1、肿瘤免疫治疗思考和对策肿瘤免疫治疗思考和对策234567一、树突状细胞在肿瘤免疫中的应用一、树突状细胞在肿瘤免疫中的应用8z树突状细胞（DC）是机体内最重要的一群抗原提呈细胞，是机体免疫应答的有力启动者，以DC为物质基础的免疫疗法是近年来新发展起来的一种新的生物治疗手段。9DC激发肿瘤特异性免疫应答的三个环节激发肿瘤特异性免疫应答的三个环节z1.肿瘤特异性抗原的递呈；肿瘤特异性抗原的递呈；z2.肿瘤特异性肿瘤特异性CTL细胞和非特异性杀伤细细胞和非特异性杀伤细胞的活化；胞的活化；z3.效应细胞向肿瘤部位的迁移和清除肿瘤效应细胞向肿瘤部位的迁移和清除肿瘤的限制因素的识别。的限制因素的识别。z主要
2、目的是诱导患者机体产生肿瘤特异性主要目的是诱导患者机体产生肿瘤特异性的、持久的免疫应答。的、持久的免疫应答。10主要治疗策略主要治疗策略z（1）直接输注）直接输注DCs，以激发机体免疫功能，以激发机体免疫功能的主动免疫；的主动免疫；z（2）以经自体）以经自体DCs体外扩增、激活的体外扩增、激活的T淋淋巴细胞（巴细胞（CTL）为物质基础的过继免疫疗）为物质基础的过继免疫疗法，使肿瘤患者产生有效、持久的抗肿瘤法，使肿瘤患者产生有效、持久的抗肿瘤免疫效应。免疫效应。11 3.DC体外扩增的方法z DC 在组织中含量甚微，细胞表面缺乏特征性的标志，不易及其它细胞分离。细胞来源的困难一度限制了对DC生物
3、学特性等方面的深入研究。z 在应用中发现治疗时使用的DC可能并不完全成熟，相当一部分回输的DC是非功能性的幼稚DC，从而大大降低了治疗效果；而如果仅仅应用未成熟的DC往往只能导致机体的免疫耐受。z 国内外许多实验室都致力于研究通过体外培养获得大量高纯度功能性成熟DC的方法12 z 目前用于临床和实验研究的DC 大多是通过体外分离DC的前体细胞，在含有有关细胞因子的培养体系中诱导获得。z 骨髓、脐血、外周血CD34+细胞或外周血单个核细胞均可作为体外培养DC的来源。z 适当的细胞因子配伍和应用顺序对DC的培养具有重要作用。z 13肿瘤抗原特异性肿瘤抗原特异性DCs的制备的制备z细胞性肿瘤抗原体外
4、冲击DC：包括采用灭活的肿瘤细胞或凋亡的肿瘤细胞负载DC;z合成的肿瘤细胞抗原或抗原肽体外冲击DC;z肿瘤抗原提取物负载DC：目前常用的提取物包括肿瘤细胞碎片、酸性洗脱肽及mRNA抽提物;z基因修饰的DC：包括肿瘤抗原编码的基因及某些细胞因子（GM-CSF、IL-7、IL-12等）通过病毒导入DC。14二、细胞毒性二、细胞毒性T T细胞在肿瘤免疫中的运用细胞在肿瘤免疫中的运用15zCTL抗凋亡能力测定z FLIP、Bcl-2、Baxz51Cr释放试验z 对相应肿瘤细胞的杀伤作用z 对自体PBMC的杀伤作用zT细胞趋化实验16A病人选择病人选择z 已经病理组织学确诊为非小细胞肺癌z 已失去手术机
5、会或不愿接受手术治疗z 住院病人z 临床分期（TNM）：期及期以上 z 年龄65岁z 预计生存期1.0年z 生存质量评分60分z 心、肝、肾等脏器功能基本正常z 知情同意的志愿受试者17B肿瘤治疗肿瘤治疗za）将病人随机分为A、B、C三组，zA组：对照组，行常规的正规放疗或化疗；zB组：试验组，正规化疗+肿瘤抗原特异性自体T细胞过继免疫治疗；zC组：试验组，正规放疗+肿瘤抗原特异性自体T细胞过继免疫治疗；zb)肿瘤抗原特异性CTL输注程序：在减瘤治疗后，分3次回输体外扩增的自体T淋巴细胞（1109/次），即在最大程度降低机体的肿瘤负荷后，重建患者的细胞免疫功能。18C疗效评价疗效评价z a)二
6、个疗程后，按WHO的判定标准，评定疗效z l CR（完全缓解）z l PR（部分缓解）z l MR（稳定）z l NC或PD（无变化或进展）z b)生存质量评分（Karnofsky的标准）z 根据肿瘤患者治疗前后的精神、睡眠、食欲、疲乏、疼痛、家庭理解及配合、同事的理解与配合、自身对癌症的认识、对治疗的态度、行为状态、日常活动z 情况、面部的表情等进行等级综合评分。z c）临床症状体征改变的分析。z d）生存期、中位生存期的分析。z e）免疫功能状况的分析z 采用免疫荧光标记法分析患者治疗前后的T细胞及其亚群功能变化（CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD4+/CD28+、CD8+/
7、CD28+、CD4+-IFN-+、CD8+-IFN-+、CD4+-IL-10+、CD8+-IL-10+、CD56、CD40L、CD95L）z 采用ELISA法分析患者治疗前后的血清细胞因子水平变化（IL-2、sIL-2R、IL-10、IL-12、IFN-）z 患者治疗前后自体T淋巴细胞对相应肿瘤细胞的杀伤效应测定（51Cr释放试验）z 肽-MHC四聚体的测定19三、免疫分子的分析及临床意义三、免疫分子的分析及临床意义20Dual Parameter HistogramsFSC SizeSSC granularityLymphsMonosGrans2521CD3CD4CD3CD8HumanLym
8、phocytesMouse-anti-CD4Mouse-anti-CD3Mouse-anti-CD8CD3CD4CD3CD8Immunophenotyping22抗体的基本结抗体的基本结构是一个构是一个Y Y型的型的多肽链，由两条多肽链，由两条完全相同的重链完全相同的重链和轻链组成。和轻链组成。23抗体（抗体（Antibody,AbAntibody,Ab）是血液和组）是血液和组织液中的一类糖蛋白，以织液中的一类糖蛋白，以球蛋白的球蛋白的形式存在血清中，也是形式存在血清中，也是B B淋巴细胞识别淋巴细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的体抗原后增殖分化为浆细胞所产生的体液免疫应答效应分子，也被称
9、之免疫液免疫应答效应分子，也被称之免疫球蛋白（球蛋白（Immunoglobulin,IgImmunoglobulin,Ig）。）。24 杂交瘤技术的创立和单克隆抗体杂交瘤技术的创立和单克隆抗体的研制及运用的研制及运用MilsteinMilstein和和KohlerKohler巧妙地提出将抗体生成细胞和巧妙地提出将抗体生成细胞和肿瘤细胞融合而构建能分泌结构均一的特异性抗体肿瘤细胞融合而构建能分泌结构均一的特异性抗体分子，这为抗体的运用和产业化带来革命性突破。分子，这为抗体的运用和产业化带来革命性突破。单抗作为临床诊断、治疗、预防以及基础理论研究单抗作为临床诊断、治疗、预防以及基础理论研究的新型制剂，已日益显示出重要的作用和广泛的应的新型制剂，已日益显示出重要的作用和广泛的应用前景。用前景。体外诊断试剂体外诊断试剂 体内诊断体内诊断 体内治疗：抑制移植排斥反应，抗肿瘤、抗感染。体内治疗：抑制移植排斥反应，抗肿瘤、抗感染。25Thank You世界触手可及世界触手可及携手共进，齐创精品工程携手共进，齐创精品工程
