1、专题专题2:2:微生物的培养与应用微生物的培养与应用微生物包括哪五类：微生物包括哪五类：真菌真菌原生动物原生动物特点：特点：结构都相当简单结构都相当简单,个体多数十分微小个体多数十分微小.通通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿且体内一般不含有叶绿素素.不能进行光合作用不能进行光合作用.原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界微生物基础知识微生物基础知识细菌的外形与大小细菌的外形与大小细菌：细菌：单细胞不分枝的原核微生物单细胞不分枝的原核微生物。细菌细胞细菌细胞，通常
2、用适当染料，通常用适当染料后显微镜观察后显微镜观察图图1-1 常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态A.球菌球菌 B.杆菌杆菌 C.弧菌弧菌细菌细胞由外向里依次有、菌菌（、，。细菌的构造细菌的构造*细胞壁细胞壁n细胞壁有哪些功能？细胞壁有哪些功能？n 伤伤寒寒杆杆菌菌细细胞胞壁壁中中含含毒毒素素 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢芽孢。芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸
3、孢，煮沸3 3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.菌落：菌落：n单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落形态结构的子细胞群体，叫做菌落。n菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落细菌的菌落特征因种细菌的菌落特征因种而异而异 1 1、结构：、结构：单细胞原核单细胞原
4、核分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）链霉素、土霉素、四环素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其中微生物中发现了几千种抗生素，其中2/32/3是是由放线菌产生的由放线菌产生的 应用应用:病毒的结构病毒的结构病毒病毒 SARS病毒、病毒、禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白质病毒）朊病毒（蛋白质病毒）2、病毒的增殖：、病毒的增殖：真菌真菌如图是酵母菌电子显微如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构镜下的形态结构酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉生殖生殖直立菌丝直立菌丝 营养菌丝营养菌丝腐生生活腐生生活孢子生
5、殖孢子生殖细菌的营养类型细菌的营养类型 n根据细菌所利用的能源和碳源的不同根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。，将细菌分为两大营养类型。n自养菌（自养菌（autotrophautotroph）n异养菌（异养菌（heterotrophheterotroph）n腐生菌腐生菌n寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌1.1.何为培养基？何为培养基？3.3.不同的培养基有不同的配方，但是不同的培养基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养其基本成分都相同，都包括哪些营养元素？有何作用？请举例说明。元素？有何作用？请举例说明。阅读教材阅读教材P1415P1415相关内容，回
6、答相关内容，回答以下问题：以下问题：2.2.按照不同的培养基划分标准，培养按照不同的培养基划分标准，培养基有哪些种类、配制特点及其应用？基有哪些种类、配制特点及其应用？一、基础知识：一、基础知识：（一）培养基（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1 1）按物理状态来分：培养基可分为）按物理状态来分：培养基可分为固体培固体培养基养基和和液体培养基液体培养基。其中固体培养基用于菌。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。种分离、鉴定菌落等。（2 2）按功能来分，可分为）
7、按功能来分，可分为选择培养基选择培养基和和鉴别鉴别培养基培养基。（3 3）按成分来分，可分为）按成分来分，可分为天然培养基天然培养基和和合成合成培养基培养基。1.1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途 2.2.不同的微生物往往需要采用不同不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方的培养基配方(参考教材附录内容参考教材附录内容)3.3.不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、无机盐无机盐、等等营养物质，营养物质，另外还需要满足微生物生长对另外还需要满足微生物生长对pHpH、特特殊营养物质殊营养物质,例如例如:生长因子生长因子(即细菌生长即细菌生长必需，
8、而自身不能合成的化合物必需，而自身不能合成的化合物,如维生如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等的要求。等的要求。培养基培养基应用应用加入青霉素加入青霉素分离酵母菌、霉菌等分离酵母菌、霉菌等真菌真菌加入高浓度食盐加入高浓度食盐分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源不加氮源分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无不加含碳有机物的无碳培养基碳培养基分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素加入青霉素等抗生素分离导入了目的基因分离导入了目的基因的受体细胞的受体细胞加加入入氨基喋呤、次黄氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶嘌呤
9、和胸腺嘧啶核苷核苷分离杂交瘤细胞分离杂交瘤细胞液体培养基液体培养基表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：菌落，菌苔半固体培养基半固体培养基无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)(是否运动？是否运动？)4.4.培养基的用途培养基的用途液体培养基：增菌液体培养基：增菌固体培养基：纯化，增菌固体培养基：纯化，增菌半固体培养基：动力检测，保种半固体培养基：动力检测，保种1.1.何为无菌技术？何为无菌技术？无菌技术包括哪些方无菌技术包括哪些方面？面？2.2.什么是消毒？灭菌？两者有何区别？什么是消毒？灭菌？两者有何区别？3.3.常用的消毒与灭菌的方法有
10、哪些？常用的消毒与灭菌的方法有哪些？有何要求？有何要求？4.4.请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。的操作步骤。1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。操作中，所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到的无论是随后将要学到的倒平板倒平板、平平板划线板划线操作，还是操作，还是平板稀释涂布法平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到其操作中的每一步都需要做到“无无菌菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功规范地进行无菌操作，才可
11、能成功地培养微生物。地培养微生物。（）（）消毒定义：消毒定义：利用化学或物理方法，杀死大部份利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。区分为致病微生物的过程。区分为高程度消毒高程度消毒（High-level DisinfectionHigh-level Disinfection）、）、中程度中程度消毒消毒（Intermediate-level Intermediate-level DisinfectionDisinfection）、）、低程度消毒低程度消毒（Low-Low-level Disinfectionlevel Disinfection）三种方式。）三种方式。2.2.消毒与灭菌的
12、概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别（2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：以化学剂或物理方法消灭以化学剂或物理方法消灭所有所有微微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到霉菌及病毒，而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。作中最普通也是最重要的技术。煮沸消毒法煮沸消毒法:100:100煮沸煮沸5-6min5-6min 巴氏消毒法：巴氏消毒法：707075 75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min 化学药剂消毒法化学药剂消毒
13、法:用用75%75%酒精进行皮酒精进行皮肤消毒肤消毒;用氯气消毒水源等用氯气消毒水源等 紫外线消毒紫外线消毒(1)消毒的方法消毒的方法3 3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌：干热灭菌：160160170 170 下下加热加热1 12h2h。高压蒸气灭菌：高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维持下维持151530min.30min.(2)灭菌的方法灭菌的方法 最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它可以，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保
14、持培养基的营养成分不被眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。破坏。有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌高温干热灭菌。为了。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设
15、计的。具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。分类分类定义定义方法方法灭菌法灭菌法杀灭一切微生物杀灭一切微生物物理法：热力、辐射、微物理法：热力、辐射、微波、等离子体波、等离子体化学法：醛类、烷化剂化学法：醛类、烷化剂高效消高效消毒法毒法杀灭一切致病微杀灭一切致病微生物生物紫外线、含氯剂、臭氧、紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等复配剂等中效消中效消毒法毒法杀灭除芽孢外的杀灭除芽孢外的致病微生物致病微生物超声波、碘类、醇类、酚超声波、碘类、醇类、酚类类低效消低效消毒法毒法杀灭细菌繁殖体杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒、亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、中单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子草药、金属离子1 1关于
16、微生物营养物质的叙述中，关于微生物营养物质的叙述中，正确的是正确的是A A、是碳源的物质不可能同时是氮源、是碳源的物质不可能同时是氮源 B B、凡碳源都提供能量、凡碳源都提供能量C C、除水以外的无机物只提供无机盐、除水以外的无机物只提供无机盐 DD、无机氮源也能提供能量、无机氮源也能提供能量答案：答案：D2 2下面对发酵工程中灭菌的理下面对发酵工程中灭菌的理解解的是的是A A、防止杂菌污染、防止杂菌污染 B B、消灭杂菌、消灭杂菌C C、培养基和发酵设备都必须灭、培养基和发酵设备都必须灭菌菌 D D、灭菌必须在接种前、灭菌必须在接种前答案：答案：B编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g1
17、0g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml3 3右表是某微生物培养基成右表是某微生物培养基成分，请据此回答：分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培养的微）右表培养基可培养的微生物类型是生物类型是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加加入培养基中。入培养基中。如不想浪费此培养基，可再如不想浪费此培养基，可再加入加入 。自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物
18、（3 3）若除去成分，加（）若除去成分，加（CH2OCH2O），），该培养基可用于培养该培养基可用于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都溶化）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行是后分装前，要进行是 。（6 6）右表中各成分重量确定的原则）右表中各成分重量确定的原则是是 。（7 7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是加的成分是 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂）1.1.无菌技术除了用来防止
19、实验室的培养物无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。菌。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒）需
20、要消毒。1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存四、实验操作四、实验操作(一一)制备牛肉膏蛋白胨培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌用于培养细菌)牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏牛肉膏 5.0g蛋白胨蛋白胨 10.0gNaCl 5.0g琼脂琼脂 20.0g将上述物质溶解后，添加自来水，定将上述物质溶解后，添加自来水，定容至容至1000mL1计算、称量计算、称量2溶化溶化3调调pH：pH764
21、过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。5分装：分装过程中注意不要使培分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6加塞加塞7包扎包扎操作步骤操作步骤8灭菌灭菌:将将50ml培养基用玻棒转移至三角培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为、温度为121，灭菌，灭菌1530min。将培养皿用旧报纸包裹
22、，放。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在入干热灭菌箱内，在160170 下灭下灭菌菌2h。倒平板技术倒平板技术1.将灭过菌的将灭过菌的培养皿放在火培养皿放在火焰旁的桌面上，焰旁的桌面上，右手拿装有培右手拿装有培养基的锥形瓶，养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。左手拨出棉塞。1234倒平板技术倒平板技术2.右手拿锥形右手拿锥形瓶，使瓶口迅瓶，使瓶口迅速通过火焰。速通过火焰。1234倒平板技术倒平板技术12343.用左手的拇指用左手的拇指和食指将培养皿和食指将培养皿打开一条稍大于打开一条稍大于瓶口的缝隙，右瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的手将锥形瓶中的培养基培养基(约约1020mL)倒入培养倒入培养皿
23、，左手立即盖皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。上培养皿的皿盖。倒平板技术倒平板技术12344.等待平板冷等待平板冷却凝固，大约却凝固，大约需需510min。然后，将平板然后，将平板倒过来放置，倒过来放置，使皿盖在下，使皿盖在下，皿底在上。皿底在上。9倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 左右时，在酒左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接后观察平板，无杂菌污染才可用来接种种.10无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入37的温室中培的温室中培养养2448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭
24、菌是否彻底。1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。板了。问题讨论问题讨论 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什
25、么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。珠落入培养基，造成污染。4.在倒平板的过程中，如果不小在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？为什么？答：空气中的微生物可能答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间
26、的培养基上滋在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培生，因此最好不要用这个平板培养微生物。养微生物。（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种技术：微生物的接种技术：平板划线的操作方法平板划线的操作方法 一旦划破，会造成划线不均匀，一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。处生长，会形成一个条状的菌落。一旦划破，
27、会造成划线不均匀，一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。处生长，会形成一个条状的菌落。1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次
28、划线种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。感染操作者。2.2.在灼烧接种环之
29、后，为什么要等其在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
30、的菌落。稀释涂布平板法稀释涂布平板法1.将分别盛有将分别盛有9mL水的水的6支试管灭菌，支试管灭菌，并按并按101106的顺序编号。的顺序编号。2.用移液管吸取用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第培养的菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。3.从从101倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注稀释液，注入入102倍稀释的试管中，重复第倍稀释的试管中，重复第2步的操作。步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。注意：注意：移液管
31、需要经过灭菌。操作时，移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰试管口和移液管离火焰12cm处处.涂布平板的所有操作都应在火焰附涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第菌操作要求，想一想，第2步应如何进行步应如何进行无菌操作？无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无无菌菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。问题讨论问题讨论微生物的恒温培养微生物
32、的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养菌种的保存菌种的保存1.临时保藏：临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后置养基，菌落长成后置于于4冰箱保存。冰箱保存。2.长期保存：长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中如果未接种的培养基在恒温箱中保温保温12 d后无菌落生长，说明培后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重养基的制备是成功的，否则需要重新制备。新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求
33、 如果培养基上生长的菌落的颜色、如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h与与24 h后的大肠杆菌菌落的后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。好的科学态度与习惯。本课题知识小结本课题知识小结:
