1、1姚振江姚振江流行病与卫生统计学系流行病与卫生统计学系广东药学院广东药学院2以前的实验室.现在的实验室对个人防护有了新的要求.3生物安全概要生物安全概要简介实验室内感染生物危害分类感染/生物危害控制溢出响应生物医学废弃物处理总结4什么是生物安全什么是生物安全?从业人员处理生物危害材料时的措施，以避免感染自己、他人或环境达到此目的主要通过：工程学控制行政管理控制操作与规程个体防护设备5什么是生物危害什么是生物危害?例如：病毒、细菌、真菌和寄生虫以及他们的毒素血液和体液,还有人和动物的组织 变异的细胞系和一些特定类型的核酸 是由生物或者此种生物产生的物质引起的对人、是由生物或者此种生物产生的物质引
2、起的对人、动物或环境具有潜在威胁动物或环境具有潜在威胁6为什么我们关注生物危害物质？为什么我们关注生物危害物质？可能获得实验室感染可能获得实验室感染(LAI)环境污染环境污染造成研究的污染造成研究的污染公众知晓公众知晓7实验室感染实验室感染传播途径传播途径易感宿主易感宿主感染源感染源经皮接种吸入气溶胶粘膜接触食入培养物和储存物研究的动物标本免疫系统免疫状况年龄8只有只有20%可查到原因可查到原因80%是由人为的错误造成的20%是由于设备故障造成的排在前排在前4位的导致感染的事故位的导致感染的事故溢出或溅出注射器及针尖锐的物体，碎玻璃动物或体外寄生虫的抓伤或咬伤实验室感染实验室感染9实验室感染实
3、验室感染谁什么哪里何时如何研究者SARS台湾2003年12月微生物学家西尼罗病毒美国2002年8月划伤实验室工作人员流脑美国2000年气溶胶?实验室工作人员牛痘病毒欧洲2002年接触1019791999年间实验室相关感染（年间实验室相关感染（LAI）的统计）的统计实验室感染实验室感染11暴露的风险暴露的风险有关的病原体体液的类型暴露的途径暴露的持续时间暴露过程中的血液量此次暴露病毒的浓度个人保护设备使用12如果发生了暴露或可能发生了暴露如果发生了暴露或可能发生了暴露开始急救通知你的管理者或指定的人向医院的急诊部门或大学的卫生服务部门报告向职业卫生、伤残和死亡办公室报告（电话或网络）13全面预防
4、全面预防预防血传病原体传播的最简单的行之有效的方法预防血传病原体传播的最简单的行之有效的方法 包括包括:教育教育洗手洗手穿防护设备穿防护设备使用安全的工作规程使用安全的工作规程如果不能保证样品的非感染性，按照感染性样品处理如果不能保证样品的非感染性，按照感染性样品处理If samples cannot be guaranteed non-infective treat as infectious!14生物危害的分类生物危害的分类常见病原体非传统的病原体重组 DNA组织培养动物工作解剖的标本15BSL 4BSL 3BSL 2BSL 1_水平按箭头方向由低到高水平按箭头方向由低到高 微生物对人、动
5、物、植物和微生物对人、动物、植物和/或环境的危险性或环境的危险性程序和设备需求程序和设备需求 围堵策略水平需求围堵策略水平需求 对人员、环境和社区的保护程度对人员、环境和社区的保护程度生物危害的等级生物危害的等级16危险危险分组分组个体危险个体危险公众危险公众危险遏制遏制例子例子1LowLowLevel 1大肠杆菌 细杆菌2ModerateLimitedLevel 2 大肠杆菌 0157:H7,链球菌、沙门氏菌、腺病毒、肝炎病毒A、B、C，流感，麻疹。3HighLowLevel 3 炭疽杆菌，结核分支杆菌，汉坦病毒，HIV，黄热病度4HighHighLevel 4 拉沙病毒,埃博拉病毒,马尔堡
6、病毒Unlikely to cause disease in healthy workers or animalsRarely cause serious human or animal diseaseMay cause serious diseaseLikely to cause very serious disease常见病原体的等级常见病原体的等级17不常见的病原体不常见的病原体p传播性的海绵体脑病阮病毒疾病；致死性神经变传播性的海绵体脑病阮病毒疾病；致死性神经变性情况性情况庫賈氏病庫賈氏病,新型克雅氏病新型克雅氏病,疯牛病疯牛病,绵羊瘙痒绵羊瘙痒病，慢性消耗性疾病。病，慢性消耗性疾病。
7、p对通常的灭活病毒的破坏方法产生抗性对通常的灭活病毒的破坏方法产生抗性p与危害处理办公室接触以评估其需求（防护、程与危害处理办公室接触以评估其需求（防护、程序、废弃物的处理）序、废弃物的处理）18重组重组DNA危险级别依赖于DNA的来源、载体及宿主 生物安全委员会将帮助研究者作出这方面的判断遗传工程 =在体外将遗传物质从一个细胞参入到另一个细胞19组织培养组织培养一般可能含有致病微生物的潜在风险一般可能含有致病微生物的潜在风险Level 2人和灵长类的含有支原体的细胞系当使用新的细胞系时要进行详细的评估其他Level 120动物工作动物工作动物可储存感染性的微生物（自然的或引进的）等级基于所从
8、事工作的类型对所有从事动物工作的人员都需要进行专门的动物照料培训所有的工作包括动物的使用必须得到动物委员会的许可21解剖的标本解剖的标本所有的 标本都应考虑其可能存在的感染性微生物考虑标本的类型尤为重要血液,器官,组织脊髓,脑组织来自于感染的病人一般而言，生物2级仅仅依据于其工作的特性22感染感染/生物危害控制生物危害控制工程控制工程控制管理控制管理控制实践与操作实践与操作个人防护设备个人防护设备23工程控制工程控制在技术层面上,通过改变危害的来源以减少 或根除危害的暴露防护:一道 vs二道 防护水平24第一道防护（一级屏障）第一道防护（一级屏障）确保工作人员和直接环境免受感染性微生物的暴露保
9、护性的外壳 封闭感染性的微生物或动物培养皿,玻璃罐,瓶塞等生物安全柜，手套箱和动物笼等装备 控制的效果取决于防护的完整性控制的效果取决于防护的完整性25第二道防护（二级屏障）第二道防护（二级屏障）保护实验室外的环境免遭暴露包括实验室设计和规章制度26生物安全防护水平生物安全防护水平防护水平与危险水平相似生物安全委员会将对研究提案进行评估以确保防护水平恰当。一级 二级 三级 四级27一级水平一级水平 最基本的实验室不需要特别的设计特性不需要生物安全柜可在开放的实验台上进行工作28二级水平二级水平 具有生物危害2级的临床、诊断、研究和教学部门如果具有气溶胶或溅出的潜在风险，需要一级或二级生物安全柜
10、必须制定处理溢出的应急方案使用权应加以控制29专门的设计和建造一级屏障保护个体二级屏障保护环境所有工作人员必须进行专门的培训：病原微生物的使用，个人防护设备，设备、废弃物处理，还有实践与操作三级水平三级水平 型型(全密封型全密封型)30四级水平四级水平在一个国家一般只有一个设计规范异常的严格，工作人员完全与感染性材料隔离313233生物安全柜生物安全柜对生物病原物理防护的有效方法，尤其当产生气溶胶时。高效分子空气过滤器能以99.97%的效率去除颗粒（最小 0.3微米）有三个主要级别的安全柜（I,II,III）能提供不同水平的保护。34在生物安全柜内安全操作在生物安全柜内安全操作使用前使用前:确
11、保生物安全柜经过检验关闭紫外灯，打开荧光灯用适宜的消毒剂消毒工作台面将最基本的条目放入安全柜在工作之前，让排风机运转 5-10 分钟35使用中使用中:确保材料和器材放置在接近安全柜内的后部，尤其是产生气溶胶的设备，不要阻挡通风口。使用技术减少飞溅和气溶胶的产生。总的工作流程应该是从清洁区域到污染区域。减少运动以免阻碍气流在生物安全柜内打开火焰存在着争议。在生物安全柜内安全操作在生物安全柜内安全操作36使用后使用后:保持排风机工作至少5分钟以清洁安全柜移走和消毒用过的器材和材料消毒安全柜台面关闭排风机和荧光灯，打开紫外灯。在生物安全柜内安全操作在生物安全柜内安全操作37保养保养:2次/天-擦拭工
12、作台面1次/周 擦拭紫外灯1次/月 擦拭所有的垂直面1次/年 紫外灯强度验证-用甲醛气体去除沾染(ORM)-认证(ORM)在生物安全柜内安全操作在生物安全柜内安全操作38行政管理控制行政管理控制危险评估医学监测培训/教育资源检查符号&标志根据程序、信息和方法将暴露危险降至最低39风险评估风险评估确定防护的种类,方法和所需的安全设备使用者的职责,能从ORM得到的帮助考虑的方面有:实验设计,方法,个人的经验和知识情况等http:/www.hc-sc.gc.ca/pphb-dgspsp/ols-bsl/lbg-ldmbl/pdf/lbg-3e-draft.pdf*行政管理控制行政管理控制40医学监测
13、医学监测 用医学方法监测环境污染对人类健康的影响，观察人群健康水平和人体对环境污染的生物学效应。培训培训&教育教育实验室专门的政策和规程生物安全培训行政管理控制行政管理控制41检查检查日常的自查生物安全检查清单此外,检查实验室以确保其按照规程或 指导方针工作并提供反馈意见行政管理控制行政管理控制42标记标记&标签标签生物危害标记必须粘贴在使用生物危害材料的实验室的门上生物危害标签应贴在使用生物病原的容器、设备和储存装置上行政管理控制行政管理控制43实践和规程实践和规程总的安全指导方针好的微生物学实践洗手专门的规程离心机注射器、针头和其他的尖锐物移液管混匀器、研磨器、超声破碎仪、冷冻真空干燥器接
14、种环冷冻切片机44一般实验室安全指导方针一般实验室安全指导方针基本的常识,你必须了解你所面对的实验室的危险，并且经过正确的培训以便处理这些危险。最基本的是知道所有的实验危险举出5个例子?b i o s a f et y使用移液管和移液器使用接种环分离血清打开安瓶使用离心机45良好的微生物实践良好的微生物实践(GMP)(GMP)基本的使用标准适用于所有的微生物学实验工作目的预防实验室人员和环境被污染预防实验或样本被污染无菌操作、减少气溶胶产生、控制污染、个人防护、应急反应。46洗手洗手预防感染的单纯有效的方法之一如果经常正确的执行如果经常正确的执行何时洗手？开始任何操作之前离开实验室之前当手有明
15、显的污物时在安全柜内完成任何实验之前和之后每次脱掉手套时在触及脸和嘴之前下班时Level 1 lab -a non antiseptic soap can be usedLevel 2 lab-requires antiseptic hand washing solutions47安全使用离心机安全使用离心机使用前裂纹？过满？平衡？盖子或塞子安置正确？转速能达到？使用可封闭的转子 使用后离心完全停止？溢出或渗漏？使气溶胶沉降（30分钟）or 在生物安全柜内打开48注射剂及针注射剂及针尽可能避免使用在生物安全柜内完成感染性材料的操作使用注射器时小心抽吸保护从塞子退出的针不要弄弯、切断或翻新针处理
16、所有使用过的针和注射器，将其放入黄色的尖锐物体盛放器内49移液管移液管禁用嘴吸移液管所有的生物危害材料的移液管都应在生物安全柜内使用。不要使液体溢出，使用移液管装置。避免飞溅，沿管壁将液体慢慢注入试管或瓶内不要用抽-吸混匀溶液。可再度使用的移液管应水平放置在已消毒的浅盘上50混匀器、研磨器、超声破碎器和冷冻干燥器混匀器、研磨器、超声破碎器和冷冻干燥器尽可能地在BSC内操作，再打开前静置5分钟以使气溶胶沉降。安全地混匀 不要用玻璃混匀罐 使用后立即清除污染冷冻真空干燥器 使用玻璃制造的真空部件时，确保使用前无损坏。使用后所有的表面都要消毒 尽可能使用真空蒸发套51接种环接种环在开放的火焰上灭菌可
17、能产生含有活微生物的气溶胶柄越短，越能减少震动一次性的塑料接种环是较好的替代52冷冻干燥器冷冻干燥器在准备冰冻切片时戴手套，当使用冷冻干燥器时戴厚手套。经常性的去污(70%乙醇or 专门的消毒剂)防备和上锁!53个体防护设备个体防护设备个体防护设备是非常重要的防护屏障，也是最后一道防护线监督者和使用者的职责就是确保使用个体防护设备监督者和使用者的职责就是确保使用个体防护设备护目镜手套实验室外衣 鞋 54个体防护设备个体防护设备考虑的标准阻断暴露的途径提供保护的级别容易使用只有当正确的选择、适合、小心使用和个体培训才能产生效果确保离开实验室前脱下个体防护设备55个体防护设备个体防护设备鞋袜鞋袜应
18、该穿包裹脚趾的鞋，在一些较高级防护的实验室和动物设施部门穿靴子。实验室外衣实验室外衣长袖达膝的外衣有弹性的袖口后背系带的长大衣定期清洗56个体防护设备个体防护设备手套手套对于从事生物病原的人使用乳胶、腈、乙烯树脂材料的手套测验的手套不应再用，实用的手套能消毒再用，如果它们没有变形的征兆。考虑弹性和手掌的长度双层手套危险处理办公室对那些具有过敏的人提供帮助，找到替换材质的手套。在公共场所不要带实验手套57个体防护设备个体防护设备眼和脸防护眼和脸防护护目镜、安全眼镜可以保护眼睛面罩可以保护面部皮肤呼吸罩呼吸罩58溢出溢出溢出反应不同主要基于：溢出的是什么？溢出多少？在哪里溢出的?对环境潜在的风险是
19、什么？溢出物应该被立即清理（除非产生了气溶胶），确保正确的去除污染方法确保恰当的使用个体防护设备，清除设备容易使用59溢出溢出 一般清理一般清理用吸收性物质盖住溢出区域用恰当的消毒剂（10%漂白剂）浸泡溢出区从吸收性物质的外围向内倒消毒剂确保每个玻璃碎片都被捡起（用镊子！）并将其放入尖锐物品盛放器内。作用20-30分钟 擦拭掉吸收性物质废弃物应放入适当的生物危害物品袋，以便高压灭菌处理 60溢出溢出 特殊案例特殊案例在离心机内在生物安全柜内开放区域(实验室,再转送过程中)可用的溢出响应方案在：http:/www.uottawa.ca/services/ehss/SPILLRESPONSEPLA
20、N.pdf61废弃物处理废弃物处理生物废弃物(未处理)62废弃物处理废弃物处理生物废弃物生物废弃物 (已处理已处理)With H2O 1:10In compliance with Sewer use by-laws*63特殊的废弃物特殊的废弃物EB（溴化乙锭）（溴化乙锭）(4.2 g亚硝酸钠(NaNO2)和20 ml 次磷酸(50%)(H3PO2)加蒸馏水至 300 ml）用蘸取清洗液的纸巾清洗1次污染区，然后用纸巾蘸取自来水清洗5次，再用新的纸巾擦拭1次，最后用紫外灯检测，以确保EB被完全清除。Recombinant DNA（重组（重组DNA）液体培养物必须加次氯酸钠至终浓度10%，作用至少5分钟，然后倒入下水道。64总总 结结生物安全 保证个体和环境不受感染生物危害 微生物,血液和体液，组织和组织培养大学内的每一个人都有职责大学内的每一个人都有职责正确的知识、计划和关注，生物暴露是可避免的65
