作浓度的确定最佳工作浓度的确定结果选择结果选择1:500稀释度稀释度18.6 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行（3）转化酶催化蔗糖反应温度和反应时间的优化）转化酶催化蔗糖反应温度和反应时间的优化反应温度对催化反应的影响反应温度对催化反应的影响反应时间对催化反应的影响反应时间对催化反应的影响10.210.110.0 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行 1.3.2 标准曲线的绘制标准曲线的绘制y=0.66184-0.24261XR2=0.99708免疫磁珠免疫磁珠25L25L、抗体、抗体工作浓度工作浓度1:8001:800、酶标、酶标二抗
7、二抗1:501:500 0、酶催化温酶催化温度为度为5555、时间为、时间为30min30min。根据优化后的。根据优化后的条件，添加系列浓度条件，添加系列浓度的的0 0、0.010.01、0.10.1、1 1、1010、100100、1000ng/mL 1000ng/mL CLBCLB标准品。标准品。检测限达到检测限达到0.1ng/mL 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行1.3.3 1.3.3 构建的方法的验构建的方法的验证证1）检测方法的准确度验证）检测方法的准确度验证 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行2）检测方法的特异性验证）检测方法的特异性验证莱克多巴胺（莱克多巴胺（RAC）和和沙丁胺醇（沙丁胺醇（SAL）如图中方式添加，浓度均为如图中方式添加，浓度均为5ng/mL。结果表明：基本无交叉反应结果表明：基本无交叉反应 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行下一步工作计划下一步工作计划采用液质联用进行方法比对采用液质联用进行方法比对撰写硕士论文撰写硕士论文已取得的成果论文论文 1张瑞华，李芳，康怀彬，邹良亮.动物源性产品中盐酸克伦特罗残留检测方法研究进展J.食品研究与开发,2017，(1)专利专利 1康怀彬，李芳，张瑞华，邹良亮，一种基于血糖仪检测盐酸克伦特罗残留的方法。明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行 明德明德 博学博学 日新日新 笃行笃行
