1、常用的病毒学诊断方法包括：常用的病毒学诊断方法包括：病毒的分离鉴定病毒的分离鉴定病毒的血清学检查病毒的血清学检查病毒蛋白和核酸的检测病毒蛋白和核酸的检测第一节 病毒感染的诊断二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定(一)病毒的分离1.动物接种动物接种 是最原始的病毒培养方法，根据病毒种是最原始的病毒培养方法，根据病毒种类不同，选择敏感动物及适宜接种部位，类不同，选择敏感动物及适宜接种部位，如嗜如嗜 神经性病毒（狂犬病毒）可接种神经性病毒（狂犬病毒）可接种于小鼠脑内，痘病毒可接种于家兔角膜于小鼠脑内，痘病毒可接种于家兔角膜或皮内。或皮内。2.鸡胚培养鸡胚培养 鸡胚对多种病毒敏感。一般采用孵化鸡胚
2、对多种病毒敏感。一般采用孵化914天的鸡胚，根据病毒种类不同，天的鸡胚，根据病毒种类不同，将病毒标本将病毒标本 接种于鸡胚的不同部位，接种于鸡胚的不同部位，最常用的鸡胚接种部位有：羊膜腔、尿最常用的鸡胚接种部位有：羊膜腔、尿囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。3.组织培养法组织培养法 (tissueculture)或细胞或细胞培养培养(cellculture)法法 是将离体活组织块或分散的组织细胞加是将离体活组织块或分散的组织细胞加以培养的技术总称，为病毒分离鉴定中以培养的技术总称，为病毒分离鉴定中的最常用的基本方法。的最常用的基本方法。1.细胞的变化细胞的变化 有些病毒在
3、细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为细胞病变效应(CPE)。常见的变化有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等。有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等 作用于细胞膜，可使邻近的细胞相互融合，形成多核巨细胞或称融合细胞。有些病毒(如狂犬病病毒、麻疹病毒等)可在培养细胞中形成胞浆或核内的包涵体。病毒在培养细胞中增殖的指标病毒在培养细胞中增殖的指标病毒培养时出现的CPE1.中和试验中和试验(neutralizing test,NT test)是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验。中和抗体(netralizing antibodies,NTAb)是作用于病毒表面抗原(衣壳或包膜
4、)的抗体，同种不同型病毒间一般无交叉，特异性高，而且抗体在体内维持时间长。中和抗体阳性不一定表示正在感染中，也可能因以前有过隐性感染所致。因此，中和试验适用于人群免疫情况的调查，在临床诊断上较少使用。2.补体结合试验补体结合试验(complement fixation test,CF test)用已知病毒可溶性(CF)抗原来检测病人血清中相应(CF)抗体。CF抗原是病毒的内部抗原，同种异型间常有交叉，故特异性较中和试验低。但CF抗体出现较早，消失较快，故CF阳性可作为近期感染的指标。减毒活疫苗与死疫苗优缺点比较特点减毒活疫苗死疫苗制备方法通过非正常培养减毒株通过化学物理方法使感染失活免疫接种一
5、般为一次性多次免疫疫苗的稳定性相对不稳定相对稳定免疫的类型体液免疫和细胞免疫体液免疫毒力回升有可能不可能安全性对免疫缺陷者有危险安全性好生产和成本生产较复杂、成本高生产简单、成本低一、抗病化学制剂一、抗病化学制剂（一）核苷类药物 核苷类药物的作用机制有主要是抑制病毒基因复制模拟核苷成分掺入病毒基因组：合成的异常嘧啶取代病毒DNA前体的胸腺嘧啶，病毒在复制过程中，这种异常的嘧啶分子掺入子代DNA中使子代病毒结构基因的合成和表达无法进行，从而抑制病毒的复制，或复制出的病毒为缺陷病毒。竞争病毒复制酶 1.无环鸟苷(acyclovir,ACV，阿昔洛韦)和丙氧鸟苷（ganciclovir GCV，庚昔
6、洛韦）为鸟嘌呤或脱氧鸟嘌呤核苷类似物。该药细胞毒性很小，是目前最有效的抗疱疹病毒药物之一。广泛用于疱疹病毒感染引起的单纯疱疹、生殖器疱疹及带状疱疹。2.叠氮胸苷(azidothymidine,AZT)胸腺嘧啶核苷类似物，通过阻断前病毒DNA的合成而抑制HIV的复制，AZT对病毒逆转录酶的抑制比对细胞DNA多聚酶敏感100倍以上。可以有效地降低AIDS的发病率与病死率。耐药株的出现系由基因突变导致逆转录酶具有耐药性。因有抑制骨髓作用和形成病毒的耐药而面临被淘汰。3.病毒唑 对多种RNA和DNA病毒的复制都有抑制作用，但主要用于RNA病毒感染的治疗，对细胞的核酸也有抑制作用。目前临床主要用于流感病
7、毒和呼吸道合胞病毒的治疗。1赛科纳瓦(saquinavir)1995年批准的第1个蛋白酶抑制剂。2英迪纳瓦（indinavir）、瑞托纳瓦（ritonavir）是1996年批准的新一代蛋白酶抑制剂，用于HIV。（五）其他抗病毒药物（五）其他抗病毒药物1.金刚烷胺和甲基金刚烷胺 金刚烷胺为合成胺类，甲基金刚烷胺是其衍生物，两者有相同的抗病毒谱和副作用，能阻止脱壳，主要用于治疗甲型流感。2.甲酸磷霉素 无机焦磷酸盐的有机类似物，抑制多种疱疹病毒，包括CMV、HSV、VZV、EBV、HHV6，可能还对HBV和逆转录病毒有作用。选择性抑制病毒DNA多聚酶和逆转录酶，而对宿主细胞无影响。二、干扰素和干扰
8、素诱生剂的应用二、干扰素和干扰素诱生剂的应用1.干扰素(IFN)具有广谱抗病毒作用，毒性小，使用同种IFN无抗原性，主要用于甲、乙、丙型肝炎，HSV，乳头瘤病毒和鼻病毒等感染的治疗。反复应用也会引起耐药性。2.IFN诱生剂 如：poly I C、甘草甜素、芸芝多糖。三、中草药防治病毒感染三、中草药防治病毒感染 中草药如黄芪、板蓝根、大青叶、贯众、螃蜞菊以及甘草和大蒜提取物等均有抑制病毒的作用，对肠道病毒、呼吸道病毒、虫媒病毒、肝炎病毒感染有一定防治作用，其作用机理尚在研究中。四、基因治疗四、基因治疗五、免疫治疗五、免疫治疗2.补体结合试验补体结合试验(complement fixation t
9、est,CF test)用已知病毒可溶性(CF)抗原来检测病人血清中相应(CF)抗体。CF抗原是病毒的内部抗原，同种异型间常有交叉，故特异性较中和试验低。但CF抗体出现较早，消失较快，故CF阳性可作为近期感染的指标。一、抗病化学制剂一、抗病化学制剂（一）核苷类药物 核苷类药物的作用机制有主要是抑制病毒基因复制模拟核苷成分掺入病毒基因组：合成的异常嘧啶取代病毒DNA前体的胸腺嘧啶，病毒在复制过程中，这种异常的嘧啶分子掺入子代DNA中使子代病毒结构基因的合成和表达无法进行，从而抑制病毒的复制，或复制出的病毒为缺陷病毒。竞争病毒复制酶 2.叠氮胸苷(azidothymidine,AZT)胸腺嘧啶核苷
10、类似物，通过阻断前病毒DNA的合成而抑制HIV的复制，AZT对病毒逆转录酶的抑制比对细胞DNA多聚酶敏感100倍以上。可以有效地降低AIDS的发病率与病死率。耐药株的出现系由基因突变导致逆转录酶具有耐药性。因有抑制骨髓作用和形成病毒的耐药而面临被淘汰。3.病毒唑 对多种RNA和DNA病毒的复制都有抑制作用，但主要用于RNA病毒感染的治疗，对细胞的核酸也有抑制作用。目前临床主要用于流感病毒和呼吸道合胞病毒的治疗。（五）其他抗病毒药物（五）其他抗病毒药物1.金刚烷胺和甲基金刚烷胺 金刚烷胺为合成胺类，甲基金刚烷胺是其衍生物，两者有相同的抗病毒谱和副作用，能阻止脱壳，主要用于治疗甲型流感。2.甲酸磷霉素 无机焦磷酸盐的有机类似物，抑制多种疱疹病毒，包括CMV、HSV、VZV、EBV、HHV6，可能还对HBV和逆转录病毒有作用。选择性抑制病毒DNA多聚酶和逆转录酶，而对宿主细胞无影响。四、基因治疗四、基因治疗
