1、1/9第第 2 课时课时微生物的选择培养和计数微生物的选择培养和计数课标内容要求课标内容要求核心素养对接核心素养对接1.举例说明通过调整培养基的配方可有举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。目的地培养某种微生物。2概述稀释涂布平板法和显微镜计数概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。法是测定微生物数量的常用方法。1.生命观念：各类微生物都能适应其生生命观念：各类微生物都能适应其生活环境。活环境。2科学思维：根据微生物的代谢类型科学思维：根据微生物的代谢类型配制选择培养基。配制选择培养基。3科学探究：讨论土壤中分解尿素的科学探究：讨论土壤中分解尿素的细菌的分离
2、与计数的方法。细菌的分离与计数的方法。一、选择培养基一、选择培养基1水生栖热菌的筛选水生栖热菌的筛选：水生栖热菌能在：水生栖热菌能在 7080 的高温条件下生存，而的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下绝大多数微生物在此条件下不能生存不能生存。2选择培养基选择培养基：在微生物学中在微生物学中，允许允许特定种类特定种类的微生物生长的微生物生长，同时抑制或同时抑制或阻止阻止其他种类其他种类微生物生长的培养基。微生物生长的培养基。二、微生物的选择培养二、微生物的选择培养1分解尿素的细菌的分离分解尿素的细菌的分离分解尿素的细菌能合成分解尿素的细菌能合成脲脲酶，该酶能催化尿素分解产生酶，该酶能催化
3、尿素分解产生 NH3，以此作为细，以此作为细菌生长的氮源。要将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方菌生长的氮源。要将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方设计思路是设计思路是培养基中除含有细菌必需的碳源、水、无机盐外，只含有尿素一种培养基中除含有细菌必需的碳源、水、无机盐外，只含有尿素一种氮源氮源。2稀释涂布平板法分离分解尿素的细菌稀释涂布平板法分离分解尿素的细菌土壤中细菌的数量庞大，要想得到能分解尿素的细菌的纯培养物，必须要土壤中细菌的数量庞大，要想得到能分解尿素的细菌的纯培养物，必须要对土样进行对土样进行充分稀释充分稀释，然后再将菌液，然后再将菌液涂布涂布到制备好
4、的到制备好的选择培养基上选择培养基上，操作过程，操作过程如下：如下：采集土样采集土样将将 10 g 土样加入盛有土样加入盛有 90 mL 无菌水无菌水的锥形瓶中，充分的锥形瓶中，充分摇匀摇匀。取取1 mL 上清液加入盛有上清液加入盛有 9 mL 无菌水的试管中，依次无菌水的试管中，依次等比稀释等比稀释取取 0.1 mL 菌液菌液，滴加到滴加到培养基培养基表面表面将涂布器浸在盛有将涂布器浸在盛有酒精酒精的烧杯中的烧杯中将涂布器放在将涂布器放在火焰火焰上灼上灼烧，待酒精燃尽、涂布器烧，待酒精燃尽、涂布器冷却冷却后，再进行涂布后，再进行涂布用涂布器将菌液均匀地涂布在用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基培
5、养基表面表面。涂布时可转动涂布时可转动培养皿培养皿，使涂布均匀使涂布均匀涂布的菌液被培养基吸收后涂布的菌液被培养基吸收后，2/9将平板将平板倒置倒置，放入，放入 3037 的恒温箱中培养的恒温箱中培养 12 d。三、微生物的数量测定三、微生物的数量测定1稀释涂布平板法稀释涂布平板法(1)原理：当样品的原理：当样品的稀释度稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的于样品稀释液中的一个活菌一个活菌。通过。通过统计平板上的菌落数统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数为约
6、含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数为 30300 的平板进行的平板进行计数。计数。(2)注意问题：统计的菌落数往往比活菌的实际数目注意问题：统计的菌落数往往比活菌的实际数目少少。这是因为。这是因为当两个或当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。2显微镜直接计数法显微镜直接计数法(1)方法方法：利用特定的利用特定的细菌计数板细菌计数板或或血细胞计数板血细胞计数板，在显微镜下观察在显微镜下观察、计数计数。(2)注意问题：统计的结果一般是注意问题：统计的结果一般是活菌数活菌数和和死菌数死菌数的总和。的总和。判断对错判断对错(正
7、确的打正确的打“”“”，错误的打，错误的打“”“”)1选择分解尿素的细菌的培养基为液体培养基。选择分解尿素的细菌的培养基为液体培养基。()提示提示：选择分解尿素的细菌的培养基为固体培养基选择分解尿素的细菌的培养基为固体培养基，固体培养基具有分离固体培养基具有分离、鉴定作用。鉴定作用。2用平板划线法培养计数，应选择菌落数在用平板划线法培养计数，应选择菌落数在 10100 的平板。的平板。()提示提示：微生物计数采用稀释涂布平板法，为保证结果准确，应选择菌落数微生物计数采用稀释涂布平板法，为保证结果准确，应选择菌落数在在 30300 的平板。的平板。3统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数目
8、。统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数目。()提示提示：由于当两个或多个细胞连在一起时由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落平板上观察到的只是一个菌落，所以统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。所以统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。4统计菌落数目的理论依据是一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌统计菌落数目的理论依据是一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。()5分解尿素的细菌在分解尿素时分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨可以将尿素转化为氨，使得培养基的使得培养基的 pH降低。降低。()提示提示：尿素分解菌将尿素转化为氨，使培养基的尿素分解菌将尿素转化为氨，
9、使培养基的 pH 升高。升高。6在用涂布器涂布平板时，为了操作方便可完全打开培养皿盖。在用涂布器涂布平板时，为了操作方便可完全打开培养皿盖。()提示提示：为了防止杂菌污染，不能完全打开皿盖。为了防止杂菌污染，不能完全打开皿盖。3/9选择培养基选择培养基1目的：目的：从众多的微生物中分离所需要的微生物。从众多的微生物中分离所需要的微生物。2三种筛选方法的特点及举例三种筛选方法的特点及举例方法方法特点特点举例举例利用微生物的营养利用微生物的营养特点进行选择培养特点进行选择培养通过控制培养基的营养成分，通过控制培养基的营养成分，使某种微生物能生长，其他微使某种微生物能生长，其他微生物不能生长生物不能
10、生长利用只含有尿素一种氮利用只含有尿素一种氮源的培养基源的培养基， 可筛选出分可筛选出分解尿素的细菌解尿素的细菌利用某种化学物质利用某种化学物质进行的选择培养进行的选择培养在完全培养基中加入某些化学在完全培养基中加入某些化学物质，利用加入的化学物质对物质，利用加入的化学物质对微生物产生的影响，抑制某些微生物产生的影响，抑制某些微生物，同时选择所需的微生微生物，同时选择所需的微生物物加入青霉素可以分离出加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌利用培养条件进行利用培养条件进行的选择培养的选择培养改变微生物的培养条件改变微生物的培养条件将培养基放在高温环境将培养基放在高温环境中培养可以得到耐高温
11、中培养可以得到耐高温的微生物的微生物合作探究：合作探究：(1)如何从大豆田土壤中分离出固氮微生物？如何从大豆田土壤中分离出固氮微生物？提示提示：从大豆田土壤取土样从大豆田土壤取土样，利用缺乏氮源的培养基可分离出固氮微生物利用缺乏氮源的培养基可分离出固氮微生物。(2)要分离出分解纤维素的微生物，应在什么样的环境中取土样？应配制什要分离出分解纤维素的微生物，应在什么样的环境中取土样？应配制什么样的培养基？么样的培养基？提示提示：应从富含纤维素的培养基中取土样，如树林中多年落叶形成的腐殖应从富含纤维素的培养基中取土样，如树林中多年落叶形成的腐殖土。应配制以纤维素为唯一碳源的培养基。土。应配制以纤维素
12、为唯一碳源的培养基。(3)根据选择培养基的原理，如何筛选出耐酸菌？根据选择培养基的原理，如何筛选出耐酸菌？提示：提示：可将培养基的可将培养基的 pH 调至酸性，再接种培养。调至酸性，再接种培养。1原油中含有大量有害的原油中含有大量有害的、致癌的多环芳烃致癌的多环芳烃。土壤中有些细菌可以利用原土壤中有些细菌可以利用原油中的多环芳烃为碳源，在培养基中形成分解圈。为筛选出能高效降解原油的油中的多环芳烃为碳源，在培养基中形成分解圈。为筛选出能高效降解原油的菌株并投入除污，某小组同学设计了相关实验。下列有关实验的叙述，不正确菌株并投入除污，某小组同学设计了相关实验。下列有关实验的叙述，不正确4/9的是的
13、是()A应配制来源于被原油污染土壤的土壤稀释液备用应配制来源于被原油污染土壤的土壤稀释液备用B配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基C将土壤稀释液灭菌后接种到选择培养基上将土壤稀释液灭菌后接种到选择培养基上D在选择培养基上能形成分解圈的即为所需菌种在选择培养基上能形成分解圈的即为所需菌种C为了筛选、获取能利用多环芳烃为碳源的菌种，首先是取材，应配制为了筛选、获取能利用多环芳烃为碳源的菌种，首先是取材，应配制来源于被原油污染土壤的土壤稀释液备用来源于被原油污染土壤的土壤稀释液备用， A 项正确项正确； 其次配制以多环芳烃为唯其次配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养
14、基一碳源的选择培养基，B 项正确项正确；然后进行接种然后进行接种，在无菌环境下在无菌环境下，将土壤稀释液将土壤稀释液接种到选择培养基上，在适宜的条件下进行培养，若将土壤稀释液进行灭菌，接种到选择培养基上，在适宜的条件下进行培养，若将土壤稀释液进行灭菌，就不能筛选出能高效降解原油的菌株，就不能筛选出能高效降解原油的菌株，C 项错误；在选择培养基上形成的菌落项错误；在选择培养基上形成的菌落，若该菌落周围有分解圈，即为所需菌种，若该菌落周围有分解圈，即为所需菌种，D 项正确。项正确。2从自然菌样中筛选较理想生产菌种的一般步骤从自然菌样中筛选较理想生产菌种的一般步骤：采集菌样采集菌样富集培养富集培养纯
15、种分离纯种分离性能测定。请回答下列问题：性能测定。请回答下列问题：(1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样采集菌样， 然后再按一定的方法分离然后再按一定的方法分离、 纯化纯化。 培养嗜盐菌的菌样应从培养嗜盐菌的菌样应从_(填填“高盐高盐”或或“低盐低盐”)环境采集环境采集，培养厌氧菌的菌样应从培养厌氧菌的菌样应从_(填填“有氧有氧”或或“无氧无氧”)环境采集。环境采集。(2)富集培养指创设仅适应于该条件的微生物旺盛生长的特定的环境条件，富集培养指创设仅适应于该条件的微生物旺盛生长的特定的环境条件，
16、使待分离微生物在群落中的数量大大增加，从而达到从自然界中分离到所需的使待分离微生物在群落中的数量大大增加，从而达到从自然界中分离到所需的特定微生物目的的微生物培养方法。对嗜盐菌富集培养的培养基应是特定微生物目的的微生物培养方法。对嗜盐菌富集培养的培养基应是_培养基；对含耐高温淀粉酶的微生物富集培养应选择培养基；对含耐高温淀粉酶的微生物富集培养应选择_的培养基，并在的培养基，并在_条件下培养。条件下培养。(3)实验室最常用的灭菌方法是高温处理。高温灭菌的原理是高温使微生物实验室最常用的灭菌方法是高温处理。高温灭菌的原理是高温使微生物的蛋白质和核酸等物质发生的蛋白质和核酸等物质发生_。 _灭菌法是
17、微生物研究和教学中灭菌法是微生物研究和教学中应用最广、效果最好的湿热灭菌法。应用最广、效果最好的湿热灭菌法。(4)下下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。分析接种的具体方法。5/9获得图获得图A效果的接种方法是效果的接种方法是_；获得图；获得图 B 效果的接种方法是效果的接种方法是_。解析解析(1)在长期自然选择的作用下在长期自然选择的作用下，生物与其生活环境相适应生物与其生活环境相适应，培养嗜盐培养嗜盐菌的菌样应从高盐环境中采集，培养厌氧菌的菌样应从无氧环境中采集。菌的菌样应从高盐环境中采
18、集，培养厌氧菌的菌样应从无氧环境中采集。(2)对对嗜盐菌富集培养的培养基应是加盐培养基，对含耐高温淀粉酶的微生物富集培嗜盐菌富集培养的培养基应是加盐培养基，对含耐高温淀粉酶的微生物富集培养应选择以淀粉为唯一碳源的培养基且在高温条件下培养。养应选择以淀粉为唯一碳源的培养基且在高温条件下培养。(3)高温能使蛋白质高温能使蛋白质和核酸发生不可逆转的变性，高压蒸汽灭菌法是应用最广、效果最好的湿热灭和核酸发生不可逆转的变性，高压蒸汽灭菌法是应用最广、效果最好的湿热灭菌法。菌法。(4)从培养基中菌落分布看，获得图从培养基中菌落分布看，获得图 A 用的是稀释涂布平板法，获得图用的是稀释涂布平板法，获得图 B
19、用的是平板划线法。用的是平板划线法。答案答案(1)高盐高盐无氧无氧(2)加盐加盐以淀粉为唯一碳源以淀粉为唯一碳源高温高温(3)变性变性高高压蒸汽压蒸汽(4)稀释涂布平板法稀释涂布平板法平板划线法平板划线法微生物计数的方法微生物计数的方法微生物生长量的测定有计数法、重量法、生理指标法等方法，但是一般使微生物生长量的测定有计数法、重量法、生理指标法等方法，但是一般使用计数法，计数法可分为直接计数法和间接计数法。二者的比较如下表所示：用计数法，计数法可分为直接计数法和间接计数法。二者的比较如下表所示：项目项目直接计数法直接计数法间接计数法间接计数法原理原理利用特定细菌计数板或血细胞计数利用特定细菌计
20、数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量品中微生物的数量当样品的稀释度足够高时当样品的稀释度足够高时， 培养培养基表面生长的一个菌落基表面生长的一个菌落， 来源于来源于样品稀释液中的一个活菌样品稀释液中的一个活菌。 通过通过统计平板上的菌落数统计平板上的菌落数， 就能推测就能推测出样品中大约含有多少活菌出样品中大约含有多少活菌主要主要用具用具显微镜、细菌计数板显微镜、细菌计数板培养基培养基计数计数数据数据菌体本身菌体本身培养基上菌落数培养基上菌落数优点优点计数方便、操作简单计数方便、操作简单计数的是活菌计数的是活菌缺点缺点死菌、活菌都计算在内
21、死菌、活菌都计算在内操作较复杂，有一定误差操作较复杂，有一定误差计算计算每毫升原液含菌数每小格平均菌每毫升原液含菌数每小格平均菌每毫升原液含菌数培养基上每毫升原液含菌数培养基上6/9公式公式体数体数40010 000稀释倍数稀释倍数平均菌落数平均菌落数稀释倍数稀释倍数涂布液涂布液体积体积合作探究合作探究：1.在用稀释涂布平板法对微生物进行计数时在用稀释涂布平板法对微生物进行计数时，统计菌落数目的理统计菌落数目的理论依据是什么？论依据是什么？提示提示：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。品稀释液
22、中的一个活菌。2在稀释涂布平板法中，为何需要涂布在稀释涂布平板法中，为何需要涂布 3 个平板？个平板？提示：提示：作为重复实验，统计时取平均值，以减少偶然因素对实验结果的影作为重复实验，统计时取平均值，以减少偶然因素对实验结果的影响，增强实验结果的说服力。响，增强实验结果的说服力。3为什么一般选择菌落数为为什么一般选择菌落数为 30300 的平板进行计数？的平板进行计数？提示：提示：若平板上菌落数过多，说明稀释度过低，菌体的密度大，就会出现若平板上菌落数过多，说明稀释度过低，菌体的密度大，就会出现更多的两个或两个以上的菌体形成的菌落，结果不准确，且计数较困难。若平更多的两个或两个以上的菌体形成
23、的菌落，结果不准确，且计数较困难。若平板上菌落数过少，菌落形成的偶然性大，结果也不准确。板上菌落数过少，菌落形成的偶然性大，结果也不准确。4为什么要选取菌落数目稳定时的记录作为结果？为什么要选取菌落数目稳定时的记录作为结果？提示：提示：尽量缩小统计的菌落数与实际活菌数的差值，因为繁殖慢的菌体开尽量缩小统计的菌落数与实际活菌数的差值，因为繁殖慢的菌体开始看不出明显的菌落。始看不出明显的菌落。5稀释涂布平板法和显微计数法对微生物计数产生的实验误差如何？试分稀释涂布平板法和显微计数法对微生物计数产生的实验误差如何？试分析原因。析原因。提示：提示：稀释涂布平板法计数的值比实际值小，原因是当两个或多个细
24、胞连稀释涂布平板法计数的值比实际值小，原因是当两个或多个细胞连在一起时在一起时，平板上观察到的只是一个菌落平板上观察到的只是一个菌落；显微计数法计数的结果比实际值大显微计数法计数的结果比实际值大，原因是显微镜下无法区分细胞的死活，计数时包括了死细胞。原因是显微镜下无法区分细胞的死活，计数时包括了死细胞。1 用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中的细菌数用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中的细菌数， 在对应稀释倍数为在对应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()A涂布了涂布了 1 个平板，统计的菌落数是个平板，统计的菌落数是 230B涂
25、布了涂布了 2 个平板，统计的菌落数是个平板，统计的菌落数是 215 和和 260，取平均值，取平均值 238C涂布了涂布了 3 个平板，统计的菌落数分别是个平板，统计的菌落数分别是 21、212 和和 256，取平均值，取平均值 163D涂布了涂布了 3 个平板个平板，统计的菌落数分别是统计的菌落数分别是 212、240 和和 250，取平均值取平均值 234D在设计实验时，一定要涂布至少在设计实验时，一定要涂布至少 3 个平板作为重复组，才能增强实验个平板作为重复组，才能增强实验7/9的说服力与准确性的说服力与准确性，A、B 错误错误。C 项虽然涂布了项虽然涂布了 3 个平板个平板，但是但
26、是，其中其中 1 个平个平板的计数结果与其他的相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，此时，板的计数结果与其他的相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，此时，不能简单地用不能简单地用 3 个平板的计数值来求平均值，个平板的计数值来求平均值，C 错误。错误。2下下图为图为“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中样品稀释示意实验中样品稀释示意图。据图分析，下列叙述正确的是图。据图分析，下列叙述正确的是()A3 号试管的稀释倍数为号试管的稀释倍数为 103倍倍B4 号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰好为号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰好为
27、5 号试管的号试管的 10倍倍C5 号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为 1.7109个个D该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要多该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要多C3 号试管的稀释倍数为号试管的稀释倍数为 104倍，倍，A 项错误；项错误；4 号试管中稀释液进行平板号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数不一定恰好为培养得到的菌落平均数不一定恰好为 5 号试管的号试管的 10 倍，倍，B 项错误；项错误；5 号试管的号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为结果表明每克土壤中的菌株数为(168175167) 30.11061.7109（
28、个个） ，C 项正确项正确； 在固体培养基上可能存在两个或多个菌体形成一个菌落的情况在固体培养基上可能存在两个或多个菌体形成一个菌落的情况， 得到得到的结果往往会比实际活菌数目少，的结果往往会比实际活菌数目少，D 项错误。项错误。用稀释涂布平板法计数微生物的方法用稀释涂布平板法计数微生物的方法(1)稀释涂布平板操作要求：按照平行重复原则，每一稀释度的菌液涂布稀释涂布平板操作要求：按照平行重复原则，每一稀释度的菌液涂布 3个或个或 3 个以上的平板。个以上的平板。(2)计数的时机：当各平板上菌落数目稳定时进行计数。计数的时机：当各平板上菌落数目稳定时进行计数。(3)选择可用于计数的平板：选择菌落
29、数在选择可用于计数的平板：选择菌落数在 30300 的平板的平板(相同稀释度的平相同稀释度的平板均符合该特点板均符合该特点)进行计数，然后取平均值。进行计数，然后取平均值。(4)每克样品中的菌株数某一稀释度下平板上生长的平均菌落数每克样品中的菌株数某一稀释度下平板上生长的平均菌落数涂布平涂布平板时所用的稀释液的体积板时所用的稀释液的体积稀释倍数。稀释倍数。课堂小结课堂小结知知 识识 网网 络络 构构 建建核核 心心 语语 句句 背背 诵诵8/91.选择培养基是指允许特定种类的微生选择培养基是指允许特定种类的微生物生长物生长， 同时抑制或阻止其他种类微生同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
30、物生长的培养基。2.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素素，因此可用尿素为唯一氮源的选择培因此可用尿素为唯一氮源的选择培养基分离能分解尿素的细菌。养基分离能分解尿素的细菌。3.为确保结果准确，一般选择菌落数为确保结果准确，一般选择菌落数在在30300 的平板进行计数。的平板进行计数。4.当样品的稀释度足够高时，培养基表当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落面生长的一个菌落， 来源于样品稀释液来源于样品稀释液中的一个活菌。中的一个活菌。5.统计的菌落数往往比活菌的实际数目统计的菌落数往往比活菌的实际数目少少，这是因为当两个或多个细胞连在一这是因为当两个或多
31、个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落起时，平板上观察到的只是一个菌落。1分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是()加尿素加尿素不加尿素不加尿素加琼脂加琼脂不加琼脂不加琼脂加葡萄糖加葡萄糖不加葡不加葡萄糖萄糖加硝酸盐加硝酸盐不加硝酸盐不加硝酸盐ABCDC尿素和硝酸盐都能作为氮源，而培养尿素分解菌的培养基应是以尿素尿素和硝酸盐都能作为氮源，而培养尿素分解菌的培养基应是以尿素为唯一氮源的固体培养基。因此培养基中应不加硝酸盐，加入尿素和琼脂。葡为唯一氮源的固体培养基。因此培养基中应不加硝酸盐，加入尿素和琼脂。葡萄糖作为碳源，也需要加入。萄糖作为碳源
32、，也需要加入。2高中生物学实验中高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是的一项是()A将少许干酵母加入新鲜的葡萄汁中将少许干酵母加入新鲜的葡萄汁中B将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C将转基因植物叶片接种到无菌培养基上将转基因植物叶片接种到无菌培养基上D将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上9/9C不进行严格的灭菌对葡萄酒制作的影响不大，因为多数微生物不能在不进行严格的灭菌对葡萄酒制作的影响不大，因为多数微生物不能在缺氧缺氧、酸性和含糖较高的环境中生存酸
33、性和含糖较高的环境中生存，A 不符合题意不符合题意；不进行严格的灭菌对腐乳不进行严格的灭菌对腐乳制作的影响不大，因为腐乳制作时还需在其中放入酒精、盐和香辛料等，这些制作的影响不大，因为腐乳制作时还需在其中放入酒精、盐和香辛料等，这些物质都具有杀菌作用物质都具有杀菌作用，B 不符合题意不符合题意；植物组织培养要求严格的无菌环境植物组织培养要求严格的无菌环境，如果如果不进行严格无菌操作，会造成培养的幼苗生长缓慢甚至培育失败，不进行严格无菌操作，会造成培养的幼苗生长缓慢甚至培育失败，C 符合题意符合题意；选择培养基是根据要培养的微生物的代谢特点制备的，一般的杂菌在其上面也选择培养基是根据要培养的微生
34、物的代谢特点制备的，一般的杂菌在其上面也很难生存，很难生存，D 不符合题意。不符合题意。3尿素是一种重要的氮肥尿素是一种重要的氮肥，农作物不能将其直接吸收利用农作物不能将其直接吸收利用，而是通过土壤而是通过土壤中的细菌将其分解为氨和中的细菌将其分解为氨和 CO2后才能被农作物利用。请回答下列问题：后才能被农作物利用。请回答下列问题：(1)土壤中的某些细菌能分解尿素是因为该种细菌能合成土壤中的某些细菌能分解尿素是因为该种细菌能合成_。(2)为筛选尿素分解菌而制备的培养基中含有的营养物质除尿素外，还包括为筛选尿素分解菌而制备的培养基中含有的营养物质除尿素外，还包括水水、碳源碳源、_等等，该培养基能
35、筛选出目的菌株的原因是该培养基能筛选出目的菌株的原因是_。(3)一般依据尿素分解菌菌落的一般依据尿素分解菌菌落的_、隆起程度和颜色等特征来统计菌、隆起程度和颜色等特征来统计菌落数目落数目。现将现将 10 mL 尿素分解菌悬液进行梯度稀释尿素分解菌悬液进行梯度稀释，分别取分别取 0.1 mL 稀释倍数稀释倍数为为106的样液接种到的样液接种到 3 个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为 39、42、45，则，则 1 mL 悬液中活细菌数量为悬液中活细菌数量为_个。上述过程采用的接种方法是个。上述过程采用的接种方法是_。(4)为检验培养基及培养皿灭
36、菌是否合格为检验培养基及培养皿灭菌是否合格，可采取的措施是可采取的措施是_。解析解析(1)分解尿素的细菌能合成脲酶，将尿素分解。分解尿素的细菌能合成脲酶，将尿素分解。(2)微生物的培养基微生物的培养基中需含有水、无机盐、碳源和氮源，尿素作为氮源。因为只有能合成脲酶的细中需含有水、无机盐、碳源和氮源，尿素作为氮源。因为只有能合成脲酶的细菌才能利用尿素作为氮源生长，因此该培养基能筛选出分解尿素的细菌。菌才能利用尿素作为氮源生长，因此该培养基能筛选出分解尿素的细菌。(3)一一个菌落为一个细菌繁殖的后代，不同的微生物的菌落个菌落为一个细菌繁殖的后代，不同的微生物的菌落特征特征不同，菌落的特征包不同，菌
37、落的特征包括形状、大小、隆起程度，据此来统计菌落的数目。微生物计数的方法采用稀括形状、大小、隆起程度，据此来统计菌落的数目。微生物计数的方法采用稀释涂布平板法接种，释涂布平板法接种，1 mL 悬液中活细菌的数目为悬液中活细菌的数目为(394245)30.11064.2108(个个)。(4)可单独设置一个灭菌后不接种样液的含培养基的培养皿进行培可单独设置一个灭菌后不接种样液的含培养基的培养皿进行培养，观察该培养基上是否出现菌落，从而判断灭菌是否合格。养，观察该培养基上是否出现菌落，从而判断灭菌是否合格。答案答案(1)脲酶脲酶(2)无机盐无机盐只有以尿素为唯一氮源的细菌才能在该培养只有以尿素为唯一氮源的细菌才能在该培养基上生长基上生长(3)形状形状、 大小大小4.2108稀释涂布平板法稀释涂布平板法(4)单独设置一个灭单独设置一个灭菌后不接种样液的培养皿菌后不接种样液的培养皿(含培养基含培养基)进行培养进行培养
