1、教学安排：教学安排：1.员工培训员工培训 由老师讲解白细胞介素由老师讲解白细胞介素-2生产的理论基生产的理论基础。础。分配实操任务：白细胞介素发酵生产。分配实操任务：白细胞介素发酵生产。l2 酵母宿主菌特性酵母宿主菌特性l优点：可对蛋白修饰；蛋白折叠正确；优点：可对蛋白修饰；蛋白折叠正确；l缺点：生产较慢。缺点：生产较慢。常用甲醇诱导型。常用甲醇诱导型。l3 基因工程菌发酵控制要点基因工程菌发酵控制要点l(1)培养基培养基l 兼顾生长与外源基因表达。兼顾生长与外源基因表达。l(2)接种量接种量l 接种量适中，影响生长速度和迟滞期的接种量适中，影响生长速度和迟滞期的长短。长短。l(3)温度温度l
2、 影响酶活性。影响酶活性。l(4)溶解氧溶解氧l 维持较高维持较高DO值。值。l(5)诱导时机诱导时机l 微生物生长旺盛后。微生物生长旺盛后。l(6)pHl 根据生长期与生产期的需求控制。根据生长期与生产期的需求控制。l三、白细胞介素的结构与功能三、白细胞介素的结构与功能l Interleukin，简称，简称IL。l 目前批准上市的有目前批准上市的有IL-2、IL-6、IL-12等。等。l IL-2分子量为的糖蛋白，它分子量为的糖蛋白，它刺激已被特异性抗原或致丝裂因数启动的刺激已被特异性抗原或致丝裂因数启动的细胞增殖。重组白介素可用于临床细胞增殖。重组白介素可用于临床研究。主要用于研究。主要用
3、于肾癌肾癌、黑色素瘤黑色素瘤和和非何杰非何杰金淋巴瘤金淋巴瘤有效（）。有效（）。细胞代表个有单核巨噬细胞，细胞代表个有单核巨噬细胞，和淋巴细胞特征的异原的细胞体。这些和淋巴细胞特征的异原的细胞体。这些细胞似乎对癌细胞有特异作用。此细胞似乎对癌细胞有特异作用。此外，细胞（不象细胞）介导杀伤外，细胞（不象细胞）介导杀伤不受的约束。不受的约束。l四、生产工艺、生产工艺l1 工艺流程图IL-2工程菌工程菌斜面斜面摇瓶摇瓶发酵发酵制备包涵体制备包涵体洗涤与裂解洗涤与裂解凝胶过滤与凝胶过滤与复性复性检定与包装检定与包装l2 生产过程及工艺过程生产过程及工艺过程l(1)发酵发酵l 工程菌为大肠杆菌，温度敏感
4、型。工程菌为大肠杆菌，温度敏感型。l 种子用种子用LB培养基；培养基；l 发酵用发酵用M9CA培养基，培养基，30度度10小时，后小时，后提高温度至提高温度至42度，诱导度，诱导3h。l(2)分离纯化分离纯化l包涵体制备包涵体制备l 离心收集，菌体悬于离心收集，菌体悬于EDTA溶液中，用溶液中，用超声波破碎细胞，后超声波破碎细胞，后8000r/min离心，收集离心，收集沉淀沉淀(包涵体和细胞碎片包涵体和细胞碎片)。l 包涵体洗涤及裂解：包涵体洗涤及裂解：l l 用用Tris-HCl洗涤洗涤3次，离心收集沉淀，用次，离心收集沉淀，用盐酸胍变性，离心收集上清液。盐酸胍变性，离心收集上清液。l凝胶过滤及复性：凝胶过滤及复性：l 上清过上清过Sephacryl S-200柱，醋酸液洗脱，柱，醋酸液洗脱，收集洗脱峰。收集洗脱峰。l干燥：干燥：l 用冷冻真空干燥。用冷冻真空干燥。l作业：作业：l1 蛋白药物有哪些种类？蛋白药物有哪些种类？l2 大肠杆菌与酵母宿主菌各有何特点和表达大肠杆菌与酵母宿主菌各有何特点和表达类型？类型？l3 白细胞介素白细胞介素-2有何功能与用途？有何功能与用途？l4 白细胞介素生产工艺如何？白细胞介素生产工艺如何？22 结束语结束语
