1、肠杆菌科鉴定流程主讲人：王曦晖1谷风书苑9版伯杰鉴定细菌手册分为24个属，108个种现增加到31个属,常见的15个属 1.占临床分离菌总数50%2.占G-杆菌总数80%3.占败血症50%4.占尿路感染70一.分布2谷风书苑二.临床意义l有些菌属对人类有明显的致病作用有些菌属对人类有明显的致病作用1、鼠疫耶耳森菌-引起烈性传染病2、埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶耳森菌属可导致腹泻、食物中毒.伤寒l多数菌属是肠道正常菌群，也是条件致病菌多数菌属是肠道正常菌群，也是条件致病菌3谷风书苑n与人类感染有关的肠杆菌科细菌有与人类感染有关的肠杆菌科细菌有31个菌属，个菌属，其中临床标本中常见的菌属有其中临
2、床标本中常见的菌属有15种种 克雷伯菌属克雷伯菌属 爱德华菌属爱德华菌属 邻单胞菌属邻单胞菌属 变形杆菌属变形杆菌属 普罗威登斯菌属普罗威登斯菌属 沙门菌属沙门菌属 耶尔森菌属耶尔森菌属 志贺菌属志贺菌属 沙雷菌属沙雷菌属 肠杆菌属肠杆菌属 埃希菌属埃希菌属 哈夫尼亚菌属哈夫尼亚菌属 枸橼酸杆菌属枸橼酸杆菌属 摩根菌属摩根菌属 多源菌属多源菌属 4谷风书苑三.微生物特性n1.G-杆菌，多数有鞭毛、菌毛n2.发酵葡萄糖，兼性厌氧n3.氧化酶阴性4.4.还原硝酸盐为亚硝酸盐还原硝酸盐为亚硝酸盐5.5.触酶（）触酶（）6.6.营养条件不高，5谷风书苑涂片：涂片：G-b氧化酶试验氧化酶试验非发酵菌、弧
3、菌非发酵菌、弧菌+肠杆菌科细菌、不动、嗜麦芽菌肠杆菌科细菌、不动、嗜麦芽菌双糖试验双糖试验FO不动、嗜麦芽不动、嗜麦芽肠杆菌科细菌肠杆菌科细菌苯丙，苯丙，葡盐葡盐,枸枸,硝硝,赖赖,鸟鸟,氨对氨对,山山,肌肌,侧侧,吲哚吲哚 硝酸盐还原硝酸盐还原+嗜麦芽嗜麦芽不动不动四、鉴定流程图6谷风书苑种属鉴定科的特征科的特征硝酸盐还原硝酸盐还原葡萄糖发酵葡萄糖发酵氧化酶氧化酶 触酶触酶属间鉴定特征属间鉴定特征种间鉴定特征种间鉴定特征血清学分型血清学分型报告细菌种名报告细菌种名报告细菌血清型报告细菌血清型概概述述7谷风书苑五、肠杆菌科的初步分群 n可用苯丙氨酸和葡萄糖酸盐试验将肠杆菌科分为四大组8谷风书苑
4、菌菌 属属 名名 苯丙氨酸 葡萄糖酸盐变形杆菌属 +普鲁维登斯菌属 +摩根氏菌属 +克雷伯菌属 +肠杆菌属 +沙雷菌属 +哈夫尼亚菌 +埃希菌属 志贺菌属 沙门菌属 枸橼酸杆菌属 爱德华菌属 耶尔森菌属 9谷风书苑六.苯丙氨酸阳性组的各属鉴别 n试 验 变形杆菌属 普鲁维登菌属 摩根氏菌属 塔特姆属nH2S +-n枸橼酸盐 +/-+-n靛基质 +/-+-10谷风书苑1.变形杆菌属内各种的鉴别 试 验 普通变形杆菌 奇异变形杆菌 潘氏变形杆菌 产粘液变形杆菌靛基质 +-鸟基酸 -+-木糖 +-11谷风书苑2.普鲁维登菌属各种的鉴别 试试 验验 产碱 斯图 雷极 普鲁维登斯菌 普鲁维登斯菌 普鲁维
5、登斯菌侧金盏花醇 +-+甘露醇 +-12谷风书苑生化反应生化反应雷氏雷氏斯氏斯氏产碱产碱拉氏拉氏海氏海氏吲哚产生吲哚产生+-肌醇肌醇 +-V海藻糖海藻糖-+-戊五醇戊五醇+-+-+13谷风书苑3.摩根菌属种的鉴定 试验试验 摩根摩根菌 摩根菌(生物1群)赖氨酸赖氨酸 -+动力动力 +-14谷风书苑+_+苯丙氨酸+H2S枸橼酸盐靛基质鸟氨酸靛基质侧金盏花醇甘露醇普通变形杆菌奇异变形杆菌潘氏变形杆菌产碱普鲁维登斯菌雷极普鲁维登斯菌斯图普鲁维登斯菌摩根菌塔特姆菌.苯丙氨酸阳性组菌属鉴别索引图4-15谷风书苑七.葡萄糖酸盐阳性组各属鉴别 试 验克雷伯菌属沙雷菌属肠杆菌属 哈夫尼亚菌属 动 力-+DNA
6、酶-+-鸟氨酸-+枸橼酸盐+-16谷风书苑u原克雷伯菌属（原克雷伯菌属（klebsiella）有）有5个种，个种，2个亚种个亚种肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌产酸克雷伯菌产酸克雷伯菌解鸟氨酸克雷伯菌解鸟氨酸克雷伯菌分分 类类克克雷雷伯伯菌菌属属臭鼻亚种臭鼻亚种鼻硬结亚种鼻硬结亚种17谷风书苑培养特征培养特征 血琼脂上菌落较大，呈血琼脂上菌落较大，呈黏液状，以接种环挑取黏液状，以接种环挑取时易拉成丝时易拉成丝 在肠道培养基上呈发酵在肠道培养基上呈发酵乳糖小菌落乳糖小菌落 在液体培养基内生长混在液体培养基内生长混浊、浓厚、可见菌膜，浊、浓厚、可见菌膜，管底有粘性沉淀物管底有粘性沉淀物 K.pneumon
7、iae 菌落（血平板）菌落（血平板）克克雷雷伯伯菌菌属属18谷风书苑1.克雷伯菌属各种的鉴别试 验产酸克雷伯菌肺炎克雷伯菌臭鼻克雷伯菌鼻硬结克雷伯菌靛基质+甲基红+丙二酸盐+19谷风书苑沙雷菌属沙雷菌属（普通营养平板）（普通营养平板）20谷风书苑2.沙雷菌属各种的鉴别 试 验粘质沙雷菌液化沙雷菌 红色沙雷菌鸟氨酸+阿拉伯糖+21谷风书苑分类：现有分类：现有13个种个种2个生物型个生物型u原有原有7个种个种2个生物型个生物型产气肠杆菌产气肠杆菌(E.aerogenes)阴沟肠杆菌阴沟肠杆菌(E.cloacae)杰高维肠杆菌杰高维肠杆菌坂崎肠杆菌坂崎肠杆菌泰洛肠杆菌泰洛肠杆菌中间肠杆菌中间肠杆菌聚
8、团肠杆菌聚团肠杆菌河生肠杆菌生物群河生肠杆菌生物群1河生肠杆菌生物群河生肠杆菌生物群2u后增加后增加7个菌个菌阿氏肠杆菌阿氏肠杆菌何氏肠杆菌何氏肠杆菌溶解肠杆菌溶解肠杆菌超压肠杆菌超压肠杆菌克沃尼肠杆菌克沃尼肠杆菌考伯肠杆菌考伯肠杆菌帕瑞勒肠杆菌帕瑞勒肠杆菌 肠肠杆杆菌菌属属22谷风书苑3.肠杆菌属各种的鉴别 试 验坂崎杆菌 阴沟杆菌 产气杆菌格高菲杆菌赖氨酸+山梨醇+本菌属的细菌生化反应不典型，常用的商品化鉴定系统本菌属的细菌生化反应不典型，常用的商品化鉴定系统很难达到很难达到90以上的鉴定正确率以上的鉴定正确率23谷风书苑4.哈夫尼亚菌属鉴定n葡萄糖酸盐 枸橼酸盐 棉子 糖n +24谷风书
9、苑5.葡萄糖酸盐阳性菌属鉴别双岐索引图+-+葡萄糖酸盐+侧金盏花醇赖氨酸鸟氨酸赖氨酸鸟氨酸靛基质枸橼酸盐山梨醇丙二酸盐阴沟肠杆菌产酸克雷伯菌山梨醇肺炎克雷伯菌产气肠杆菌红色沙雷菌多源肠杆菌鼻硬结克雷伯菌臭鼻克雷伯菌哈夫尼亚菌山梨醇格高菲肠杆菌阿拉伯糖贩崎肠杆菌阴沟肠杆菌粘质沙雷菌液化沙雷菌25谷风书苑八.苯丙氨酸葡萄糖酸盐阴性组的各属鉴别 试 验沙门菌属志贺菌属埃希菌属枸橼酸杆菌属耶尔森菌属爱德华菌属甘露醇+ONPG+动 力+枸橼酸盐+/+赖氨酸+26谷风书苑枸枸橼橼酸酸杆杆菌菌属属分分 类类枸橼酸杆菌属（枸橼酸杆菌属（Citrobacter）包括）包括11个种个种弗劳地枸橼酸杆菌弗劳地枸橼酸
10、杆菌(C.freundii)差异枸橼酸杆菌（差异枸橼酸杆菌（C.diversus）库斯枸橼酸杆菌库斯枸橼酸杆菌无丙二酸盐枸橼酸杆菌无丙二酸盐枸橼酸杆菌(C.amalonaticus)（C.koseri）布拉吉枸橼酸杆菌布拉吉枸橼酸杆菌 （C.braakii）雷登枸橼酸杆菌雷登枸橼酸杆菌 （C.rodentium）塞拉克枸橼酸杆菌塞拉克枸橼酸杆菌 （C.sedlakii）魏克曼枸橼酸杆菌魏克曼枸橼酸杆菌 （C.werkmanii）扬哥枸橼酸杆菌扬哥枸橼酸杆菌 （C.youngae）吉乐枸橼酸杆菌吉乐枸橼酸杆菌 （C.gillenii）穆利枸橼酸杆菌穆利枸橼酸杆菌 （C.murliniae）法玛丽
11、枸橼酸杆菌法玛丽枸橼酸杆菌 （C.farmeri）27谷风书苑1.枸橼酸杆菌属各种的鉴别 试 验费劳地枸橼酸杆菌异型枸橼酸杆菌丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌鸟氨酸+侧金盏花醇+注意：很多鉴定系统的数据库中不包括枸橼酸杆菌属新种名称和分类资注意：很多鉴定系统的数据库中不包括枸橼酸杆菌属新种名称和分类资料料28谷风书苑2.爱德华菌属各种的鉴别 试 验迟缓爱德华菌保科爱德华菌鲶鱼爱德华菌H2S+甲基红+29谷风书苑3.埃希菌属种的鉴别 试 验大肠埃希菌大肠埃希菌（不活泼株）葡萄糖产气+动 力+30谷风书苑 致泻性致泻性E.coli分为分为5类：类：肠毒素型大肠埃希菌肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)肠致病性大肠
12、埃希菌肠致病性大肠埃希菌(EPEC)肠侵袭型大肠埃希菌肠侵袭型大肠埃希菌(EIEC)肠出血型大肠埃希菌肠出血型大肠埃希菌(EHEC)肠凝聚型大肠埃希菌肠凝聚型大肠埃希菌(EAggEC)埃埃希希菌菌属属临床意义临床意义(Clinical Significance)E.coli以肠道外感染多见，主要有泌尿系统感染以肠道外感染多见，主要有泌尿系统感染 E.coli中的致病菌株能引起各种类型的腹泻，根中的致病菌株能引起各种类型的腹泻，根据其不同的血清型别、毒力和临床症状据其不同的血清型别、毒力和临床症状31谷风书苑鉴定要点鉴定要点u不活跃大肠埃希菌与志贺菌易混淆，需相互鉴别不活跃大肠埃希菌与志贺菌易混
13、淆，需相互鉴别 醋酸钠醋酸钠葡萄糖葡萄糖铵利用铵利用粘质酸盐粘质酸盐产酸试验产酸试验大肠埃希菌大肠埃希菌志贺菌属志贺菌属埃埃希希菌菌属属大肠埃希菌大肠埃希菌 在中国兰平板上为蓝色菌落在中国兰平板上为蓝色菌落大肠埃希菌大肠埃希菌 在伊红美蓝平板上为紫黑色菌落在伊红美蓝平板上为紫黑色菌落大肠埃希菌大肠埃希菌 在麦康凯和在麦康凯和SS平板上为红色菌落平板上为红色菌落32谷风书苑培养特征培养特征 u 兼性厌氧菌兼性厌氧菌u 营养要求不高营养要求不高u 菌落呈中等大小、无菌落呈中等大小、无色、半透明、光滑色、半透明、光滑u 在在SS平板上，因产生平板上，因产生H2S可形成黑色中心可形成黑色中心的菌落的菌
14、落伤寒沙门菌菌落形态（伤寒沙门菌菌落形态（SS平板）平板）四四沙沙门门菌菌属属33谷风书苑u常用血清：常用血清：O多价血清（含多价血清（含AF群）群）O、H、Vi抗原因子血清抗原因子血清 方法方法：从临床标本中分离到菌株经纯培养后，符从临床标本中分离到菌株经纯培养后，符合沙门合沙门 菌属生物学特性，则菌属生物学特性，则 采用采用A-F多价血清初步确定是否为多价血清初步确定是否为Salmonella 1.如阳性，即用如阳性，即用O因子血清分群；再用第一相因子血清分群；再用第一相H因子血清定型，也可用第二相辅助定型因子血清定型，也可用第二相辅助定型 2.如阴性：如阴性：应考虑是否有应考虑是否有Vi
15、抗原抗原?血清学分型血清学分型加热或传代加热或传代去除去除Vi抗原抗原凝集：做凝集：做O多价和单价凝集多价和单价凝集不凝集：可能为不凝集：可能为AF以外以外沙沙门门菌菌属属34谷风书苑35谷风书苑如是双相菌，进一步用复合血清1、2、5检查第2相抗原。群菌 型抗原1相2相A甲型副伤寒1,2,12aB乙型副伤寒1,4,12b1.2 鼠伤寒1,4,12i1.2C1丙型副伤寒6,7(Vi)C1.5 C1猪霍乱6,71.5D伤 寒1,9(Vi)d 肠 炎1,9,12g,m 都柏林1,9,12(Vi)g,pE火 鸡3,10e,h1.w 山夫顿3,15e,h1.bF河伯丁1,3,19g,t36谷风书苑u兼性
16、厌氧菌兼性厌氧菌u营养要求不高营养要求不高u普通平板：中等大普通平板：中等大小、半透明、光滑小、半透明、光滑u鉴别培养基：乳糖不鉴别培养基：乳糖不发酵的菌落发酵的菌落培养特性培养特性菌落形态（麦康凯平板）菌落形态（麦康凯平板）志志贺贺菌菌属属37谷风书苑种属鉴定种属鉴定u菌属特征菌属特征 u发酵葡萄糖产酸不产气发酵葡萄糖产酸不产气u赖氨酸（）赖氨酸（）uH2S（）（）u尿素（尿素（）u动力（动力（）志志贺贺菌菌属属38谷风书苑5.志贺菌属的鉴定n先用志贺多价血清与菌种凝集，如多价血清凝集为志贺菌，多价里不包含鲍氏C16-20再进一步用因子血清凝集而定群。亚群和种血 清 型痢疾A 110福氏B
17、1a,1b,2a,2b,3a,3b,4a,4b,5,6鲍氏C1C15宋氏D39谷风书苑6、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性组菌属鉴别 双歧索引图+苯丙氨酸、葡萄糖酸盐-甘露醇ONPG枸橼酸盐动力H2S侧金盏花醇赖氨酸沙门菌属志贺菌属迟缓爱德华菌甲基红异型枸橼酸杆菌鸟氨酸葡萄糖产气耶尔森菌属丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌费劳地枸橼酸杆菌大肠埃希菌大肠埃希菌（不活泼株）保科爱德华菌鲶鱼爱德华菌40谷风书苑肠杆菌鉴定选用多少生化反应管为好肠杆菌鉴定选用多少生化反应管为好苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、赖氨酸、鸟苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、赖氨酸、鸟氨酸、氨基酸对照、枸橼酸盐、硝酸氨酸、氨基酸对照、枸橼酸盐、硝酸盐、侧金盏花醇、山梨
18、醇、甘露醇、盐、侧金盏花醇、山梨醇、甘露醇、ONPGONPG、靛基质、双糖（、靛基质、双糖（H H2 2S S）41谷风书苑九.API鉴定系统(20E)菌液制成0.5麦氏浊度,加入20E板条,42谷风书苑1.变形杆菌菌落呈迁延性生长十、肠杆菌科某些菌株的特殊性质43谷风书苑2.克雷伯菌自身菌落可拉出丝来44谷风书苑3.多源聚团菌在M-H平板上产生黄色45谷风书苑4.沙雷菌M-H 平板上产生铁锈红色46谷风书苑5.宋内志贺菌无色不透明菌落47谷风书苑6.能产生H2S的菌株变形杆菌 爱德华菌 伤寒沙门菌 费劳地枸橼酸杆菌大肠杆菌48谷风书苑大肠杆菌的特点对多种糖对多种糖产酸产气产酸产气,吲哚吲哚、
19、甲基红、甲基红、VP VP、枸橼酸盐、枸橼酸盐(IMVC)+-(IMVC)+-五种致病性大肠杆菌要用特异性血五种致病性大肠杆菌要用特异性血清凝集加以鉴别清凝集加以鉴别49谷风书苑十一.沙门菌属的特点所有动物可分离到沙门菌,有2000多血清可引起人类胃肠炎、败血症、伤寒50谷风书苑沙门菌属的特点肥达反应 O H A B C 1:80 1:1601:801:801:8051谷风书苑十二.志贺菌属的特点急性菌痢-发烧,腹痛,脓血便,痢疾志贺菌引起的菌痢死亡率高达20%慢性菌痢-反复发作二个月52谷风书苑志贺菌属与大肠埃希菌区别:动力阴性,赖氨酸阴性,分解葡萄糖不分解乳糖志贺菌属与伤寒沙门菌区别:动力
20、阴性H2S阴性,能于志贺菌因子血清凝集志贺菌属的特点53谷风书苑u常用血清：常用血清：O多价血清（含多价血清（含AF群）群）O、H、Vi抗原因子血清抗原因子血清 方法：方法：从临床标本中分离到菌株经纯培养后，符从临床标本中分离到菌株经纯培养后，符合沙门合沙门 菌属生物学特性，则菌属生物学特性，则 采用采用A-F多价血清初步确定是否为多价血清初步确定是否为Salmonella 1.如阳性，即用如阳性，即用O因子血清分群；再用第一相因子血清分群；再用第一相H因子血清定型，也可用第二相辅助定型因子血清定型，也可用第二相辅助定型 2.如阴性：如阴性：应考虑是否有应考虑是否有Vi抗原抗原?血清学分型血清学分型加热或传代加热或传代去除去除Vi抗原抗原凝集：做凝集：做O多价和单价凝集多价和单价凝集不凝集：可能为不凝集：可能为AF以外以外沙沙门门菌菌属属54谷风书苑 55谷风书苑
