1、药理实验中容易犯的错误及对策药理实验中容易犯的错误及对策谢人明 陕西省中医药研究院 西安 710003谢沁 海正辉瑞制药有限公司 上海 200032刘芳 陕西中医学院 基础医学院 咸阳 7120462014.12 前言前言 l毛泽东主席1965年教导我们“人类总得不断地总结经验，有所发现、有所发明、有所创造、有所前进，停止的论点，悲观的论点,，无所作为和骄傲自满的论点都是错误的。”-人的正确思想是从哪里来的？在纪念白求恩那篇文章中说要学习“白求恩同志毫不利己专门利人的精神”，“对技术精益求精的精神”。笔者从事药理研究多年，积累了一些经验与教训。现归纳成药理实验中容易犯的错误并给予克服的对策及小
2、窍门。一、麻醉量要计算正确麻醉量要计算正确 注射部位要准确注射部位要准确l麻醉量要计算正确麻醉量要计算正确，注射部位要准确。否则，注射部位要准确。否则，导致麻醉过量死亡；不足，麻醉不全动物挣导致麻醉过量死亡；不足，麻醉不全动物挣扎不易手术。常用大鼠、小鼠、豚鼠以乌拉扎不易手术。常用大鼠、小鼠、豚鼠以乌拉坦麻醉较好，坦麻醉较好，1.0g/腹腔注射。例如大白鼠腹腔注射。例如大白鼠250g则用则用10%的乌拉坦的乌拉坦2.5ml腹腔注射即可，腹腔注射即可，位置以左、右下腹部以锋利针刺入腹腔，先位置以左、右下腹部以锋利针刺入腹腔，先向上挑见针尖，然后放平回抽无回血，便可向上挑见针尖，然后放平回抽无回血
3、，便可缓慢注入。位置一定要在腹壁与肠子之间浆缓慢注入。位置一定要在腹壁与肠子之间浆膜吸收最好。若注入肠腔中粪便吸附麻醉剂，膜吸收最好。若注入肠腔中粪便吸附麻醉剂，使其剂量不足动物不易麻醉，若再补过量，使其剂量不足动物不易麻醉，若再补过量，动物可能会因过量而致死亡。动物可能会因过量而致死亡。二、手术止血要彻底二、手术止血要彻底 保证血压平稳保证血压平稳l以大动物狗、猫为例，进行开胸血流动力学实以大动物狗、猫为例，进行开胸血流动力学实验，颈部手术分离出气管及颈总动脉，从颈部验，颈部手术分离出气管及颈总动脉，从颈部正中线开口，出血少，见出血点要线扎或电烧正中线开口，出血少，见出血点要线扎或电烧灼止血
4、。开胸时要肌肉分层切开，止血必须彻灼止血。开胸时要肌肉分层切开，止血必须彻底。否则开胸后狗的血压可低于底。否则开胸后狗的血压可低于100mmHg。l肌肉切开可以用两把止血钳分开，分别结扎后肌肉切开可以用两把止血钳分开，分别结扎后再切开。否则动物肝素化以后肌肉广泛出血，再切开。否则动物肝素化以后肌肉广泛出血，致狗血压过低，动物不能维持较长时间致狗血压过低，动物不能维持较长时间。三、大鼠利胆及幽门结扎抗溃疡实验大鼠利胆及幽门结扎抗溃疡实验 穿线穿线 位置很重要位置很重要l动物麻醉后仰卧位固定，从上腹部中线切开皮肤，动物麻醉后仰卧位固定，从上腹部中线切开皮肤，从腹白线切开进入腹腔，此位置血管很少，出
5、血从腹白线切开进入腹腔，此位置血管很少，出血少。找到十二指肠用无齿眼科弯镊子夹住十二指少。找到十二指肠用无齿眼科弯镊子夹住十二指肠，提起肠系膜沒有血管处，再用小镊子夹线穿肠，提起肠系膜沒有血管处，再用小镊子夹线穿过绕过十二指肠，如果是利胆实验将十二指肠向过绕过十二指肠，如果是利胆实验将十二指肠向下轻拉，从肝至十二指肠有一韧带，从中找出总下轻拉，从肝至十二指肠有一韧带，从中找出总胆管，穿双线下线结扎，上线先打一活结，以眼胆管，穿双线下线结扎，上线先打一活结，以眼科小剪剪开科小剪剪开1/3总胆管，将内径总胆管，将内径1mm的聚乙烯塑的聚乙烯塑料管插入，再将活扣扎紧，并将线扎于外边有胶料管插入，再将
6、活扣扎紧，并将线扎于外边有胶布缠绕的塑料管扎紧以防滑脱，黄色胆汁便不断布缠绕的塑料管扎紧以防滑脱，黄色胆汁便不断顺利流出。顺利流出。l同法幽门结扎时将胃的幽门部轻轻提起，同法幽门结扎时将胃的幽门部轻轻提起，在十二指肠肠系膜无血管处以镊子将缝线在十二指肠肠系膜无血管处以镊子将缝线穿过结扎幽门部，要轻拉否则将十二指肠穿过结扎幽门部，要轻拉否则将十二指肠旁胰腺破坏实验便不成功。好的操作幽门旁胰腺破坏实验便不成功。好的操作幽门结扎后结扎后4h胃液可达胃液可达5-8ml，手术不好的仅可，手术不好的仅可收集少于收集少于2ml胃液。四、血压实验减少切口出血血压实验减少切口出血l 以狗、猫、大鼠为对象，动物麻
7、醉后仰卧位固定，从以狗、猫、大鼠为对象，动物麻醉后仰卧位固定，从颈部正中下颌部至胸骨上部连线切口可少出血，纵向颈部正中下颌部至胸骨上部连线切口可少出血，纵向钝性分离气管前肌肉出血少，在气管两侧容易找到颈钝性分离气管前肌肉出血少，在气管两侧容易找到颈总动脉。以无齿眼科镊子将与颈总动脉同行的神经轻总动脉。以无齿眼科镊子将与颈总动脉同行的神经轻轻地分开。动脉下穿双线，远心端结扎，近心端打一轻地分开。动脉下穿双线，远心端结扎，近心端打一活结，将动脉夹夹住活结后的近心端。小剪子剪开活结，将动脉夹夹住活结后的近心端。小剪子剪开1/3管径，将充满肝素生理盐水的连接压力换能器的细塑管径，将充满肝素生理盐水的连
8、接压力换能器的细塑料管插入动脉，将活结扎死，并固定于塑料管外的胶料管插入动脉，将活结扎死，并固定于塑料管外的胶布处防滑脱。压力换能器中空气必须排空，以肝素生布处防滑脱。压力换能器中空气必须排空，以肝素生理盐水充满，不能有气泡，否则血压波动不稳，血易理盐水充满，不能有气泡，否则血压波动不稳，血易进入换能器中。换能器中应澄明无血，脉压差可达进入换能器中。换能器中应澄明无血，脉压差可达30-45mmHg。l若从股动脉插入，可在腹股沟处，以手摸若从股动脉插入，可在腹股沟处，以手摸动脉波动最明显处，以夹皮钳从两侧夹住，动脉波动最明显处，以夹皮钳从两侧夹住，用烧灼器烧开切口，这样可以减少出血，用烧灼器烧开
9、切口，这样可以减少出血，在动脉上方以并紧的止血钳引导进行烧灼，在动脉上方以并紧的止血钳引导进行烧灼，千万不能烧破股动脉，否则狗血喷头。以千万不能烧破股动脉，否则狗血喷头。以无齿眼科镊子分离出股动脉，并将并行的无齿眼科镊子分离出股动脉，并将并行的股静脉，股神经轻轻分开。穿线结扎同上。股静脉，股神经轻轻分开。穿线结扎同上。五、五、大鼠长期毒性实验结束后大鼠长期毒性实验结束后 颈总动脉插管取血最好颈总动脉插管取血最好l原因是血液量多，而且无组织液混入，血原因是血液量多，而且无组织液混入，血小板不破坏，手术准确，取血彻底，小板不破坏，手术准确，取血彻底，300g左右大鼠可取血左右大鼠可取血10mml以
10、上，满足很多的以上，满足很多的血液生化指标测定，如血液生化指标测定，如ALT、AST、TBL、TP、ALB、GLB、GLU、TC、TG、LDH、CK、K+、Na+、Cl-、Ca2+、P3+、BUN、CREA、ALP等等20项以及血液学指标项以及血液学指标16项项测定测定。六、血氧测定时保证动脉血样新鲜六、血氧测定时保证动脉血样新鲜 否则氧分压降低否则氧分压降低l一般可先分出股动脉，向后肢远心端分出倒一般可先分出股动脉，向后肢远心端分出倒Y字字形分支，从一细分支插入，取血插管进入股动脉形分支，从一细分支插入，取血插管进入股动脉管腔中，外连接三通取血。因为血总是流动的，管腔中，外连接三通取血。因为
11、血总是流动的，所以血氧饱和度好。所以血氧饱和度好。七、兔灌胃要注意不要入肺，七、兔灌胃要注意不要入肺，否则引起兔死亡否则引起兔死亡l一人用双腿夹兔双下肢，双手分别抓住前一人用双腿夹兔双下肢，双手分别抓住前腿及兔头，另一人将开口器从兔嘴角一侧腿及兔头，另一人将开口器从兔嘴角一侧插入，顺时针滚动，将兔舌压在下方，以插入，顺时针滚动，将兔舌压在下方，以导尿管从开口器中的中孔插入，将导尿管导尿管从开口器中的中孔插入，将导尿管外端插入装满水的烧杯中，若不冒气泡，外端插入装满水的烧杯中，若不冒气泡，说明导尿管插入食管中，可将药物缓缓注说明导尿管插入食管中，可将药物缓缓注入入1mL,动物不挣扎，再将药推完。
12、动物不挣扎，再将药推完。八、静脉注射液进行兔耳血管刺激八、静脉注射液进行兔耳血管刺激性实验的小窍门性实验的小窍门l兔耳缘静脉消毒后，用小儿头皮针兔耳缘静脉消毒后，用小儿头皮针3，4 从耳缘静脉远心端自耳尖部穿刺，以从耳缘静脉远心端自耳尖部穿刺，以1ml/min速度推入要测的注射液。每日一次，速度推入要测的注射液。每日一次，连续连续5-7天，每天往近心端前进天，每天往近心端前进3mm,注射注射完毕，以干棉签轻轻抚平静脉，可迅速止完毕，以干棉签轻轻抚平静脉，可迅速止血，通畅耳部循环。血，通畅耳部循环。九、特殊实验不要忘记禁食九、特殊实验不要忘记禁食l利胆实验、胃溃疡实验必须前天晚上禁食，利胆实验、
13、胃溃疡实验必须前天晚上禁食，狗、大鼠十二指肠给药也必须禁食，否则狗、大鼠十二指肠给药也必须禁食，否则药物被食物吸附，药物难以显示作用。药物被食物吸附，药物难以显示作用。十、不要忘记动物饮水饮食十、不要忘记动物饮水饮食l尤其是节假日，周六周日。一定不要忘记给动物尤其是节假日，周六周日。一定不要忘记给动物饮水饮食，否则动物饥渴难忍，做不好实验。北饮水饮食，否则动物饥渴难忍，做不好实验。北京同仁堂百年老字号有一古训京同仁堂百年老字号有一古训“修合无人见，存修合无人见，存心有天知心有天知”“”“人在做，天在看人在做，天在看”。你爱护照顾动。你爱护照顾动物，动物就给我们好的实验数据和结果。长期给物，动物
14、就给我们好的实验数据和结果。长期给药尤其要定时定人，要安抚动物，不要激惹动物，药尤其要定时定人，要安抚动物，不要激惹动物，不要对动物粗暴，否则动物有攻击性，就像捅马不要对动物粗暴，否则动物有攻击性，就像捅马蜂窝一样，马蜂就要蜇人。动物实验必须控制好蜂窝一样，马蜂就要蜇人。动物实验必须控制好条件，条件控制越严格，实验越容易成功。否则，条件，条件控制越严格，实验越容易成功。否则，实验数据标准差太大。实验数据标准差太大。结束语结束语l 吃一堑，长一智。失败是成功之母，实验不可能一帆风吃一堑，长一智。失败是成功之母，实验不可能一帆风顺，要经常及时总结，对技术精益求精。实验操作是一顺，要经常及时总结，对
15、技术精益求精。实验操作是一门艺术。老子说门艺术。老子说“天下难事，必作于易，天下大事，必天下难事，必作于易，天下大事，必作于细作于细”（道德经，第（道德经，第63章）细节决定成败，谁不注重章）细节决定成败，谁不注重细节，就要招致实验失败。希望年轻的药理工作者打好细节，就要招致实验失败。希望年轻的药理工作者打好基础，练好基本功。切开、结扎、止血、缝合、插管、基础，练好基本功。切开、结扎、止血、缝合、插管、灌胃、静脉注射灌胃、静脉注射。天才在于勤奋，聪明在于积累。天才在于勤奋，聪明在于积累。老子说老子说“合抱之木，生于微末。九层之台，起于垒土。合抱之木，生于微末。九层之台，起于垒土。千里之行，始于足下。千里之行，始于足下。”望年轻同志，认认真真，踏踏望年轻同志，认认真真，踏踏实实，一步一个脚印，慎终如始，不断总结经验，接受实实，一步一个脚印，慎终如始，不断总结经验，接受教训，积学储宝，迅速成长，迎接光辉灿烂的明天教训，积学储宝，迅速成长，迎接光辉灿烂的明天。l 谢谢 谢！谢！l
