1、免疫增殖病的检测方免疫增殖病的检测方法法第一节 免疫增殖病的分类一、定义一、定义 免疫增殖病免疫增殖病（immunoproliferative disease）是指免疫器官、免疫组织或免疫是指免疫器官、免疫组织或免疫细胞（包括淋巴细胞和单核细胞（包括淋巴细胞和单核巨巨噬细胞）噬细胞）异常增生异常增生（包括良性或（包括良性或恶性）所致的一组疾病。恶性）所致的一组疾病。这类疾病的表现有免疫功能这类疾病的表现有免疫功能异常及免疫球蛋白质和量的变化异常及免疫球蛋白质和量的变化。2免疫增殖病的检测方法二、免疫增殖病的分类二、免疫增殖病的分类增殖细胞增殖细胞疾疾 病病T细胞细胞ALL、淋巴母细胞瘤、部、淋
2、巴母细胞瘤、部分非霍奇金淋巴瘤等。分非霍奇金淋巴瘤等。B细胞细胞CLL、MM、传单、原发性、传单、原发性巨球蛋白血症、淋巴瘤等巨球蛋白血症、淋巴瘤等组织组织-单核单核细胞细胞急单、急性组织细胞增多急单、急性组织细胞增多症等症等其其它它毛细胞白血病、其他霍奇毛细胞白血病、其他霍奇金病等金病等3免疫增殖病的检测方法第二节第二节 免疫增殖病的免免疫增殖病的免疫损伤机制疫损伤机制 一、浆细胞异常增生一、浆细胞异常增生 浆细胞异常增生是指浆细胞异常增生是指单克隆浆细胞异常增生并单克隆浆细胞异常增生并伴有单克隆免疫球蛋白或伴有单克隆免疫球蛋白或其多肽链亚单位合成异常。其多肽链亚单位合成异常。4免疫增殖病的
3、检测方法 对多发性骨髓瘤细胞的起对多发性骨髓瘤细胞的起源观察表明，骨髓瘤细胞起源观察表明，骨髓瘤细胞起源于骨髓中的前源于骨髓中的前B细胞进入淋细胞进入淋巴细胞阶段，当受到抗原刺巴细胞阶段，当受到抗原刺激后，其增殖产生记忆的激后，其增殖产生记忆的B细细胞，胞，B细胞在淋巴结中完成免细胞在淋巴结中完成免疫球蛋白类别转换，可变成疫球蛋白类别转换，可变成为浆细胞的瘤细胞并移至骨为浆细胞的瘤细胞并移至骨髓定居并增殖。髓定居并增殖。5免疫增殖病的检测方法在通常情况下在通常情况下IL-6是支持浆是支持浆细胞增殖分化的关键因子，细胞增殖分化的关键因子，所以浆细胞的瘤细胞的持续所以浆细胞的瘤细胞的持续增殖当有增
4、殖当有IL-6的持续高水平的持续高水平存在。而临床检测表明骨髓存在。而临床检测表明骨髓瘤患者血清瘤患者血清IL-6确有异常升确有异常升高。因此，高水平的高。因此，高水平的IL-6是是浆细胞瘤的原因之一。浆细胞瘤的原因之一。6免疫增殖病的检测方法二、正常体液免疫抑制二、正常体液免疫抑制正常的体液免疫是正常的体液免疫是B细胞的增殖分化细胞的增殖分化产生效应的过程，一系列细胞因子将产生效应的过程，一系列细胞因子将有序地启动上述过程，有序地启动上述过程，IL-4可启动休可启动休止期的止期的B细胞进入细胞进入DNA合成期；合成期；IL-5促进促进B细胞继续增殖；细胞继续增殖；IL-6促使促使B细胞细胞分
5、化分化 为浆细胞，正常条件下为浆细胞，正常条件下IL-6可以可以反馈抑制反馈抑制IL-4控制控制B细胞的增殖分化过细胞的增殖分化过程，上述过程构成了一个生物信息调程，上述过程构成了一个生物信息调节回路，恰到好处地控制体液免疫应节回路，恰到好处地控制体液免疫应答过程的有序进行。答过程的有序进行。7免疫增殖病的检测方法浆细胞瘤患者体内浆细胞瘤患者体内IL-6水平异常增水平异常增高，其直接的效应是抑制高，其直接的效应是抑制IL-4的产的产生，从而抑制了整个体液免疫反应生，从而抑制了整个体液免疫反应的过程。另外，浆细胞瘤可以分泌的过程。另外，浆细胞瘤可以分泌大量无抗体活性的免疫球蛋白，其大量无抗体活性
6、的免疫球蛋白，其Fc段与正常段与正常B细胞和原浆细胞以及细胞和原浆细胞以及其它有其它有Fc 受体的细胞结合，这些受体的细胞结合，这些细胞表面将被无活性的免疫球蛋白细胞表面将被无活性的免疫球蛋白封闭，影响对其他生物信息的接收，封闭，影响对其他生物信息的接收，并可阻断并可阻断B细胞的增殖、发育和影细胞的增殖、发育和影响抗原提呈。响抗原提呈。8免疫增殖病的检测方法9免疫增殖病的检测方法三、异常免疫球蛋白增生所造三、异常免疫球蛋白增生所造成的病理损伤成的病理损伤 浆细胞异常增生的后果是产生大量的浆细胞异常增生的后果是产生大量的单克隆型免疫球蛋白或其片段，这类免疫单克隆型免疫球蛋白或其片段，这类免疫球蛋
7、白或片段无正常的免疫功能。多为一球蛋白或片段无正常的免疫功能。多为一种类型或为重链或轻链，其含量远远高于种类型或为重链或轻链，其含量远远高于正常的免疫球蛋白。这些恶性增殖的免疫正常的免疫球蛋白。这些恶性增殖的免疫球蛋白可以沉积于组织，造成组织变性和球蛋白可以沉积于组织，造成组织变性和淋巴细胞浸润，导致相应器官的功能障碍，淋巴细胞浸润，导致相应器官的功能障碍，因其血浆浓度过高而导致血液粘稠度增加，因其血浆浓度过高而导致血液粘稠度增加，产生一系列直接或间接的病理损害。产生一系列直接或间接的病理损害。10免疫增殖病的检测方法第三节第三节 常见免疫球蛋白增常见免疫球蛋白增殖病殖病 单克隆免疫球蛋白增单
8、克隆免疫球蛋白增殖病是指患者体内存在异殖病是指患者体内存在异常增多的单克隆免疫球蛋常增多的单克隆免疫球蛋白的一类疾病。白的一类疾病。11免疫增殖病的检测方法免疫球蛋白电泳位置在丙种球免疫球蛋白电泳位置在丙种球蛋白区域，故又称丙种球蛋白蛋白区域，故又称丙种球蛋白增殖病，由于单克隆细胞增生，增殖病，由于单克隆细胞增生，所以其产生的免疫球蛋白理化所以其产生的免疫球蛋白理化性质高度均一，但无抗体及其性质高度均一，但无抗体及其它免疫活性，所以这类免疫球它免疫活性，所以这类免疫球蛋白亦叫副蛋白或蛋白亦叫副蛋白或M蛋白。蛋白。M蛋白可通过肾小球从尿中排出，蛋白可通过肾小球从尿中排出，即本即本-周蛋白。周蛋白
9、。12免疫增殖病的检测方法一、多发性骨髓瘤一、多发性骨髓瘤(一一)定义多发性骨髓瘤定义多发性骨髓瘤（multiple myeloma MM)是浆细胞增生的恶性肿瘤，是浆细胞增生的恶性肿瘤，其免疫学特征其免疫学特征:血清中和尿血清中和尿中出现中出现M蛋白、血清中正蛋白、血清中正常常Ig水平明显降低、骨髓中水平明显降低、骨髓中不成熟的浆细胞比例显著不成熟的浆细胞比例显著升高。升高。13免疫增殖病的检测方法(二二)、临床表现和病理变化、临床表现和病理变化1、早期：无特殊症状，仅表现早期：无特殊症状，仅表现为为ESR增快，血中检出增快，血中检出M蛋白、蛋白、蛋白尿、浆细胞增多。蛋白尿、浆细胞增多。2、
10、典型病人症状及病理变化：、典型病人症状及病理变化：(1)骨髓瘤细胞增生，浸润和破坏骨髓瘤细胞增生，浸润和破坏骨组织，造成骨质疏松和溶骨骨组织，造成骨质疏松和溶骨性病变，导致骨痛和不同部位性病变，导致骨痛和不同部位的骨折；的骨折；14免疫增殖病的检测方法(2)、恶性增殖的骨髓瘤细胞代替了、恶性增殖的骨髓瘤细胞代替了骨髓中的正常成分，引起贫血、粒骨髓中的正常成分，引起贫血、粒细胞、血小板减少，由于细胞、血小板减少，由于M蛋白增蛋白增高，引起血粘增加，或沉积于肾小高，引起血粘增加，或沉积于肾小管中，造成肾小管上皮细胞淀粉样管中，造成肾小管上皮细胞淀粉样变性，发生肾病综合征，严重时可变性，发生肾病综合
11、征，严重时可导致肾衰。血粘增高可引起神经功导致肾衰。血粘增高可引起神经功能障碍。能障碍。(3)、骨髓瘤细胞浸润其它组织时，、骨髓瘤细胞浸润其它组织时，可引起其相关组织或器官的病变。可引起其相关组织或器官的病变。15免疫增殖病的检测方法(三)、分类根据M蛋白的类别不同可分为：IgG型：约占5060%IgA型：约占2025%IgD型约：占12%IgE型约：罕见根据浆细胞合成功能不全分类可分为：轻链病和重链病16免疫增殖病的检测方法二、原发性巨球蛋白血症二、原发性巨球蛋白血症 是一种伴有血清是一种伴有血清IgM增加增加的的B细胞增殖病。病因不明。细胞增殖病。病因不明。临床症状：主要表现为临床症状：主
12、要表现为IgM过多所致的血液高粘性综合过多所致的血液高粘性综合征，另外贫血、肝脾、淋巴征，另外贫血、肝脾、淋巴结肿大、反复感染也常见。结肿大、反复感染也常见。17免疫增殖病的检测方法三、重链病三、重链病 由于浆细胞发生突变并异由于浆细胞发生突变并异常增殖，合成功能障碍，只产常增殖，合成功能障碍，只产生免疫球蛋白的重链或有缺陷生免疫球蛋白的重链或有缺陷的重链，不能与轻链组成完整的重链，不能与轻链组成完整的免疫球的免疫球 蛋白分子，致使血清蛋白分子，致使血清中和尿中出现大量游离的无免中和尿中出现大量游离的无免疫功能的重链，称为重链病。疫功能的重链，称为重链病。18免疫增殖病的检测方法四、良性单克隆
13、丙种球蛋白病四、良性单克隆丙种球蛋白病 是指血清中出现是指血清中出现M蛋白，蛋白，而不伴有浆细胞恶而不伴有浆细胞恶 性增殖的性增殖的疾病。本病一般无症状，往疾病。本病一般无症状，往往因其它疾病就诊时发现血往因其它疾病就诊时发现血中有中有M蛋白。如果尿中出现蛋白。如果尿中出现本本-周氏蛋白则是危险信号。周氏蛋白则是危险信号。19免疫增殖病的检测方法第四节第四节 免疫检测方法免疫检测方法 免疫球蛋白异常增免疫球蛋白异常增生病的实验室诊断主生病的实验室诊断主要依靠血液学和免疫要依靠血液学和免疫学手段，其中免疫学学手段，其中免疫学检测尤为重要。常用检测尤为重要。常用以下方法进行检测：以下方法进行检测：
14、20免疫增殖病的检测方法一、血清蛋白区带电泳一、血清蛋白区带电泳 蛋白质区带电泳是血清蛋白质区带电泳是血清蛋白的经典分析方法，血清蛋白的经典分析方法，血清(或尿液或尿液)标本中不同性质的蛋标本中不同性质的蛋白质可明显分开形成不同的白质可明显分开形成不同的区带，通过正常的电泳图谱区带，通过正常的电泳图谱进行比较分析，可发现患进行比较分析，可发现患 者者电泳图谱有一狭窄而浓缩的电泳图谱有一狭窄而浓缩的集中带，即集中带，即M区带。如下图区带。如下图21免疫增殖病的检测方法22免疫增殖病的检测方法二、免疫球蛋白定量测定二、免疫球蛋白定量测定 常用单向扩散法和免疫常用单向扩散法和免疫浊度法。恶浊度法。恶
15、 性单克隆丙种性单克隆丙种球蛋白病呈现某一类丙种球球蛋白病呈现某一类丙种球蛋白的显著增高蛋白的显著增高(30mg/ml)。良性单克隆丙种球蛋白病增良性单克隆丙种球蛋白病增高不显著，一般在高不显著，一般在20mg/ml以下。以下。23免疫增殖病的检测方法25免疫增殖病的检测方法图26-326免疫增殖病的检测方法1、如果待测标本与某型球如果待测标本与某型球蛋白重链及轻链抗血清产生蛋白重链及轻链抗血清产生相同迁移度的特殊沉淀弧，相同迁移度的特殊沉淀弧，提示存在单克隆丙种球蛋白提示存在单克隆丙种球蛋白(M蛋白蛋白)，此现象多见于，此现象多见于IgG、IgA、IgM型多发性型多发性骨髓瘤或原发性巨蛋白血
16、症。骨髓瘤或原发性巨蛋白血症。27免疫增殖病的检测方法2、在同一抗轻链血清的、在同一抗轻链血清的反应中，同时出现两条相反应中，同时出现两条相邻的特殊沉淀弧，则可能邻的特殊沉淀弧，则可能是除是除M蛋白外还存在游离蛋白外还存在游离轻，偶尔也可见两种轻，偶尔也可见两种M蛋蛋白，此时应进一歩测定尿白，此时应进一歩测定尿中的本中的本-周蛋白。周蛋白。28免疫增殖病的检测方法3、患者血清仅与其中患者血清仅与其中一种抗轻链抗血清产生一种抗轻链抗血清产生一种特殊的沉淀弧，而一种特殊的沉淀弧，而其它五种抗血清均不产其它五种抗血清均不产生沉淀弧，这种情况可生沉淀弧，这种情况可能是：能是：29免疫增殖病的检测方法(
17、1)伴有肾功能不全的轻链病，伴有肾功能不全的轻链病，游离轻链较少从尿中排出而游离轻链较少从尿中排出而滞留于血液中；滞留于血液中；(2)存在轻链的四分子多聚体，存在轻链的四分子多聚体，分子量大，不易从尿中排出分子量大，不易从尿中排出而存于血液中；而存于血液中；(3)尚未发现的新重链的免疫尚未发现的新重链的免疫球蛋白。球蛋白。30免疫增殖病的检测方法4、若患者血清只与、若患者血清只与IgG、IgA或或 IgM中的一种抗重血中的一种抗重血清产生特殊沉淀弧，但在两清产生特殊沉淀弧，但在两抗轻链抗血清中无沉淀弧，抗轻链抗血清中无沉淀弧，提示可能存在重链病。提示可能存在重链病。5、非分泌型骨髓瘤血清标、非
18、分泌型骨髓瘤血清标本在免疫电泳中均不出现特本在免疫电泳中均不出现特殊沉淀弧。殊沉淀弧。31免疫增殖病的检测方法(二二)免疫选择电泳免疫选择电泳将含抗将含抗k或或r 血清的琼脂制成薄血清的琼脂制成薄层琼脂板，打孔后加入待测血层琼脂板，打孔后加入待测血清进行火箭电泳，与标本相应清进行火箭电泳，与标本相应的免疫球蛋白形成火箭样沉淀的免疫球蛋白形成火箭样沉淀峰。然后于孔的两侧各挖一槽，峰。然后于孔的两侧各挖一槽，加入某型免疫球蛋白的抗血清加入某型免疫球蛋白的抗血清或另一型轻抗血，温育扩散后，或另一型轻抗血，温育扩散后，按沉淀弧形成的情况，进行鉴按沉淀弧形成的情况，进行鉴定定。32免疫增殖病的检测方法3
19、3免疫增殖病的检测方法(三三)免疫固定电泳免疫固定电泳将待测血清或其它标本在琼脂平将待测血清或其它标本在琼脂平板上作区带电泳，分离后于其上板上作区带电泳，分离后于其上覆盖含抗覆盖含抗k或或r轻链或各类重链的轻链或各类重链的抗血清滤纸，当抗体与某区带中抗血清滤纸，当抗体与某区带中的单克隆免疫球蛋白结合后，便的单克隆免疫球蛋白结合后，便形成复合物而沉淀下来，再通过形成复合物而沉淀下来，再通过漂洗与染色，呈现浓而狭窄的着漂洗与染色，呈现浓而狭窄的着色区带，即可判断单克隆丙种球色区带，即可判断单克隆丙种球蛋白的轻链或重链型别。蛋白的轻链或重链型别。34免疫增殖病的检测方法35免疫增殖病的检测方法（四）
20、其它检测方法（四）其它检测方法本周蛋白检测：多发性骨髓本周蛋白检测：多发性骨髓病阳性率极高病阳性率极高 本周蛋白在本周蛋白在PH5.0的条件的条件下，加热至下，加热至5060C时出现沉时出现沉淀，继续加热至淀，继续加热至90C后又重后又重新溶解。根据这种理化性质，新溶解。根据这种理化性质，又将其称为凝溶蛋白。又将其称为凝溶蛋白。36免疫增殖病的检测方法小结：小结：1、掌握免疫增殖病的定义、掌握免疫增殖病的定义2、熟悉免疫增殖病的免疫损、熟悉免疫增殖病的免疫损伤机制伤机制3、熟悉常见的免疫增殖病的、熟悉常见的免疫增殖病的临床表现及免疫学特征临床表现及免疫学特征4、掌握免疫增殖病的免疫学、掌握免疫增殖病的免疫学检验检验37免疫增殖病的检测方法
