1、病毒感染与细胞凋亡病毒感染与细胞凋亡概念：是由一系列基因控制并受复概念：是由一系列基因控制并受复 杂信号调节的细胞自然死亡杂信号调节的细胞自然死亡 的现象。的现象。Apoptosis Apoptosis“叶子凋落叶子凋落”左，正常胸腺细胞；右，凋亡胸腺细胞左，正常胸腺细胞；右，凋亡胸腺细胞富含半胱氨酸富含半胱氨酸死亡结构域死亡结构域 death effector domain BIDn CaspaseCaspase 可激活名叫可激活名叫CADCAD（caspasecaspase-activated-activated DnaseDnase）的核酸酶，）的核酸酶，CADCAD能在核小体的连接区将
2、其切断，形成约为能在核小体的连接区将其切断，形成约为200bp200bp整数倍的核酸片段。整数倍的核酸片段。正常情况下正常情况下CADCAD存在于胞质中，并且与抑制因子存在于胞质中，并且与抑制因子ICAD/DFF-45ICAD/DFF-45蛋白结合，蛋白结合，不能进入细胞核。不能进入细胞核。CaspaseCaspase活化后可以降解活化后可以降解ICAD/DFF-45ICAD/DFF-45，释放出，释放出CADCAD，使它进入细胞核降解使它进入细胞核降解DNADNA。nCaspase可直接破坏细胞结构，如裂解核纤层，核纤层（可直接破坏细胞结构，如裂解核纤层，核纤层（Lamina）是由）是由核纤
3、层蛋白通过聚合作用而连成头尾相接的多聚体，由此形成核膜的骨核纤层蛋白通过聚合作用而连成头尾相接的多聚体，由此形成核膜的骨架结构，使染色质（架结构，使染色质（chromatin）得以形成并进行正常的排列。在细胞发）得以形成并进行正常的排列。在细胞发生凋亡时，核纤层蛋白作为底物被生凋亡时，核纤层蛋白作为底物被Caspase在一个近中部的固定部位所裂在一个近中部的固定部位所裂解，从而使核纤层蛋白崩解，导致细胞染色质的固缩。解，从而使核纤层蛋白崩解，导致细胞染色质的固缩。n Caspase可作用于几种与细胞骨架调节有关的酶或蛋白，改变细胞结可作用于几种与细胞骨架调节有关的酶或蛋白，改变细胞结构。除此之
4、外，构。除此之外，Caspase还能灭活或下调与还能灭活或下调与DNA修复有关的酶、修复有关的酶、mRNA剪切蛋白和剪切蛋白和DNA交联蛋白。交联蛋白。细胞凋亡的检测方法细胞凋亡的检测方法形态学观测：染色法、透射和扫描电镜观察形态学观测：染色法、透射和扫描电镜观察DNADNA电泳：电泳：DNADNA片段就呈现出梯状条带片段就呈现出梯状条带TUNELTUNEL测定法，即测定法，即DNADNA断裂的原位末端标记法断裂的原位末端标记法彗星电泳法（彗星电泳法（comet assaycomet assay）流式细胞分析流式细胞分析 +坏死坏死凋亡凋亡细胞色素细胞色素c诱导的凋亡细胞诱导的凋亡细胞DNA电泳图电泳图1细胞色素细胞色素c诱导诱导0 h2细胞色素细胞色素c诱导诱导1 h3细胞色素细胞色素c诱导诱导2 h4细胞色素细胞色素c诱导诱导3 h5细胞色素细胞色素c诱导诱导4 h6阴性对照阴性对照7Marker （自赵允、翟中和）自赵允、翟中和）NS1转录后调控子转录后调控子
