1、1 新药的开发过程新药的开发过程$600 millions6 to 12 YearsDrug DiscoveryNon-ClinicalDevelopment Clinical TrialsPhase IIIPhase IIPhase IMarket LaunchCSFHDPDSubmissionamToxicology/ADME2抗肿瘤药物分类(1)细胞毒类药物细胞毒类药物(cytotoxic agent)：包括干扰核酸和蛋白：包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等(2)生物反应调节剂生物反应调节剂(biological
2、 response modifier)(3)肿瘤耐药逆转剂肿瘤耐药逆转剂(resistance reversal agent)(4)肿瘤治疗增敏剂肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer)(5)肿瘤血管生成抑制剂肿瘤血管生成抑制剂(tumor angiogenesis inhibitor)(6)分化诱导剂分化诱导剂(differentiation inducing agent)(7)生长因子抑制剂生长因子抑制剂(growth factor inhibitor)(8)反义寡核苷酸反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide)3抗肿瘤药物药效学n包括体外抗肿
3、瘤试验，体内抗肿瘤试验n评价药物的抗癌活性时，以体内试验结果为主，同时参考体外试验结果以做出正确的结论。nI类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步研究。4体外抗肿瘤活性试验体外抗肿瘤活性试验试验目的 n 对候选化合物进行初步筛选n了解候选化合物的抗瘤谱n为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考，如剂量范围、肿瘤类别等 5 试验方法试验方法n选用选用10-15株人癌细胞株株人癌细胞株n根据试验目的选择相应细胞系及适量的细胞接种浓度，根据试验目的选择相应细胞系及适量的细胞接种浓度，按常规细胞培养法进行培养按常规细胞培养法进行培养n推荐使用四氮唑盐推荐使用四氮唑盐MTT还原法、还原法、XTT 还原法、磺酰罗还
4、原法、磺酰罗丹明丹明B(SRB)染色法、或染色法、或51Cr释放试验、集落形成法等释放试验、集落形成法等测定药物的抗癌作用。测定药物的抗癌作用。n药物与细胞共培养时间一般为药物与细胞共培养时间一般为48-72 小时，贴壁细胞小时，贴壁细胞需先贴壁需先贴壁24 小时后再给药。小时后再给药。n试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照用一定浓度的试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照用一定浓度的标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照。6测定细胞生长和存活方法测定细胞生长和存活方法nM T T 法 和法 和 X T T 法 是 代 谢 测 定 法，没 有 颜 色 的法 是 代 谢 测
5、定 法，没 有 颜 色 的tetrazolium salt(MTT 和和XTT)被细胞还原，产生具被细胞还原，产生具有颜色的与活细胞数成比例的有颜色的与活细胞数成比例的formazan，比色测定。比色测定。n为了简化为了简化MTT solubilization步骤，发展了步骤，发展了XTT tetrazolium测定方法，测定方法，MTT还原产生不溶性还原产生不溶性formazan,比色测定前溶解于比色测定前溶解于DMSO，XTT试剂可被试剂可被活细胞直接代谢成水溶性活细胞直接代谢成水溶性formazan，不需进一步处，不需进一步处理培养细胞，便可以立即读取光密度。方便简单，其理培养细胞，便可
6、以立即读取光密度。方便简单，其缺点是可产生相对比较高的背景数据，同时也具有缺点是可产生相对比较高的背景数据，同时也具有MTT的不稳定终点特性。的不稳定终点特性。7测定细胞生长和存活方法测定细胞生长和存活方法n对系列蛋白质染色剂进行实验，发现对系列蛋白质染色剂进行实验，发现磺磺酰罗丹明酰罗丹明B（sulforhodamine B）(SRB)可替代可替代tetrazolium assay方法，方法，具有最好的燃料结合强度，信噪比率，具有最好的燃料结合强度，信噪比率，并且和细胞数具有很好的线形关系，并且和细胞数具有很好的线形关系，SRB是一亮粉色染料，在稀醋酸中，可是一亮粉色染料，在稀醋酸中，可结合
7、于结合于TCA固定细胞的碱性氨基酸上。固定细胞的碱性氨基酸上。具有十分稳定的终点具有十分稳定的终点。8 评价标准评价标准n以同一样品不同浓度对肿瘤细胞抑制率以同一样品不同浓度对肿瘤细胞抑制率作图可得到剂量效应曲线作图可得到剂量效应曲线n采用采用Logit法计算半数有效浓度法计算半数有效浓度(IC50值值或或EC50值值)。n体外试验至少重复一次。体外试验至少重复一次。9体内抗肿瘤试验体内抗肿瘤试验n体内抗肿瘤试验必须选用三种以上肿瘤模型体内抗肿瘤试验必须选用三种以上肿瘤模型n动物肿瘤移植模型动物肿瘤移植模型n人类肿瘤裸鼠移植瘤模型人类肿瘤裸鼠移植瘤模型n重复试验重复试验 鼓励使用人类肿瘤裸鼠移
8、植瘤模型和多种类的移鼓励使用人类肿瘤裸鼠移植瘤模型和多种类的移植瘤模型、原位接种模型和中空纤维测定植瘤模型、原位接种模型和中空纤维测定(hollow-fiber assay)等等 方法。方法。10 动物动物n动物要求健康，符合等级动物要求，有动物要求健康，符合等级动物要求，有实验动物合格证。实验动物合格证。n雌雄均可，但同一批实验中动物性别必雌雄均可，但同一批实验中动物性别必须相同。须相同。n小鼠鼠龄为小鼠鼠龄为5-6周，体重为周，体重为18-22克。克。n评价同一物质的活性时，不同批次的实评价同一物质的活性时，不同批次的实验必须采用同一品系的小鼠。验必须采用同一品系的小鼠。11肿瘤模型肿瘤模
9、型n小鼠肿瘤模型小鼠肿瘤模型 淋巴细胞白血病腹水瘤淋巴细胞白血病腹水瘤L1210和和P388、白血、白血病病L-615、宫颈癌、宫颈癌U14、肝癌、肝癌H22、Lewis肺肺癌、黑色素瘤癌、黑色素瘤B16、网织细胞瘤、网织细胞瘤M5076、肠、肠癌癌26、肠腺癌、肠腺癌38、乳腺癌、乳腺癌CD8F1、艾氏腹水、艾氏腹水瘤（瘤（EAC）、肉瘤）、肉瘤-180等，以及各种小鼠肿等，以及各种小鼠肿瘤的亚型和耐药株等。瘤的亚型和耐药株等。12肿瘤模型肿瘤模型n人类肿瘤裸鼠移植模型人类肿瘤裸鼠移植模型 n应选用体外试验敏感细胞株进行体内抗应选用体外试验敏感细胞株进行体内抗人类肿瘤裸鼠移植试验。人类肿瘤裸
10、鼠移植试验。13缺点缺点部分模型很难构建，部分模型很难构建，皮下抑制肿瘤很少转皮下抑制肿瘤很少转移，生存时间不适合移，生存时间不适合作为试验终点作为试验终点优点优点n可预测细胞毒类可预测细胞毒类化合物的活性化合物的活性n有助于筛选化合有助于筛选化合物，为临床用药物，为临床用药程序和联合用药程序和联合用药方案提供参考方案提供参考n可用于研究获得可用于研究获得性药物抗性性药物抗性14NCI回顾性研究：回顾性研究：多个人癌移植模型试验的阳性结果可在一定多个人癌移植模型试验的阳性结果可在一定程度上提示临床有效性程度上提示临床有效性非小细胞肺癌移植模型具有临床相关性非小细胞肺癌移植模型具有临床相关性 通
11、常移植临床拟治疗的肿瘤细胞通常移植临床拟治疗的肿瘤细胞15人类肿瘤裸鼠移植模型建立时的注意点人类肿瘤裸鼠移植模型建立时的注意点 1.移植瘤一般由相应的细胞株移植而建立，移植瘤一般由相应的细胞株移植而建立，对细胞株和移植瘤的化疗敏感性应予了解。对细胞株和移植瘤的化疗敏感性应予了解。2.移植瘤复苏后一般应传移植瘤复苏后一般应传2-3代后再用于体内代后再用于体内抗肿瘤试验。抗肿瘤试验。3.对模型生长情况应全面了解，尤其是生长对模型生长情况应全面了解，尤其是生长快的模型快的模型4.为了保持移植瘤的生物学特性和遗传特性，为了保持移植瘤的生物学特性和遗传特性，复苏后移植瘤体内传代应少于复苏后移植瘤体内传代
12、应少于 15-20代代 16人类肿瘤裸鼠移植模型建立时的注意点人类肿瘤裸鼠移植模型建立时的注意点n细胞要求达到最低质量保证标准（支原体、细胞要求达到最低质量保证标准（支原体、MAP、人类同功酶、核型和体内致瘤性的检、人类同功酶、核型和体内致瘤性的检查）、适应同一培养液以及具有可重复的生长查）、适应同一培养液以及具有可重复的生长和药物敏感特性。制备大量的保种细胞，并冷和药物敏感特性。制备大量的保种细胞，并冷冻保存，用于药物筛选过程中细胞经冻保存，用于药物筛选过程中细胞经20代传代代传代后的替换。所有细胞在筛选过程中均要进行详后的替换。所有细胞在筛选过程中均要进行详细特性确认，如组织病理、超微结构
13、、免疫细细特性确认，如组织病理、超微结构、免疫细胞化学，以确定和证明组织和肿瘤类型。胞化学，以确定和证明组织和肿瘤类型。17肿瘤模型产生免疫原性的表现q近交系动物的遗传特性发生漂移，对肿瘤模型近交系动物的遗传特性发生漂移，对肿瘤模型产生免疫性。产生免疫性。产生免疫性的表现有：产生免疫性的表现有：1.在传代和对照组中出现肿瘤消退，假如肿瘤在传代和对照组中出现肿瘤消退，假如肿瘤出现溃疡、消退和再生长，可能是感染造成，出现溃疡、消退和再生长，可能是感染造成，如果是溃疡、消退，并且不再生长，通常是由如果是溃疡、消退，并且不再生长，通常是由于免疫原性引起。如果用于免疫原性引起。如果用60mg的同种肿瘤攻
14、的同种肿瘤攻击动物，结果没有生长，基本可以肯定产生了击动物，结果没有生长，基本可以肯定产生了免疫性。免疫性。18肿瘤模型产生免疫原性的表现2.在化疗实验中有大于在化疗实验中有大于2个剂量水平的治愈个剂量水平的治愈时，应怀疑有免疫原性在起作用。时，应怀疑有免疫原性在起作用。3.在生命延长期实验中，存活动物的生命在生命延长期实验中，存活动物的生命延长增长百分率应小于延长增长百分率应小于250%，如果大，如果大于于250%应怀疑有免疫原性在起作用。应怀疑有免疫原性在起作用。4.缺乏明显的侵袭性和转移，可能是由于缺乏明显的侵袭性和转移，可能是由于肿瘤的恶性程度比较低，也可能是由于肿瘤的恶性程度比较低，
15、也可能是由于免疫性问题造成。免疫性问题造成。19肿瘤模型产生免疫原性的表现n5.对药物反应性的改变表明免疫原性的形成。对药物反应性的改变表明免疫原性的形成。n6.肿瘤在后期阶段比早期阶段的反应更好，肯肿瘤在后期阶段比早期阶段的反应更好，肯定表明是免疫性参与，对于均质性的肿瘤模型定表明是免疫性参与，对于均质性的肿瘤模型而言，开始给药的时间越早，肿瘤反应越好，而言，开始给药的时间越早，肿瘤反应越好，免疫反应要经对抗原的识别和处理后才能产生。免疫反应要经对抗原的识别和处理后才能产生。n给予小鼠两次用给予小鼠两次用X-射线杀死的肿瘤细胞，间隔射线杀死的肿瘤细胞，间隔10天，再天，再10天后，给处理和没
16、有处理的小鼠天后，给处理和没有处理的小鼠移植活的肿瘤细胞，检测免疫性的产生是一种移植活的肿瘤细胞，检测免疫性的产生是一种很好方法，费时、费力。很好方法，费时、费力。20试验过程试验过程肿瘤接种方法肿瘤接种方法n皮下接种皮下接种n腹腔接种腹腔接种n原位接种原位接种 21皮下肿瘤模型皮下肿瘤模型n选择肿瘤生长旺盛且无溃破的荷瘤小鼠，颈椎选择肿瘤生长旺盛且无溃破的荷瘤小鼠，颈椎脱臼处死，在无菌条件下（超净台或接种罩），脱臼处死，在无菌条件下（超净台或接种罩），用碘酒、酒精或新洁尔灭消毒动物皮肤，切开用碘酒、酒精或新洁尔灭消毒动物皮肤，切开皮肤，剥离肿瘤。将瘤组织剪成皮肤，剥离肿瘤。将瘤组织剪成1.5
17、 mm3左右，左右，用套管针接种于动物一侧或双侧腋窝皮下；或用套管针接种于动物一侧或双侧腋窝皮下；或制成细胞悬液，然后按一定比例加入无菌生理制成细胞悬液，然后按一定比例加入无菌生理盐水，一般每只小鼠接种肿瘤细胞数量为（盐水，一般每只小鼠接种肿瘤细胞数量为（1-5）106。22腹水瘤模型n无菌条件下，消毒动物皮肤，吸取生长无菌条件下，消毒动物皮肤，吸取生长良好的动物腹水，以生理盐水按一定比良好的动物腹水，以生理盐水按一定比例稀释后接种于动物腹腔，接种细胞数例稀释后接种于动物腹腔，接种细胞数量一般为（量一般为（1-5）106。23原位接种模型n原位接种是指将来源于某脏器的肿瘤接种在动原位接种是指将
18、来源于某脏器的肿瘤接种在动物的某脏器，如将人肝癌接种在裸小鼠的肝脏。物的某脏器，如将人肝癌接种在裸小鼠的肝脏。原位接种不是常规的方法，但有其优越性，是原位接种不是常规的方法，但有其优越性，是鼓励使用的方法。主要有肺、肝、胃、肠、乳鼓励使用的方法。主要有肺、肝、胃、肠、乳腺、颅内等原位接种方法腺、颅内等原位接种方法 24实验设计实验设计n试验设阴性对照组、阳性对照组、治疗试验设阴性对照组、阳性对照组、治疗组。组。n治疗组设高、中、低三个剂量组。小鼠治疗组设高、中、低三个剂量组。小鼠肿瘤和腹水瘤接种后次日将动物随机分肿瘤和腹水瘤接种后次日将动物随机分组，裸鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤组，裸鼠移植瘤
19、用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至直径，待肿瘤生长至100300mm3后后将动物随机分组。将动物随机分组。n动物数普通小鼠每组动物数普通小鼠每组10只，裸鼠只，裸鼠6只。只。25剂量设置剂量设置n治疗组设高、中、低剂量治疗组，一般按治疗组设高、中、低剂量治疗组，一般按4:2:1设置，高剂量使用最大耐受量或设置，高剂量使用最大耐受量或LD10的的剂量。剂量。n阴性对照组给予相应的溶剂；阴性对照组给予相应的溶剂；n阳性对照药选用对该动物敏感的、临床应用的阳性对照药选用对该动物敏感的、临床应用的抗肿瘤药物，抗肿瘤药物，n如受试物为一抗癌药物的衍生物或类似物时，如受试物为一抗癌药物的衍生物或类似物
20、时，必须选用该抗癌药物作为阳性对照药。必须选用该抗癌药物作为阳性对照药。26阳性对照药选择原则阳性对照药选择原则n疗效确切疗效确切n与被试物质化学结构类似与被试物质化学结构类似n与被试物质有类似的作用机理。与被试物质有类似的作用机理。27药物配制药物配制n溶于水的药物，用生理盐水或蒸馏水配制；如溶于水的药物，用生理盐水或蒸馏水配制；如用酸、碱溶解者，可先用小量酸用酸、碱溶解者，可先用小量酸(0.1-0.5N HCl)或碱或碱(NaHCO3、Na2CO3、NaOH)溶解，溶解，调节调节pH在在4.5-9.0的范围内。用乙醇、丙二醇、的范围内。用乙醇、丙二醇、吐温吐温80、DMSO助溶的药物，或用
21、吐温助溶的药物，或用吐温60、吐温吐温80、2-3%淀粉、淀粉、0.5%羧甲基纤维素制羧甲基纤维素制成混悬液的药物，可腹腔注射或口服，但必须成混悬液的药物，可腹腔注射或口服，但必须设相同浓度的溶剂对照组。用注射用花生油配设相同浓度的溶剂对照组。用注射用花生油配制的溶液或乳剂可口服、皮下或肌肉注射。制的溶液或乳剂可口服、皮下或肌肉注射。28给药方案和给药途径给药方案和给药途径n分组当日开始给药，根据不同药物的代谢动力分组当日开始给药，根据不同药物的代谢动力学和毒性反应等确定给药方案。学和毒性反应等确定给药方案。n给药途径应与推荐临床用药的途径相同。给药途径应与推荐临床用药的途径相同。n给药次数较
22、多，或被试物质溶解性较差，静脉给药次数较多，或被试物质溶解性较差，静脉给药有困难时，可考虑使用腹腔给药，但在评给药有困难时，可考虑使用腹腔给药，但在评价药效时要注意这两种给药途径是有差别的。价药效时要注意这两种给药途径是有差别的。n 可采取瘤周、瘤内、肌肉、皮下给药途径。可采取瘤周、瘤内、肌肉、皮下给药途径。n腹水瘤试验时一般不能应用腹腔给药途径腹水瘤试验时一般不能应用腹腔给药途径。29评价标准评价标准 腹水瘤模型腹水瘤模型n接种给药后，观察和记录动物死亡时间，接种给药后，观察和记录动物死亡时间，计算生存天数。如阴性对照组计算生存天数。如阴性对照组20%动物动物存活时间超过存活时间超过4周，表
23、明腹水瘤生长不良，周，表明腹水瘤生长不良，实验作废实验作废。30评价标准评价标准 裸鼠移植瘤模型裸鼠移植瘤模型n推荐使用测量瘤径的方法，动态观察受推荐使用测量瘤径的方法，动态观察受试物抗肿瘤的效应。试物抗肿瘤的效应。n肿瘤直径的测量次数根据移植瘤的生长肿瘤直径的测量次数根据移植瘤的生长情况而定，一般为每周情况而定，一般为每周2-3次次,每次测量每次测量同时还需称鼠重同时还需称鼠重。31评价标准评价标准n肿瘤体积肿瘤体积(tumor volume,TV)的计算公式为：的计算公式为：V =1/2ab2 或或/6abcn其中其中a、b、c分别表示长宽高。两公式的相关分别表示长宽高。两公式的相关性极好
24、，可采用任一公式。性极好，可采用任一公式。n根据测量结果计算出相对肿瘤体积（根据测量结果计算出相对肿瘤体积（relative tumor volume，RTV），），RTV=Vt/V0。n其中其中V0为分笼给药时为分笼给药时(即即d0)测量所得肿瘤体积，测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积为每一次测量时的肿瘤体积。32评价标准n抗肿瘤活性评价指标为相对肿瘤增殖率抗肿瘤活性评价指标为相对肿瘤增殖率T/C（%）TRTVT/C%=100%CRTVnTRTV：治疗组：治疗组RTV；CRTV：阴性对照组：阴性对照组RTV。n疗效评价标准：疗效评价标准：T/C%60%为无效；为无效；T/C%60
25、（42？）%，并经统计学处理，并经统计学处理P0.05为有效。为有效。33评价标准（小鼠肿瘤模型）n生长较慢小鼠肿瘤采用与裸鼠移植瘤同样的测生长较慢小鼠肿瘤采用与裸鼠移植瘤同样的测量瘤径的评价方法。量瘤径的评价方法。n生长较快小鼠肿瘤可采用称瘤重的方法评价。生长较快小鼠肿瘤可采用称瘤重的方法评价。试验结束后处死动物，称体重，解剖剥离瘤块，试验结束后处死动物，称体重，解剖剥离瘤块，称瘤重。阴性对照组肿瘤平均瘤重小于称瘤重。阴性对照组肿瘤平均瘤重小于1克，克，或或20%肿瘤重量小于肿瘤重量小于400毫克，表示肿瘤生毫克，表示肿瘤生长不良，试验作废。长不良，试验作废。34评价标准（小鼠肿瘤模型）n疗
26、效评价公式：疗效评价公式：给药组平均瘤重给药组平均瘤重-阴性对照组平均瘤重阴性对照组平均瘤重肿瘤生长抑制率肿瘤生长抑制率 =100%阴性对照组平均瘤重阴性对照组平均瘤重 n评价标准评价标准 肿瘤生长抑制率肿瘤生长抑制率40%为无效；肿瘤生长抑制率为无效；肿瘤生长抑制率40%，并经统计学处理并经统计学处理P50%n细胞形态学观察：可在光学显微镜与电镜下观察候选细胞形态学观察：可在光学显微镜与电镜下观察候选化合物作用后细胞的形态学变化，对照组的早幼粒细化合物作用后细胞的形态学变化，对照组的早幼粒细胞应胞应90%-95%，候选化合物组细胞分化，成熟粒，候选化合物组细胞分化，成熟粒细胞占比例越高，说明
27、该化合物的分化效果越好细胞占比例越高，说明该化合物的分化效果越好 53分化诱导剂n实体瘤细胞的分化诱导实体瘤细胞的分化诱导 n常用细胞株、试验方法及评价标准常用细胞株、试验方法及评价标准：人肝癌人肝癌HepG2、SMMC7721 主要测定细胞的甲胎蛋白主要测定细胞的甲胎蛋白(AFP)、白蛋白含、白蛋白含量，量，-谷氨酸转移酶谷氨酸转移酶(-GT)、酪氨酸转氨酶、酪氨酸转氨酶(TAT)活性及观察细胞形态。活性及观察细胞形态。分化细胞分化细胞AFP含量、含量、TAT和和-GT活性明显降低，活性明显降低，白蛋白含量增加，细胞胞质增加、核缩小。白蛋白含量增加，细胞胞质增加、核缩小。54分化诱导剂n体内
28、试验体内试验 n常用人癌细胞小鼠肾囊膜下移植试验、常用人癌细胞小鼠肾囊膜下移植试验、小鼠髓单核细胞白血病试验和人癌细胞小鼠髓单核细胞白血病试验和人癌细胞裸小鼠移植瘤模型等。裸小鼠移植瘤模型等。n可选两种模型，根据肿瘤鼠生存时间、可选两种模型，根据肿瘤鼠生存时间、肿瘤的体积及形态变化，观察分化诱导肿瘤的体积及形态变化，观察分化诱导效果。效果。n重复试验一次重复试验一次 55肿瘤治疗增敏剂n增敏剂主要是指放射治疗增敏剂，能增增敏剂主要是指放射治疗增敏剂，能增加临床上恶性肿瘤放射治疗或其它治疗加临床上恶性肿瘤放射治疗或其它治疗的疗效及降低治疗后的复发率。的疗效及降低治疗后的复发率。n药效学试验分为体
29、外和体内试验：药效学试验分为体外和体内试验：56肿瘤治疗增敏剂n体外试验体外试验 n分别选择对放射、化疗药物具有中、低分别选择对放射、化疗药物具有中、低度敏感的人肿瘤细胞株，度敏感的人肿瘤细胞株，n采用采用MTT、SRB或细胞集落形成方法进或细胞集落形成方法进行化合物的细胞毒性试验，以行化合物的细胞毒性试验，以IC50值作值作为评价指标。为评价指标。57 肿瘤治疗增敏剂n体内试验体内试验 n选用对射线及化疗药物敏感性较小的三种实体选用对射线及化疗药物敏感性较小的三种实体瘤模型进行试验，其中至少有一种人癌裸鼠移瘤模型进行试验，其中至少有一种人癌裸鼠移植瘤模型。植瘤模型。n由强致癌物或病毒等因素诱
30、发的肿瘤，或者不由强致癌物或病毒等因素诱发的肿瘤，或者不是在同一品系动物身上移植传代的肿瘤往往会是在同一品系动物身上移植传代的肿瘤往往会出现免疫反应，因此都不能用于肿瘤治疗增敏出现免疫反应，因此都不能用于肿瘤治疗增敏剂研究。剂研究。n疗效评价可参照体内抗肿瘤试验疗效评价可参照体内抗肿瘤试验 58 抗肿瘤药物的安全性评价抗肿瘤药物的安全性评价59非临床安全性评价的目的非临床安全性评价的目的药物筛选和临床研究间的过渡药物筛选和临床研究间的过渡n预测药物在人体中的安全性预测药物在人体中的安全性n预测药物的毒性靶器官和可逆性预测药物的毒性靶器官和可逆性n判断药物是否可进入临床研究判断药物是否可进入临床
31、研究n为为 I I 期临床研究的起始剂量和临床研究方案提期临床研究的起始剂量和临床研究方案提供参考供参考60n骨髓抑制：骨髓抑制：5-FU，Taxoln肝脏毒性肝脏毒性:甲氨喋呤，甲氨喋呤，6-6-巯基嘌呤巯基嘌呤n胃肠道毒性：胃肠道毒性：5-FU，长春新碱，长春新碱n肾毒性：顺铂，甲氨喋呤肾毒性：顺铂，甲氨喋呤n心脏毒性：白消安，阿霉素心脏毒性：白消安，阿霉素n呼吸系统毒性：甲氨喋呤，环膦酰胺呼吸系统毒性：甲氨喋呤，环膦酰胺n神经毒性：神经毒性：5-FU，Taxol举例：举例：61n安全性药理学试验安全性药理学试验n急性毒性试验急性毒性试验n长期给药毒性试验长期给药毒性试验n遗传毒性试验遗传
32、毒性试验n生殖毒性试验生殖毒性试验n致癌性试验致癌性试验62 新作用机制的细胞毒类抗肿瘤药应进行安全新作用机制的细胞毒类抗肿瘤药应进行安全性药理学试验性药理学试验（ICH）63 试验设计关注点：试验设计关注点：n一般应测定啮齿类和非啮齿类动物的一般应测定啮齿类和非啮齿类动物的MTD或啮齿类或啮齿类动物的动物的STD10n应采用临床拟用给药途径应采用临床拟用给药途径n尽量采用临床拟用剂型尽量采用临床拟用剂型n试验恢复期一般应为试验恢复期一般应为24周周nFDA：至少一种动物应进行一般行为、摄食量血液：至少一种动物应进行一般行为、摄食量血液学、血液生化学和组织病理学检查学、血液生化学和组织病理学检
33、查n建议测定最大耐受剂量下的建议测定最大耐受剂量下的AUC 64 推算临床起始剂量（按体表面积计算）推算临床起始剂量（按体表面积计算）：nEMEA:以最敏感动物的以最敏感动物的MTD的的1/10为为I期临床研期临床研究的起始剂量究的起始剂量nFDA:（1）若啮齿类动物）若啮齿类动物STD10的的1/10不引起非不引起非啮齿类动物产生毒性，以啮齿类动物啮齿类动物产生毒性，以啮齿类动物STD10的的1/10作为作为I期临床研究的起始剂量；（期临床研究的起始剂量；（2）若引起）若引起毒性，以不引起非啮齿类动物出现严重、不可逆毒毒性，以不引起非啮齿类动物出现严重、不可逆毒性的剂量的性的剂量的1/6作为
34、作为I期临床研究的起始剂量期临床研究的起始剂量n有文献（有文献（1986年）：年）：1/10LD10为为I期临床研究的期临床研究的起始剂量起始剂量65n叶酸抑制剂不宜使用啮齿类动物叶酸抑制剂不宜使用啮齿类动物n铂类化合物有时不宜使用犬铂类化合物有时不宜使用犬相关动物：相关动物：66n采用啮齿类和非啮齿类动物采用啮齿类和非啮齿类动物n给药频率尽量与临床一致给药频率尽量与临床一致n给药期限为给药期限为4周（周（12个治疗周期）的长期个治疗周期）的长期毒性研究可支持药物进行毒性研究可支持药物进行I期和等周期的期和等周期的II期期临床试验临床试验n给药期限一般最长不超过给药期限一般最长不超过6个月个月
35、n恢复期多为恢复期多为68周周67一般不需要在临床研究前完成遗传毒性试验一般不需要在临床研究前完成遗传毒性试验一般不需要进行致癌性试验一般不需要进行致癌性试验不一定要求上市前提供生殖毒性试验资料不一定要求上市前提供生殖毒性试验资料68细胞毒抗肿瘤药非临床研究技术要求的相关文献细胞毒抗肿瘤药非临床研究技术要求的相关文献n美国美国（1）The current toxicology protocol of the National Cancer Institute(Lowe MC.,et al,Fundamentals of Cancer Chemotherapy,McGraw-Hill,1984)
36、（2）Regulatory Considerations for Preclinical developmental of anticancer drugs(DeGeorge JJ.,et al,Cancer Chemother Pharmacol,1998)n欧盟欧盟 Note for guidance on the preclinical evaluation of anticancer medicinal products CPMP/SWP/997/96(effective:Jan 99)n中国中国 细胞毒类抗肿瘤药药效学和毒理学研究技术指导原则细胞毒类抗肿瘤药药效学和毒理学研究技术指导
37、原则 卫生部卫生部/1993.7/1993.7n日本日本正制定指导原则草案，现有“关于支持抗癌药临床试验和上市注册的毒关于支持抗癌药临床试验和上市注册的毒性试验的问题和解答性试验的问题和解答”/厚生劳动省/2004.869技术要求比较（技术要求比较（1）毒理研究内容毒理研究内容美国美国欧盟欧盟日本日本一般药理一般药理急性毒性急性毒性-Rodent-Non Rodent 长期毒性长期毒性（较短给药期）（较短给药期）a a-Rodent-Non Rodent长期毒性长期毒性-Rodent(6-monthb)-Non Rodent(6-monthb)-Non Rodent(9-month)ICH-P
38、hase I（新机制）Phase IPhase IPhase I/IIPhase I/IIPhase III/注册Phase III/注册不要求ICH-Phase I（新机制）Phase IPhase IPhase IaPhase IaPhase II/III/注册Phase II/III/注册不要求ICH-Phase I（新机制）Phase IPhase I同ICH同ICH同ICH-可小于9个月a 2 weeks to 1 month or 1 to 2 cyclesb maximum of 6 months or 6 to 8 cycles70技术要求比较（技术要求比较（2）毒理研究内容毒
39、理研究内容美国美国欧盟欧盟日本日本遗传毒性遗传毒性致癌性致癌性生殖毒性生殖毒性-Seg I-Seg II-Seg III注册不要求不要求Phase III/注册不要求 Phase III/注册不要求不要求推 荐不要求Phase II不要求Phase I？Phase I？Phase III？71n由于恶性肿瘤危及生命和细胞毒抗肿瘤由于恶性肿瘤危及生命和细胞毒抗肿瘤药性质，其非临床评价具有鲜明的特点药性质，其非临床评价具有鲜明的特点n其非临床研究可在较大程度上预测临床其非临床研究可在较大程度上预测临床不良反应及其可逆性不良反应及其可逆性n非临床安全性研究对确定安全、有效的非临床安全性研究对确定安全
40、、有效的临床起始剂量（通过临床起始剂量（通过MTD MTD 或或STDSTD1010)和临床和临床试验方案有重要的作用试验方案有重要的作用n应从利弊权衡角度来把握与其研究和评应从利弊权衡角度来把握与其研究和评价的灵活性价的灵活性72p 经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量p Study Constantly,And You Will Know Everything.The More You Know,The More Powerful You Will Be写在最后感谢聆听不足之处请大家批评指导Please Criticize And Guide The Shortcomings结束语讲师：XXXXXX XX年XX月XX日
