1、临床遗传学与分子生物学 实验诊断,南方医院实验诊断学教研室 温淑娟,1 染色体病检查 2 核酸和基因相关检验 3 产前诊断 4 新生儿疾病筛查,1 染色体病检查,人类染色体数目或结构畸变导致的遗 传性疾病称染色体病。 共同的临床特征： 先天性多发畸形、智力低下、生长发育迟缓和皮肤纹理改变。性染色体异常的患着还将出现性发育不全及内、外生殖器异常或畸形。,谁需要做染色体检查？,高龄孕妇，尤其是40岁以上孕妇 曾有异常新生儿或胎儿的孕妇 无症状异常基因携带或基因缺失的夫妻 易患某种遗传病的特殊人群 曾有接触、暴露或服用致畸物质的孕妇,染色体检查的基本步骤,取材：主要采取外周血白细胞、绒毛组织、羊水细
2、胞、脐血等 细胞培养：加入丝裂原获分裂细胞，制成染色体标本 显微镜下进行初步的染色体观察和分析照相并进行核型分析 讨论分析结果并作出诊断报告,染 色 体 图 象 分 析 系 统,正 常 女 性 核 型 图,唐 氏 综 合 征 核 型 图,唐 氏 综 合 征 患 者,唐 氏 综 合 症,分为：完全型、易位型、嵌合型 发生率约1600800,男多于女。我国大约每20分钟就有一位唐氏儿出生。 出生风险率随孕妇年龄增加而加大，尤其40岁以上。 60患儿在胎儿早期即夭折流产。 第一个被确诊的人类染色体病。,Turner综合征核型图,Turner综合征患者,Turner综合征,X单体综合征；先天性卵巢发育
3、不全综合征 发病率约占女婴1/5000。在自发流产中高达7.5%。 原发闭经患者中占1/3,4P部分三体综合征,4P 部分三体综合征,部分三体综合征,部分三体是指某条染色体的某一区带有重复 已报道1-22号染色体都有部分三体病例 多数在胚胎期流产或在婴儿期夭折,2 核酸和基因相关检验,聚合酶链式反应（PCR） 实时荧光PCR技术 核酸分子杂交技术 限制性酶切 凝胶电泳技术,一、聚合酶链式反应（PCR),PCR？ PCR的原理 PCR的技术特点,反转录PCR 荧光PCR,PCR (Polymerase Chain Reaction) 聚合酶链式反应,是模拟DNA体内 复制过程，在DNA聚 合酶作
4、用下，进行 特定DNA片段的体外 复制。,PCR扩增原理,引物,延伸,延伸,5,5,3,3,变性、复性,变性、复性,病原体,DNA,RNA,PCR,裂解抽提,扩 增 产 物 检 测,核酸纯化,PCR检测流程,RT-PCR,凝胶电泳,酶切分析,杂交,核酸序列分析,PCR扩增及产物分析,PCR产物电泳图,p,1 2 3 4 Marker,270 bp,PCR的技术特点,特异性强(几乎没有方法学的假阳性) 灵敏度高 简便快速 对样品要求低 PCR的局限性,荧 光 P C R,Oligo 1: Fluorescein,Oligo 2: LC Red 640,荧光共振能量传递（FRET Probe）,双
5、标记探针（Taqman Probe）,FQ-PCR反应原理,特异性荧光双标记探针 Taq酶 53外切酶活性,荧 光 P C R 仪,FQ-PCR实时动力学曲线,FQ-PCR的技术特点,封闭状态下检测，避免了扩增产物污染而致的假阳性 可定量检测，扩展了临床应用空间 光谱技术进一步提高了灵敏度可检测单拷贝基因 荧光探针杂交，进一步提高了特异性 扩增与自动分析一体化，检测更加简便快速,三、核酸分子杂交技术,核酸分子杂交？ 常用的核酸分子杂交技术及应用,常用的核酸分子杂交技术, Southern印迹杂交-DNA印迹 Northern印迹杂交-研究RNA的方法 斑点杂交-狭缝杂交。DNA、RNA均可检测
6、 原位杂交-检测DNA或RNA同时还可对其进 行细胞及基因组内定位,3 产前诊断,一、产前筛查 采用简便、可行、无创的检查方法，对发病率高、病情严重的遗传性疾病或先天畸形进行产前筛查，筛出可疑者再进一步确诊,二、胎儿遗传病的孕妇血清学筛查,常用的血清标志物有 AFP hCG（或 free -hCG） uE3 PAPP-A,MOM?,中位数值的倍数： 指产前筛查中，孕妇个体的血清标志物的检测结果是正常孕妇群在该孕周时血清标志物浓度中位数值的多少倍。,唐筛检查?,通过化验孕妇的血液，来判断胎儿患有唐氏综合征的危险程度。,中孕期（15-22周） AFP、free -hCG（或hCG)二联筛查 目标疾
7、病：Down综合征，18-三体征， 神经管缺损 早孕期（7-13周） PAPP-A、hCG（或free -hCG）二联筛查 目标疾病：Down综合征,DSAFP 0.70.8MOM free -hCG 2.3-2.4MOM uE3 0.7MOM PAPP-A 明显降低 18三体征-free -hCG0.25MOM NTDAFP2.5MOM,临床意义,Down综合征 风险率1/270 18三体征 风险率1/350 NTD-AFP2.5MOM 结合孕妇的年龄、体重、孕周计算得出胎儿罹患某一遗传性疾病的风险率。,谁会生出“唐氏儿”？,唐氏综合征是一种偶发性疾病，所以每一个怀孕的妇女都有可能生出“唐氏
8、儿”。生唐氏儿的几率会随着孕妇年龄的递增而升高。唐氏筛查一定要做。,孕妇年龄与唐氏患儿出生风险率 的关系,20岁-1/1477 30岁-1/939 35岁-1/353 40岁-1/85 44岁-1/39,应注意的几个问题,唐氏筛查值是修正值。影响唐氏筛查值的因素主要有：孕妇年龄，体重、孕周，是否胰岛素依赖性糖尿病、双胎，是否吸烟，异常妊娠史等 唐筛检查可筛检出60-70%的唐氏患儿。 唐氏筛查为可能性检查：高危人群只是说胎儿更有可能是唐氏儿，低危人群中也有可能是唐氏儿。,三、产前诊断,绒毛穿刺 羊膜腔穿刺 脐血管穿刺 只对产前筛查高风险、预产年龄35岁及（或）有胎儿异常其他高危因素的孕妇进行,
9、胎儿染色体非整倍体无创基因检测,提取母体外周血血浆中的游离DNA片段（包括来自母体和胎儿的DNA片段）进行高通量大规模并行基因组测序，将结果进行生物统计学为基础的信息分析，从而检查胎儿染色体是否存在非整倍体变化。,4 新生儿疾病筛查,新生儿疾病筛查相关法律法规 新生儿疾病筛查实验,新生儿疾病筛查相关法律法规,卫生部相关法律法规 中华人民共和国母婴保健法 中华人民共和国母婴保健法实施办法 卫生部新生儿疾病筛查管理办法 卫生部新生儿疾病筛查技术规范 广东省相关法律法规 广东省母婴保健管理条例 广东省新生儿疾病筛查管理办法 广东省新生儿疾病筛查的母婴保健技术服务执业许可办法 地方相关法律法规 广州市新生儿疾病筛查管理办法,新生儿疾病筛查实验,先天性甲状腺功能低下（CH） 苯丙酮尿症（PKU） 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症 先天性肾上腺皮质增生症（CAH）,新生儿疾病筛查,干血斑标本采集 标本送检或收集 实验室检测 筛查阳性召回 病例诊断和治疗随访,新生儿疾病筛查结果家长自助查询系统, 广东省新生儿疾病筛查网,谢谢,
