1、 第第1章章 第第2节节微生物的培养技术及应用 向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶，有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶，由由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶，自制酸奶虽然方便，但是奶，自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导食用自制酸奶导致肠胃不适致肠胃不适的事件屡见不鲜，的事件屡见不鲜，主要原因是在制主要原因是在制作过程中有杂菌混入作过程中有杂菌混入。那么，怎样才能保证无那么，怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢处不在的杂菌不混入发酵物中呢？酸奶酸奶从社会中来防止杂
2、菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。在实验室培养微生物，为微生物提供合适的营养和环境条件；确保其他微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来。培养基无菌技术微生物的纯培养微生物：_的统称。的统称。难以用肉眼观察的微小生物难以用肉眼观察的微小生物原核生物(细菌、蓝细菌等细菌、蓝细菌等)原生生物(如草履虫、衣藻等如草履虫、衣藻等)真菌(如酵母菌、霉菌等如酵母菌、霉菌等)病毒新冠病毒细菌草履虫酵母菌一、培养基的配制1.概念：人们按照人们按照微生物对营养物质的不同需求微生物对营养物质的不同需求，配，配制出供其生长繁殖的制出供其生长繁殖的营养基质营养基质培养基。
3、培养基。2.作用：用以用以培养、分离、鉴定、保存微生物培养、分离、鉴定、保存微生物或或积累积累其代谢物其代谢物。3.类型：长有酵母菌长有酵母菌菌落菌落的固体培养基的固体培养基盛有液体培养基盛有液体培养基无无 有有 琼脂琼脂划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分用途不加凝固剂不加凝固剂加凝固剂，如琼脂加凝固剂，如琼脂微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种活菌计数、保藏菌种含化学成分含化学成分不明确不明确的天然物质的天然物质工业生产工业生产培养基成分培养基成分明确明确分类、鉴定分类、鉴定允许特定种类的微生物生长允许特定种类的微生物生长,同同时抑制或阻止其他种类微生物时抑制或阻止
4、其他种类微生物生长的培养基生长的培养基培养、分离出特培养、分离出特定微生物定微生物在培养基中加入某种指示剂在培养基中加入某种指示剂或化学药品或化学药品,用以鉴别不同种用以鉴别不同种类的微生物类的微生物鉴别不同种类鉴别不同种类微生物微生物天然培养基合成培养基固体培养基液体培养基半固体培养基选择培养基鉴别培养基一、培养基的配制组分组分含量含量提供的主要营养提供的主要营养牛肉膏牛肉膏5 g碳源、氮源、磷酸盐和维生素等碳源、氮源、磷酸盐和维生素等蛋白胨蛋白胨10 g碳源、氮源和维生素等碳源、氮源和维生素等NaCl5 g无机盐无机盐H2O定容至定容至1000 mL水水表表1-1 1-1 1000 mL
5、1000 mL 牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成4.成分：一、培养基的配制一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质一乳酸杆菌乳酸杆菌霉菌霉菌细菌细菌厌氧微生物厌氧微生物培养基培养基特殊特殊处理处理添加维生素调至酸性调至中性或弱碱性提供无氧条件此外还需要满足微生物生长对_、_ 以及_的需求。PHO2特殊营养物质一、培养基的配制1.概念：2.防止杂菌污染手段：_获得获得纯净的微生物培养物纯净的微生物培养物的操作技术的操作技术防止杂菌污染防止杂菌污染主要包括主要包括_和和_消毒消毒灭菌灭菌二、无菌技术消毒：是指使用较为温和的物理、化
6、学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。有些细菌在恶劣的有些细菌在恶劣的条件下，细胞里面条件下，细胞里面形成一个椭圆形的形成一个椭圆形的休眠体，叫做休眠体，叫做芽孢芽孢。细菌、原生动物、真细菌、原生动物、真菌和植物等产生的菌和植物等产生的一一种种有繁殖作用的无性有繁殖作用的无性生殖细胞生殖细胞。能直接发能直接发育成新个体育成新个体。孢子孢子（1 1）对操作的）对操作的_、操作者的、操作者的_进行进行清洁和消毒清洁和消毒。空间空间衣着和手衣着和手（2 2）将用于微生物培养的）将用于微生物培养的_、_和和_等进行等进行灭菌
7、灭菌。器皿器皿接种用具接种用具培养基培养基二、无菌技术消毒和灭菌的工作内容：消毒：是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。1.概念：2.防止杂菌污染手段：_获得获得纯净的微生物培养物纯净的微生物培养物的操作技术的操作技术防止杂菌污染防止杂菌污染主要包括主要包括_和和_消毒消毒灭菌灭菌紫外线消毒紫外线消毒：接种室、接种箱或超净工作台接种室、接种箱或超净工作台在使用之前，可以用紫外在使用之前，可以用紫外线照射线照射30min30min，以杀死物体表面或空气中的微生物以杀死物体表面或空气中的微生物。
8、在照射前，适量。在照射前，适量喷洒石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。喷洒石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。巴氏消毒法：巴氏消毒法：在在62656265消毒消毒30 min30 min或或80908090处理处理30s1min30s1min，适合不耐高温的液体适合不耐高温的液体，如牛奶。可以杀死牛奶中的绝大多数微生物，并，如牛奶。可以杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且基本不会破坏牛奶的营养成分。且基本不会破坏牛奶的营养成分。煮沸消毒法：煮沸消毒法：在在100100煮沸煮沸56 min56 min，可以杀死微生物的营养细胞和可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢一部分芽孢。化学
9、药物消毒化学药物消毒：用：用75%75%酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等。酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等。资料卡资料卡常用的消毒方法灼烧灭菌灼烧灭菌：常用于：常用于涂布器、接种环、接种针、试管口或其它金涂布器、接种环、接种针、试管口或其它金属用具属用具等的灭菌。直接在酒精灯火焰的充分燃烧层（等的灭菌。直接在酒精灯火焰的充分燃烧层（外焰外焰）灼烧。）灼烧。湿热灭菌湿热灭菌：利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌。：利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌。高压蒸高压蒸汽灭菌的效果最好汽灭菌的效果最好，100 kPa100 kPa、121121下维持下维持1530 min1530 min，常用常用于于培养
10、基、无菌水培养基、无菌水等的灭菌。等的灭菌。干热灭菌干热灭菌：160170160170下加热下加热23h23h。常用于。常用于耐高温的和需要耐高温的和需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿等）和金属器具等保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿等）和金属器具等。资料卡资料卡常用的灭菌方法请判断以下材料或用具需要消毒还是需要灭菌，请判断以下材料或用具需要消毒还是需要灭菌，并选择合适的方法并选择合适的方法（1 1）培养细菌用的培养基：）培养细菌用的培养基：_（2 2）玻璃棒、试管、烧瓶和吸管：）玻璃棒、试管、烧瓶和吸管：_（3 3）实验操作者的双手：）实验操作者的双手：_填一填灭菌、高压蒸汽
11、灭菌法灭菌、干热灭菌消毒、用酒精擦拭双手(1)(1)获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染()(2)(2)灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底()(3)(3)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养如培养基、接种环等基、接种环等)都可采用干热灭菌法进行灭菌都可采用干热灭菌法进行灭菌()判断正误下列关于灭菌、消毒方法的描述，错误的是（下列关于灭菌、消毒方法的描述，错误的是（）A A用巴氏消毒法处理牛奶是因为高温易破坏牛奶用巴氏消毒法处理牛奶是因为高温易破坏牛奶的营养成分的营养成分
12、B B煮沸后的凉开水中仍含有部分芽孢和孢子煮沸后的凉开水中仍含有部分芽孢和孢子C C接种的无菌操作台要进行灭菌处理接种的无菌操作台要进行灭菌处理D D对接种环灼烧灭菌后，要等其温度下降再进行对接种环灼烧灭菌后，要等其温度下降再进行接种接种练习与应用C1.1.培养物培养物：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的条件下形成的含特定种类微生物的群体含特定种类微生物的群体。3.3.纯培养纯培养：获得纯培养物的过程就是纯培养。：获得纯培养物的过程就是纯培养。4.4.步骤步骤：_ _ _ _ _ _ _ _2.2.纯培养物纯培养物：由：由单一个体单一个体
13、繁殖所获得的微生物群体。繁殖所获得的微生物群体。配制培养基配制培养基 灭菌灭菌接种接种分离和培养分离和培养三、微生物的纯培养酵母菌的纯培养微生物群微生物群分散分散或或稀释稀释单个细胞单个细胞繁殖繁殖单菌落单菌落 分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落菌落。单菌落。单菌落一般是由一般是由单个微生物单个微生物繁殖形成的纯培养物。繁殖形成的纯培养物。1.实验原理获得单菌落的方法：获得单菌落的方法：稀释涂布平板法、平板划线法2.2.目的要求
14、(1)(1)学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板。学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板。(2)(2)学会进行无菌操作。学会进行无菌操作。(3)(3)尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落。尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落。3.3.材料用具 酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖(或蔗糖或蔗糖)、琼脂、蒸馏水、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸(或报纸或报纸)、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱和恒温培养箱等。锅、
15、干热灭菌箱和恒温培养箱等。酵母菌的纯培养4.方法步骤配制配制培养基培养基称取去皮称取去皮马铃薯马铃薯200g200g，切成小块，加水，切成小块，加水1000ml1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，加热煮沸至马铃薯软烂，用用纱布过滤纱布过滤。向滤液中加入。向滤液中加入20g20g葡萄糖葡萄糖（也可用（也可用蔗糖蔗糖代替）、代替）、151520g20g琼脂琼脂，用用蒸馏水蒸馏水定容至定容至1000ml1000ml。灭菌灭菌 将配制好的将配制好的培养基转移到锥形瓶中，培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，并用皮筋勒紧，再放入再放入高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅中，
16、中，在压力为在压力为100kPa100kPa、温度为、温度为121121的条件下，灭菌的条件下，灭菌151530min30min。将。将5 58 8套培养皿包成一包套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱干热灭菌箱内，在内，在160160170170灭菌灭菌2h2h。倒平板倒平板待培养基待培养基冷却到冷却到5050左右左右时，在时，在酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近倒平板。倒平板。1.1.制备培养基制备培养基酵母菌的纯培养等待培养基等待培养基冷却凝冷却凝固后固后，将培养皿，将培养皿倒转倒转过来放置过来放置拔出锥形瓶的棉塞拔出锥形瓶的棉塞将瓶口迅速通过火焰倒平板的具体
17、操作步骤倒平板的具体操作步骤用拇指和食指将培养皿打开用拇指和食指将培养皿打开一条一条稍大于瓶口的缝隙稍大于瓶口的缝隙，将培，将培养基（养基（10-20mL10-20mL）倒入培养皿，）倒入培养皿，立即盖上皿盖。立即盖上皿盖。倒平板注意事项：倒平板注意事项：温度：温度：5050左右左右操作：在酒精灯火焰附近操作：在酒精灯火焰附近冷凝后平板倒置冷凝后平板倒置酵母菌的纯培养2.2.接种和分离酵母菌接种和分离酵母菌 通过通过接种环接种环在在固体培养基表面连续划线固体培养基表面连续划线的操作，将的操作，将聚集的菌聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面种逐步稀释分散到培养基表面。经过。经过数次划线数次划线后培
18、养可以分离后培养可以分离得到得到单菌落单菌落。连续划线法连续划线法分区划线法分区划线法酵母菌的纯培养4.方法步骤平板划线的具体操作步骤平板划线的具体操作步骤将接种环放在火将接种环放在火焰上焰上灼烧灼烧，直到接，直到接种环的金属丝种环的金属丝烧红。烧红。在在火焰旁冷却火焰旁冷却接种接种环，并拔出装有酵母环，并拔出装有酵母菌的棉塞。菌的棉塞。将将试管口试管口通过火焰通过火焰将将已冷却已冷却的接的接种环伸入菌液中，种环伸入菌液中，蘸取蘸取一环菌液。一环菌液。将将试管通过火试管通过火焰焰，并塞上棉塞。，并塞上棉塞。左手在左手在火焰附近火焰附近将皿将皿盖盖打开一条缝隙打开一条缝隙，右手，右手将沾有菌种的
19、接种环迅将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划速伸入平板内，划三至三至五条平行线五条平行线，盖上皿盖盖上皿盖。注意不要划破培养基。注意不要划破培养基。灼烧接种环灼烧接种环，待其，待其冷却冷却后，后，从从第一区域划线的末端第一区域划线的末端开始开始往往第二区域内划线第二区域内划线。重复以上操。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与注意不要将最后一区的划线与第一区相连。第一区相连。酵母菌的纯培养第1区划线接种环灭菌第2区划线接种环灭菌第3区划线接种环灭菌接种环灭菌分区划线法12345接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次.划线首尾不
20、能相接每次划线前接种环进行灭菌划线后，培养皿倒置培养平板划线法注意事项:完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种将接种后的平板和一个未接种的平板倒置后的平板和一个未接种的平板倒置，放入，放入 28 28左左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养的恒温培养箱中培养 24 48h24 48h。3.3.培养酵母菌培养酵母菌酵母菌的纯培养4.方法步骤1 1、防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和、防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是（应用微生物的前提。下列叙述错
21、误的是（）A.A.实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒。实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒。B.B.在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染。时一定要洗手，以防止被微生物感染。C.C.接种环、接种针等金属用品，直接在酒精灯火焰接种环、接种针等金属用品，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌。的内焰部位灼烧灭菌。D.D.使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。免污染环境。基础检测基础检测C2 2、微生物培养过程中，要重视无菌操作，现代生微生物培养过程中，要重视无菌
22、操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染，请分析下列操作，正确的是菌污染，请分析下列操作，正确的是()A.A.煮沸消毒法中煮沸消毒法中100 100 煮沸煮沸5 56 min6 min可以杀死全部可以杀死全部微生物的细胞和芽孢、孢子微生物的细胞和芽孢、孢子B.B.将接种环直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，将接种环直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌可以迅速彻底地灭菌C.C.加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌D.D.家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌B基础检测基础检测
