1、重庆师范大学生命科学学院重庆师范大学生命科学学院u掌握凝集反应的原理;u熟悉凝集反应的实验步骤和应用;u掌握比色法测定血红蛋白含量的方法。n实验目的实验目的l凝集反应：凝集反应：一定浓度的电解质环境中，一定浓度的电解质环境中，抗原抗体凝集成为大小不等抗原抗体凝集成为大小不等肉眼可见的凝集块肉眼可见的凝集块。颗粒性抗原颗粒性抗原抗体抗体 凝集反应凝集反应ABO血型-以原定型l分型血清：抗分型血清：抗A血清、抗血清、抗B血清血清l采血针、酒精、棉签、牙签采血针、酒精、棉签、牙签l生理盐水生理盐水l载玻片载玻片l记录并判断结果记录并判断结果:人类红细胞含有一种与恒河猴 Rhesus macacus的
2、红细胞相同的凝集原称为Rh 因子含Rh因子(8种，主要是D抗原)Rh阳性不含Rh因子Rh阴性输血溶血新生儿溶血分娩后分娩后72h内进内进行行Rh抗体被动抗体被动免疫免疫胎儿红细胎儿红细胞进入母胞进入母体即被破体即被破坏坏（不能（不能诱导母亲诱导母亲抗抗Rh免疫免疫反应反应）Rh+Rh初孕 健康新生儿 健康新生儿Rh再孕Rh+新生儿溶血的预防l血红蛋白是红细胞的主要成分，包括珠蛋白和亚铁血红素。血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋白外，尚能与某些物质作用形成多种血红蛋白衍生物。它们具有特定的色泽和吸光谱，在临床上，可用以诊断某些变性血红蛋白血症和血红蛋白的定量测定。l测定血红蛋白含量的方法很多，实
3、验常用比色法比色法。其原理是在一定量的血液中，血红蛋白经少量盐酸的作用，使亚铁血红素变成高铁血红素，呈现较稳定的棕色。用水稀释后与标准色比较，求出每100ml血液中所含的血红蛋白克数。正常成年男子每100ml血液平均含14.4g，女子为13.1g。血红蛋白计、0.1 mol/L HCl、刺血针、滤纸片、酒精棉球、干棉球、蒸馏水。血红蛋白计包括 标准比色架，架的两侧镶有两个棕色标准玻璃色柱。血红蛋白稀释管，有方形也有圆形的。两侧有刻度，一侧以g为计数单位，对侧以百分率计，按我国情况，是以每100ml血液内含血红蛋白14.5g为100%。20mm3血红蛋白吸管，还有玻璃棒、滴管。用滴管加0.1mo
4、l/LHCl于血红蛋白稀释管内，到刻度百分比刻度20处。用刺血针刺破指尖采血，血滴宜大些。用血红蛋白吸管的尖端接触血滴，吸血至刻度20 mm3处（0.02ml）。用滤纸片或棉球擦净吸管口周围的血液，将吸管插入血红蛋白稀释管的盐酸内，轻轻吹出血液至管底部，反复吸入并吹出稀释管内上层的盐酸，洗涤吸管多次，使吸管内的血液完全洗入稀释管内。摇匀或用小玻璃棒搅匀后，放置10 min，使盐酸与血红蛋白充分作用。把稀释管插入标准比色架两色柱中央的空格中，使无刻度的两侧面位于空格的前后方，便于透光和比色。用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水（每加一滴要搅拌），边滴边观察颜色，直至颜色与标准玻璃色柱相同为止。稀释管上液面的刻度读数即为每100 ml血液血红蛋白的克数。吹血液入稀释管及洗净吸管时，不宜用力过猛。蒸馏水需逐滴加入，多做几次比色，以免稀释过量。每次比色时，充分摇均，以免影响比色。
