1、章引言章引言基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外_和_等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做_技术。 例如，通过转基因技术，可以实现利用大肠杆菌生产人的胰岛素。在此实例中，目的基因是_，受体细胞是_，目的基因的表达产物是_。 DNA重组转基因DNA重组人胰岛素基因大肠杆菌细胞人胰岛素2021人人教版（教版（新教材新教材）必修二）必修二 遗传和进化遗传和进化第三章 基因工程第1节 重组DNA技术的基本工具本节聚焦重组DNA技术所需要的三种基本工具是什么？他们的
2、作用是什么?基因工程载体需要具备什么条件？DNA重组技术的基本工具是什么？将DNA分子导入细胞准确切割DNA分子连接DNA片段主要从原核生物中分离纯化主要从原核生物中分离纯化思考 根据你所掌握的知识你能推测限制酶存在于原核生物中的根据你所掌握的知识你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？作用是什么吗？限制酶在原核生物中主要起到限制酶在原核生物中主要起到切割外源切割外源DNADNA使之失效使之失效，从而达到，从而达到保护自身保护自身的目的。的目的。一、限制性核酸内切酶 分子手术刀一、限制性核酸内切酶 分子手术刀 练习：流感嗜血杆菌的练习：流感嗜血杆菌的d d菌株菌株( Haemophilu
3、s influenzae d )( Haemophilus influenzae d )中先后分离到中先后分离到3 3种限制酶，则分别命名为种限制酶，则分别命名为: :Hind、Hind、 Hind粘质沙雷氏杆菌粘质沙雷氏杆菌（Serratia marcesens）Sma大肠杆菌大肠杆菌（Escherichia coli R）EcoR（1 1）识别双链）识别双链DNADNA分子的某种分子的某种特定的核苷酸序列特定的核苷酸序列例如：例如：大肠杆菌的大肠杆菌的EcoEcoRR限制酶只能识别限制酶只能识别GAATTCGAATTC序序列，列，（2 2）在）在特定的位点切割特定的位点切割DNADNA分子
4、。分子。并在并在G G和和A A之间切开。之间切开。一、限制性核酸内切酶 分子手术刀特定部位的两个核苷酸之间的特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键磷酸二酯键断开断开一、限制性核酸内切酶 分子手术刀产生黏性末端产生黏性末端或或平末端平末端一、限制性核酸内切酶 分子手术刀1.已知限制酶的识别序列和切点是GGATCC，限制酶的识别序列和切点是GATC。 （1）则能被限制酶I切割的DNA，_（能/不能）被限制酶II切割； （2）能被限制酶II切割的DNA，_（能/不能/不一定能）被限制酶I切割。能不一定能牛刀小试牛刀小试过渡过渡1.DNA连接酶的作用是：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被_切开的两个
5、_之间的_。限制酶核苷酸磷酸二酯键二、DNA连接酶 分子缝合针类型Ecoli DNA连接酶T4DNA连接酶来源_功能只缝合_缝合_和_结果恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的_大肠杆菌T4噬菌体黏性末端黏性末端平末端磷酸二酯键二、DNA连接酶 分子缝合针2.种类 DNA连接酶与连接酶与DNA聚合酶是一回事吗聚合酶是一回事吗?为什么为什么?形成形成磷酸二酯键磷酸二酯键以以一条一条DNADNA链为模板链为模板，单个核苷酸单个核苷酸连接成连接成一条互补的一条互补的DNADNA链链将将DNADNA双链上的双链上的两个两个缺口同时连接缺口同时连接起来，起来，不需要模板不需要模板需要需要不需要不需要单个脱氧
6、核苷酸单个脱氧核苷酸DNADNA分子片段分子片段与DNA相关的五种酶的比较名称作用部位作用结果限制酶磷酸二酯键将DNA切成两个片段DNA连接酶磷酸二酯键将两个DNA片段连接为一个DNA分子DNA聚合酶磷酸二酯键将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端DNA(水解)酶磷酸二酯键将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸解旋酶碱基对之间的氢键将双链DNA分子局部解旋为单链，形成两条长链拓展延伸拓展延伸关于下图所示黏性末端的叙述，正确的是A.与是由相同限制酶切割产生的B.DNA连接酶可催化与的连接C.经酶切形成需要脱去2分子水D.DNA连接酶与DNA聚合酶均能作用于上述黏性末端B B牛刀小试牛刀小试 通常是利用_作
7、为载体，将目的基因送入受体细胞中。质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有_能力的很小的双链_DNA分子。 在基因工程中使用的载体除质粒外，还有_、_等。质粒自我复制环状噬菌体的衍生物动植物病毒DNA聚合酶的识别和结合位点三、基因进入细胞的载体分子运输车质粒作为运载体的条件： 质粒DNA分子上有一个至多个限制酶切割位点，便于_； 质粒含有复制原点，可在受体细胞中进行自我复制，或整合到受体细胞_； 质粒DNA分子上有特殊的_，如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等，供重组DNA的_。外源DNA片段（目的基因）插入染色体DNA上标记基因鉴定和选择三、基因进入细胞的载体分子运输车
8、普通的细菌一般是对抗生素_（敏感/不敏感）的，在含有青霉素或四环素的培养基中_（能/不能）生长。如果给普通细菌导入一个含有四环素抗性基因的质粒，四环素抗性基因的_可使细菌获得抵抗四环素的性状。 敏感不能表达产物如何利用标记基因的筛选呢？图甲是含有目的基因的外源DNA片段，图乙是用于将目的基因导入受体细胞的质粒（阴影部分表示抗生素抗性基因），相关限制酶的作用部位如图所示，现欲培养转基因抗病植株，回答下列问题。（1）上述操作中不宜选用Sma I，原因是Sma I会破坏_和_。（2）在基因工程的操作中，不宜选用EcoR I，原因是用EcoR I切割外源DNA片段后，_。目的基因抗性基因目的基因只有一
9、侧含有黏性末端，不能插入到质粒中牛刀小试牛刀小试探究和实践探究和实践（一）提取（一）提取DNADNA的方法的方法1.1.提取生物大分子的基本思路提取生物大分子的基本思路选用一定的选用一定的物理或化学方法物理或化学方法，分离具有不同，分离具有不同物理或物理或化学性质化学性质的生物大分子的生物大分子2.2.提取提取DNADNA的基本思路（的基本思路（DNADNA的粗提取）的粗提取）利用利用DNADNA与与RNARNA、蛋白质和脂质等在、蛋白质和脂质等在物理和化学性质物理和化学性质方面的差异，方面的差异，提取提取DNADNA，去除其他成分。，去除其他成分。一、基础知识一、基础知识1.DNA1.DNA
10、的溶解性的溶解性DNADNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaClNaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同利用这一特点，利用这一特点，选择适当的盐浓度选择适当的盐浓度就能就能使使DNADNA充分溶解，充分溶解，而使杂质沉淀；而使杂质沉淀；或者或者让其他成分溶解，让其他成分溶解，DNADNA析出析出（二）（二）DNADNA等大分子的理化性质等大分子的理化性质一、基础知识一、基础知识1.DNA1.DNA的溶解性的溶解性（二）（二）DNADNA等大分子的理化性质等大分子的理化性质一、基础知识一、基础知识根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的
11、溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时，DNA的溶解度最大，浓度为 014 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。此外，此外，DNADNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。利利用这一原理
12、，将用这一原理，将DNADNA与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。2.DNA2.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶蛋白酶水解蛋白质，水解蛋白质， 对对DNADNA没有影响没有影响 高高 温温大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080 而而DNADNA在在8080以上才会变性以上才会变性 洗涤剂洗涤剂瓦解细胞膜，瓦解细胞膜， 但对但对DNADNA没有影响没有影响1.DNA1.DNA的溶解性的溶解性（二）（二）DNADNA等大分子的理化性质等大分子的理化性质一、基础知识一、基础知识试剂：试剂：条件：条件：二苯胺二苯胺沸水浴条件下，沸水浴条件下，DN
13、ADNA与二苯胺反应呈现与二苯胺反应呈现蓝色蓝色沸水浴沸水浴现象：现象：（三）（三）DNADNA的鉴定的鉴定一、基础知识一、基础知识（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液（三）除去滤液中的杂质（三）除去滤液中的杂质( (纯化纯化) )（四）（四）DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定二、实验设计二、实验设计（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取从下列材料中选取从下列材料中选取2 23 3种种原则：原则：菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；鱼卵、猪肝、鸡血、菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红
14、细胞；在液体培养基中培养的大肠杆菌哺乳动物的红细胞；在液体培养基中培养的大肠杆菌凡是含有凡是含有DNADNA的生物材料都可以考虑的生物材料都可以考虑, ,但是，选用但是，选用DNADNA含含量相对较高的组织，成功的可能性更大。量相对较高的组织，成功的可能性更大。新鲜的鸡血（注意要加入柠檬酸钠，防止血液凝固）新鲜的鸡血（注意要加入柠檬酸钠，防止血液凝固）思考：思考：不能。因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核不能。因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核。二、实验设计二、实验设计材料：材料：能否选用牛、羊、猪红细胞血做实验材料？为什么？能否选用牛、羊、猪红细胞血做实验材料？为什么？动物细胞的破碎较易，以鸡
15、血为例，在鸡血细胞液中加入一定动物细胞的破碎较易，以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液1.1.动物细胞动物细胞答：答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗溶液，水分可以大量蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗溶液，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂速了鸡血细胞的破裂( (细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂) )，从而释放出从而释放出D
16、NADNA。讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？二、实验设计二、实验设计讨论讨论1 1：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？答：洗涤剂是一些离子去污剂，能答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于溶解细胞膜，有利于DNADNA的释放；的释放；食盐的主要成分是食盐的主要成分是NaClNaCl，有利于有利于DNADNA的溶解。的溶解。（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液1.1.植物细胞植物细胞二、实验设计二、实验设计实例：提取洋葱实例：提取洋葱DNADNA时，在切碎的洋葱中加入一定的
17、时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，洗涤剂和食盐，进行充分的进行充分的搅拌和研磨搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。，过滤后收集研磨液。植物细胞植物细胞需要先用一定的洗涤剂溶解细胞膜需要先用一定的洗涤剂溶解细胞膜答：研磨不充分会使答：研磨不充分会使细胞核内的细胞核内的DNADNA释放不完全，提取的释放不完全，提取的DNADNA量变少量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。讨论讨论2 2：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？1.1.搅拌的目的（注意应沿
18、一个方向快速搅拌，但也不能过快过猛，搅拌的目的（注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能过快过猛，防止打碎防止打碎DNA DNA ）加速了鸡血细胞的加速了鸡血细胞的破裂破裂( (细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂) )，从而释放出，从而释放出DNADNA2.2.这个步骤过滤获得什么？这个步骤过滤获得什么？获得含核物质的滤液（获取含获得含核物质的滤液（获取含DNADNA的滤液）（的滤液）（注意：此时释放出来的大注意：此时释放出来的大量量DNADNA和和RNARNA往往与蛋白质结合在一起，应用往往与蛋白质结合在一起，应用3434层纱布进行过滤，层纱布进行过滤，除除去一些颗粒较大的杂质）去一些颗粒较大的
19、杂质）3.3.滤液中可能含有哪些细胞成分？滤液中可能含有哪些细胞成分？可能含有核蛋白、多糖和可能含有核蛋白、多糖和RNARNA等杂质等杂质（为了纯化提取的（为了纯化提取的DNADNA需要将滤液作需要将滤液作进一步处理进一步处理）（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液二、实验设计二、实验设计问题探讨：问题探讨：DNADNA的溶解性的溶解性（三）除去滤液中的杂质（三）除去滤液中的杂质方案一、方案一、在滤液中加入在滤液中加入NaClNaCl，使，使NaClNaCl溶液浓度为溶液浓度为2mol/L2mol/L，过滤除去，过滤除去不溶的杂质不溶的杂质，再加入蒸馏水，调节，再
20、加入蒸馏水，调节NaClNaCl溶液浓度为溶液浓度为0.14mol/L0.14mol/L，析出，析出DNADNA，过滤除去，过滤除去溶液中的杂质溶液中的杂质，再用，再用2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液溶解溶液溶解DNADNA。 思考思考1 1：加入：加入2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液，搅拌溶液，搅拌1min1min，注意应沿一个方向，目的是？，注意应沿一个方向，目的是？目的是使目的是使DNADNA充分溶解充分溶解思考思考2 2：过滤溶解有：过滤溶解有DNADNA的的2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液，获得什么？溶液，获得什么？含含DNADNA的滤
21、液的滤液思考思考3 3：这一步过滤的目的是？：这一步过滤的目的是？获得含获得含DNADNA的滤液，除去不溶的杂质的滤液，除去不溶的杂质二、实验设计二、实验设计思考思考4 4：加蒸馏水的目的是？：加蒸馏水的目的是？调节调节NaClNaCl溶液物质的量为接近溶液物质的量为接近0 014mol/L14mol/L，使，使DNADNA黏稠物最大限度的析出黏稠物最大限度的析出思考思考5 5：这一步搅拌的目的是？（轻轻地沿一个方向不停地均与搅拌）：这一步搅拌的目的是？（轻轻地沿一个方向不停地均与搅拌）稀释稀释NaClNaCl溶液溶液, ,析出析出DNADNA黏稠物黏稠物思考思考6 6：这一步过滤含：这一步过
22、滤含DNADNA黏稠物的黏稠物的0 014mol/L14mol/L的的NaClNaCl溶液，获得什么？溶液，获得什么？获得获得DNADNA黏稠物（黏稠物（ 纱布上的纱布上的DNADNA黏稠物）黏稠物）思考思考7 7：过滤的目的？：过滤的目的？获得获得DNADNA黏稠物。除去溶液中的杂质黏稠物。除去溶液中的杂质（三）除去滤液中的杂质（三）除去滤液中的杂质二、实验设计二、实验设计方案一、方案一、在滤液中加入在滤液中加入NaClNaCl，使，使NaClNaCl溶液浓度为溶液浓度为2mol/L2mol/L，过滤除去，过滤除去不溶的杂质不溶的杂质，再加入蒸馏水，调节，再加入蒸馏水，调节NaClNaCl溶
23、液浓度为溶液浓度为0.14mol/L0.14mol/L，析出，析出DNADNA，过滤除去，过滤除去溶液中的杂质溶液中的杂质，再用，再用2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液溶解溶液溶解DNADNA。 为什么反复地溶解与析出为什么反复地溶解与析出DNADNA，能够去除杂质？，能够去除杂质？ 1.1.用用高盐高盐浓度的溶液溶解浓度的溶液溶解DNADNA，能，能除去在高盐中不能溶除去在高盐中不能溶解的杂质；解的杂质；2.2.用用低盐低盐浓度使浓度使DNADNA析出，能析出，能除去溶解在低盐溶液中的除去溶解在低盐溶液中的杂质。杂质。 因此，通过反复溶解与析出因此，通过反复溶解与析出DNADN
24、A，就能够除去与，就能够除去与DNADNA溶解度不同的多种杂质。溶解度不同的多种杂质。 二、实验设计二、实验设计讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？方案二：利用蛋白酶分解杂质蛋白，方案二：利用蛋白酶分解杂质蛋白， 使提取的使提取的DNADNA与蛋白质分开；与蛋白质分开；方案三：利用方案三：利用DNADNA和蛋白质对高温耐受性的不同，和蛋白质对高温耐受性的不同， 使蛋白质变性，与使蛋白质变性，与DNADNA分离分离（三）除去滤液中的杂质（三）除去滤液中的杂质二、实验设计二、实验设计（四）（四）DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定1.DNA1.DNA的析出的
25、析出思考：搅拌的目的思考：搅拌的目的( (玻璃棒朝一个方向缓慢玻璃棒朝一个方向缓慢、均匀地搅拌均匀地搅拌) )卷起卷起DNADNA丝状物丝状物，获取含杂质较少的，获取含杂质较少的DNADNA二、实验设计二、实验设计加入与滤液体积相等的加入与滤液体积相等的冷却的酒精溶液冷却的酒精溶液( (体积分数体积分数9595) )，静置静置2 23min3min，溶液中会出现，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的白色丝状物，这就是粗提取的DNADNA用玻璃棒用玻璃棒沿一个方向搅拌沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水冷却的酒精溶液冷却的酒精溶液( (体积分数体积
26、分数9595) )作用：作用：一是抑制核酸水解酶活性，防止一是抑制核酸水解酶活性，防止DNADNA降解；降解；二是低温有利于增加二是低温有利于增加DNADNA分子柔韧性，减少断裂。分子柔韧性，减少断裂。 向向两支试管两支试管中分别加入中分别加入 2mol/L NaCl 2mol/L NaCl 溶液溶液5ml5ml 其中一支试管中加入其中一支试管中加入DNADNA丝状物，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解丝状物，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解 向两支试管中各加入二苯胺试剂向两支试管中各加入二苯胺试剂4ml4ml 混匀后，置于沸水浴中加热混匀后，置于沸水浴中加热5min5min 待试管冷却后，比较两只试管中溶
27、液的颜色变化。待试管冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化。观察现象：观察现象：溶解丝状物的溶液变为溶解丝状物的溶液变为蓝色蓝色（四）（四）DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定2.DNA2.DNA的鉴定的鉴定二、实验设计二、实验设计原理：原理：DNA在酸性条件下加热，其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂，生成嘌呤碱、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸，而2-脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成-羟基-酮基戊醛，后者与二苯胺试剂反应生成蓝色物质。（四）（四）DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定2.DNA2.DNA的鉴定的鉴定二、实验设计二、实验设计思考：可以单独用甲基绿鉴定某种物质是否是思考：可以单独用甲基绿鉴定某
28、种物质是否是DNADNA吗？吗？不可以，甲基绿同样会和不可以，甲基绿同样会和RNARNA结合呈绿色！结合呈绿色！1.1.以血液为实验材料时，每以血液为实验材料时，每100ml100ml血液中需要加入血液中需要加入3g3g柠檬酸钠，防柠檬酸钠，防止血液凝固。止血液凝固。2.2.加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和玻璃棒搅拌时，动作要不利于后续步骤的操作。加入酒精和玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，轻缓，以免加剧以免加剧DNADNA分子的断裂，导致分子的断裂，导致DNADNA分子不能形成絮状沉淀。分
29、子不能形成絮状沉淀。3.3.二苯胺试剂要二苯胺试剂要现配现用现配现用，否则会影响鉴定的效果。，否则会影响鉴定的效果。三、操作提示三、操作提示二苯胺试剂的配制二苯胺试剂的配制 称取称取1.5g1.5g二苯胺，溶于二苯胺，溶于100ml100ml冰醋酸中，再加入冰醋酸中，再加入1.5ml1.5ml浓硫酸，浓硫酸，用棕色瓶保存。临用前，在用棕色瓶保存。临用前，在10ml10ml的上述溶液中再加入的上述溶液中再加入0.1ml0.1ml体积分体积分数为数为0.2%0.2%的乙醛溶液。的乙醛溶液。 观察你提取的观察你提取的DNADNA颜色，如果颜色，如果不是白色丝状物不是白色丝状物，说明，说明DNADNA
30、中的中的杂质较多杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果功，如果不呈现蓝色不呈现蓝色，可能所提取的，可能所提取的DNADNA含量低含量低，或是实，或是实验操作中验操作中出现错误出现错误，需要重新制备，需要重新制备四、结果分析与评价四、结果分析与评价（一）是否提取出了（一）是否提取出了DNADNA（二）分析（二）分析DNADNA中的杂质中的杂质 本实验提取的本实验提取的DNADNA粗制品有可能仍然含有粗制品有可能仍然含有核蛋白、多核蛋白、多糖等杂质。糖等杂质。过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液 获得含核物质的滤液获得含核物质的
31、滤液 过滤含粘稠物的过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl0.14mol/LNaCl溶液溶液 获取纱布上的获取纱布上的DNADNA粘稠物粘稠物 过滤溶解有过滤溶解有DNADNA的的2mol/LNaCl2mol/LNaCl溶液溶液 得到含得到含DNADNA的滤液的滤液 1.1.本实验中有三次过滤本实验中有三次过滤 , ,获得什么？获得什么？问题总结问题总结 第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液 加速了鸡血细胞的破裂加速了鸡血细胞的破裂( (细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂) )，从而释放出，从而释放出DNADNA 第二次搅拌加第二次搅拌加2mol/L NaCl2mo
32、l/L NaCl溶液的滤液溶液的滤液 目的是使目的是使DNADNA充分溶解在充分溶解在2mol/ LNaCl2mol/ LNaCl溶液中溶液中 第三次搅拌加蒸馏水至第三次搅拌加蒸馏水至0.14mol/L NaCl0.14mol/L NaCl溶液溶液 稀释稀释NaClNaCl溶液溶液, ,析出析出DNADNA黏稠物黏稠物 第四次搅拌放入第四次搅拌放入2mol/L NaCl2mol/L NaCl溶液中纱布上的粘稠物溶液中纱布上的粘稠物 使使DNADNA黏稠物充分溶解在黏稠物充分溶解在2mol/L NaCl2mol/L NaCl溶液中溶液中 第五次搅拌体积分数为第五次搅拌体积分数为95%95%的酒精
33、的酒精2.2.实验中有五次用玻璃棒搅拌实验中有五次用玻璃棒搅拌? ?分别有什么作用分别有什么作用? ? 卷起卷起DNADNA丝状物，获取含杂质较少的丝状物，获取含杂质较少的DNADNA问题总结问题总结3.3.本实验两次用蒸馏水本实验两次用蒸馏水第一次：第一次：加速了鸡血细胞的破裂加速了鸡血细胞的破裂( (细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂) )，从而释放出从而释放出DNADNA4.4.本实验两次析出本实验两次析出DNADNA第一次：用第一次：用0.14 mol0.14 molL L 的的NaCINaCI溶液析出溶液析出DNADNA，过滤除去溶液中的杂质，过滤除去溶液中的杂质第二次：用冷却的第
34、二次：用冷却的9595的酒精，获得含杂质较少的的酒精，获得含杂质较少的DNADNA（利用（利用DNADNA不溶不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精）于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精）问题总结问题总结第二次：第二次：调节调节NaClNaCl溶液物质的量为溶液物质的量为0 014mol/L14mol/L，使，使DNADNA黏稠黏稠物最大限度的析出物最大限度的析出实验成功的关键及注意事项实验成功的关键及注意事项1.破碎细胞，释放DNA的过程中，若是血细胞，加水后必须充分搅拌，不应少于5min；若是菜花，则应与研磨液混合，研磨时间不少于10min2.用冷酒精浓缩和沉淀DNA时，
35、所用的95%的酒精必须经过预冷后才能使用3.在用玻璃棒搅拌时，玻璃棒不能直接插烧杯底部，并且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子4.由于玻璃表面带电荷，DNA中的磷酸基业带电荷而被吸附于玻璃表面，故实验中用塑料杯和试管可减少损失1.材料中核物质没有充分释放出来，如研磨不充分或蒸馏水的量不够实验现象不明显的原因分析实验现象不明显的原因分析2.加入酒精后摇动或搅拌时过猛，DNA被破坏3.二苯胺配制时间过长，变成浅蓝色，影响鉴定效果4.析出含DNA的黏稠物时，蒸馏水一次快速加入，影响实验结果5.实验中有多次搅拌，但是其目的及操作方法是不同的，操作时不注意区分，影响实验结果（注意：搅拌都沿一个方向进行）谢谢
