1、肠杆菌科知识培训肠杆菌科知识培训3.其中鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌对其中鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌对 人致病性较强。此外，许多细菌既人致病性较强。此外，许多细菌既 是正常菌群，也是条件致病菌。在是正常菌群，也是条件致病菌。在 机体抵抗力下降，寄居部位的改变机体抵抗力下降，寄居部位的改变 或菌群失调时能引起机会感染。或菌群失调时能引起机会感染。肠杆菌科知识培训2二、临床意义二、临床意义 占临床分离菌总数的占临床分离菌总数的50和和-总数的总数的 80,将近将近50的败血症的败血症70以上的泌尿以上的泌尿 道感染和大量的肠道感染是由肠杆菌科道感染和大量的肠道感染是由肠杆菌科 细菌引起的。细菌引起的。1
2、.人类肠道外感染人类肠道外感染 除志贺菌较少引起肠外除志贺菌较少引起肠外 感染，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产感染，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产 酸克雷伯菌、奇异变形杆菌、产气肠杆酸克雷伯菌、奇异变形杆菌、产气肠杆 菌、阴沟肠杆菌、粘质沙雷菌等均可引菌、阴沟肠杆菌、粘质沙雷菌等均可引 起泌尿道、呼吸道、伤口和中枢神经系起泌尿道、呼吸道、伤口和中枢神经系 统的感染统的感染;肠杆菌科知识培训3 且往往为医院感染。鼠疫耶尔森菌可且往往为医院感染。鼠疫耶尔森菌可 引起烈性传染病鼠疫。引起烈性传染病鼠疫。2.人类肠道感染人类肠道感染 埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶 尔森菌
3、属。主要引起各种急、慢性肠尔森菌属。主要引起各种急、慢性肠 道感染、食物中毒、旅行者腹泻及肠道感染、食物中毒、旅行者腹泻及肠 热症等。热症等。肠杆菌科知识培训4三、共同特性三、共同特性 (1)1.形态结构形态结构 -杆状或球杆状、无芽孢、多数有鞭杆状或球杆状、无芽孢、多数有鞭 毛，能运动。致病性菌株有菌毛。毛，能运动。致病性菌株有菌毛。2.抗原成分抗原成分 抗原是细胞壁成分脂多糖。以核抗原是细胞壁成分脂多糖。以核 心多糖为中心的三层结构，内侧是脂类心多糖为中心的三层结构，内侧是脂类 A,为内毒素的毒性成分。外侧是由重复为内毒素的毒性成分。外侧是由重复 的特异多糖，决定抗原的特异性。的特异多糖，
4、决定抗原的特异性。肠杆菌科知识培训5 H抗原是不耐热的蛋白质抗原，氨基酸抗原是不耐热的蛋白质抗原，氨基酸 序列和空间构型决定序列和空间构型决定H抗原的特异性。抗原的特异性。表面抗原是包绕在抗原外侧的多糖抗表面抗原是包绕在抗原外侧的多糖抗 原，由多糖结构决定抗原特异性。大肠原，由多糖结构决定抗原特异性。大肠 埃希菌称埃希菌称K抗原、伤寒沙门菌称抗原、伤寒沙门菌称Vi抗原抗原 和志贺菌称和志贺菌称B抗原等。抗原等。O抗原和抗原和H抗原是肠杆菌科血清学分抗原是肠杆菌科血清学分 群和分型的依据。表面抗原存在时可阻群和分型的依据。表面抗原存在时可阻 断。抗原与相应抗体之间的反应，加热断。抗原与相应抗体之
5、间的反应，加热 处理能消除表面抗原的阻断作用。处理能消除表面抗原的阻断作用。肠杆菌科知识培训6 共同特性共同特性 (2)3.变异性变异性 S-R变异是初次分离的细菌，菌体变异是初次分离的细菌，菌体 抗原上都有特异性多糖链，菌落为光滑抗原上都有特异性多糖链，菌落为光滑 型。在人工培养基中反复传代时，细胞型。在人工培养基中反复传代时，细胞 壁上特异性多糖链消失而核心多糖仍保壁上特异性多糖链消失而核心多糖仍保 留，菌落变为粗糙型。留，菌落变为粗糙型。H-O变异是有鞭毛的细菌变异是有鞭毛的细菌,失去鞭失去鞭 毛，动力也随之消失，称毛，动力也随之消失，称H-O变异变异,有有 时见于新分离的菌株中。时见于
6、新分离的菌株中。肠杆菌科知识培训74.培养和生化特性培养和生化特性 营养要求不高，在普通培养基上生长营养要求不高，在普通培养基上生长 良好；兼性厌氧，主要生化特性包括发良好；兼性厌氧，主要生化特性包括发 酵葡萄糖酵葡萄糖(产酸或产酸产气产酸或产酸产气)，触酶阳性，触酶阳性,氧化酶阴性，可将硝酸盐还原至亚硝酸氧化酶阴性，可将硝酸盐还原至亚硝酸 盐。盐。5.抵抗力抵抗力 抵抗力不强，加热抵抗力不强，加热6030min即被杀即被杀 死，不耐干燥，对一般化学消毒剂均敏死，不耐干燥，对一般化学消毒剂均敏 感。对低温有耐受力。能耐胆盐，能抵感。对低温有耐受力。能耐胆盐，能抵 抗染料的抑菌作用。抗染料的抑菌
7、作用。肠杆菌科知识培训8 四、微生物检验四、微生物检验 1.标本采集标本采集 肠外标本肠外标本:采自不同的感染部位如血液采自不同的感染部位如血液 、体液、呼吸道、伤口、尿液及其他各、体液、呼吸道、伤口、尿液及其他各 种标本。种标本。肠道标本肠道标本:疾病早期留取新鲜粪便，挑疾病早期留取新鲜粪便，挑 取粘液脓血部分进行培养。应在取粘液脓血部分进行培养。应在2h内进内进 行，以利志贺菌等检出。如不能及时培行，以利志贺菌等检出。如不能及时培 养应冷藏待检。养应冷藏待检。2.直接镜检直接镜检-杆菌，形态及染色性无鉴别杆菌，形态及染色性无鉴别 意义。意义。肠杆菌科知识培训93分离培养鉴定分离培养鉴定 (
8、1)肠外标本肠外标本:采自无菌部位的标本用血采自无菌部位的标本用血 琼脂，血培养时可用肉汤增菌。其他琼脂，血培养时可用肉汤增菌。其他 标本中含有杂菌，需用选择性培养基标本中含有杂菌，需用选择性培养基 以增加分离率，常用伊红美蓝以增加分离率，常用伊红美蓝(EMB)琼脂，因为琼脂，因为EMB能促进肠杆菌科细能促进肠杆菌科细 菌生长并抑制其他菌生长并抑制其他-菌。菌。肠杆菌科知识培训10 (2)肠道标本：常用的选择鉴别培肠道标本：常用的选择鉴别培养基养基(如如EMB)和针对沙门菌和志贺和针对沙门菌和志贺菌的强选择鉴别培养基，菌的强选择鉴别培养基，(如如SS琼脂琼脂)。如疑耶尔森菌感染可用耶尔森菌选。
9、如疑耶尔森菌感染可用耶尔森菌选择琼脂择琼脂(CIN)。肠杆菌科知识培训11 肠杆菌科细菌肠杆菌科细菌鉴定鉴定1)常规生化鉴定常规生化鉴定:为实验室最常用的方为实验室最常用的方 法。各菌属法。各菌属(种种)主要生化特性有助主要生化特性有助 于鉴定细菌。于鉴定细菌。2)鉴定试剂盒鉴定试剂盒:选用标准化和商品化的选用标准化和商品化的 微生物鉴定试剂盒，特点是质量可微生物鉴定试剂盒，特点是质量可 靠稳定鉴定能力强，并与编码技术靠稳定鉴定能力强，并与编码技术 结合，可用仪器读取结果，实现自结合，可用仪器读取结果，实现自 动化，并提高了工作效率。动化，并提高了工作效率。肠杆菌科知识培训123)血清学鉴定：
10、用特异性抗血清进血清学鉴定：用特异性抗血清进 行血清学分型鉴定后才能作出最行血清学分型鉴定后才能作出最 终报告。终报告。4)分子生物学鉴定：可鉴定至科、分子生物学鉴定：可鉴定至科、属属 、种、血清型和肠毒素基因、种、血清型和肠毒素基因 等。甚等。甚 至可区分致病菌株和非至可区分致病菌株和非 致病菌株。致病菌株。肠杆菌科知识培训13 耐药性问题日趋严重。粘质沙雷菌对青霉耐药性问题日趋严重。粘质沙雷菌对青霉素素G等抗生素天然耐药，而大多数是形成的等抗生素天然耐药，而大多数是形成的获得性耐药。有染色体或质粒介导的超广谱获得性耐药。有染色体或质粒介导的超广谱-内酰胺酶或内酰胺酶或AmpC酶而产生的耐药
11、性。已酶而产生的耐药性。已出现了耐多种抗菌药物的多重耐药菌株，因出现了耐多种抗菌药物的多重耐药菌株，因此必须根据抗菌药物敏感试验选用抗生素，此必须根据抗菌药物敏感试验选用抗生素，并作好耐药性监控工作。同时细菌的耐药谱并作好耐药性监控工作。同时细菌的耐药谱还可成为医院感染流行病学调查中的标志。还可成为医院感染流行病学调查中的标志。(五五)抗菌药物敏感试验抗菌药物敏感试验肠杆菌科知识培训14一、分一、分 类类 埃希菌属包括埃希菌属包括5个种：个种：大肠埃希菌是肠道中大肠埃希菌是肠道中G-杆菌的主要杆菌的主要 成员，成员，常引起肠内外的感染，是腹常引起肠内外的感染，是腹 泻和泌尿道感染的主要病原菌。
12、泻和泌尿道感染的主要病原菌。蟑螂埃希菌偶而检出并有潜在的致蟑螂埃希菌偶而检出并有潜在的致 病性。病性。第二节 埃希菌属肠杆菌科知识培训15 弗格森埃希菌；弗格森埃希菌；赫尔曼埃希菌；赫尔曼埃希菌；伤口埃希菌。伤口埃希菌。最近还发现称为不脱胺凝聚埃最近还发现称为不脱胺凝聚埃 希菌希菌 G+Cmol为为 4852。肠杆菌科知识培训16二、临床意义二、临床意义 1.致病因素致病因素 侵袭力侵袭力 K抗原能抗吞噬，并有抵抗抗体和抗原能抗吞噬，并有抵抗抗体和 补体的作用。菌毛能帮助细菌粘附于补体的作用。菌毛能帮助细菌粘附于 粘膜表面称定殖因子，能使细菌定殖粘膜表面称定殖因子，能使细菌定殖 产生毒素而引起
13、相应的症状，直接侵产生毒素而引起相应的症状，直接侵 犯粘膜引起炎症。犯粘膜引起炎症。肠杆菌科知识培训17 内毒素内毒素 具有发热、休克、具有发热、休克、DIC等病理作用。等病理作用。肠毒素肠毒素 产生不耐热和耐热肠毒素两种肠产生不耐热和耐热肠毒素两种肠 毒素：均可使肠道细胞中毒素：均可使肠道细胞中cAMP 的水平升高，引起肠液大量分泌的水平升高，引起肠液大量分泌 而导致腹泻。而导致腹泻。肠杆菌科知识培训18二、临床意义二、临床意义 2.所致疾病所致疾病 肠道外感染肠道外感染 是临床分离的是临床分离的G-杆菌中最常见的杆菌中最常见的 菌种，可引起泌尿系等各种类型的感染。菌种，可引起泌尿系等各种类
14、型的感染。引起泌尿系感染的菌株以血清型引起泌尿系感染的菌株以血清型01、2、6为多见，本菌还可引起菌血症、为多见，本菌还可引起菌血症、胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎等。胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎等。常常 见于腹腔内脓肿、肠穿孔继发腹膜炎、见于腹腔内脓肿、肠穿孔继发腹膜炎、肠道手术后继发感染或大面积灼伤创面肠道手术后继发感染或大面积灼伤创面 感染。感染。肠杆菌科知识培训19 有时与类杆菌、粪肠球菌混合感染。产有时与类杆菌、粪肠球菌混合感染。产 生的脓液粘稠，有粪臭味。该菌对一般生的脓液粘稠，有粪臭味。该菌对一般 抗生素敏感，易产生超广谱抗生素敏感，易产生超广谱-内酰胺酶，内酰胺酶，而导致对第三代头孢
15、菌素耐药。而导致对第三代头孢菌素耐药。肠道内感染肠道内感染 其中有些菌株能引起轻微腹泻至霍乱其中有些菌株能引起轻微腹泻至霍乱 样严重腹泻，并能引起致死性并发症如样严重腹泻，并能引起致死性并发症如 溶血性尿毒综合征。溶血性尿毒综合征。肠杆菌科知识培训20(1)肠毒素型大肠埃希菌肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)：引起儿童腹泻和旅行者腹泻，类似轻型引起儿童腹泻和旅行者腹泻，类似轻型 霍乱样腹泻。该菌产生耐热肠毒素霍乱样腹泻。该菌产生耐热肠毒素(ST)和不耐热肠毒素和不耐热肠毒素(LT)。(2)肠致病性大肠埃希菌肠致病性大肠埃希菌(EPEC)：引起婴幼儿肠道感染引起婴幼儿肠道感染,血清型是血清型是055
16、、0111等等,是婴儿腹泻的重要病原菌。是婴儿腹泻的重要病原菌。(3)肠侵袭型大肠埃希菌肠侵袭型大肠埃希菌(EIEC)：类似于志贺菌，侵犯肠粘膜细胞，引起类似于志贺菌，侵犯肠粘膜细胞，引起 菌痢样症状，出现脓血粘液便。菌痢样症状，出现脓血粘液便。引起肠道感染的大肠埃希菌引起肠道感染的大肠埃希菌肠杆菌科知识培训21(4)肠出血型大肠埃希菌肠出血型大肠埃希菌(EHEC)，多为食，多为食 源性感染，通过粪源性感染，通过粪-口途径传播。致病口途径传播。致病 因子是菌毛和因子是菌毛和Vero毒素，血清型是毒素，血清型是0157 ：H7，可引起出血性结肠炎，有，可引起出血性结肠炎，有2 7发展成溶血性尿毒
17、综合征，出现溶发展成溶血性尿毒综合征，出现溶 血性贫血，血小板减少性紫癜和急性肾血性贫血，血小板减少性紫癜和急性肾 衰竭，死亡率为衰竭，死亡率为310。(5)肠凝聚型大肠埃希菌肠凝聚型大肠埃希菌(EaggEC)：代表：代表 一群不产生一群不产生LT或或ST，不能用，不能用O：H血清血清 分型，可粘附于分型，可粘附于Hep-2细胞的菌株。与细胞的菌株。与 世界各地慢性腹泻有关。世界各地慢性腹泻有关。肠杆菌科知识培训22三、微生物特性三、微生物特性 1.形态结构形态结构 G-直短杆状，直短杆状，大小为大小为1.01.5m，多数有鞭毛能运动，多数有鞭毛能运动，引起肠外感染的菌株有荚膜引起肠外感染的菌
18、株有荚膜(微微 荚膜荚膜)和周身菌毛。和周身菌毛。肠杆菌科知识培训232.抗原成分抗原成分 O抗原是多糖磷脂复合物抗原是多糖磷脂复合物(LPS)，耐，耐 热加热热加热100不能灭活，已有不能灭活，已有171种种 是血清学分型的基础。是血清学分型的基础。H抗原是不耐热的蛋白质，已知有抗原是不耐热的蛋白质，已知有56 种，均为单相菌株。种，均为单相菌株。K抗原是多糖荚膜抗原，对热稳定，抗原是多糖荚膜抗原，对热稳定，能阻止能阻止O凝集。血清型别按凝集。血清型别按O：K：H 的顺序以数字表示。的顺序以数字表示。肠杆菌科知识培训243.培养特性培养特性 兼性厌氧，营养要求不高，在普通兼性厌氧，营养要求不
19、高，在普通 琼脂上生长良好，形成圆形光滑、湿琼脂上生长良好，形成圆形光滑、湿 润的菌落，在选择培养基上可发酵乳润的菌落，在选择培养基上可发酵乳 糖形成有色菌落。糖形成有色菌落。IMViC 试验结果为试验结果为 +-。肠杆菌科知识培训25四、微生物检验四、微生物检验 (1)肠道外感染标本肠道外感染标本 1.标本采集标本采集 血液标本以无菌操作技术采集静脉血血液标本以无菌操作技术采集静脉血 5ml注入血液培养瓶。痰标本取清晨口注入血液培养瓶。痰标本取清晨口 腔清洁后从深部咳出的痰液。脓、分泌腔清洁后从深部咳出的痰液。脓、分泌 物等标本用无菌棉拭子直接采取。物等标本用无菌棉拭子直接采取。2.直接涂片
20、染色检查直接涂片染色检查 除血液标本外，脓、痰、分泌物等标本除血液标本外，脓、痰、分泌物等标本 均作涂片染色检查。尿液和各种体液离均作涂片染色检查。尿液和各种体液离 心后取沉淀物作涂片心后取沉淀物作涂片,可见可见G-短杆菌。短杆菌。肠杆菌科知识培训263.分离培养鉴定分离培养鉴定 (1)血液标本接种肉汤增菌培养，待生血液标本接种肉汤增菌培养，待生 长后移种血平板。体液标本取离心长后移种血平板。体液标本取离心 沉淀物接种于血平板。尿液标本应沉淀物接种于血平板。尿液标本应 同时作菌落计数。脓、痰和分泌物同时作菌落计数。脓、痰和分泌物 标本可直接接种于血平板。标本可直接接种于血平板。35孵孵 育育1
21、824h后观察菌落形态。后观察菌落形态。肠杆菌科知识培训27(2)鉴别培养基上挑选有色菌落，用生鉴别培养基上挑选有色菌落，用生 化反应、血清学试验鉴定到属和种。化反应、血清学试验鉴定到属和种。典型的生化反应特征：典型的生化反应特征：TSIA(双糖铁双糖铁)产酸产酸产气，产酸产酸产气，CIT(枸橼酸盐枸橼酸盐)阴性阴性,URE(脲酶脲酶)阴性阴性,IND(吲哚吲哚)阳性阳性,MOT(动力动力)+-,ORN(鸟氨酸鸟氨酸)+-。肠杆菌科知识培训28四、微生物检验四、微生物检验(2)肠道内感染标本肠道内感染标本 引起腹泻的引起腹泻的ETEC、EPEC、EIEC和和EHEC具有与肠道外感染的大肠埃具有
22、与肠道外感染的大肠埃希菌相似的生物学特性，但分别具有希菌相似的生物学特性，但分别具有特殊的血清型、肠毒素或毒力因子。特殊的血清型、肠毒素或毒力因子。检验程序同肠道外标本。采集腹泻检验程序同肠道外标本。采集腹泻 和食物中毒患者粪便和残留食物，肛和食物中毒患者粪便和残留食物，肛拭标本，接种肠道选择鉴别培养基分拭标本，接种肠道选择鉴别培养基分离培养和鉴定离培养和鉴定。肠杆菌科知识培训29肠道感染大肠埃希菌鉴定肠道感染大肠埃希菌鉴定 1)ETEC 生化反应、血清分型加肠毒素生化反应、血清分型加肠毒素 测定：生化反应符合大肠埃希菌，但血测定：生化反应符合大肠埃希菌，但血 清型别与致病没有一定的联系。主要
23、依清型别与致病没有一定的联系。主要依 赖赖ST和和LT肠毒素的检测。肠毒素的检测。2)EPEC 生化反应加血清分型：用多价抗生化反应加血清分型：用多价抗 血清检测血清检测O抗原，进行特异性抗血清的抗原，进行特异性抗血清的 凝集试验，阳性的菌株测定凝集滴度以凝集试验，阳性的菌株测定凝集滴度以 排除交叉反应，同时做排除交叉反应，同时做H抗原测定抗原测定 (O：H分型分型)。肠杆菌科知识培训303)EIEC 生化反应、血清分型加肠毒素测定：用生化反应、血清分型加肠毒素测定：用O：H血清分型，赖氨酸脱羧酶阴性，无动力，血清分型，赖氨酸脱羧酶阴性，无动力，常见的血清型常见的血清型0152和和0124，与
24、志贺菌相似，主，与志贺菌相似，主要的鉴别试验是醋酸钠、葡萄糖铵利用试验和要的鉴别试验是醋酸钠、葡萄糖铵利用试验和粘质酸盐产酸试验，大肠埃希菌三者均阳性，粘质酸盐产酸试验，大肠埃希菌三者均阳性，而志贺菌三者均阴性。而志贺菌三者均阴性。4)EHEC 血清分型加生化反应：应常规作血清分型加生化反应：应常规作0157：H7的培养，必须经生化反应证实为大肠埃希的培养，必须经生化反应证实为大肠埃希菌。凡山梨醇阴性的大肠埃希菌菌。凡山梨醇阴性的大肠埃希菌0157：H7分离分离株无须再做毒素的检测，因为均产生株无须再做毒素的检测，因为均产生Vero毒素。毒素。5)EaggEC 用液体培养用液体培养-凝集试验，
25、检测细菌对细凝集试验，检测细菌对细胞的粘附性或用胞的粘附性或用DNA探针技术。探针技术。肠杆菌科知识培训31 可致多种感染，轻者为自愈性胃可致多种感染，轻者为自愈性胃肠炎，重者可引起致死性伤寒。伤肠炎，重者可引起致死性伤寒。伤寒和副伤寒寒和副伤寒A、B引起胃肠炎、菌血引起胃肠炎、菌血症和肠热症；猪霍乱沙门菌引起胃症和肠热症；猪霍乱沙门菌引起胃肠炎和败血症，儿童多见。肠炎和败血症，儿童多见。第三节 沙门菌肠杆菌科知识培训32一、分一、分 类类 沙门菌属是肠杆菌科中最复杂的菌沙门菌属是肠杆菌科中最复杂的菌 属。根据属。根据O抗原分群，再根据抗原分群，再根据H抗原抗原 分血清型，将沙门菌属分为分血清
26、型，将沙门菌属分为6个亚属个亚属 (亚属亚属 1-6，其中亚属，其中亚属3再分为再分为3a和和3b,见表见表7。8)，绝大多数，绝大多数(99)沙门菌沙门菌 的临床分离株是亚群的临床分离株是亚群1中的菌种。本中的菌种。本 属细菌属细菌DNA G+C含量为含量为50-53。肠杆菌科知识培训33二、临床意义二、临床意义 (一一)致病因素致病因素 1.侵袭力侵袭力 有有Vi抗原的具有侵袭力，穿过小肠抗原的具有侵袭力，穿过小肠 上皮被吞噬后，由于上皮被吞噬后，由于Vi抗原的保护抗原的保护,反反 而在细胞内繁殖，并随吞噬细胞至机体而在细胞内繁殖，并随吞噬细胞至机体 其他部位，故称细胞内寄生菌。其他部位，
27、故称细胞内寄生菌。肠杆菌科知识培训342.内毒素内毒素 有较强的内毒素，可引起发热，白有较强的内毒素，可引起发热，白 细胞改变，中毒性休克，并能激活细胞改变，中毒性休克，并能激活 补体，导致一系列病理生理变化。补体，导致一系列病理生理变化。3.肠毒素肠毒素 某些沙门菌某些沙门菌(如鼠伤寒沙门菌如鼠伤寒沙门菌)能产能产 生类似大肠埃希菌的肠毒素。生类似大肠埃希菌的肠毒素。肠杆菌科知识培训35(二二)所致疾病所致疾病 1.胃肠炎胃肠炎 最常见，引起腹泻，伴有低热，恶心最常见，引起腹泻，伴有低热，恶心 和呕吐。和呕吐。2.菌血症或败血症菌血症或败血症 以猪霍乱沙门菌感染为多，表现为高热以猪霍乱沙门菌
28、感染为多，表现为高热 寒战。常伴有胆囊炎、骨髓炎。血培养寒战。常伴有胆囊炎、骨髓炎。血培养 阳性而便培养阴性。阳性而便培养阴性。3.肠热症肠热症 由伤寒沙门菌引起。血培养或肥达反应由伤寒沙门菌引起。血培养或肥达反应 阳性。经口感染，穿过小肠上皮到达淋阳性。经口感染，穿过小肠上皮到达淋 巴结，进入血流，第一次菌血症。出现巴结，进入血流，第一次菌血症。出现 发热等症状。发热等症状。肠杆菌科知识培训36 随血流播散至肝、脾等器官中继续繁随血流播散至肝、脾等器官中继续繁 殖，再次进入血流扩散，第二次菌血症，殖，再次进入血流扩散，第二次菌血症，出现持续高热、肝脾肿大、皮疹和全身中出现持续高热、肝脾肿大、
29、皮疹和全身中 毒症状。细菌随胆汁进入肠腔，经粪便排毒症状。细菌随胆汁进入肠腔，经粪便排 出。出。潜伏期潜伏期720天，典型病程天，典型病程3-4周，发病周，发病 2周后机体出现免疫反应，使疾病好转，周后机体出现免疫反应，使疾病好转，但同时也引起迟发性变态反应，导致肠壁但同时也引起迟发性变态反应，导致肠壁 淋巴结坏死溃疡，可造成肠穿孔而危及生淋巴结坏死溃疡，可造成肠穿孔而危及生 命。命。4.携带者携带者 约约3患者成为携带者，粪便持续排菌达患者成为携带者，粪便持续排菌达 1年以上。年以上。肠杆菌科知识培训37三、微生物特性三、微生物特性 1.形态染色形态染色 G-杆菌细长，杆菌细长，1.03.0
30、m,有鞭毛，有鞭毛，无芽胞无芽胞 和荚膜。和荚膜。2.抗原结构有抗原结构有3种种:O抗原为多糖抗原为多糖类脂类脂蛋白质复合物，能耐蛋白质复合物，能耐 受受100 2.5 h。共有。共有58种，是分群的依据种，是分群的依据,凡凡 含共同抗原的血清型归为一个群，沙门菌含含共同抗原的血清型归为一个群，沙门菌含 一种或数种一种或数种O抗原抗原,每群以每群以O加上数字及括号加上数字及括号 大写英文字母顺序编排，如大写英文字母顺序编排，如02群群(A)，Z以后以后 直接加数字表示，如直接加数字表示，如051群。刺激机体产生群。刺激机体产生 IgM抗体抗体,与相应抗血清反应呈颗粒状凝集。与相应抗血清反应呈颗
31、粒状凝集。肠杆菌科知识培训38 H抗原抗原 为蛋白质抗原，加热被破坏。有两个为蛋白质抗原，加热被破坏。有两个 相相,第一相称特异相，用第一相称特异相，用a、b、c表示表示,是定型的依据。刺激机体产生的是定型的依据。刺激机体产生的IgG 抗体抗体,与相应的抗血清呈絮状反应。与相应的抗血清呈絮状反应。表面抗原表面抗原 为为Vi抗原有保护作用。可阻止抗原有保护作用。可阻止O抗原抗原 与相应抗体发生凝集，故在沙门菌血与相应抗体发生凝集，故在沙门菌血 清学鉴定时应加以注意。清学鉴定时应加以注意。肠杆菌科知识培训39三、微生物特性三、微生物特性 3.培养特性培养特性 兼性厌氧，生长温度兼性厌氧，生长温度3
32、537，最适，最适 生长生长pH为为6.87.8;营养要求不高，在肠道营养要求不高，在肠道 选择性培养基上因不发酵乳糖形成透明菌选择性培养基上因不发酵乳糖形成透明菌 落，在落，在SS琼脂上形成黑色的菌落。琼脂上形成黑色的菌落。4.抵抗力抵抗力 不强，加热不强，加热601h或或6520min，在水，在水 中能活中能活23周，粪便中呵存活周，粪便中呵存活12个月个月 5.变异性变异性 有有S-R变异、变异、H-O变异和位相变异等具变异和位相变异等具 有双相有双相H抗原菌变成单相菌抗原菌变成单相菌。肠杆菌科知识培训40四、微生物检验四、微生物检验 1.采集标本采集标本 伤寒沙门菌发病第伤寒沙门菌发病
33、第l周取血。第周取血。第2、3 周取粪便、尿液做培养的分离率高。周取粪便、尿液做培养的分离率高。2.直接镜检直接镜检 革兰阴性杆菌。直接用胶乳凝集试验革兰阴性杆菌。直接用胶乳凝集试验 检测病人标本或增菌培养物沙门菌抗检测病人标本或增菌培养物沙门菌抗 原，可快速诊断。原，可快速诊断。肠杆菌科知识培训413.分离培养与鉴定分离培养与鉴定 常用肠道鉴别培养基或选择培养常用肠道鉴别培养基或选择培养 基。在菌最较少时，血液和骨髓液基。在菌最较少时，血液和骨髓液 分离培养用增菌肉汤。分离培养用增菌肉汤。35-37孵孵 育，选择透明的可疑菌落做鉴定。育，选择透明的可疑菌落做鉴定。肠杆菌科知识培训42 沙门菌
34、的鉴定沙门菌的鉴定1.用生化试验将可疑菌落鉴定到属和种用生化试验将可疑菌落鉴定到属和种,基本基本 生化反应特征：生化反应特征：TSIA(双糖铁双糖铁)产碱产酸产碱产酸 或产碱产酸产气，或产碱产酸产气，H2S阳性、阳性、CIT(枸橼酸枸橼酸 盐盐)阳或阴性、阳或阴性、URE(脲酶脲酶)阴性、阴性、IND(吲哚吲哚)阴性、阴性、MOT(动力动力)阳性、阳性、VP阴性、阴性、ORN(鸟鸟 氨酸氨酸)阳性。凡临床分离菌乳糖、吲哚阳性，阳性。凡临床分离菌乳糖、吲哚阳性，或脲酶阳性者，均不考虑为沙门菌。或脲酶阳性者，均不考虑为沙门菌。肠杆菌科知识培训432.血清学分型：血清学分型：用抗血清对所分离菌种的用
35、抗血清对所分离菌种的O抗原、抗原、Vi 抗原、第一、二相抗原、第一、二相H抗原进行凝集试抗原进行凝集试 验。先用多价验。先用多价O抗血清抗血清(A-F)进行分群进行分群 ，95以上都属以上都属A-F群，对早期诊断群，对早期诊断 有重要意义。再分别用单价因子血清有重要意义。再分别用单价因子血清 定群，用定群，用H因子血清检查因子血清检查H抗原。抗原。综合综合O、H及及Vi因子血清的检查结因子血清的检查结 果进行判断。果进行判断。肠杆菌科知识培训44(五五)抗体检测抗体检测(肥达反应肥达反应)用已知伤寒、副伤寒沙门菌的用已知伤寒、副伤寒沙门菌的O、H 抗原，检测受检血清中有无相应的抗体抗原，检测受
36、检血清中有无相应的抗体 的半定量试管内凝集试验，称为肥达反的半定量试管内凝集试验，称为肥达反 应。能辅助诊断伤寒，甲、乙、丙型副应。能辅助诊断伤寒，甲、乙、丙型副 伤寒沙门菌引起的肠热症。伤寒沙门菌引起的肠热症。肠杆菌科知识培训451.方法方法 将受检血清用生理盐水作倍比稀将受检血清用生理盐水作倍比稀 释，分别加入等量伤寒沙门菌释，分别加入等量伤寒沙门菌O、H 抗原及副伤寒沙门菌甲、乙、丙的抗原及副伤寒沙门菌甲、乙、丙的 H抗原，进行试管内凝集试验，凡抗原，进行试管内凝集试验，凡 血清最高稀释度出现明显凝集者为血清最高稀释度出现明显凝集者为 凝集效价。凝集效价。肠杆菌科知识培训462.结果解释
37、结果解释 (1)正常值：各地区有所不同，正常值：各地区有所不同，O 80,H1：160，A、B，Cl：80；或第二份血清效价增高或第二份血清效价增高4倍以上具有倍以上具有 诊断意义。诊断意义。(2)O抗原的抗体为抗原的抗体为IgM，出现较早，出现较早，H 抗体为抗体为IgG，出现较迟。，出现较迟。O高高H不高不高,可能为疾病早期；可能为疾病早期；周后复查如升高周后复查如升高 为肠热症。为肠热症。H高高O不高，可能以往不高，可能以往 患过伤寒或接受过预防接种，为回忆患过伤寒或接受过预防接种，为回忆 反应。反应。肠杆菌科知识培训47、分、分 类类 将志贺菌属分为将志贺菌属分为4个血清群个血清群(种
38、种)：A群为群为 痢疾志贺菌；痢疾志贺菌；B群为福氏志贺菌；群为福氏志贺菌；C群为鲍群为鲍 特志贺菌；特志贺菌；D群为宋内志贺菌。群为宋内志贺菌。最近将生化性状相近的最近将生化性状相近的A、B，C群归为群归为 一群，统称志贺菌一群，统称志贺菌A、B、C血清群；而将血清群；而将 生化特征与之相异，鸟氨酸脱羧酶和生化特征与之相异，鸟氨酸脱羧酶和-半半 乳糖苷酶均阳性的宋内志贺菌单列出来。乳糖苷酶均阳性的宋内志贺菌单列出来。DNA G+Cmol为为4953。第四节 志贺菌属肠杆菌科知识培训48二、临床意义二、临床意义(一一)致病因素致病因素 1.侵袭力侵袭力 因菌毛的作用，细菌粘附在肠粘膜表面因菌毛
39、的作用，细菌粘附在肠粘膜表面;2.内毒素内毒素 造成粘膜细胞死亡发炎，并形成毛细血造成粘膜细胞死亡发炎，并形成毛细血 管血栓，导致坏死脱落和溃疡，临床出现管血栓，导致坏死脱落和溃疡，临床出现 脓血便；并引起全身中毒症状，导致发热脓血便；并引起全身中毒症状，导致发热 、意识障碍，甚至中毒性休克；、意识障碍，甚至中毒性休克；3.外毒素外毒素 A群志贺菌群志贺菌和和型产生志贺毒素，有型产生志贺毒素，有 细胞毒、肠毒素和神经毒等生物学活性。细胞毒、肠毒素和神经毒等生物学活性。肠杆菌科知识培训49(二二)所致疾病所致疾病 有以下有以下3种临床类型：种临床类型：1急性细菌性痢疾急性细菌性痢疾 表现为腹痛发
40、热，有里急后重现象表现为腹痛发热，有里急后重现象,便中含有粘液和血。很少进血流，中毒便中含有粘液和血。很少进血流，中毒 性菌痢见于小儿，常无消化道症状而表性菌痢见于小儿，常无消化道症状而表 现为全身中毒症状，往往造成死亡。现为全身中毒症状，往往造成死亡。肠杆菌科知识培训502.慢性细菌性痢疾慢性细菌性痢疾 菌痢治疗不彻底，造成反复发作菌痢治疗不彻底，造成反复发作 迁延不愈，超过迁延不愈，超过2个月视为慢性菌个月视为慢性菌 痢；痢；3.携带者携带者 有恢复期带菌、慢性带菌和健康有恢复期带菌、慢性带菌和健康 带菌等带菌等3种，是主要的传染源。种，是主要的传染源。肠杆菌科知识培训51三、微生物特性三
41、、微生物特性 1.G-杆菌，菌体短小，无芽胞荚膜和鞭杆菌，菌体短小，无芽胞荚膜和鞭 毛，有菌毛毛，有菌毛 2.抗原成分抗原成分 有群和型特异性两种有群和型特异性两种O抗原，是分类依抗原，是分类依 据根据生化反应和据根据生化反应和O抗原的不同，分为抗原的不同，分为 A、B、C、D 4个血清群和个血清群和40余个血清型。余个血清型。O抗原耐热，加热抗原耐热，加热100、60min不被破坏。不被破坏。K抗原能阻断抗原能阻断O凝集。凝集。肠杆菌科知识培训523.变异性变异性 有有S-R变异、耐药性变异。多重耐药性变异、耐药性变异。多重耐药性 问题己成为严重的医学问题。问题己成为严重的医学问题。4.培养
42、特性培养特性 兼性厌氧，生长温度兼性厌氧，生长温度37，pH7.27.4 。营养要求不高，能在普通培养基上生。营养要求不高，能在普通培养基上生 长。在鉴别培养基上形成无色半透明的长。在鉴别培养基上形成无色半透明的 菌落。菌落。5.抵抗力抵抗力 比其他肠道细菌抵抗力低，在比其他肠道细菌抵抗力低，在1石炭酸石炭酸 中中15-30min和加热和加热6010min即被杀死即被杀死肠杆菌科知识培训53四、微生物检验四、微生物检验 1.标本采集标本采集 在治疗前采集粘液脓血便作床边在治疗前采集粘液脓血便作床边 接种，不能及时接种可置甘油保存接种，不能及时接种可置甘油保存 液送检液送检;2.直接镜检直接镜检
43、 G-杆菌。胶乳凝集试验和免疫荧杆菌。胶乳凝集试验和免疫荧 光技术检测抗原。光技术检测抗原。肠杆菌科知识培训543.核酸检测核酸检测 志贺菌携带一个非结合型大质粒志贺菌携带一个非结合型大质粒,能能 编码与侵袭性相关的外膜蛋白编码与侵袭性相关的外膜蛋白,是产是产 生痢疾综合征的重要致病因子生痢疾综合征的重要致病因子,从中从中 2.5kb侵袭相关区段中设计出侵袭相关区段中设计出ipaH引引 物物,可用于检测志贺菌序列。可用于检测志贺菌序列。4.分离培养分离培养 用鉴别培养基和选择培养基用鉴别培养基和选择培养基,取可疑取可疑 菌落鉴定。菌落鉴定。肠杆菌科知识培训55 志贺菌鉴定（志贺菌鉴定（1）1.
44、生化试验生化试验 鉴定到属和种鉴定到属和种 基本生化反应特征基本生化反应特征:TSIA(双糖铁双糖铁)产碱产酸、不产气产碱产酸、不产气,CIT(枸橼酸盐枸橼酸盐)阴性阴性,URE(脲酶脲酶)阴性阴性,MOT(动力动力)阴性阴性,YP阴性。阴性。肠杆菌科知识培训56 志贺菌鉴定（志贺菌鉴定（2）2.血清学鉴定血清学鉴定 先用志贺菌属先用志贺菌属4种多价种多价(A群群1，2型、型、B群群 16型、型、C群群l6型及型及D群群)作玻片凝集试作玻片凝集试 验，凝集者再进一步作定型。验，凝集者再进一步作定型。A群：即痢疾志贺菌，为一群甘露醇阴性群：即痢疾志贺菌，为一群甘露醇阴性 的菌株，共有的菌株，共有
45、10个血清型个血清型(1)0)，其，其O抗抗 原从原从1 X共共10种均为独立的血清理，种均为独立的血清理，肠杆菌科知识培训57 群：即福氏志贺菌，有群：即福氏志贺菌，有6个血清型个血清型和和X、Y 2个变型。个变型。6型菌株缺少共同型菌株缺少共同的群抗原，故多价血清中应包含的群抗原，故多价血清中应包含6型因型因子血清，否则将会造成漏检。子血清，否则将会造成漏检。C群：即鲍特志贺菌。本菌共有群：即鲍特志贺菌。本菌共有15个个血清群，血清群，D群：即宋内志贺菌：仅有群：即宋内志贺菌：仅有个血清个血清型，但有光滑型型，但有光滑型(S)和粗糙型和粗糙型(R)两种茵两种茵落落;R型菌型菌 不被不被S型
46、血清所凝集；因此诊型血清所凝集；因此诊断血清应含有断血清应含有S及及R两种因子血清两种因子血清肠杆菌科知识培训58 包括包括3种人类致病菌：鼠疫耶尔森种人类致病菌：鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌。还可从临床标本中分离到弗尔森菌。还可从临床标本中分离到弗氏、中间、克氏、舆氏、伯氏、莫氏氏、中间、克氏、舆氏、伯氏、莫氏、罗氏和鲁氏等、罗氏和鲁氏等8种耶尔森菌。种耶尔森菌。第五节 耶尔森菌属肠杆菌科知识培训59一、鼠疫耶尔森菌一、鼠疫耶尔森菌 (一一)临床意义临床意义 是烈性自然疫源性传染病鼠疫的是烈性自然疫源性传染病鼠疫的 病原菌。病原菌。1致病因
47、素致病因素 有内毒素和鼠毒素两种毒素。鼠有内毒素和鼠毒素两种毒素。鼠 毒素与毒力有关，作用于心血管系毒素与毒力有关，作用于心血管系 统，引起不可逆性休克与死亡，该统，引起不可逆性休克与死亡，该 毒素存在于细胞内，菌细胞裂解或毒素存在于细胞内，菌细胞裂解或 白溶后释放。白溶后释放。肠杆菌科知识培训602临床类型临床类型 1)腺鼠疫：局部淋巴结腺鼠疫：局部淋巴结(多为腹股沟淋多为腹股沟淋 巴结巴结)的肿胀、坏死和脓肿；的肿胀、坏死和脓肿；2)败血型鼠疫：由细菌侵入血流大量败血型鼠疫：由细菌侵入血流大量 繁殖所致。可在繁殖所致。可在2-3天内死亡；天内死亡；3)肺鼠疫：由腺鼠疫、败血型鼠疫继肺鼠疫：
48、由腺鼠疫、败血型鼠疫继 发而成，可通过呼吸道在人与人之发而成，可通过呼吸道在人与人之 间直接传播，引起原发性肺鼠疫，间直接传播，引起原发性肺鼠疫，死亡率极高。死亡率极高。肠杆菌科知识培训61(二二)微生物特性微生物特性 1.G-杆状，杆状，0.51.0m，两极浓染，两极浓染，有荚膜，无芽胞和鞭毛。有荚膜，无芽胞和鞭毛。2.抗原构造构造复杂，重要的有抗原构造构造复杂，重要的有(1)F1 抗原抗原:是封套抗原。特异性高，抗原是封套抗原。特异性高，抗原 性强，产生的抗体有良好的保护作性强，产生的抗体有良好的保护作 用用;(2)VW抗原：是菌体的表面抗原：是菌体的表面 抗原，与本菌的毒力和侵袭力有关。
49、抗原，与本菌的毒力和侵袭力有关。(3)T抗原：为为鼠毒素抗原：为为鼠毒素,有良好的抗有良好的抗 原性和免疫原性，可脱毒成类毒素原性和免疫原性，可脱毒成类毒素 制成抗毒素。制成抗毒素。肠杆菌科知识培训623.兼性厌氧，生长温度为兼性厌氧，生长温度为2730，最，最 适适pH为为6.97.2,血琼脂培养血琼脂培养48h后形成后形成 粗糙菌落，肉汤培养粗糙菌落，肉汤培养48h后形成菌膜，稍后形成菌膜，稍 加摇动后的菌膜钟乳石状下垂；本菌动加摇动后的菌膜钟乳石状下垂；本菌动 力为阴性；力为阴性；IMViC试验反应模式为试验反应模式为+、苯丙氨酸脱氨酶、脲酶、硫化氢、苯丙氨酸脱氨酶、脲酶、硫化氢 均为阴
50、性；不液化明胶，当穿刺培养时均为阴性；不液化明胶，当穿刺培养时 菌沿穿刺线纵树状发育；分解葡萄糖产菌沿穿刺线纵树状发育；分解葡萄糖产 酸不产气，对多数糖不分解：酸不产气，对多数糖不分解：肠杆菌科知识培训63(三三)微生物检验微生物检验 鼠疫耶尔森菌传染性极强，故应严格遵守操鼠疫耶尔森菌传染性极强，故应严格遵守操 作规程，一旦疑为本菌，应立即向省市疾病控作规程，一旦疑为本菌，应立即向省市疾病控 制中心等部门报告，并将菌种送检验中心或专制中心等部门报告，并将菌种送检验中心或专 业实验室作进一步的鉴定。鼠疫的确诊主要依业实验室作进一步的鉴定。鼠疫的确诊主要依 赖病原学诊断，须经全面生化反应、噬菌体裂
