1、实验实验11 染色体分带技术染色体分带技术一、实验目的一、实验目的了解染色体分带技术的原理及应用了解染色体分带技术的原理及应用了解染色体了解染色体G带和带和C带显示的原理带显示的原理掌握染色体掌握染色体G带和带和C带显色技术流程带显色技术流程2022-11-101二、实验原理二、实验原理 人们用物理、化学因素处理后，再用染料对染色人们用物理、化学因素处理后，再用染料对染色体进行分化染色，使每条染色体上出现明暗相间，体进行分化染色，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）。染色带的数目、部位、宽窄和着）。
2、染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性，所以每一条染色体都色深浅均具有相对稳定性，所以每一条染色体都有固定的分带模式，即称带型。染色体带型是鉴有固定的分带模式，即称带型。染色体带型是鉴别染色体的重要依据。别染色体的重要依据。2022-11-102二、实验原理二、实验原理 G带带是将处于分裂中期的细胞经胰酶或碱、热、尿素等处理后，再经是将处于分裂中期的细胞经胰酶或碱、热、尿素等处理后，再经吉姆萨染料染色后所呈现的区带，是目前被广泛应用的一种带型。其吉姆萨染料染色后所呈现的区带，是目前被广泛应用的一种带型。其特性是显带方法简单恒定，带型稳定，保存时间长。一般认为，易着特性是显带方法简单
3、恒定，带型稳定，保存时间长。一般认为，易着色的阳性带为含有色的阳性带为含有AT多的染色体节段，在间期核呈固缩状态，而且多的染色体节段，在间期核呈固缩状态，而且是是DNA晚复制区之一，有相当一部分中度重复序列晚复制区之一，有相当一部分中度重复序列DNA可能在可能在G带带区；相反，含区；相反，含GC多的染色体段则不易着色。也有人认为，多的染色体段则不易着色。也有人认为，Giemsa染料在染料在G带区是与带区是与DNA结合，而且与结合结合，而且与结合DNA的染色质非组蛋白有的染色质非组蛋白有关。总的来说，关。总的来说，G显带的机制还未搞清。显带的机制还未搞清。C带带是染色体标本经强碱（是染色体标本经
4、强碱（NaOH或或Ba(OH)2）热处理后，在着丝热处理后，在着丝粒周围区域和异染色质区经粒周围区域和异染色质区经Giemsa染成深色，而染色体两臂的常染染成深色，而染色体两臂的常染色质部分仅有浅淡轮廓。这是一种染色体上不显示带纹的特殊显带法，色质部分仅有浅淡轮廓。这是一种染色体上不显示带纹的特殊显带法，主要显示着丝粒区和异染色质区的变化。主要显示着丝粒区和异染色质区的变化。2022-11-103二、实验原理二、实验原理 双翅目昆虫双翅目昆虫(果蝇、摇蚊等果蝇、摇蚊等)幼虫期的唾腺细胞很大，其核幼虫期的唾腺细胞很大，其核内的染色体称为唾腺染色体内的染色体称为唾腺染色体。由于它们比普通染色体大由
5、于它们比普通染色体大100-150倍，宽约倍，宽约5m，长约长约400m，因而也称为巨大染色体因而也称为巨大染色体。另外唾另外唾腺染色体经多次复制而不分开，所以又称作多线染色体。唾腺染腺染色体经多次复制而不分开，所以又称作多线染色体。唾腺染色体经染色后出现深浅不同，疏密有别的横纹，且其数目和位置色体经染色后出现深浅不同，疏密有别的横纹，且其数目和位置常常是恒定的，标志着物种的特征。常常是恒定的，标志着物种的特征。2022-11-104三、实验仪器材料三、实验仪器材料 洋葱、蚕豆、大蒜根尖洋葱、蚕豆、大蒜根尖 果蝇唾腺果蝇唾腺 1 N HCl溶液溶液 Ba(OH)2溶液溶液 Giemsa染液染液
6、 显微镜显微镜2022-11-105四、实验步骤四、实验步骤2022-11-106四、实验步骤四、实验步骤2022-11-107 唾腺呈半透明，球棒状，前端较细，后端粗钝，有唾腺呈半透明，球棒状，前端较细，后端粗钝，有时成对粘在一起成时成对粘在一起成“V”字型，其外侧有时附有乳白或淡字型，其外侧有时附有乳白或淡黄色的脂肪，黄色的脂肪，此时应保留唾腺形态的完整，因为食道和此时应保留唾腺形态的完整，因为食道和肠管也是半透明的，如果唾腺不完整，就很难判断唾腺肠管也是半透明的，如果唾腺不完整，就很难判断唾腺和肠道的取弃。和肠道的取弃。四、实验步骤四、实验步骤2022-11-108果蝇唾腺染色体制片果蝇
7、唾腺染色体制片 把唾腺剔出移到玻片的干净处，并清除其余器官和组织。把唾腺剔出移到玻片的干净处，并清除其余器官和组织。如果唾腺上附有脂肪，应把乳白色或淡黄色的脂肪清除干如果唾腺上附有脂肪，应把乳白色或淡黄色的脂肪清除干净，保留半透明的唾腺。净，保留半透明的唾腺。把多余的生理盐水用吸水纸吸干，加一滴把多余的生理盐水用吸水纸吸干，加一滴 1 N盐酸；室温下盐酸；室温下水解水解2分钟，然后吸干。分钟，然后吸干。空气干燥一周空气干燥一周四、实验步骤四、实验步骤2022-11-109植物根尖染色体制片植物根尖染色体制片 前处理：根尖用前处理：根尖用0.1%秋水仙素溶液处理秋水仙素溶液处理412小时。小时。
8、固定：固定：用水洗净处理过的根尖，经用水洗净处理过的根尖，经Carnoy固定液固定固定液固定2-24小时，换入小时，换入70%酒精保存。酒精保存。解离解离：取出根尖，用蒸馏水洗净，放入取出根尖，用蒸馏水洗净，放入1N HCl中中60解离解离 810min，再用蒸馏水洗净。再用蒸馏水洗净。低渗：低渗：倒去酶液，用蒸馏水慢慢冲洗倒去酶液，用蒸馏水慢慢冲洗2次，然后次，然后在蒸馏水中浸泡在蒸馏水中浸泡30 min。后固定后固定:取出材料于载片，滴加新鲜取出材料于载片，滴加新鲜Carnoy固定液，固定固定液，固定10-30 min 涂片：用镊子将材料捣碎，边捣边加固定液，去掉大块残渣。涂片：用镊子将材
9、料捣碎，边捣边加固定液，去掉大块残渣。空气干燥一周空气干燥一周四、实验步骤四、实验步骤2022-11-1010G带带显色显色（1）将制好的染色体标本，置）将制好的染色体标本，置7275烤箱中烤片烤箱中烤片3h。（2）放入预温至）放入预温至37的的0.025%胰酶溶液中（胰酶溶液中（pH=7.27.4）消）消化化1min左右，每次的作用时间并不完全相同，可先试一张片子，左右，每次的作用时间并不完全相同，可先试一张片子，再根据显带效果调整胰酶作用时间。再根据显带效果调整胰酶作用时间。（3）在）在Giemsa 染液中染色染液中染色10min，自来水冲洗干净，晾干后，自来水冲洗干净，晾干后，即可阅片。
10、即可阅片。（4）镜检：在显微镜高倍目镜下检查显带标本，在染色体上若出）镜检：在显微镜高倍目镜下检查显带标本，在染色体上若出现清晰的深浅相间的带型，即为可取标本，可供摄像分析现清晰的深浅相间的带型，即为可取标本，可供摄像分析四、实验步骤四、实验步骤2022-11-1011四、实验步骤四、实验步骤1.制片、烤片同制片、烤片同G显带技术（显带技术（65，2小时）。小时）。2.染色体标本在室温下用染色体标本在室温下用0.1 N HCl水解水解15分钟后蒸馏水冲洗。分钟后蒸馏水冲洗。3.2%Ba(OH)2，65处理处理10分钟后蒸馏水冲洗。分钟后蒸馏水冲洗。4.2SSC，65处理处理1小时。小时。5.冲洗冷却后用冲洗冷却后用1：10 Giemsa稀释液染色稀释液染色7分钟。分钟。6.冲洗后晾干，镜检。冲洗后晾干，镜检。C带带显色显色2022-11-1012五、实验结果五、实验结果G带带显色显色2022-11-1013五、实验结果五、实验结果C带带显色显色2022-11-1014唾腺染色体显色唾腺染色体显色五、实验结果五、实验结果2022-11-1015六、思考题六、思考题 染色体显带有哪些技术？染色体显带有哪些技术？染色体显染色体显G带的关键步骤是什么？带的关键步骤是什么？染色体显染色体显C带的关键步骤是什么？带的关键步骤是什么？2022-11-1016
