1、定性免疫学检验的性能验定性免疫学检验的性能验证与质量控制证与质量控制ISO15189认可中大家到困惑的问题认可中大家到困惑的问题 定性免疫项目如：定性免疫项目如：ELISA检测、自身抗体检测、自身抗体免疫印迹试验、抗核抗体免疫荧光（免疫印迹试验、抗核抗体免疫荧光（IIF）检测）检测质量控制和性能验证及验证内容？如何做？标质量控制和性能验证及验证内容？如何做？标准？准？235.5.1.1 5.5.1.1 检验方法和程序的分析性能验证内容检验方法和程序的分析性能验证内容应参考应参考试剂盒说明书上明确标示的性能参数进行验证试剂盒说明书上明确标示的性能参数进行验证，至少，至少应包括：应包括：检出限检出
2、限、符合率符合率（采用国家标准血清盘或临（采用国家标准血清盘或临床诊断明确的阴阳性样品各床诊断明确的阴阳性样品各2020份或与其他分析方法比份或与其他分析方法比对），对），如为定量方法应验证精密度（包括重复性和中如为定量方法应验证精密度（包括重复性和中间精密度）间精密度）；并应明确检验项目的预期用途，如；并应明确检验项目的预期用途，如筛查筛查、诊断诊断、确认确认。5.5 检验程序检验程序CNAS-CL39：2012医学实验室质量和能力认可准则在临床医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学检验领域的应用说明免疫学检验领域的应用说明-2014改版改版4n 试剂盒说明书（先决条件！）试剂盒说明书（先
3、决条件！）n 国际和或国内标准国际和或国内标准性能验证的合格标准从何而来？性能验证的合格标准从何而来？567n筛查试验筛查试验n诊断试验诊断试验n确认实验确认实验nC50C50nC5C5nC95C95概念准备概念准备8n筛查试验用于检测整个人群或部分人群中分析物的筛查试验用于检测整个人群或部分人群中分析物的存在情况。存在情况。n一般而言，筛查试验应当具有较高的临床敏感性（一般而言，筛查试验应当具有较高的临床敏感性（即临床检出率大于即临床检出率大于95%95%），对其特异性的要求（和阳），对其特异性的要求（和阳性预测值）则取决于对各种因素的综合考虑。性预测值）则取决于对各种因素的综合考虑。如粪便
4、隐血检测如粪便隐血检测筛查试验筛查试验9n用于临床怀疑某种特定疾病或状况是否存在。用于临床怀疑某种特定疾病或状况是否存在。n诊断试验需具有良好的敏感性和特异性。诊断试验需具有良好的敏感性和特异性。n诊断试验后如需进行确认试验，对诊断试验的特诊断试验后如需进行确认试验，对诊断试验的特异性要求可以稍微降低。异性要求可以稍微降低。如各种微生物培养如各种微生物培养诊断试验诊断试验10n确认试验用于验证筛查试验或者诊断试验结果的确确认试验用于验证筛查试验或者诊断试验结果的确认。认。n对于确认试验，特异性比敏感性更为重要。对于确认试验，特异性比敏感性更为重要。如梅毒密螺旋体抗体荧光吸收试验（如梅毒密螺旋体
5、抗体荧光吸收试验（FTA-ABSFTA-ABS）确认试验确认试验11n一份样本，在多次重复实验中各有一份样本，在多次重复实验中各有50%50%的几率获得的几率获得阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。临界点（临界点（C50）浓度的定义）浓度的定义C5012n这里的这里的C50C50指的是一个处于试剂检测临界点的样本指的是一个处于试剂检测临界点的样本浓度，其一旦确定，是不变的。浓度，其一旦确定，是不变的。n试剂盒试剂盒CUT-OFFCUT-OFF值指的是一个判断某一次测定结果值指的是一个判断某一次测定结果的由阴性和阳性对照信号值按一定公式计算出来的信的由阴性和阳性对
6、照信号值按一定公式计算出来的信号值，每次测定都会有所差异。号值，每次测定都会有所差异。C50与试剂盒阳性反应判断值（与试剂盒阳性反应判断值（CUT-OFF值）的区别值）的区别13n一份样本，在多次重复实验中有一份样本，在多次重复实验中有95%95%的几率获得阴的几率获得阴性结果时该分析物的性结果时该分析物的浓度浓度。C5 浓度的定义浓度的定义C514n一份样本，在多次重复实验中有一份样本，在多次重复实验中有95%95%的几率获得阳的几率获得阳性结果时该分析物的浓度。性结果时该分析物的浓度。C95 浓度的定义浓度的定义C9515n应熟悉待验证的试剂或系统应熟悉待验证的试剂或系统n进行必要的培训，
7、包括样本的处理和储存、试剂的进行必要的培训，包括样本的处理和储存、试剂的处理和储存、合理的检测方案、对结果合理的解释以处理和储存、合理的检测方案、对结果合理的解释以及系统的质量控制等。及系统的质量控制等。n制定质量保证计划制定质量保证计划n确定患者样本的数量及强弱（评价重复性）确定患者样本的数量及强弱（评价重复性）n确定比较的方法确定比较的方法性能验证专业知识技能准备性能验证专业知识技能准备16n质控品：可为商品质控品，有阳性和阴性。质控品：可为商品质控品，有阳性和阴性。nC50C50和可能的和可能的C5C5（低于（低于C50C50浓度浓度20%20%）及）及C95C95浓度样本浓度样本（高于
8、（高于C50C50浓度浓度20%20%）：用于重复性及最低检出限验：用于重复性及最低检出限验证，不少于证，不少于4040次检测量）次检测量）n临床样本或血清盘（准确性验证）（不少于临床样本或血清盘（准确性验证）（不少于5050份阳份阳性和阴性样本）性和阴性样本）样本准备样本准备17n进行重复性研究时，理想情况下需绘制在规定条件下候选方进行重复性研究时，理想情况下需绘制在规定条件下候选方法的整个不精密度曲线，然而具体操作时法的整个不精密度曲线，然而具体操作时需要检测的样本数需要检测的样本数量较大量较大n可使用一个可使用一个简单的方法简单的方法，即为待评价的检测方法建立分析物，即为待评价的检测方法
9、建立分析物的临界浓度，并判定某一特定浓度范围，例如的临界浓度，并判定某一特定浓度范围，例如C50C5020%20%，是，是否包含了否包含了C5-C95C5-C95区间区间。n若若-20%-20%到到+20%+20%浓度范围包含了浓度范围包含了C5-C95C5-C95区间，那么区间，那么20%20%或距离或距离C50C50更远浓度的样本更远浓度的样本将得到一致的检测结果将得到一致的检测结果，即在，即在 C5-C95 C5-C95区区间之外的样本检测结果可认为是精密的，浓度间之外的样本检测结果可认为是精密的，浓度C95C95，将持续，将持续得到阳性结果，浓度得到阳性结果，浓度C5C5，将持续得到阴
10、性结果。，将持续得到阴性结果。20%20%仅用于举例，实验室也可根据检验目的和可接受的精密度选择仅用于举例，实验室也可根据检验目的和可接受的精密度选择10%10%或或30%30%。分析物浓度接近分析物浓度接近C50的定性方法精密度试验的定性方法精密度试验 18n评价定性检测试剂或系统精密度时，评价定性检测试剂或系统精密度时，需采用浓度接需采用浓度接近临界值的分析物作为检测材料近临界值的分析物作为检测材料，不宜采用阴性低值，不宜采用阴性低值或强阳性样本来评价定性检测方法的不精密度。或强阳性样本来评价定性检测方法的不精密度。n定性测定精密度分析质量指标为定性测定精密度分析质量指标为C5-C95C5
11、-C95浓度区间（浓度区间（亦即亦即“灰区灰区”），），这一区间范围这一区间范围C50C5020%20%。只提供两种检测结果只提供两种检测结果(-/+)的定性检测的精密度的定性检测的精密度19分析物浓度接近临界值时的不精密度曲线分析物浓度接近临界值时的不精密度曲线20两种不同方法的不精密度曲线比较两种不同方法的不精密度曲线比较21n检测试剂或系统的说明书可能会注明分析物的临界检测试剂或系统的说明书可能会注明分析物的临界浓度，但需验证。浓度，但需验证。n如果临界浓度未知，则可以将阳性样本进行一系列如果临界浓度未知，则可以将阳性样本进行一系列稀释，然后将他们进行重复检测以确定能够获得稀释，然后将他
12、们进行重复检测以确定能够获得50%50%阳性和阳性和50%50%阴性结果的那个稀释度。这一稀释度的分阴性结果的那个稀释度。这一稀释度的分析物浓度即为临界点（析物浓度即为临界点（C50C50）。）。如何获得系统或试剂的如何获得系统或试剂的“临界点（临界点（C50）”CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance;Approved Guideline22C50是否准确？是否准确？40次测试 C501阳性结果=27/40(67.5%)2阳性结果（14-26）/40（35%-65%）正确23不同不同C5
13、0重复检测次数与检出阳性数的关系重复检测次数与检出阳性数的关系24如何获得系统或试剂的如何获得系统或试剂的“临界点（临界点（C50）”2526n制备评价用样本制备评价用样本 制备制备3 3份样本。一份浓度为份样本。一份浓度为C50C50，一份为，一份为C50+20%C50+20%，一份为，一份为C50-20%C50-20%。每份样本的体积需保证每份样本的体积需保证4040次或更多次重复检测的次或更多次重复检测的需要。需要。n评价方法评价方法 每份样本检测每份样本检测4040次，确定每一份样本结果为阳性次，确定每一份样本结果为阳性和阴性的百分比。和阴性的百分比。试验步骤试验步骤 27-20%-2
14、0%+20%+20%浓度范围在浓度范围在C5-C95C5-C95区间之内；用该方法检测，浓度超过区间之内；用该方法检测，浓度超过C50C5020%20%的样的样本检测结果不一致；此结论错误率本检测结果不一致；此结论错误率5%5%，需使用更宽浓度范围的样本（如，需使用更宽浓度范围的样本（如30%30%）进行另外的试验。进行另外的试验。结果判断结果判断-1 28-20%-20%+20%+20%浓度范围包含了浓度范围包含了C5-C95C5-C95区间；用该方法检测，浓度超过区间；用该方法检测，浓度超过C50C5020%20%的样的样本检测结果一致本检测结果一致结果判断结果判断-229用该方法检测，用
15、该方法检测，C50+20%C50+20%的样本检测结果一致，的样本检测结果一致，C50-20%C50-20%的样本不一定能得到一致的样本不一定能得到一致结果；需要用低于结果；需要用低于C50C50更大百分率浓度的样本（如更大百分率浓度的样本（如-30%-30%）进行补充试验。）进行补充试验。结果判断结果判断-330用该方法检测，用该方法检测，C50-20%C50-20%的样本检测结果一致，的样本检测结果一致，C50+20%C50+20%的样本不一定能得到一致的样本不一定能得到一致结果；需要用高于结果；需要用高于C50C50更大百分率浓度的样本（如更大百分率浓度的样本（如+30%+30%）进行补
16、充试验。）进行补充试验。结果判断结果判断-431n检测限（检测限（limit of detectionlimit of detection）是指检测方法可检）是指检测方法可检测出的最低被测量浓度，也称检测低限（测出的最低被测量浓度，也称检测低限（lower lower limit of detectionlimit of detection）或最小检出浓度（）或最小检出浓度（minimum minimum detectable concentrationdetectable concentration），），有时也称为分析灵有时也称为分析灵敏度敏度（analytical sensitivity
17、analytical sensitivity）。）。n如前所述，分析物浓度位于如前所述，分析物浓度位于C5-C95C5-C95区间之外（小于区间之外（小于C5C5或大于或大于C95C95）时，候选方法对同一样本的重复性检）时，候选方法对同一样本的重复性检测将得到相同结果。因此，测将得到相同结果。因此，C95C95代表了某一试剂可以代表了某一试剂可以测出的最低被测量浓度测出的最低被测量浓度。检出限的验证检出限的验证32n评估试剂分析敏感性所使用的样本，如检测项目有评估试剂分析敏感性所使用的样本，如检测项目有国家参考品，则可使用国家参考品或经国家参考品标国家参考品，则可使用国家参考品或经国家参考品
18、标化的参考品进行检测，如没有国家参考品，则使用可化的参考品进行检测，如没有国家参考品，则使用可以溯源或量化的样本，如国际标准物质，或与国际标以溯源或量化的样本，如国际标准物质，或与国际标准物质溯源的样本，是更有意义的。准物质溯源的样本，是更有意义的。n处于测定下限浓度（如处于测定下限浓度（如C95C95）的样本，重复检测）的样本，重复检测2020次，应至少有次，应至少有1818次以上为阳性反应。次以上为阳性反应。检出限的验证检出限的验证3334概概 述述 特定的定性免疫测定系统或试剂的特定的定性免疫测定系统或试剂的准确度以与准确度以与临临床诊断床诊断、金标准方法金标准方法和和经过验证确认血清样
19、本盘的检经过验证确认血清样本盘的检测测比较来评价，常以比较来评价，常以敏感性敏感性（包括临床敏感性）（包括临床敏感性）/特特异性异性（包括临床特异性）和（包括临床特异性）和阳性符合率阳性符合率/阴性符合率阴性符合率来表示。来表示。准确度验证准确度验证35n临床敏感性：在患有明确临床疾病的患者中，其检临床敏感性：在患有明确临床疾病的患者中，其检测结果呈阳性或者超过正常值范围的比率测结果呈阳性或者超过正常值范围的比率 （即出现（即出现阳性结果和确定患者患病）；注：该临床疾病必须由阳性结果和确定患者患病）；注：该临床疾病必须由不依赖于被评价试验的标准确定。不依赖于被评价试验的标准确定。n临床特异性：
20、在没有特定临床疾病的患者中，其检临床特异性：在没有特定临床疾病的患者中，其检测结果呈阴性或者在正常值范围内的比率。测结果呈阴性或者在正常值范围内的比率。临床特异性和临床敏感性临床特异性和临床敏感性36研究人群研究人群 有一些研究的人群，仅包括健康人群和疾病严重的有一些研究的人群，仅包括健康人群和疾病严重的人群，而忽略了介于两种状态之间的人群和一些不典人群，而忽略了介于两种状态之间的人群和一些不典型的患病人群。将这部分人群剔除在研究人群之外，型的患病人群。将这部分人群剔除在研究人群之外，会优化评价的结果，造成试剂在实际应用当中结果简会优化评价的结果，造成试剂在实际应用当中结果简单明确的假象。因此
21、，研究人群最好符合以下要求：单明确的假象。因此，研究人群最好符合以下要求：涵盖疾病的各个阶段；涵盖疾病的各个阶段；涵盖一些不典型的、较难诊断的患病人群；涵盖一些不典型的、较难诊断的患病人群；各组不同特征的人群均需有一定的数量。各组不同特征的人群均需有一定的数量。总之，研究的人群要能够代表该检测系统或试剂总之，研究的人群要能够代表该检测系统或试剂预期使用的人群，否则给出的数据将存在偏倚。预期使用的人群，否则给出的数据将存在偏倚。临床特异性和临床敏感性临床特异性和临床敏感性37n阳性结果的可靠性（阳性结果的可靠性（预示值预示值）：即测定为阳性）：即测定为阳性的标本实际上为阳性的可能性。的标本实际上
22、为阳性的可能性。=真阳性真阳性/（真阳性（真阳性+假阳性）假阳性）100%100%n阴性结果的可靠性阴性结果的可靠性:则为一份给出阴性结果的样本则为一份给出阴性结果的样本实际上为阴性的可靠性。实际上为阴性的可靠性。=真阴性真阴性/（真阴性（真阴性+假阴性）假阴性）100%100%临床特异性和临床敏感性临床特异性和临床敏感性38试剂的检测结果试剂的检测结果 共计共计分析物阳性分析物阳性分析物阴性分析物阴性阳性结果数阳性结果数TPFPTP+FP阴性结果数阴性结果数FNTNFN+TN共计共计TP+FNFP+TNTP+FP+FN+TN敏感性敏感性100%特异性特异性100%阳性预测值阳性预测值100%
23、阴性预测值阴性预测值100%符合率符合率100%注注1:式中：式中：TP分析物存在时检测结果为阳性的数量。分析物存在时检测结果为阳性的数量。FP分析物不存在时结果为阳性的数量。分析物不存在时结果为阳性的数量。TN分析物不存在时检测结果为阴性的数量。分析物不存在时检测结果为阴性的数量。FN分析物存在时检测结果为阴性的数量。分析物存在时检测结果为阴性的数量。FNTPTPFPTNTNFPTPTPFNTNTNFNTNFPTPTPTN表表1:敏感性、特异性和阳性预测值、阴性预测值的计算敏感性、特异性和阳性预测值、阴性预测值的计算39n作为筛查试验，检测的作为筛查试验，检测的敏感性敏感性应应95%95%。
24、作为诊断试。作为诊断试验，检测验，检测敏感性和特异性敏感性和特异性均应均应95%95%。作为确认试验特。作为确认试验特异性应异性应98%-99%98%-99%。定性免疫检验项目敏感性、特异性要求定性免疫检验项目敏感性、特异性要求40建议使用计分可信区间建议使用计分可信区间以上公式中，以上公式中，1.961.96是从标准正态分布对应的是从标准正态分布对应的9595可信区间可信区间得来的。若置信水平改变，则得来的。若置信水平改变，则1.961.96也应被相应的百分位点也应被相应的百分位点所替代。所替代。41敏感性、特异性的计算举例敏感性、特异性的计算举例表：待评价试剂与诊断标准相比较进行敏感性、特
25、异性的计算举例表：待评价试剂与诊断标准相比较进行敏感性、特异性的计算举例待评价试剂的检测结果待评价试剂的检测结果诊断标准诊断标准 分析物存在分析物存在分析物不存在分析物不存在总计总计阳性结果数阳性结果数88290阴性结果数阴性结果数14336350共计共计102338440n敏感性敏感性=100%=100%88/102=86.3%88/102=86.3%n特异性特异性=100%=100%336/338=99.4%336/338=99.4%n敏感性和特异性的95%置信区间为敏感性(74.3%,93.2%)和特异性(96.7%,99.9%)。42概概 述述n如果如果没有可用的诊断标准没有可用的诊断
26、标准，那么厂家需提供待评价，那么厂家需提供待评价试剂试剂与某一已验证方法进行比较与某一已验证方法进行比较的结果，在这种情况的结果，在这种情况下，则不能够计算敏感性和特异性，而是计算阳性符下，则不能够计算敏感性和特异性，而是计算阳性符合率和阴性符合率。合率和阴性符合率。n这种计算反映的并非方法的准确度，而是这种计算反映的并非方法的准确度，而是待评价试待评价试剂和已验证方法的一致性程度剂和已验证方法的一致性程度。阳性符合率和阴性符合率阳性符合率和阴性符合率43表：待评价试剂与已验证方法相比较进行阳性符合率和阴性符合率的计算表：待评价试剂与已验证方法相比较进行阳性符合率和阴性符合率的计算阳性符合率和
27、阴性符合率的计算阳性符合率和阴性符合率的计算待评价试剂的检测结果待评价试剂的检测结果已验证方法已验证方法+-+ab-cd共计共计a+cb+d阳性符合率阳性符合率=a/(a+c)=a/(a+c)100%100%。阴性符合率阴性符合率=d/(b+d)=d/(b+d)100%100%。总符合率总符合率=(a+d)/(a+b+c+d)=(a+d)/(a+b+c+d)100%100%。n需要特别说明的是，阳性符合率可以解释为已验证方法检测结果为阳性需要特别说明的是，阳性符合率可以解释为已验证方法检测结果为阳性的样本中待评价试剂的阳性率，的样本中待评价试剂的阳性率，44表：待评价试剂与已验证方法相比较进行
28、阳性符合率和阴性符合率的计表：待评价试剂与已验证方法相比较进行阳性符合率和阴性符合率的计算举例算举例阳性符合率和阴性符合率的计算举例阳性符合率和阴性符合率的计算举例待评价试剂的检测结果已验证方法总计+-+801090-8342350共计88352440阳性符合率阳性符合率=80/88=80/88 100%=90.9%100%=90.9%。阴性符合率阴性符合率=342/352=342/352 100%=97.2%100%=97.2%总符合率总符合率=(80+342)/440=(80+342)/440 100%=95.9%100%=95.9%95%置信区间为：敏感性(78.8%,96.4%)和特异
29、性(93.5%,98.8%)。45n每次实验，应立即记录所有原始检测数据并复核，每次实验，应立即记录所有原始检测数据并复核，以早期发现分析系统及人为误差的来源。以早期发现分析系统及人为误差的来源。n一旦发现某些结果是由可解释的误差引起的，则应一旦发现某些结果是由可解释的误差引起的，则应将其记录下来，同时，这些结果不能用于数据分析。将其记录下来，同时，这些结果不能用于数据分析。n如不能确定误差产生的原因，则保留原始结果。如不能确定误差产生的原因，则保留原始结果。数据收集的检查数据收集的检查 46n第三方质控品第三方质控品n检测系统配套质控品检测系统配套质控品n自制质控品自制质控品质控品的来源质控
30、品的来源5.6 检验结果质量的保证检验结果质量的保证-室内质控室内质控47n基质：应尽量选择人血清基质，工程菌或动物源性基质：应尽量选择人血清基质，工程菌或动物源性的基质由于人体内有大量的异嗜性抗体的存在引起非的基质由于人体内有大量的异嗜性抗体的存在引起非特异或中和反应造成假失控。稀释液也应用人血清，特异或中和反应造成假失控。稀释液也应用人血清，冻干品复溶可以使用生理盐水，避免使用动物源性的冻干品复溶可以使用生理盐水，避免使用动物源性的小牛血清等。小牛血清等。n稳定性：室内质控需要观察一段时间，一般选择生稳定性：室内质控需要观察一段时间，一般选择生产者声明在一定保存条件下如产者声明在一定保存条
31、件下如2-82-8或或-20-20以下有效以下有效期为期为6 6个月以上个月以上。要特别注意开瓶有效期和冻干质控。要特别注意开瓶有效期和冻干质控物复溶后分装瓶的有效期与原装瓶有效期的区别，通物复溶后分装瓶的有效期与原装瓶有效期的区别，通常前二者的有效期要短许多。常前二者的有效期要短许多。实验室应对这些有效期实验室应对这些有效期进行验证。进行验证。5.6 检验程序的质量控制检验程序的质量控制质控物的选择质控物的选择 48n质控物数量、实验位置和频次：质控物数量应满足质控物数量、实验位置和频次：质控物数量应满足一个批号至少半年的实验量。每分析批至少安排一个一个批号至少半年的实验量。每分析批至少安排
32、一个弱阳性弱阳性和一个和一个阴性阴性质控，检测位置不能固定而应随机质控，检测位置不能固定而应随机放置。放置。n试剂盒所设的试剂盒所设的阴、阳性内对阴、阳性内对照照是用来计算是用来计算CUT OFFCUT OFF值或阈值值或阈值的，也有相应的有效性判断标准，但只能在的，也有相应的有效性判断标准，但只能在同批号试剂内使用，同批号试剂内使用，不能作为质控指标不能作为质控指标，质控必须是质控必须是可以监控到不同批号试剂间的变化的外对照。可以监控到不同批号试剂间的变化的外对照。质控物的选择质控物的选择 49n高值或超高值阳性血清是用来监控高值或超高值阳性血清是用来监控“HOOKHOOK效应效应”的的，应
33、该在引进分析方法或试剂盒时评价，不需要长期，应该在引进分析方法或试剂盒时评价，不需要长期监控，同时其测定值远高于监控，同时其测定值远高于CUT OFF CUT OFF 值对边缘结果的值对边缘结果的监控也无任何价值。监控也无任何价值。质控物的选择质控物的选择 50o质控品水平：质控品水平：n 阴性质控品阴性质控品：特定项目人阴性血清混合物（若为：特定项目人阴性血清混合物（若为ELISA或或CLIA质控品浓度宜质控品浓度宜0.5倍临界值左右）倍临界值左右）n 阳性质控品阳性质控品：特定项目人阳性血清混合物：特定项目人阳性血清混合物o ANA 1:1000o anti-dsDNA 1:100或以上或
34、以上o anti-ENA 中强度阳性：若组合式检测，至少有中强度阳性：若组合式检测，至少有2个项目为阳性个项目为阳性质控物的选择质控物的选择 51o 质控品水平：质控品水平：n 弱阳性质控品弱阳性质控品：o ELISA、CLIA：临界值：临界值24倍的样本倍的样本o IIF:比临界值高比临界值高1个滴度。特定项目人阳性血清或阴阳个滴度。特定项目人阳性血清或阴阳性血清混合物。性血清混合物。nANA：1：1001:320，ANA模型：斑点型，或均质模型：斑点型，或均质型，或核仁型，或胞浆型等（可以每型，或核仁型，或胞浆型等（可以每6个月变换，存储质控个月变换，存储质控品至少有品至少有2个模型！）个
35、模型！）nanti-dsDNA：1:101:32nanti-ENA：低度阳性或：低度阳性或临界值临界值24倍的样本倍的样本（若组合式（若组合式检测，至少有检测，至少有2个项目为弱阳性）个项目为弱阳性）质控物的选择质控物的选择 52大量的临床免疫项目无商品化的质控物供应，实验室大量的临床免疫项目无商品化的质控物供应，实验室需自制，其步骤为：需自制，其步骤为：1 1 收集阳性血清收集阳性血清(无明显溶血、黄胆、脂肪血和污染血清无明显溶血、黄胆、脂肪血和污染血清)到到一定量（至少够本室使用一定量（至少够本室使用6 6个月以上的量）；个月以上的量）；2 2 传染性病原体需经传染性病原体需经5656、1
36、010小时灭活后使用；小时灭活后使用；3 0.2m3 0.2m生物滤膜过滤，去除纤维沉淀物和细菌；生物滤膜过滤，去除纤维沉淀物和细菌；4 4 稀释，用正常人血清稀释；稀释，用正常人血清稀释；5 IIF5 IIF方法方法ANAANA弱阳性弱阳性质控质控品（均质型），将混合血清浓度调品（均质型），将混合血清浓度调整到其整到其临界值（临界值（1:1001:100）或高）或高1 1个滴度（个滴度（1:3201:320）或之间）或之间；6 6 测定值，与定值参考品进行对比、求值，无参考品时选择测定值，与定值参考品进行对比、求值，无参考品时选择在在2 2-4-4倍倍Cut OffCut Off值值附近的阳
37、性值；附近的阳性值；6 6 分装小瓶（每日用量），加盖、贴签，分装小瓶（每日用量），加盖、贴签，-20-20冻存备用；冻存备用；7 7 稳定性及瓶间差评价。稳定性及瓶间差评价。自制质控品自制质控品53n 不同保存条件下不同保存条件下 以数值计算方法：以数值计算方法：抽样方法同均一性抽样方法同均一性 2-8 2-8：CVCV值、累计值、累计CVCV值，稳定期值，稳定期 -80 -80：CVCV值、累计值、累计CVCV值，稳定期值，稳定期 室温：室温：CVCV值、累计值、累计CVCV值，稳定期值，稳定期 以定性判定方法：以定性判定方法：抽样方法同均一性抽样方法同均一性 2-8 2-8：滴度的符合率
38、，累计符合率，稳定期：滴度的符合率，累计符合率，稳定期 -80 -80：滴度的符合率，累计符合率，稳定期：滴度的符合率，累计符合率，稳定期 室温：滴度的符合率，累计符合率，稳定期室温：滴度的符合率，累计符合率，稳定期质控品稳定性的评价质控品稳定性的评价1 1）均一性评估：同批号质控品随机抽取）均一性评估：同批号质控品随机抽取5 5支（瓶），支（瓶），80%80%符合为合格。符合为合格。2 2）稳定性评估：评估）稳定性评估：评估1 1周，周，1 1月，月，3 3月，月，6 6月，月，1 1年。有效期一般可标定为年。有效期一般可标定为1 1年。年。54o纯定性试验：纯定性试验：如免疫印迹、斑点渗滤
39、等，除膜条如免疫印迹、斑点渗滤等，除膜条本身的内对照外：本身的内对照外：n 每检测日或分析批，应使用弱阳性和阴性质控品两每检测日或分析批，应使用弱阳性和阴性质控品两个水平进行质控。个水平进行质控。n 质控判定规则质控判定规则o 阴性质控品的检测结果为阴性阴性质控品的检测结果为阴性o 弱阳性质控品的检测结果为弱阳性弱阳性质控品的检测结果为弱阳性纯定性试验的质控要求纯定性试验的质控要求如：抗如：抗ENA抗体谱检测抗体谱检测55o以滴度或稀释度判定的试验：如间接免疫荧光法、凝集试验以滴度或稀释度判定的试验：如间接免疫荧光法、凝集试验等，等，n 每检测日或分析批，应使用弱阳性和阴性质控品两个每检测日或
40、分析批，应使用弱阳性和阴性质控品两个水平进行质控。水平进行质控。n 质控判定规则：质控判定规则：o 阴性质控结果为阴性阴性质控结果为阴性o 弱阳性质控结果在弱阳性质控结果在靶值上下一个滴度或稀释度靶值上下一个滴度或稀释度纯定性试验的质控要求纯定性试验的质控要求如：ANA、anti-dsDNA、ANCA、AMA、SMA等56o 用数值判定结果的试验：如用数值判定结果的试验：如ELISAELISA、CLIACLIA等。等。n 浓度：弱阳性质控品浓度宜在浓度：弱阳性质控品浓度宜在2 24 4倍临界值左右，阴倍临界值左右，阴性质控品浓度宜性质控品浓度宜0.50.5倍临界值左右（两个水平）。倍临界值左右
41、（两个水平）。n 频次：若是频次：若是ELISAELISA应每板做质控，若是应每板做质控，若是CLIACLIA每分析批做每分析批做质控。质控。n 质控判定规则：至少利用其多规则中一个偶然误差及一质控判定规则：至少利用其多规则中一个偶然误差及一个系统误差规则。个系统误差规则。12s警告，警告，13s和和22s失控失控。纯定性试验的质控要求纯定性试验的质控要求如：如：anti-PR3anti-PR3、ACLACL、anti-CCPanti-CCP等等57n发现问题发现问题n分析问题产生的原因分析问题产生的原因n采取纠正措施加以改进，进而预防采取纠正措施加以改进，进而预防n验证和追踪验证和追踪 避免
42、同样的问题出现第二次！避免同样的问题出现第二次！失控原因分析及处理失控原因分析及处理58n阳性质控品阳性质控品失控的常见原因失控的常见原因:污染、温育时间不污染、温育时间不稳定、偶然误差。稳定、偶然误差。n阴性质控品阴性质控品的常见失控原因：污染、洗板不干净的常见失控原因：污染、洗板不干净、标本间的交叉污染。、标本间的交叉污染。n处理措施：全自动加样系统处理措施：全自动加样系统 一次性吸头的使用一次性吸头的使用，洗板机的维护，洗液的定期更换，温育温度和，洗板机的维护，洗液的定期更换，温育温度和温育时间的保证，加样器的准确，荧光显微镜的温育时间的保证，加样器的准确，荧光显微镜的维护。维护。失控原
43、因分析及处理失控原因分析及处理59微量加样器的质量保证微量加样器的质量保证60检定或校准：检定或校准：至少每年至少每年1 1次次n加样器的校准加样器的校准 可依据可依据ISO/DIS8655ISO/DIS8655文件和国家技术监督局颁文件和国家技术监督局颁发的有关定量、可调移液器的中华人民共和国国发的有关定量、可调移液器的中华人民共和国国家计量检定规程家计量检定规程定量、可调移液器试行检定规定量、可调移液器试行检定规程程（JJG646-90JJG646-90）规定的重量测试方法。这是目）规定的重量测试方法。这是目前用于此类仪器有效的校准方法。前用于此类仪器有效的校准方法。微量加样器的质量保证微
44、量加样器的质量保证61n 测定波长：测定波长：400-750nm400-750nmn 吸光度范围：吸光度范围：0.0-4.00.0-4.0，线性误差，线性误差2.0%2.0%，精密，精密度度CV0.2%CV0.2%n 光学系统：垂直光路多通道（硅胶管或光导纤光学系统：垂直光路多通道（硅胶管或光导纤维）维）n 检测速度：数秒检测速度：数秒n 震板功能震板功能n 温育功能温育功能n 软件功能软件功能酶标仪的质量保证：酶标仪的性能酶标仪的质量保证：酶标仪的性能62n 酶标仪校准至少酶标仪校准至少1 1年年1 1次，可由计量部门或厂家次，可由计量部门或厂家完成，实验室验证完成，实验室验证酶标仪的质量保
45、证：酶标仪的校准酶标仪的质量保证：酶标仪的校准核心：比色测定的核心：比色测定的 准确性准确性 线性线性 精密性精密性63荧光显微镜的质量保证荧光显微镜的质量保证稳定激发光稳定激发光优质光路优质光路光强校验光强校验64n 校准：至少每年校准：至少每年1 1次，可有厂家完成，实验室验次，可有厂家完成，实验室验证证n 汞灯：寿命一般汞灯：寿命一般200200小时，及时更换小时，及时更换n 正确使用：尤其开机、关机（两次开启光源间正确使用：尤其开机、关机（两次开启光源间隔要在隔要在2020分钟以上）分钟以上）荧光显微镜的质量保证荧光显微镜的质量保证65n5.6.3.15.6.3.1应按照应按照CNAS
46、-RL02CNAS-RL02能力验证规则能力验证规则的要求的要求参加相应的能力验证参加相应的能力验证/室间质评。应保留参加能力验室间质评。应保留参加能力验证证/室间质评的检测结果、回报表和证书。室间质评的检测结果、回报表和证书。5.6 检验结果质量的保证检验结果质量的保证-能力验证能力验证 开展单位开展单位 自身抗体项目自身抗体项目总项目数总项目数原卫生部临检中心ANA、anti-dsDNA、anti-ENAs（6项）、anti-CCP、RF10美国CAPANA、anti-DNA、anti-ENAs（6项）、anti-CCP、RF、抗磷脂抗体、抗2GP抗体、ANCA、anti-PR3、anti
47、-MPO、AMA-M2、anti-LKM、anti-GBM、抗甲状腺微粒体抗体（anti-TM）19其他组织66n5.6.3.25.6.3.2对没有开展能力验证对没有开展能力验证/室间质评的检验项目室间质评的检验项目，实验室应通过，实验室应通过与其他至少与其他至少2 2个以上实验室（如已获个以上实验室（如已获认可的实验室或其它使用相同检测方法的配套系统认可的实验室或其它使用相同检测方法的配套系统的同级别或高级别医院的实验室）的同级别或高级别医院的实验室）比对的方式判断比对的方式判断检验结果的可接受性，并应满足如下要求：检验结果的可接受性，并应满足如下要求：（a a）规定比对实验室的选择原则；规
48、定比对实验室的选择原则；（b b）样品数量：至少样品数量：至少5 5份份，包括阴性和阳性；，包括阴性和阳性；（c c）频率：至少频率：至少每年每年2 2次次；（d d）判定标准：应有判定标准：应有80%80%的结果符合要求；的结果符合要求；（e e）结果不一致时，应分析不一致的原因，必要时，采取结果不一致时，应分析不一致的原因，必要时，采取有效的纠正措施，并定期评价实验室间比对对其质量的改进有效的纠正措施，并定期评价实验室间比对对其质量的改进作用，保留相应的记录。作用，保留相应的记录。5.6 检验结果质量的保证检验结果质量的保证-实验室比对实验室比对675.6.4 5.6.4 检验结果可比性检
49、验结果可比性 如果采用手工操作或同一项目使用两套及以上如果采用手工操作或同一项目使用两套及以上检测系统时检测系统时.，应至少，应至少每年每年1 1次次进行实验室内部比对进行实验室内部比对，包括，包括人员人员和和不同方法不同方法/检测系统间检测系统间的比对，至少选的比对，至少选择择2 2份阴性份阴性标本标本(至少至少1 1份其它标志物阳性的标本份其它标志物阳性的标本)、3 3份阳性份阳性标本标本(至少含弱阳性至少含弱阳性2 2份份)进行比对，评价比对进行比对，评价比对结果的可接受性。出现不一致，应分析原因，并采结果的可接受性。出现不一致，应分析原因，并采取必要的纠正指施，及评估纠正指施的有效性。
50、有取必要的纠正指施，及评估纠正指施的有效性。有相应的记录。相应的记录。比对记录应由实验室负责人审核并签字，并应比对记录应由实验室负责人审核并签字，并应保留至少保留至少2 2年年。5.6 检验结果质量的保证检验结果质量的保证-检验结果可比性检验结果可比性68n 检验结果的审核检验结果的审核n 检验后标本的保存检验后标本的保存l 检验后标本储存的目的是为了必要时的复查及追检验后标本储存的目的是为了必要时的复查及追加检测项目加检测项目l 分离血清，根据需要多管分装，分离血清，根据需要多管分装，-80-80保存保存n 咨询服务或培训：结果的正确解读咨询服务或培训：结果的正确解读检验后的质量控制检验后的
