1、生物必修必修 人教版人教版专题二微生物的培养与应用微生物的培养与应用课题课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版学学 习习 目目 标标课课 程程 标标 准准1研究培养基对微生物的选择作用。研究培养基对微生物的选择作用。2利用选择培养基从土壤中分离分解尿素利用选择培养基从土壤中分离分解尿素的细菌。的细菌。(重点重点)3利用稀释涂布平板法进行细菌数目的测利用稀释涂布平板法进行细菌数目的测定。定。(难点难点)1用土壤浸出液进行细菌培用土壤浸出液进行细菌培养。养。2以尿素为氮源，测定能生长以尿素为氮源，测定能生
2、长细菌的数量。细菌的数量。1 1自主学习自主学习2 2新知解读新知解读3 3指点迷津指点迷津4 4核心素养核心素养5 5问题释疑问题释疑6 6知识构建知识构建7 7训练巩固训练巩固8 8课课 时时 作作 业业返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版自自 主主 学学 习习返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版一、筛选菌株一、筛选菌株1自然界中目的菌株筛选的依据：根据它对自然界中目的菌株筛选的依据：根据它对_的要求，到相应的要求，到相应的环境中去寻找。的环境中去寻找。2实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于_生
3、长的条件生长的条件(包括营养、温度、包括营养、温度、pH等等)，同时，同时_或或_其他微生物生长。其他微生物生长。3筛选分解尿素的细菌：在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中筛选分解尿素的细菌：在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中的唯一的唯一_，原则上只有能够利用，原则上只有能够利用_的微生物才能够生长。的微生物才能够生长。生存环境生存环境目的菌株目的菌株抑制抑制阻止阻止氮源氮源尿素尿素返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版二、统计菌落数目的方法二、统计菌落数目的方法1常用方法：常用方法：_法。法。2统计依据：当样品的统计依据：当样品的_足够高时，培养基表面生长的
4、一个菌足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个落，来源于样品稀释液中的一个_。通过统计平板上的菌落数，就能推。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。测出样品中大约含有多少活菌。3操作：操作：(1)设置重复组，增强实验的说服力与准确性。设置重复组，增强实验的说服力与准确性。(2)为保证结果准确，一般选择菌株数在为保证结果准确，一般选择菌株数在_的平板进行计数。的平板进行计数。4计算公式：每克样品中的菌株数计算公式：每克样品中的菌株数(CV)M，其中，其中C代表某一稀释度代表某一稀释度下平板上生长的下平板上生长的_，V代表涂布平板时所用的代表涂布平板时所用的
5、_，M代表代表_。间接计数间接计数(活菌计数活菌计数)稀释度稀释度活菌活菌30300平均菌落数平均菌落数稀释液的体积稀释液的体积稀释倍数稀释倍数返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版三、设置对照三、设置对照1对照实验：是指除了对照实验：是指除了_以外，其他条件都相同的实验。以外，其他条件都相同的实验。2主要目的：排除实验组中主要目的：排除实验组中_对实验结果的影响，提高实验对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。例如，为了确认培养基是否被杂菌污染，需以不进行接种的培结果的可信度。例如，为了确认培养基是否被杂菌污染，需以不进行接种的培养基培养作为空白对照。养基培养作为空白
6、对照。被测试条件被测试条件非测试因素非测试因素返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版四、实验设计四、实验设计1土壤取样：土壤取样：(1)取样原因：土壤有取样原因：土壤有“微生物的微生物的_”之称，同其他生物环境相之称，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量比，土壤中的微生物数量_，种类，种类_。(2)土壤要求：富含土壤要求：富含_，pH接近接近_且潮湿。且潮湿。(3)取样部位：距地表约取样部位：距地表约_的土壤层。的土壤层。2样品稀释：样品稀释：(1)稀释原因：样品的稀释原因：样品的_直接影响平板上生长的直接影响平板上生长的_。(2)稀释标准：选用一定稀释范围的样品液进
7、行培养，保证获得菌落数在稀释标准：选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得菌落数在_，便于计数。，便于计数。天然培养基天然培养基最大最大最多最多有机质有机质中性中性38 cm稀释程度稀释程度菌落数目菌落数目30300返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版3微生物的培养与观察：微生物的培养与观察：(1)培养：根据不同微生物的需要，控制适宜的培养培养：根据不同微生物的需要，控制适宜的培养_和培养时间。和培养时间。(2)观察。观察。观察方法：每隔观察方法：每隔24h统计一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录统计一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。作为结果
8、。菌落的特征：包括菌落的菌落的特征：包括菌落的_、_、隆起程度和、隆起程度和_等。等。温度温度形状形状大小大小颜色颜色返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版五、操作提示五、操作提示1无菌操作：无菌操作：(1)取土样的用具在使用前都需要取土样的用具在使用前都需要_。(2)实验操作均应在实验操作均应在_进行。进行。2做好标记：本实验使用的平板和试管比较多，为避免混淆，使用前应标做好标记：本实验使用的平板和试管比较多，为避免混淆，使用前应标明培养基的明培养基的_、_以及平板上培养样品的以及平板上培养样品的_等。等。3制定计划：对于耗时较长的生物实验，要事先制定计划，以便提高制
9、定计划：对于耗时较长的生物实验，要事先制定计划，以便提高_。4菌种鉴定：细菌合成的菌种鉴定：细菌合成的_将尿素分解成氨，使培养基的将尿素分解成氨，使培养基的_增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_指示剂，培养某种细菌指示剂，培养某种细菌后，若指示剂变后，若指示剂变_，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。灭菌灭菌火焰旁火焰旁种类种类培养日期培养日期稀释度稀释度工作效率工作效率脲酶脲酶碱性碱性酚红酚红红红返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版？思考？思考土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？土壤微生物
10、种类最多、数量最大的原因是什么？提示：提示：土壤中营养物质含量丰富，环境条件适宜等。土壤中营养物质含量丰富，环境条件适宜等。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版1选择分解尿素的细菌的培养基为液体培养基。选择分解尿素的细菌的培养基为液体培养基。()分析：分析：选择分解尿素的细菌的培养基为固体培养基，固体培养基具有分选择分解尿素的细菌的培养基为固体培养基，固体培养基具有分离、鉴定作用。离、鉴定作用。2统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数目最多的平板进行统统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数目最多的平板进行统计。计。()分析：分析：统计菌落数目时为保证结果准
11、确，一般选择菌落数在统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板的平板进行统计。进行统计。判断题判断题返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版3统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数目。统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数目。()分析：分析：由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。落，所以统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。4设置对照的目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实设置对照的目的是排除实验组中非测试因素对
12、实验结果的影响，提高实验结果的可信度。验结果的可信度。()5统计菌落数目的理论依据是一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。统计菌落数目的理论依据是一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。()6统计菌落数目时应选取菌落数目稳定时的记录作为结果。统计菌落数目时应选取菌落数目稳定时的记录作为结果。()返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版新新 知知 解解 读读返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版1原理原理人为提供有利于目的菌株生长的条件人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、包括营养、温度、pH等等)，同时抑制，同时抑制或阻止其他微生物生长。
13、或阻止其他微生物生长。2实例实例从热泉中筛选出从热泉中筛选出Taq细菌。热泉细菌。热泉7080的高温条件淘汰了绝大多数微生的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而使耐热的物，而使耐热的Taq细菌脱颖而出。细菌脱颖而出。知识点知识点1筛选菌株的原理与方法筛选菌株的原理与方法知识贴士知识贴士科学家从该细菌中分离到的科学家从该细菌中分离到的TaqDNA聚合酶能够忍受聚合酶能够忍受93左右的高温。左右的高温。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版3选择培养基选择培养基(1)概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同
14、时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。(2)原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性不同而制备培养基。不同而制备培养基。例如：用培养基选择能分解尿素的微生物的原理例如：用培养基选择能分解尿素的微生物的原理培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源，而不能生长、繁为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源，而不
15、能生长、繁殖，所以用此培养基就能够选择出能分解尿素的微生物。殖，所以用此培养基就能够选择出能分解尿素的微生物。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版(3)方法方法在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里的霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里的“加入加入”是在培养是在培养成分的基础上加入。成分的基础上加入。改变培养基中的营养成分。例如，缺乏氮源时可以分离固氮微生物；石改变培养基中的营养成分。例如，缺乏氮源时可以分离固氮微生物；
16、石油作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物。油作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物。改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境中培养可以得到改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境中培养可以得到耐高温的微生物。耐高温的微生物。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是()A未接种的选择培养基未接种的选择培养基B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D接种了的选择培养基
17、接种了的选择培养基解析解析将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照遵循的原则是单一变量原则。照遵循的原则是单一变量原则。C典例典例 1返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版 变式训练变式训练1 下面是某一课题将用到的培养基配方，请根据下表回答下下面是某一课题将用到的培养基配方，请根据下表回答下面的问题：面的问题：编号编号成分成分含量含量KH2PO41.4gNa2H
18、PO42.1gMgSO47H2O0.2g葡萄糖葡萄糖10.g尿素尿素1.0g琼脂琼脂15.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版(1)在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的是在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的是_，提供氮源的，提供氮源的是是_。(2)绝大多数微生物能利用绝大多数微生物能利用_，但是，只有能合成脲酶的微生物才，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解能分解_。(3)分析该培养基的配方，该培养基对微生物是否具有选择作用？如果具分析该培养基的配方，该培养基对微生物是否具有选择作用？
19、如果具有，又是如何进行选择的？有，又是如何进行选择的？_葡萄糖葡萄糖尿素尿素葡萄糖葡萄糖尿素尿素具有。以尿素为唯一氮源的培养基可以分离到产生脲酶的微生物具有。以尿素为唯一氮源的培养基可以分离到产生脲酶的微生物(即分解尿即分解尿素的微生物素的微生物)。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版解析解析碳源是提供碳元素的物质，氮源是提供氮元素的物质。所以碳源碳源是提供碳元素的物质，氮源是提供氮元素的物质。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成是葡萄糖，氮源是尿素。绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以这
20、种培养基对微生物有选择作用。选择的原脲酶的微生物才能分解尿素，所以这种培养基对微生物有选择作用。选择的原则是只有能够利用尿素的微生物才能够生长。则是只有能够利用尿素的微生物才能够生长。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版1统计菌落数目的方法统计菌落数目的方法微生物生长量的测定有计数法、重量法、生理指标法等方法，一般使用计微生物生长量的测定有计数法、重量法、生理指标法等方法，一般使用计数法。计数法可分为直接计数法和间接计数法，两者的比较如下表所示。数法。计数法可分为直接计数法和间接计数法，两者的比较如下表所示。知识点知识点2统计菌落数目的方法及设置对照统计菌落数目的方法
21、及设置对照项目项目直接计数法直接计数法间接计数法间接计数法原理原理利用特定细菌计数板或利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样镜下计算一定容积的样品中微生物的数量品中微生物的数量当样品的稀释度足够高时，培养基表面生当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌推测出样品中大约含有多少活菌返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版项目项目直接计数法直接计数法间接计数法间接计数法
22、主要用具主要用具显微镜、细菌计数板或血细显微镜、细菌计数板或血细胞计数板胞计数板培养基培养基计数依据计数依据 菌体本身菌体本身培养基上的菌落数培养基上的菌落数优点优点计数方便、操作简单计数方便、操作简单计数的活菌计数的活菌缺点缺点死菌、活菌都计算在内死菌、活菌都计算在内操作较复杂，且有一定误差操作较复杂，且有一定误差计算公式计算公式每毫升原液含菌数每毫升原液含菌数(每格每格平均菌体数平均菌体数400)计数室计数室容积容积稀释倍数稀释倍数注：注：400是常数。是常数。每克样品中的菌株数每克样品中的菌株数(CV)M。其中，。其中，C表示某一稀释度下平表示某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，板上生长
23、的平均菌落数，V代表涂代表涂布 平 板 时 所 用 的 稀 释 液 的 体 积布 平 板 时 所 用 的 稀 释 液 的 体 积(mL)，M代表稀释倍数代表稀释倍数返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版知识贴士知识贴士(1)间接计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因有两个：间接计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因有两个：当当两个或多个细菌连在一起繁殖时，平板上观察到的只是一个菌落；两个或多个细菌连在一起繁殖时，平板上观察到的只是一个菌落；统计结果统计结果只是活细菌产生的菌落数，而不包括死细菌数目。只是活细菌产生的菌落数，而不包括死细菌数目。(2)为使结
24、果接近真实值，一般选择菌落数在为使结果接近真实值，一般选择菌落数在30300的平板进行计数；要设的平板进行计数；要设置重复组，取其平均值。置重复组，取其平均值。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版2设置对照设置对照(1)对照实验：是指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。对照实验：是指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。(2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。的可信度。3稀释涂布平板法常用来统计活菌数稀释涂布平板法常用来统计活菌数(1)原理原理当样品的稀释度足
25、够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活菌。菌。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版(2)操作操作设置对照组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列设置对照组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取01mL接种到已制备好的平板上，然接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布
26、器将菌液涂布于整个平板表面，放在适宜的温度下培养，计算菌后用无菌涂布器将菌液涂布于整个平板表面，放在适宜的温度下培养，计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板上，落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养、计算出菌落平均数。经涂布、培养、计算出菌落平均数。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()
27、A涂布了一个平板，统计的菌落数是涂布了一个平板，统计的菌落数是230B涂布了两个平板，统计的菌落数是涂布了两个平板，统计的菌落数是215和和260，取平均值，取平均值238C涂布了三个平板，统计的菌落数分别是涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和和256，取平均值，取平均值163D涂布了三个平板，统计的菌落数分别是涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和和250，取平均值，取平均值233D典例典例 2返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版解析解析在设计实验时，一定要至少涂布在设计实验时，一定要至少涂布3个平板，作为重复组，才能增强个平板，作为重复组，
28、才能增强实验的说服力与准确性，所以实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。不正确。C项虽涂布了项虽涂布了3个平板，但是，其中个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。个平板的计数值用来求平均值。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版变式训练变式训练2 用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。原因是板上
29、的菌落数就能推测出样品中的活菌数。原因是()A平板上的一个菌落就是一个细菌平板上的一个菌落就是一个细菌B菌落中的细菌数是固定的菌落中的细菌数是固定的C此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌 D此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同解析解析用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，平板上的一个菌落用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌，但偶尔也能来自两个或以上细菌，所以一般来源于样品稀释液中的一个活菌，但偶尔也能来自两个或以上细菌，所以此方法统计的菌数可
30、能与活菌的实际数不相同。此方法统计的菌数可能与活菌的实际数不相同。C返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版土壤取样从肥沃、湿润的土壤中，用无菌小铁铲铲去表层土，迅速取土土壤取样从肥沃、湿润的土壤中，用无菌小铁铲铲去表层土，迅速取土壤并装入无菌信封密封壤并装入无菌信封密封 制备培养基准备选择培养基，以尿素为唯一氮源制备制备培养基准备选择培养基，以尿素为唯一氮源制备9个平板培养基个平板培养基知识点知识点3土壤中分解尿素的细菌的分离与计数过程土壤中分解尿素的细菌的分离与计数过程返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版样品的稀释在火焰旁称取土壤样品的稀释在
31、火焰旁称取土壤10g，放入盛有，放入盛有90mL无菌水的三角烧瓶无菌水的三角烧瓶中，振摇使土样与水充分混合，将菌分散。制成中，振摇使土样与水充分混合，将菌分散。制成101倍土壤稀释液，用一支倍土壤稀释液，用一支1mL无菌吸管从中吸取无菌吸管从中吸取1mL土壤悬液注入盛有土壤悬液注入盛有9mL无菌水试管中，吹吸三次，使充无菌水试管中，吹吸三次，使充分混匀，制成分混匀，制成102倍土壤稀释液，以此类推制成倍土壤稀释液，以此类推制成103、104、105、106倍土壤稀释液倍土壤稀释液 取样涂布在上述培养基的取样涂布在上述培养基的9个平板底面，每三个一组分别用记号笔写上个平板底面，每三个一组分别用记
32、号笔写上104、105、106倍的三种稀释液，然后用三支倍的三种稀释液，然后用三支1mL无菌吸管分别由无菌吸管分别由104、105、106倍的三管土壤稀释液中吸取倍的三管土壤稀释液中吸取01mL对号放入已写好稀释度的平板中，用无菌涂对号放入已写好稀释度的平板中，用无菌涂布器在培养基表面轻轻地涂布均匀布器在培养基表面轻轻地涂布均匀返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版(如图如图)返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版(2017江苏盐城中学高二期末江苏盐城中学高二期末)下列是关于下列是关于
33、“检测土壤中细菌总检测土壤中细菌总数数”实验操作的叙述，其中错误的是实验操作的叙述，其中错误的是()A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B取取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各倍的土壤稀释液和无菌水各01mL，分别涂布于各组，分别涂布于各组平板上平板上C将实验组和对照组平板倒置，将实验组和对照组平板倒置，37恒温培养恒温培养2448小时小时D确定对照组无菌后，选择菌落数在确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数以上的实验组平板进行计数D典例典例 3返回导航专题二微生物的培养与应用生物必
34、修生物必修 人教版人教版解析解析用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，先经高温、高压灭菌，后倒用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，先经高温、高压灭菌，后倒平板，平板，A正确；测定土壤中细菌总数利用稀释涂布平板法，即取正确；测定土壤中细菌总数利用稀释涂布平板法，即取104、105、106倍倍的土壤稀释液和无菌水各的土壤稀释液和无菌水各01ml，分别涂布于各组平板上，分别涂布于各组平板上，B正确；平板倒置正确；平板倒置后，将实验组和对照组在后，将实验组和对照组在37恒温培养恒温培养2448小时，小时，C正确；确定对照组无菌正确；确定对照组无菌后，选择菌落数在后，选择菌落数在30300的进行记数，求其平均值，
35、再通过计算得出土壤中细的进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数，菌总数，D错误。错误。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版变式训练变式训练3 在在“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中，关于实验中，关于“选择培养选择培养”步骤叙述正确的是步骤叙述正确的是()A可以增加分解尿素的细菌的浓度可以增加分解尿素的细菌的浓度B可以减少分解尿素的细菌的浓度可以减少分解尿素的细菌的浓度C所用培养基是固体培养基所用培养基是固体培养基 D所用培养基是平板培养基所用培养基是平板培养基解析解析选择培养可以增加分解尿素的细菌的浓度，实验室里用液
36、体培养选择培养可以增加分解尿素的细菌的浓度，实验室里用液体培养基来培养分解尿素的细菌。基来培养分解尿素的细菌。A返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版指指 点点 迷迷 津津返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版一、选择培养基与鉴别培养基的区别一、选择培养基与鉴别培养基的区别(规律方法规律方法)培养基种类培养基种类特点特点用途用途选择培养基选择培养基培养基中加入某种化学培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需微生物生长，促进所需要的微生物生长要的微生物生长培养、分离出特定微生物培养、分离出特定微生物(如培养酵
37、如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；用尿素作为唯一氮源的培养霉素；用尿素作为唯一氮源的培养基可用于分离分解尿素的细菌基可用于分离分解尿素的细菌)鉴别培养基鉴别培养基根据微生物的代谢特点根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种，在培养基中加入某种指示剂或化学药品指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如用伊红鉴别不同种类的微生物，如用伊红美蓝培养基鉴别饮用水中是否有大美蓝培养基鉴别饮用水中是否有大肠杆菌肠杆菌(若有，菌落呈现紫黑色若有，菌落呈现紫黑色)返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版在培养基中加入尿素在培养基中加入尿素(唯一氮源唯
38、一氮源)，以分离出能分解尿素的细，以分离出能分解尿素的细菌，这种加入尿素的培养基在功能上属于菌，这种加入尿素的培养基在功能上属于()A选择培养基选择培养基B固体培养基固体培养基C液体培养基液体培养基 D鉴别培养基鉴别培养基解析解析培养基按用途分类，分为选择培养基和鉴别培养基，按物理性质培养基按用途分类，分为选择培养基和鉴别培养基，按物理性质分类，分为液体培养基、固体培养基和半固体培养基。该培养基能分离出以尿分类，分为液体培养基、固体培养基和半固体培养基。该培养基能分离出以尿素为唯一氮源的细菌，故是选择培养基。素为唯一氮源的细菌，故是选择培养基。A典例典例 4返回导航专题二微生物的培养与应用生物
39、必修生物必修 人教版人教版知识贴士知识贴士不能正确区分选择培养基和鉴别培养基的特点和用途，是此类问题出错的不能正确区分选择培养基和鉴别培养基的特点和用途，是此类问题出错的主要原因。主要原因。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版二、微生物的培养与分离技术二、微生物的培养与分离技术 微生物培养中所需的营养及功能、培养基的配制原则和类型、无菌操作技微生物培养中所需的营养及功能、培养基的配制原则和类型、无菌操作技术等是进行微生物培养与分离必不可少的知识。术等是进行微生物培养与分离必不可少的知识。1培养基的制备培养基的制备计算计算称量称量溶化溶化调调pH灭菌灭菌倒平板。倒平板。
40、返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版2无菌技术无菌技术无菌技术主要指消毒、灭菌和无菌操作。无菌技术主要指消毒、灭菌和无菌操作。实验室中常用紫外线或化学药剂消毒，如接种室的紫外线消毒及用酒精擦实验室中常用紫外线或化学药剂消毒，如接种室的紫外线消毒及用酒精擦拭双手消毒。灭菌的方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌，主要是拭双手消毒。灭菌的方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌，主要是针对培养器具、接种器具和培养基的灭菌。另外，还需注意操作过程中无菌环针对培养器具、接种器具和培养基的灭菌。另外，还需注意操作过程中无菌环境的营造，一是可以在灭菌的接种箱中进行，二是在酒
41、精灯火焰附近所形成的境的营造，一是可以在灭菌的接种箱中进行，二是在酒精灯火焰附近所形成的无菌区进行。无菌区进行。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版3倒平板倒平板严格按照教材所示的操作步骤进行。倒平板时需待培养基冷却至严格按照教材所示的操作步骤进行。倒平板时需待培养基冷却至50左左右，在酒精灯火焰附近无菌区进行。平板冷却凝固后，将平板倒置，使皿盖在右，在酒精灯火焰附近无菌区进行。平板冷却凝固后，将平板倒置，使皿盖在下、皿底在上，这样处理可防止蒸发的水分冷却后在皿盖上形成水珠落在培养下、皿底在上，这样处理可防止蒸发的水分冷却后在皿盖上形成水珠落在培养基上，造成污染等。基
42、上，造成污染等。4平板划线操作平板划线操作通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，可得到单个分离的菌落。释分散到培养基的表面，可得到单个分离的菌落。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版5稀释涂布平板稀释涂布平板将菌液进行一系列的梯度稀释后再涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，将菌液进行一系列的梯度稀释后再涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单
43、个的菌落。落。6选择培养基用来分离某种特定的微生物选择培养基用来分离某种特定的微生物在选择培养基配制过程中要注意起选择作用的成分，如分离分解尿素的细在选择培养基配制过程中要注意起选择作用的成分，如分离分解尿素的细菌的选择培养基中的特定成分是尿素。菌的选择培养基中的特定成分是尿素。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版富集培养是微生物学中最强有力的技术手段之一，主要是指利富集培养是微生物学中最强有力的技术手段之一，主要是指利用不同微生物的生命活动特点的不同，限定环境条件，使仅适应该条件的微生用不同微生物的生命活动特点的不同，限定环境条件，使仅适应该条件的微生物旺盛生长，从
44、而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。富集条件可根据所需分离的微生物的特点，从物中分离到所需的特定微生物。富集条件可根据所需分离的微生物的特点，从物理、化学、生物等多个方面进行选择，如温度、理、化学、生物等多个方面进行选择，如温度、pH、紫外线、压强、光照、氧、紫外线、压强、光照、氧气、营养等。下图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基气、营养等。下图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。据图回答问题。苯甲酸的微生物的实验过程。据图
45、回答问题。典例典例 5返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版(1)本实验所需培养基为本实验所需培养基为_，碳源为，碳源为_。(2)实验原理是实验原理是_ _。(3)重复培养的目的是重复培养的目的是_。(4)的菌落中大部分是能降解的菌落中大部分是能降解_的微生物。的微生物。(5)为为_组，组，为为_组，设置组，设置的目的是的目的是_ _。(6)采用采用_法。将单菌落接种到法。将单菌落接种到的培养基中，在操作的培养基中，在操作过程中为防止污染，应注意的事项是过程中为防止污染，应注意的事项是_ _。选择培养基选择培
46、养基对羟基苯甲酸对羟基苯甲酸利用以对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基，经富集利用以对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基，经富集培养，选择出能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物培养，选择出能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物增大分解对羟基苯甲酸的微生物的比例增大分解对羟基苯甲酸的微生物的比例对羟基苯甲酸对羟基苯甲酸对照对照实验实验说明通过富集培养说明通过富集培养的确得到了欲分离的目的微生物的确得到了欲分离的目的微生物单菌落挑取单菌落挑取接种环在火焰上灼烧灭菌，烧红的接接种环在火焰上灼烧灭菌，烧红的接种环在火焰旁冷却后，将培养皿盖打开一条缝隙，挑取菌落接种到试管中，并种环在火焰旁冷却后，将培养皿盖打
47、开一条缝隙，挑取菌落接种到试管中，并塞好棉塞，接种环在火焰上灼烧，杀灭残留物塞好棉塞，接种环在火焰上灼烧，杀灭残留物返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版解析解析本实验所用培养基是以对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基，本实验所用培养基是以对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基，培养的微生物是能降解对羟基苯甲酸的微生物。经过培养的微生物是能降解对羟基苯甲酸的微生物。经过的重复培养，增大的重复培养，增大了分解对羟基苯甲酸的微生物的比例。最后通过设置对照及单菌落挑取法将培了分解对羟基苯甲酸的微生物的比例。最后通过设置对照及单菌落挑取法将培养基上的单菌落分别接种到含有对羟基苯甲酸及
48、不含有该物质的培养基上，验养基上的单菌落分别接种到含有对羟基苯甲酸及不含有该物质的培养基上，验证是否得到了目的微生物。接种过程中为防止污染，应注意进行一系列的无菌证是否得到了目的微生物。接种过程中为防止污染，应注意进行一系列的无菌操作。操作。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版核核 心心 素素 养养返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为对应稀释倍数为106的培养基中，第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的培养基中，第一位
49、同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为的菌落数为230；第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为；第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为21、212和和256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认作为统计结果。你认为这两位同学的实验应如何改进？给我们什么启示？为这两位同学的实验应如何改进？给我们什么启示？_案案 例例提示：第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有提示：第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但
50、是，其中说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是，其中一个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，一个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将三个平板的计数值用来求平均值。因此，不能简单地将三个平板的计数值用来求平均值。返回导航专题二微生物的培养与应用生物必修生物必修 人教版人教版解析解析在设计实验时，一定要涂布至少三个平板，作为重复组，才能增在设计实验时，一定要涂布至少三个平板，作为重复组，才能增强实验结果的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复强实验结果的说服力与准确性。在分析实验结果
