1、 支原体Mycoplasma1支原体（支原体（Mycoplasma）缺乏细胞壁缺乏细胞壁，呈高度，呈高度多形性多形性能通过滤菌器能通过滤菌器能够在能够在无生命培养基中生长繁殖的最小无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物原核细胞型微生物2柔膜体纲柔膜体纲支原体目支原体目肺炎支原体，人型支肺炎支原体，人型支原体，生殖支原体，原体，生殖支原体，穿透支原体，发酵支穿透支原体，发酵支原体，梨支原体等原体，梨支原体等解脲脲原体解脲脲原体u分类分类支原体科支原体科无胆甾原体科无胆甾原体科螺原体科螺原体科支原体属支原体属脲原体属脲原体属3细胞个体小，细胞个体小，直径直径0.3-0.5 m mm。无细胞壁
2、无细胞壁，只有细胞膜，呈，只有细胞膜，呈高度多形性高度多形性。革兰氏染色阴性革兰氏染色阴性，不易着色。，不易着色。4细胞膜厚度细胞膜厚度7.5-10 nm，有，有外、中、内三层外、中、内三层。内外两层为内外两层为蛋白质及多糖蛋白质及多糖 中间层为含中间层为含胆固醇胆固醇的脂质成分的脂质成分凡能作用于胆固醇的物质，如皂素、毛地黄凡能作用于胆固醇的物质，如皂素、毛地黄甙、二性霉素甙、二性霉素B等均能破坏细胞膜，使支原体等均能破坏细胞膜，使支原体死亡。死亡。有的支原体有有的支原体有荚膜荚膜、特殊的、特殊的顶端结构顶端结构等。等。5肺炎支原体、生殖支原肺炎支原体、生殖支原体、穿透支原体等具有体、穿透支
3、原体等具有特殊的顶端结构特殊的顶端结构，呈烧，呈烧瓶状。瓶状。顶端结构具有黏附于宿顶端结构具有黏附于宿主上皮细胞表面的作用，主上皮细胞表面的作用，与与支原体的致病性有关支原体的致病性有关。6营养要求营养要求：高于一般细菌高于一般细菌，培养基中需加入血清以提供胆，培养基中需加入血清以提供胆固醇与其它长链脂肪酸，多数支原体还需添加固醇与其它长链脂肪酸，多数支原体还需添加酵母浸液、组织浸液、核酸提取物和辅酶。酵母浸液、组织浸液、核酸提取物和辅酶。pH：适宜适宜pH为为7.6-8.0，低于，低于7.0时易死亡。但时易死亡。但解脲解脲脲原体最适脲原体最适pH为为6.0-6.5。7氧气氧气：兼性厌氧兼性厌
4、氧，但大多数寄生性支原体在，但大多数寄生性支原体在37时在微氧环境（含时在微氧环境（含5%CO2和和90%N2）中）中生长最佳。生长最佳。繁殖方式繁殖方式：通常以通常以二分裂二分裂繁殖，也可以出芽、分枝、繁殖，也可以出芽、分枝、断裂等方式增殖。断裂等方式增殖。8支原体支原体生长缓慢生长缓慢，3-4 h繁殖一代。在固体繁殖一代。在固体培养基中培养培养基中培养48-96 h 形成菌落。形成菌落。在琼脂含量较少的固体培养基上，在琼脂含量较少的固体培养基上，2-7天后天后形成形成“荷包蛋荷包蛋”样菌落样菌落（“fried egg”colony）。）。菌落中心致密隆起，深入琼脂，周边为较薄菌落中心致密隆
5、起，深入琼脂，周边为较薄的透明颗粒区。的透明颗粒区。910液体培养基：清亮，用颜色变化单位（CCU）表示。肺炎支原体培养结果 1.培养基对照；25.肺炎支原体培养第25天 1 2 3 4 5 1 2 3 4 511支原体有许多特性与细菌支原体有许多特性与细菌L型相似型相似 无细胞壁，呈多形性无细胞壁，呈多形性 能通过滤菌器能通过滤菌器 对青霉素不敏感，对低渗敏感对青霉素不敏感，对低渗敏感“荷包蛋荷包蛋”样菌落样菌落 临床表现相似，为间质性肺炎等。临床表现相似，为间质性肺炎等。12支原体支原体细菌细菌L型型非细菌非细菌 与原菌相关，可以回复与原菌相关，可以回复细胞膜含高浓度细胞膜含高浓度胆固醇胆
6、固醇 细胞膜不含胆固醇细胞膜不含胆固醇培养时需要培养时需要胆固醇胆固醇大多需要高渗培养大多需要高渗培养生长生长慢慢，菌落，菌落小小菌落稍大菌落稍大液体培养混浊度液体培养混浊度极低极低有一定混浊度，可黏附有一定混浊度，可黏附于管底或管壁于管底或管壁13支原体支原体葡萄糖葡萄糖 精氨酸精氨酸尿素尿素吸附细胞吸附细胞 致病性致病性肺炎支原体肺炎支原体+-红细胞红细胞肺炎、支气管炎肺炎、支气管炎人型支原体人型支原体-+-泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染生殖支原体生殖支原体+-泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染穿透支原体穿透支原体+-红细胞红细胞CD4CD4+T T细胞细胞巨噬细胞巨噬细胞 条件感染条件感染多见于
7、多见于艾滋病艾滋病解脲脲原体解脲脲原体-+-泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染流产及流产及不孕不育不孕不育14支原体抗原结构主要支原体抗原结构主要来自细胞膜来自细胞膜，由蛋白，由蛋白质和糖脂组成。质和糖脂组成。不同支原体均有其特有的抗原结构，不同支原体均有其特有的抗原结构，交叉交叉较少较少，在鉴定支原体时有重要意义。，在鉴定支原体时有重要意义。15 补体结合试验可检测糖脂类抗原补体结合试验可检测糖脂类抗原 ELISA试验可检测蛋白质类抗原试验可检测蛋白质类抗原 血清抗体鉴定：血清抗体鉴定：生长抑制试验（生长抑制试验（growth inhibition test,GIT）代谢抑制试验（代谢抑制试验（m
8、etabolic inhibition test,MIT）16抵抗力比细菌弱抵抗力比细菌弱，易被脂溶剂及常用消毒剂，易被脂溶剂及常用消毒剂杀灭，对紫外线、低渗、干燥及热敏感。杀灭，对紫外线、低渗、干燥及热敏感。对醋酸铊、结晶紫和亚碲酸钾抵抗力强。对醋酸铊、结晶紫和亚碲酸钾抵抗力强。对影响细胞壁合成的抗生素不敏感对影响细胞壁合成的抗生素不敏感。对干扰。对干扰蛋白质合成的抗生素和阻碍蛋白质合成的抗生素和阻碍DNA复制的药物复制的药物敏感。敏感。17黏附素、荚膜、毒性代谢产物、超抗原、黏附素、荚膜、毒性代谢产物、超抗原、其他：如穿透支原体黏附侵入其他：如穿透支原体黏附侵入CD4T细细胞引起损伤。胞引
9、起损伤。支原体主要寄生于细胞外，一般为支原体主要寄生于细胞外，一般为表面表面感染感染，大多不侵入血液及组织细胞内。，大多不侵入血液及组织细胞内。致病物质致病物质:18 固有免疫固有免疫 适应性免疫适应性免疫体液免疫：体液免疫：抗膜蛋白的抗体包括抗膜蛋白的抗体包括IgMIgM、IgGIgG和和SIgASIgA。细胞免疫：细胞免疫：主要是特异性主要是特异性CD4CD4Th1Th1 细胞分泌细胞因子细胞分泌细胞因子。以以体液免疫为主体液免疫为主，细胞免疫也起作用。，细胞免疫也起作用。19肺炎支原体肺炎支原体 Mycoplasma Pneumoniae解脲脲原体解脲脲原体 Ureaplasma Ure
10、alyticum穿透支原体穿透支原体 Mycoplasma Penetrans20菌体大小为菌体大小为0.2-0.3 mm0.2-0.3 mm，呈短细丝状，呈短细丝状具有具有特殊的顶端结特殊的顶端结构构。位于该结构表。位于该结构表面的面的P1P1蛋白，是肺蛋白，是肺炎支原体与宿主细炎支原体与宿主细胞膜受体结合的部胞膜受体结合的部位。位。P1P1表面蛋白表面蛋白（170 170 kDakDa）和）和P30P30（32 32 kDakDa）为主要）为主要的黏附蛋白。的黏附蛋白。2122初次分离应在含血清和新鲜酵母浸出液的初次分离应在含血清和新鲜酵母浸出液的培养基中，一般培养基中，一般10天左右长出
11、菌落，多天左右长出菌落，多次传代后生长加快。次传代后生长加快。产生过氧化氢和溶血素。产生过氧化氢和溶血素。能发酵葡萄糖，不分解精氨酸与尿素。能发酵葡萄糖，不分解精氨酸与尿素。23主要主要侵犯呼吸系统侵犯呼吸系统传播途径传播途径：通过：通过飞沫传播飞沫传播夏末秋初为多发季节，以夏末秋初为多发季节，以5-20岁青少年发岁青少年发病率最高。病率最高。流行特点为间歇性。每流行特点为间歇性。每4-6年出现地区性流年出现地区性流行，流行持续数月至一年。行，流行持续数月至一年。24引起的病理改变以引起的病理改变以间质性肺炎间质性肺炎及急性细支及急性细支气管炎为主，又称气管炎为主，又称原发性非典型性肺炎原发性
12、非典型性肺炎（primary atypical pneumonia）。）。临床以咳嗽、发热、头痛、咽痛和肌肉痛临床以咳嗽、发热、头痛、咽痛和肌肉痛为主。为主。有时有呼吸道外并发症，如皮疹、心血管有时有呼吸道外并发症，如皮疹、心血管和神经系统症状。和神经系统症状。25免疫性免疫性u 血清特异性血清特异性IgMIgM、IgGIgG及及SIgASIgA和致敏的淋巴细胞和致敏的淋巴细胞；u 呼吸道局部黏膜产生的呼吸道局部黏膜产生的SIgASIgA对防止再感染有较对防止再感染有较强强 保护作用保护作用；u出现出现IgEIgE介导的介导的I I型超敏反应，促使型超敏反应，促使哮喘病哮喘病急性发急性发作作。
13、261.冷凝集试验用病人血清与人O型血红细胞或自身红细胞混合，4过夜时可发生凝集，而在37时凝集又分散解离开，但仅50左右的患者才出现阳性。此反应为非特异性。2.快速诊断ELISA：检测P1和P30蛋白mAbs。PCR：从痰标本中检测16S rRNA或P1蛋白基因。27PCR分离培养分离培养 3737，1-21-2周周典型菌落典型菌落鉴定鉴定生化反应生化反应形态染色形态染色GIT,MIT标本标本DNA测序测序ELISA快速、特异、敏感快速、特异、敏感28疫苗的预防效果尚无定论。疫苗的预防效果尚无定论。治疗首选治疗首选大环内酯类抗生素大环内酯类抗生素。青霉素类及头孢类抗生素无效青霉素类及头孢类抗
14、生素无效。29 （一）生物学性状u分解精氨酸。最适pH7.27.4；u 固体培养基上形成200300 m的菌落，呈典型 的“油煎蛋”状。（二）致病性u寄居于泌尿生殖道，通过性接触传播，可引起附睾炎、盆腔炎、产褥热等；u新生儿感染则可引起肺炎、脑炎和脑脓肿30（三）微生物学检查法人型支原体在液体培养基中的生长左图：培养基对照；右图：人型支原体分解精氨酸产碱，酚红指示剂变红。1.病原体检测 -液体和固体培养基接种；-特异抗血清做GIT与MIT进一步鉴定312.核酸检测核酸检测 PCR检测：检测：检测检测16S rRNA基因。此法快速、特异，适宜于大基因。此法快速、特异，适宜于大批量标本检测批量标本
15、检测。32预防：预防：加强宣传教育，注意性卫生，切断传播途径。加强宣传教育，注意性卫生，切断传播途径。治疗：治疗：人型支原体对大环内酯类抗生素不敏感，对红霉人型支原体对大环内酯类抗生素不敏感，对红霉素（素（100 mg/L）不敏感）不敏感；可用四环素类、喹诺酮类药物治疗，但有耐药株可用四环素类、喹诺酮类药物治疗，但有耐药株产生。产生。（四）防治原则（四）防治原则33 u生殖支原体基本形态为烧瓶状，能发酵葡萄糖使培养基变酸；u培养基上不生长，须在无醋酸铊SP-4培养基生长但缓慢，菌落呈典型的“油煎蛋”状；u顶端结构有黏附素MgPa，140 kDa，能黏附在人泌尿生殖道上皮，主要引起尿道炎；u较难
16、培养，生长慢，不适宜于常规实验室分离培养。实验室最好的诊断方法是核酸检测。34 1991年Lo首次从1例艾滋病患者尿中分离出一种新支原体，其形态为杆状或长烧瓶状，一端为顶端结构，具有黏附与穿入的作用。穿透支原体电镜照片穿透支原体电镜照片穿透支原体黏附并穿入红细胞穿透支原体黏附并穿入红细胞35u穿透支原体发酵葡萄糖，分解精氨酸，不分解尿素，在SP-4培养基上生长形成典型的“油煎蛋”状菌落；u顶端结构能黏附于人红细胞、单核细胞、CD4T淋巴细胞及人尿道上皮细胞，导致宿主细胞受损或死亡；u可能是艾滋病发病的一个辅助因素。36单个或成双排列，直径单个或成双排列，直径0.05-0.3 m mm，丝，丝状
17、体少见。状体少见。固体培养基中固体培养基中菌落小菌落小，直径，直径15-60 m mm。37培养需要胆固醇和酵母浸液。培养需要胆固醇和酵母浸液。pH要求较低要求较低，最适，最适pH为为6.0-6.5。具有具有尿素酶尿素酶，能分解尿素产生氨和，能分解尿素产生氨和CO2，使，使培养基培养基pH升高。升高。不分解糖类和精氨酸。不分解糖类和精氨酸。38传播途径传播途径：性传播、垂直传播性传播、垂直传播。引起引起非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎（non-gonococcal urethritis，NGU）、前列腺炎、附睾炎等）、前列腺炎、附睾炎等泌尿生殖道疾病。泌尿生殖道疾病。还与自然流产、早产、死胎和不孕
18、有关。还与自然流产、早产、死胎和不孕有关。39PCR液体培养基（含有酚红和尿素）液体培养基（含有酚红和尿素）标本标本典型菌落典型菌落鉴定鉴定生化反应生化反应GIT，MIT阳性（红色）阳性（红色）阴性（黄色）阴性（黄色）固体培养基固体培养基 3737、5%CO5%CO2 2、90%N90%N2 2DNA测序测序快速、特异快速、特异40 解脲脲原体病原体检测与防治原则与人型支原体相同；核酸检测可从患者泌尿生殖道标本中检测尿素酶基因、多带抗原基因和16S rRNA基因。41加强宣传教育，注意性加强宣传教育，注意性卫生，切断传播途径。卫生，切断传播途径。治疗选用四环素类、喹诺酮类药物，但有耐药株产生。治疗选用四环素类、喹诺酮类药物，但有耐药株产生。42何为支原体？主要致病性支原体有哪些？各引起何种疾病？何为支原体？主要致病性支原体有哪些？各引起何种疾病？支原体与支原体与L型细菌的主要区别有哪些？型细菌的主要区别有哪些？43
