1、1/15第第 2 节节微生物的培养技术及应用微生物的培养技术及应用第第 1 课时课时微生物的基本培养技术微生物的基本培养技术课标内容要求课标内容要求核心素养对接核心素养对接1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。微生物培养物的前提。2阐明无菌技术是在操作过程中，保阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。染的技术。3概述平板划线法和稀释涂布平板法概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室进行微生物分离和纯化的常是实验室进行微生物分离和纯化的常用方法。用方法。1.科学思维：根据微生物的代谢类
2、型分科学思维：根据微生物的代谢类型分析培养基的组成。析培养基的组成。2科学探究：讨论并掌握无菌技术的科学探究：讨论并掌握无菌技术的实验操作方法实验操作方法；讨论并掌握微生物的纯讨论并掌握微生物的纯培养的方法。培养的方法。一、培养基的配制一、培养基的配制1培养基培养基人们按照微生物对人们按照微生物对营养物质营养物质的不同需求的不同需求，配制出供其配制出供其生长繁殖生长繁殖的营养基质的营养基质。2培养基的种类培养基的种类3培养基的营养组成培养基的营养组成各种培养基一般都含有各种培养基一般都含有水水、碳源碳源、氮源氮源和无机盐等营养物质，此外还需要和无机盐等营养物质，此外还需要满足微生物生长对满足微
3、生物生长对 pH、特殊营养物质以及、特殊营养物质以及 O2的需求。的需求。二、无菌技术二、无菌技术1获得纯净的微生物培养物的关键获得纯净的微生物培养物的关键：防止：防止杂菌污染杂菌污染。2消毒和灭菌消毒和灭菌消毒消毒灭菌灭菌概念概念使用较为使用较为温和温和的物理的物理、化学或生化学或生使用使用强烈强烈的理化方法杀死物体的理化方法杀死物体2/15物等方法杀死物体物等方法杀死物体表面表面或内部或内部一部分微生物一部分微生物内外内外所有所有的微生物的微生物，包括包括芽孢和芽孢和孢子孢子常用方法常用方法煮沸煮沸消毒法消毒法、巴氏消毒法巴氏消毒法、酒精酒精消毒法、紫外线消毒法消毒法、紫外线消毒法湿热湿热
4、灭菌灭菌、干热灭菌干热灭菌、灼烧灼烧灭菌灭菌适用对象适用对象操作空间、双手等操作空间、双手等接种环接种环、接种针接种针、玻璃器皿玻璃器皿、培培养基等养基等3.具体操作具体操作(1)对实验操作的对实验操作的空间空间、操作者的衣着和手进行清洁和、操作者的衣着和手进行清洁和消毒消毒。(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌灭菌。(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰酒精灯火焰附近进行。附近进行。(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具
5、与周围的物品周围的物品接触。接触。三、微生物的纯培养三、微生物的纯培养1纯培养纯培养：在微生物学中在微生物学中，将接种于将接种于培养基培养基内内，在合适条件下形成的含在合适条件下形成的含特特定种类微生物定种类微生物的群体称为培养物。由的群体称为培养物。由单一个体繁殖单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯所获得的微生物群体称为纯培养物，获得培养物，获得纯培养物纯培养物的过程就是纯培养。的过程就是纯培养。2微生物纯培养的步骤微生物纯培养的步骤：微生物的纯培养包括配制培养基、：微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌灭菌、接种接种、分离和培养等步骤。分离和培养等步骤。3酵母菌的纯培养酵母菌的纯培养(1)菌落
6、：分散的微生物在适宜的菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的可见的、有一定形态结构的子细胞群体子细胞群体。(2)获得单菌落的方法：获得单菌落的方法：平板划线平板划线法和法和稀释涂布平板稀释涂布平板法。法。3/15判断对错判断对错(正确的打正确的打“”“”，错误的打，错误的打“”“”)1液体培养基含有水，而固体培养基不含水。液体培养基含有水，而固体培养基不含水。()提示提示：液体培养基和固体培养基都含有水液体培养基和固体培养基都含有水，它们的区别为是否含有凝固剂它们的区别为是否含有凝固剂。2获得纯净微生物培养物的
7、关键是防止杂菌污染。获得纯净微生物培养物的关键是防止杂菌污染。()3用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基都要进行消毒。用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基都要进行消毒。()提示提示：用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基都要进行灭菌。用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基都要进行灭菌。4培养基分装到培养皿后进行灭菌。培养基分装到培养皿后进行灭菌。()提示提示：培养基分装到培养皿之前要进行灭菌。培养基分装到培养皿之前要进行灭菌。5平板冷凝后应将平板倒置平板冷凝后应将平板倒置，防止皿盖上的冷凝水落入培养基防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染造成污染。()6转换划线角度后需要灼烧接种环再进行划
8、线。转换划线角度后需要灼烧接种环再进行划线。()4/15制备培养基制备培养基1培养基的配制原则培养基的配制原则(1)目的要明确：不同的微生物需求不同，根据培养目的进行配制。目的要明确：不同的微生物需求不同，根据培养目的进行配制。(2)营养要协调：营养物质的浓度和比例要适宜。营养要协调：营养物质的浓度和比例要适宜。(3)pH 要适宜：为维持要适宜：为维持 pH 的相对恒定，可在培养基中加入缓冲剂，常的相对恒定，可在培养基中加入缓冲剂，常用用K2HPO4KH2PO4。2培养基的成分及功能培养基的成分及功能营养营养物质物质作用作用功能功能主要来源主要来源碳源碳源能为微生物代能为微生物代谢提供碳元素谢
9、提供碳元素构成生物体的细胞物质和一构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生些代谢产物，有些是异养生物的能源物质物的能源物质无机碳源：无机碳源：CO2、NaHCO3等；有机碳等；有机碳源：糖类、脂质、蛋源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸等白质、有机酸等氮源氮源能为微生物的能为微生物的代谢提供氮元代谢提供氮元素素合成蛋白质、核酸以及含氮合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物的代谢产物无机化合物：无机化合物：N2、NH3、 铵盐铵盐、 硝酸盐等硝酸盐等；有机氮源：尿素、牛有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等肉膏、蛋白胨等水水是生命活动所是生命活动所必需的必需的不仅是优良的溶剂，而且可不仅是优良的溶剂，而
10、且可维持生物大分子结构的稳定维持生物大分子结构的稳定外界摄入外界摄入无机无机盐盐为微生物提供为微生物提供除碳除碳、氮以外的氮以外的各种重要元素各种重要元素，包括大量元素包括大量元素细胞内的组成成分，生理调细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂能源，酶的激活剂无机化合物无机化合物合作探究：合作探究：(1)能够利用无机碳源的微生物的同化作用类型是什么？能够利用无机碳源的微生物的同化作用类型是什么？提示提示：能利用无机碳源的微生物的同化作用类型是自养型微生物。能利用无机碳源的微生物的同化作用类型是自养型微生物。(2)牛肉膏蛋白胨培养基是一种常见的细菌
11、培养基，其中牛肉膏、蛋白胨能牛肉膏蛋白胨培养基是一种常见的细菌培养基，其中牛肉膏、蛋白胨能够提供哪些营养成分？够提供哪些营养成分？5/15提示提示：牛肉膏、蛋白胨能够提供碳源、氮源、维生素牛肉膏、蛋白胨能够提供碳源、氮源、维生素(生长因子生长因子)和无机盐和无机盐。(3)在科研和生产上，研究和应用微生物的前提是什么？在实验室中培养微在科研和生产上，研究和应用微生物的前提是什么？在实验室中培养微生物应注意哪些问题？生物应注意哪些问题？提示提示：在科研和生产上，研究和应用微生物的前提是防止杂菌污染，获得在科研和生产上，研究和应用微生物的前提是防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物。在实验室中培养微生
12、物，一方面要为人们需要的微生物纯净的微生物培养物。在实验室中培养微生物，一方面要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面确保其他微生物无法混入。提供合适的营养和环境条件，另一方面确保其他微生物无法混入。1下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C待培养基冷却至待培养基冷却至 50 左右时倒平板左右时倒平板D待培养基冷却凝固后将平板倒过来放置待培养基冷却凝固后将平板倒
13、过来放置A制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板平板，其顺序不能颠倒其顺序不能颠倒，A 错误错误；牛肉膏比较黏稠牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸用玻璃棒取出称量纸，B 正正确；待培养基冷却至确；待培养基冷却至 50 左右，开始倒平板，左右，开始倒平板，C 正确；培养基冷却凝固后需将正确；培养基冷却凝固后需将平板倒置，平板倒置，D 正确。正确。2回答下列与细菌培养相关的问题。
14、回答下列与细菌培养相关的问题。(1)在细菌培养时在细菌培养时， 培养基中能同时提供碳源培养基中能同时提供碳源、 氮源的成分是氮源的成分是_(填填“蛋蛋白胨白胨”“”“葡萄糖葡萄糖”或或“NaNO3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的同来调节培养基的 pH，其原因是，其原因是_。硝化细菌在没有碳源的培养基上。硝化细菌在没有碳源的培养基上_(填填“能够能够”或或“不能不能”)生长，原因是生长，原因是_。(2)用平板培养细菌时一般需要将平板用平板培养细菌时一般需要将平板_(填填“倒置倒置”或或“正置正置”)。(3)单个细菌在平板上会形成
15、菌落单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状研究人员通常可根据菌落的形状、大小大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物颜色等特征来初步区分不同种的微生物， 原因是原因是_。(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过有些使用后的培养基在丢弃前需要经过_处理，这种处理可以杀处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。死丢弃物中所有的微生物。解析解析(1)细菌培养时常用牛肉膏蛋白胨培养基细菌培养时常用牛肉膏蛋白胨培养基， 牛肉膏能提供碳源牛肉膏能提供碳源、 氮源氮源、磷酸盐磷酸盐、维生素维生素，蛋白胨能提供碳源蛋白胨能提供碳源、氮源氮源、维生素维生素，而葡萄糖不能提供氮源而葡萄糖不能提
16、供氮源，NaNO3不能为微生物提供碳源不能为微生物提供碳源。不同细菌生长繁殖所需要的最适不同细菌生长繁殖所需要的最适 pH 是不同的是不同的，6/15应该根据培养细菌的不同来调节培养基的应该根据培养细菌的不同来调节培养基的 pH。硝化细菌是化能自养型细菌硝化细菌是化能自养型细菌，可可以空气中的以空气中的 CO2为碳源，因此在没有碳源的培养基上能够生长。为碳源，因此在没有碳源的培养基上能够生长。(2)用平板培养用平板培养细菌细菌时，一般需将平板倒置，这样可以防止皿盖上的水珠落入培养基。时，一般需将平板倒置，这样可以防止皿盖上的水珠落入培养基。(3)不同不同种类的细菌所形成的菌落，在大小、形状、光
17、泽度、颜色、硬度、透明度等方种类的细菌所形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定的特征面具有一定的特征，不同种细菌在一定培养条件下表现出各自稳定的菌落特征不同种细菌在一定培养条件下表现出各自稳定的菌落特征，可以作为菌种鉴定的重要依据。可以作为菌种鉴定的重要依据。(4)使用后的培养基在丢弃前需进行灭菌处理，使用后的培养基在丢弃前需进行灭菌处理，以免污染环境。以免污染环境。答案答案(1)蛋白胨蛋白胨不同细菌生长繁殖所需的最不同细菌生长繁殖所需的最适适pH不同不同能够能够硝化细硝化细菌可以利用空气中的菌可以利用空气中的 CO2作为碳源作为碳源(2)倒置倒置(3)在一定的培养
18、条件下在一定的培养条件下，不同种不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征微生物表现出各自稳定的菌落特征(4)灭菌灭菌消毒和灭菌消毒和灭菌消毒消毒灭菌灭菌概念概念使用较为温和的物理、化学或生物等使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生方法杀死物体表面或内部一部分微生物物(不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子)使用强烈的理化方法杀死物体内使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物外所有的微生物(包括芽孢和孢包括芽孢和孢子子)常用常用方法方法煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药物煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药物消毒法、紫外线消毒法消毒法、紫外线消毒法灼烧灭菌、干热灭菌、湿热灭菌灼烧灭菌、干
19、热灭菌、湿热灭菌适用适用对象对象操作空间、某些液体、双手等操作空间、某些液体、双手等接种环、接种针、玻璃器皿、培接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等养基等常用灭菌和消毒方法的比较常用灭菌和消毒方法的比较常用灭菌与消毒方法的比较常用灭菌与消毒方法的比较灭菌和消毒的种类灭菌和消毒的种类主要方法主要方法应用范围应用范围灭灭菌菌湿热灭菌湿热灭菌(高压高压蒸汽灭菌法）蒸汽灭菌法）100 kPa、121 维维持持1530 min培养基及多种器材、物品培养基及多种器材、物品干热灭菌干热灭菌干热灭菌箱干热灭菌箱 160170 加热加热 23 h玻璃器皿玻璃器皿(如吸管、培养皿如吸管、培养皿等等)、金属用具等凡不
20、适宜用、金属用具等凡不适宜用其他方法灭菌而又能耐高温其他方法灭菌而又能耐高温7/15的物品的物品灼烧灭菌灼烧灭菌酒精灯火焰灼烧酒精灯火焰灼烧微生物接种工具微生物接种工具，如接种环如接种环、接种针或其他金属用具等，接种针或其他金属用具等，接种过程中的试管口或瓶口接种过程中的试管口或瓶口等等消消毒毒煮沸消毒法煮沸消毒法100 煮沸煮沸 56 min家庭餐具等生活用品家庭餐具等生活用品巴氏消毒法巴氏消毒法6265 煮煮 30 min 或或8090 煮煮 30 s1 min牛奶、啤酒、果酒和酱油等牛奶、啤酒、果酒和酱油等不宜进行高温灭菌的液体不宜进行高温灭菌的液体紫外线消毒紫外线消毒30 W紫外灯照紫
21、外灯照射射30 min接种室空气接种室空气化学药物消毒化学药物消毒用体积分数为用体积分数为 70%75%的乙醇、碘酒涂抹的乙醇、碘酒涂抹，来苏尔喷洒等来苏尔喷洒等皮肤、伤口、动植物组织表皮肤、伤口、动植物组织表面和空气、手术器械、塑料面和空气、手术器械、塑料或玻璃器皿等或玻璃器皿等合作探究合作探究： 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？外，还有什么目的？提示：提示：无菌技术还能有效避免操作者被微生物感染。无菌技术还能有效避免操作者被微生物感染。2对培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气和牛奶常采用
22、的灭菌对培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气和牛奶常采用的灭菌或消毒方法分别是什么？或消毒方法分别是什么？提示：提示：分别为高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学药物消毒、紫外分别为高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学药物消毒、紫外线消毒、巴氏消毒。线消毒、巴氏消毒。3用于生物消毒的微生物具有什么特点？用于生物消毒的微生物具有什么特点？提示提示：用于生物消毒的微生物能产生杀死其他微生物的代谢产物或是寄生用于生物消毒的微生物能产生杀死其他微生物的代谢产物或是寄生性的微生物。性的微生物。1下列关于灭菌和消毒的说法不正确的是下列关于灭菌和消毒的说法不正确的是()A灭菌是指杀死环境中的所有微生
23、物，包括芽孢和孢子灭菌是指杀死环境中的所有微生物，包括芽孢和孢子B灭菌和消毒实质上是相同的灭菌和消毒实质上是相同的C接种环用灼烧法灭菌接种环用灼烧法灭菌D常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、湿热灭菌等常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、湿热灭菌等8/15B灭菌与消毒的实质是不同的灭菌与消毒的实质是不同的。灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物，包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子，使用的是较为强烈的理化因素使用的是较为强烈的理化因素，常用的灭菌方法有灼烧灭菌常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、湿热灭菌等，根据不同的材料选用不同的灭菌方法，如接种环的灭干热灭菌、湿热灭菌等，
24、根据不同的材料选用不同的灭菌方法，如接种环的灭菌用灼烧法；消毒是指杀死物体表面或内部的部分微生物菌用灼烧法；消毒是指杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子)，使用的是较为温和的物理或化学方法。使用的是较为温和的物理或化学方法。2在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。请回答下列问题：请回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具_(填填“可以可以”或或“不可不可以以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的
25、消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是这两种方法的优点是_。(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能其原因是紫外线能_。在照射前，适量喷洒在照射前，适量喷洒_，可强化消毒效果。，可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常是经过水厂供应的自来水通常是经过_(填填“氯气氯气”“”“乙醇乙醇”或或“高锰酸高锰酸钾钾”)消毒的。消毒的。(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求
26、，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是达到相应温度，最可能的原因是_。解析解析(1)在实验室中在实验室中，能耐高温的能耐高温的、需要保持干燥的物品需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和如玻璃器皿和金属材质的实验器具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。金属材质的实验器具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)巴氏消毒法或巴氏消毒法或高温瞬时消毒法与煮沸消毒法相比，其优点表现为在达到消毒目的的同时，营高温瞬时消毒法与煮沸消毒法相比，其优点表现为在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。养物质损失较少。(3)紫外线照射能消毒的原因是其能够破坏微生物细胞中紫外线照射能消毒的原因是其能够破坏微生物细胞中的
27、的DNA 分子。在利用紫外线照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可分子。在利用紫外线照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可强化消毒效果强化消毒效果。(4)自来水通常是采用氯气进行消毒的自来水通常是采用氯气进行消毒的。(5)采用高压蒸汽灭菌时采用高压蒸汽灭菌时，若压力达到设定要求，而温度未达到相应要求，最可能的原因是没有排尽高压若压力达到设定要求，而温度未达到相应要求，最可能的原因是没有排尽高压蒸汽灭菌锅内的冷空气。蒸汽灭菌锅内的冷空气。答案答案(1)可以可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破破坏坏DNA 结构结构消毒液消毒
28、液(4)氯气氯气(5)未将锅内冷空气排尽未将锅内冷空气排尽(1)酒精消毒液中酒精浓度对效果的影响：酒精消毒液中酒精浓度对效果的影响：70%的酒精杀菌效果最好。原因的酒精杀菌效果最好。原因是浓度过高，菌体表面蛋白质变性过快而凝固成一层保护膜，酒精不能渗入其是浓度过高，菌体表面蛋白质变性过快而凝固成一层保护膜，酒精不能渗入其9/15中；浓度过低，杀菌能力减弱。中；浓度过低，杀菌能力减弱。(2)无菌技术措施的选择原则。无菌技术措施的选择原则。考虑效果：灭菌的效果比消毒要好。考虑效果：灭菌的效果比消毒要好。考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒考虑操作对象的承受能力：活体生物材
29、料、操作者的手等只能采用消毒的方法，而不能采用灭菌的方法。的方法，而不能采用灭菌的方法。微生物的纯培养微生物的纯培养1平板划线法平板划线法平板划线操作及培养结果：接种环在固体培养基表面连续划线，将聚集的平板划线操作及培养结果：接种环在固体培养基表面连续划线，将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面菌种逐步分散到培养基的表面。 平板划线示意图平板划线示意图(A)及培养后菌落分布示意图及培养后菌落分布示意图(B)如下图所示。如下图所示。2稀释涂布平板法稀释涂布平板法(1)主要操作环节：系列稀释和涂布平板。主要操作环节：系列稀释和涂布平板。(2)系列稀释和涂布平板后培养结果如图所示：系列稀释和涂布平板后培
30、养结果如图所示：3平板划线法与稀释涂布平板法的注意事项平板划线法与稀释涂布平板法的注意事项(1)平板划线法：平板划线法：接种环的灼烧：接种环的灼烧：a第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物。第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物。10/15b每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端。每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端。c划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者。划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者。灼烧接种之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种。灼烧接种之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌
31、种。划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线用力要大小适当，防止用力过大划破培养基。划线用力要大小适当，防止用力过大划破培养基。(2)稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：稀释操作时：每支试管及其中的稀释操作时：每支试管及其中的 9 mL 水、移液管等均需灭菌；操作时水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰试管口和移液管应在离火焰 12 cm 处。处。涂布平板时：涂布平板时：a涂布器浸在体积分数为涂布器浸在体积分数为 70%的酒精中的酒精中，取出时取出时，让多余酒精在烧杯中滴让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。尽，然后将沾
32、有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。b不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。c酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不接触任何物体。酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不接触任何物体。4两种纯化细菌方法的比较两种纯化细菌方法的比较项目项目优点优点缺点缺点平板划线法平板划线法可以观察菌落特征可以观察菌落特征，对混合对混合菌进行分离菌进行分离不能计数不能计数稀释涂布平板法稀释涂布平板法可以计数可以计数，可以观察菌落特可以观察菌落特征征吸收量较小，较麻烦，平板吸收量较小，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延不干燥效果不好，容
33、易蔓延合作探究：合作探究：(1)倒平板时，培养基冷凝后，为什么要将平板倒置？倒平板时，培养基冷凝后，为什么要将平板倒置？提示提示：培养基冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置既可以防止皿盖上培养基冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发。的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发。(2)接种操作时每次划线接种前与接种后都要灼烧接种环或接种针，其目的接种操作时每次划线接种前与接种后都要灼烧接种环或接种针，其目的分别是什么？分别是什么？提示提示：划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后残留的菌种。划线结束后灼划线前灼烧是为了杀死上次
34、划线结束后残留的菌种。划线结束后灼烧，能及时杀死接种环或接种针上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。烧，能及时杀死接种环或接种针上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。(3)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个接种的培养基放在接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个接种的培养基放在一起培养，未接种的培养基表面是否有菌落生长很关键。如果有菌落生长，说一起培养，未接种的培养基表面是否有菌落生长很关键。如果有菌落生长，说明了什么？明了什么？11/15提示提示：培养未接种培养基的作用是对照，未接种的培养基在恒温箱中保培养未接种培养基的作用是对照，未接种的培养基在恒温箱中保温温12 d
35、 后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的。若有菌落形成，说明培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的。若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。1下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法错下列说法错误的是误的是()A步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行B步骤步骤中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖C步骤步骤中，每次划线前后都需对接种环进行灭菌处理中，每次划线前后都需对接种环进行灭菌处理
36、D划线接种结束后，将图划线接种结束后，将图平板倒置后放入培养箱中培养平板倒置后放入培养箱中培养B由图可知由图可知，是倒平板是倒平板，是用接种环蘸取菌液是用接种环蘸取菌液，是进行平板划线是进行平板划线，是培养。是培养。步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，A正确正确；倒完平板后应立即盖上培养皿倒完平板后应立即盖上培养皿，冷却后将平板倒过来放置冷却后将平板倒过来放置，B 错误错误；每次每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种
37、环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到以便得到单单菌落菌落，C 正确正确；划线接种划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱中培养，结束后，将平板倒置后放入培养箱中培养，可以避免培养基中的水分过快可以避免培养基中的水分过快地挥地挥发和防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，发和防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，D 正确。正确。2下图甲、乙是微生物接种常用的两种方式，回答相关问题：下图甲、乙是微生物接种常用的两种方式，回答相关问题：(1)图
38、甲是利用图甲是利用_法进行微生物接种的法进行微生物接种的，图乙是利用图乙是利用_法进行微生物接种的。这两种方法所用的接种工具分别是法进行微生物接种的。这两种方法所用的接种工具分别是_和和_；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是_和酒精消毒。和酒精消毒。(2)平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步减少，每次平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步减少，每次划线都要从划线都要从_开始开始， 平板划线结束后平板划线结束后， 最后一次划的线不能与第最后一次划的线不能与第12/15一次划的线一次划的线_。(3)接种操作为什么一定要
39、在接种操作为什么一定要在酒精灯酒精灯火焰附近进行？火焰附近进行？_。(4)下图是接种后培养的效果图解，其接种方法是下图是接种后培养的效果图解，其接种方法是_(填填“图甲图甲”或或“图乙图乙”)所示方法。所示方法。(5)假设用图乙所示方法接种培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可假设用图乙所示方法接种培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？能的原因是什么？_。解析解析(1)图甲和图乙分别是利用平板划线法和稀释涂布平板法进行微生图甲和图乙分别是利用平板划线法和稀释涂布平板法进行微生物接种的物接种的，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器这两种方法所用的接种工具分别是接种环和
40、涂布器。(2)平板划线时平板划线时，每次划线前都要从上一次划线的末端开始，最后一次划线不能与第一次划线相每次划线前都要从上一次划线的末端开始，最后一次划线不能与第一次划线相连。连。(3)在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。(4)培培养基上的菌落分布均匀，接种方法为稀释涂布平板法。养基上的菌落分布均匀，接种方法为稀释涂布平板法。(5)采用稀释涂布平板法采用稀释涂布平板法进行菌种分离时，稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细胞。进行菌种分离时，稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细胞。答案答案(1)平板
41、划线平板划线稀释涂布平板稀释涂布平板接种环接种环涂布器涂布器灼烧灭菌灼烧灭菌(2)上上一次划线的末端一次划线的末端相连相连(或相接或相接、相交相交、交叉等交叉等)(3)酒精灯酒精灯火焰附近存在着无菌火焰附近存在着无菌区域区域(4)图乙图乙(5)稀释倍数不够，菌液的浓度太高稀释倍数不够，菌液的浓度太高单细胞菌落的获得单细胞菌落的获得(1)利用平板划线法接种时，单细胞菌落从后划线的区域挑取。利用平板划线法接种时，单细胞菌落从后划线的区域挑取。(2)利用稀释涂布平板法接种时，只有合适的稀释度才能得到单细胞菌落。利用稀释涂布平板法接种时，只有合适的稀释度才能得到单细胞菌落。课堂小结课堂小结知知 识识
42、网网 络络 构构 建建核核 心心 语语 句句 背背 诵诵13/151.各种培养基都含有水各种培养基都含有水、碳源碳源、氮源和氮源和无机盐等营养物质。无机盐等营养物质。2.获得纯净微生物培养物的关键是防获得纯净微生物培养物的关键是防止杂菌污染。止杂菌污染。3.消毒是指使用较为温和的物理消毒是指使用较为温和的物理、 化学化学或生物等方法杀死物体表面或内部一或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。部分微生物。4.灭菌是指使用强烈的理化方法杀死灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。孢子。5.由单一个体繁殖所获得的微生物群由单一个体繁殖所
43、获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。程就是纯培养。6.菌落是分散的微生物在适宜的固体菌落是分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的可见的、有一定形态结构的子细胞群有一定形态结构的子细胞群体。体。1不同培养基的具体配方不同，但一般都含不同培养基的具体配方不同，但一般都含()A碳源、磷酸盐和维生素碳源、磷酸盐和维生素B氮源和维生素氮源和维生素C水、碳源、氮源和无机盐水、碳源、氮源和无机盐D碳元素、氧元素、氢元素、氮元素碳元素、氧元素、氢元素、氮元素C培养基中一般都含有水培养基中一般都含有水
44、、碳源碳源、氮源和无机盐氮源和无机盐，此外还应考虑此外还应考虑 pH、特特殊营养物质及殊营养物质及 O2等条件。等条件。2采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂菌分别杀死哪些部位的杂菌()A接种环、吸管、培养基、接种室接种环、吸管、培养基、接种室B吸管、接种环、培养基、接种箱吸管、接种环、培养基、接种箱14/15C培养基、吸管、接种环、接种箱培养基、吸管、接种环、接种箱D培养皿、吸管、培养基、双手培养皿、吸管、培养基、双手B干热灭菌是将灭菌物品放入干热灭菌箱内干热灭菌是将灭菌物品放入干热灭
45、菌箱内， 在在 160170 下加热下加热 23h，适用于耐高温且需要保持干燥的物品，如玻璃器皿，适用于耐高温且需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿吸管、培养皿)和金属用和金属用具等；灼烧灭菌是利用酒精灯火焰的充分燃烧层灭菌，如接种针、接种环等；具等；灼烧灭菌是利用酒精灯火焰的充分燃烧层灭菌，如接种针、接种环等；高压蒸汽灭菌用高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌用高压蒸汽灭菌锅，一般在压力为一般在压力为 100 kPa、温度为温度为 121 的条件的条件下，维持下，维持 1530 min，主要用于培养基灭菌；紫外线照射适用于物体表面灭菌，主要用于培养基灭菌；紫外线照射适用于物体表面灭菌和空气灭菌
46、和空气灭菌， 如接种室如接种室、 接种箱接种箱、 超净工作台等超净工作台等， 使用前用紫外线照射约使用前用紫外线照射约 30 min。 3下列有关平板划线操作的描述，错误的是下列有关平板划线操作的描述，错误的是()A将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红B接种环在平板上划线的位置是随机的接种环在平板上划线的位置是随机的C在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过酒精灯火焰在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过酒精灯火焰D最后一区的划线不能与第一区相连最后一区的划线不能与第一区相连B接种环在平板上划线的位置并不是随机的：将接种环在平板上划线的位置
47、并不是随机的：将蘸蘸有菌种的接种环伸入有菌种的接种环伸入平板内，划三至五条平行线后应盖上皿盖，并灼烧接种环，待其冷却后，从第平板内，划三至五条平行线后应盖上皿盖，并灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线，重复以上操作，在三、四、五区域一区域划线的末端开始往第二区域内划线，重复以上操作，在三、四、五区域内划线。内划线。4下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是()A培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌B接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧C
48、接种后的培养皿要倒置，以防培养基被污染接种后的培养皿要倒置，以防培养基被污染D菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基A接种室、接种箱等常用紫外线消毒法处理，接种环等常用灼烧灭菌法接种室、接种箱等常用紫外线消毒法处理，接种环等常用灼烧灭菌法处理，吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理，培养基及多种器材用高压蒸汽灭处理，吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理，培养基及多种器材用高压蒸汽灭菌法处理菌法处理，A 错误错误；为了防止杂菌污染为了防止杂菌污染，每次接种前后每次接种前后，接种环都要进行灼烧灭接种环都要进行灼烧灭菌，菌，B 正确；接种后，培养皿需要倒置，以防皿盖上水珠
49、落入培养基造成污染正确；接种后，培养皿需要倒置，以防皿盖上水珠落入培养基造成污染，C 正确正确； 分离菌种可以用平板划线法和稀释涂布平板法分离菌种可以用平板划线法和稀释涂布平板法， 后者还可以用于微生物后者还可以用于微生物的计数，所用培养基为固体培养基，的计数，所用培养基为固体培养基，D 正确。故选正确。故选 A。5下表是培养某微生物的培养基的配方，请回答下列问题：下表是培养某微生物的培养基的配方，请回答下列问题：15/15组分组分牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨NaCl琼脂琼脂水水用量用量5 g10 g5g20 g1 000 mL(1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、培养基的类型很多
50、，但培养基中一般都含有水、碳源、_和无机和无机盐盐。 上述培养基配方中能充当碳源的成分是上述培养基配方中能充当碳源的成分是_。 培养基配制培养基配制完成以后，一般还要调节完成以后，一般还要调节 pH 并对培养基进行并对培养基进行_处理。处理。(2)在配制培养基时，除考虑营养条件外，还要考虑在配制培养基时，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和和渗透压等条件。渗透压等条件。(3)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行行_(填填“消毒消毒”或或“灭菌灭菌”)；操作者的双手需进行清洗和操作者的双手需进行清洗和_；空空
