1、第五章 药物的杂质分析药物的杂质分析Chapter 5 Analysis of Impuries in Drugs药物分析学药物分析学 总论总论目 录第一节第一节 药物中的杂质与杂质限量药物中的杂质与杂质限量1第二节第二节 药物中杂质的检查方法药物中杂质的检查方法2第三节第三节 降解物和杂质的分离与鉴定降解物和杂质的分离与鉴定3一、一、药物的杂质与纯度药物的杂质与纯度第一节第一节 药物中的杂质与杂质限量药物中的杂质与杂质限量 杂质杂质 任何影响药品任何影响药品纯度的物质均纯度的物质均称为杂质。称为杂质。药品纯度药品纯度 药物的纯洁程药物的纯洁程度，是反映药度，是反映药品质量的一项品质量的一项重
2、要指标。重要指标。理化理化常数常数含量含量测定测定杂质杂质检查检查外观外观性状性状药物纯药物纯度的综度的综合评定合评定注意注意药物纯度与化学纯度的区别药物纯度与化学纯度的区别 二、杂质的来源二、杂质的来源 在原料药的合成过程中，起在原料药的合成过程中，起始物质不纯或未反应完全、始物质不纯或未反应完全、反应的中间体与反应副产物反应的中间体与反应副产物在精制时未能完全除去而引在精制时未能完全除去而引入杂质入杂质生产过程中引入的生产过程中引入的杂质杂质 在温度、湿度、日光、空气在温度、湿度、日光、空气等外界条件影响下，或因微等外界条件影响下，或因微生物的作用，引起药物发生生物的作用，引起药物发生水解
3、、氧化、分解、异构化、水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化，使药物中产生有霉等变化，使药物中产生有关的杂质。关的杂质。贮藏过程中引入的贮藏过程中引入的杂质杂质示例：示例：安乃近安乃近的生产的生产 原料药生产中引入的杂质原料药生产中引入的杂质 可能引入的杂质为中间体MAA中存在少量的AA与甲醛、亚硫酸氢钠缩合产生的4N去甲基安乃近，以及微量MAA、双甲氨基安替比林甲烷(MAA-CH2-MAA)、甲醛亚硫酸氢钠和亚硫酸氢钠等。NNC6H5CH3CH3H2NONNC6H5CH3CH3HNONNC6H5CH3CH3NONNC6H5CH3CH3HNONNC6
4、H5CH3CH3NOOHCH3COHCCH3CH2SO3NaH3CAAFAAFMAAMAA甲酰化甲基化水解缩合HCOOH(CH3)2SO4，NaOHH2O,H2SO4NaHSO3，HCHO示例示例 肾上腺素注射液肾上腺素注射液 抗氧剂抗氧剂焦亚硫酸钠焦亚硫酸钠 稳定剂稳定剂EDTA-2NaHOHOCOHHCH2NHCH3肾上腺素肾上腺素磺酸肾上腺素磺酸 制剂生产中引入的杂质制剂生产中引入的杂质肾上腺素肾上腺素 药物贮藏中引入的杂质药物贮藏中引入的杂质易发生氧化反应的结构：醚、醛、酚羟基、易发生氧化反应的结构：醚、醛、酚羟基、 巯基、亚硝基、巯基、亚硝基、 双键等双键等氧化反应：利血平氧化反应：
5、利血平氧化产物无降压作用氧化产物无降压作用 严格控制药品的贮藏条件，是保证临床用药安严格控制药品的贮藏条件，是保证临床用药安全、有效的一个重要方面。全、有效的一个重要方面。三、杂质的种类与分类三、杂质的种类与分类按来源分按来源分一一般般杂杂质质在自然界中分布较广泛，在多种在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。如酸、碱、水分、氯入的杂质。如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、重金属、砷盐等化物、硫酸盐、重金属、砷盐等特特殊殊杂杂质质在个别药物的生产和贮藏过程中在个别药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。如阿司匹林中的游引入的杂质。如阿司匹林中的游离水
6、杨酸、甲硝唑中的离水杨酸、甲硝唑中的2-甲基甲基-5-硝基咪唑等。硝基咪唑等。 按毒性分按毒性分信号杂质信号杂质本身一般无害，但其含量的本身一般无害，但其含量的多少可以反映出药物的纯度多少可以反映出药物的纯度水平，称其为水平，称其为“信号信号”杂质。杂质。如氯化物、硫酸盐等属于信如氯化物、硫酸盐等属于信号杂质。号杂质。毒性杂质毒性杂质对人体有毒害的杂质。如重对人体有毒害的杂质。如重金属、砷盐、氰化物等应严金属、砷盐、氰化物等应严格加以控制，以保证用药安格加以控制，以保证用药安全。全。 有机杂质有机杂质残留溶剂残留溶剂 无机杂质无机杂质 按按化化学学类类别别和和特特性性分分类类合成中未反应完全的
7、原料、中合成中未反应完全的原料、中间体、副产物、降解产物等间体、副产物、降解产物等 生产中使用的有机溶剂生产中使用的有机溶剂 来源于生产过程，一般是已知来源于生产过程，一般是已知的和确定的，直接影响药物的的和确定的，直接影响药物的稳定性，反映生产工艺情况稳定性，反映生产工艺情况 四、杂质的限量四、杂质的限量定义定义药物中所含杂质的最大允许量。药物中所含杂质的最大允许量。计算计算供供试试品品的的量量杂杂质质的的最最大大允允许许量量杂杂质质限限量量100 供供试试品品的的量量体体积积标标准准液液浓浓度度100 %100SVC(%)L 百分之几或百万分之几（百分之几或百万分之几（ppm）表示表示 检
8、查方法检查方法限度检查法限度检查法定量测定定量测定对照法对照法比较法比较法灵敏度法灵敏度法 样品管样品管 标准管标准管%100SVCL 注意事项：平行操作原则。注意事项：平行操作原则。 对照法对照法 在供试品溶液中加在供试品溶液中加入一定量的试剂，入一定量的试剂，在一定反应条件下在一定反应条件下不得有正反应出现，不得有正反应出现，从而判断供试品中从而判断供试品中所含杂质是否符合所含杂质是否符合限量规定限量规定灵敏度法灵敏度法取一定量供试品依取一定量供试品依法检查，测定特定法检查，测定特定待检杂质的参数与待检杂质的参数与规定的限量比较，规定的限量比较，不得更大。不得更大。比较法比较法 示例示例1
9、 茶苯海明中氯化物的检查茶苯海明中氯化物的检查已知：已知：20025g30. 0S ml/g10C ml5 . 1V 求：求：L？解：解：%04. 0%1002002530. 05 . 11010%100SVCL6 示例示例2 谷氨酸钠中重金属的检查谷氨酸钠中重金属的检查已知：已知：S1.0g C10g/ml L10106求：求：V？解：解：)ml(0 . 110100 . 11010CSLV66 示例示例3 肾上腺素中酮体的检查肾上腺素中酮体的检查解：解：)ml/g(1015. 1100143505. 01001EAC6%1cm1 酮酮体体%1cm1E%06. 0%100100 . 2101
10、5. 1100%CC(%)L36 样品样品酮体酮体已知：已知：=435 A=0.05求：求：L？ml/g100 .21002 .0C3样样品品 计算中应注意单位一致单位一致稀释体积稀释体积 ppm的表示方法的表示方法 第二节 药物中药物中杂质的检查方法药物中杂质检查的原理药物中杂质检查的原理常用方法常用方法 化学方法化学方法 色谱方法色谱方法 光谱方法光谱方法 物理方法物理方法 一、化学法一、化学法与试剂反应产生颜色与试剂反应产生颜色与试剂反应产生沉淀与试剂反应产生沉淀与试剂反应产生气体与试剂反应产生气体杂质杂质杂质与试剂杂质与试剂反应特征反应特征杂质限量检测方法杂质限量检测方法 药典应用示例
11、药典应用示例产生颜色 产生沉淀产生气体 目视比色，分光光度法比浊法 气体检查法颜色 铁盐、氟、硒氯化物、硫酸盐、重金属、钡盐砷、硫、碳酸盐、氨、氰化物例例4 苄氨噻嗪中芳香第一胺的检查苄氨噻嗪中芳香第一胺的检查NNHSHOOSOOH2NF3C分子结构中无芳香第一胺基，不分子结构中无芳香第一胺基，不能发生重氮化能发生重氮化-偶合反应，而芳香第偶合反应，而芳香第一胺杂质可以发生反应而产生颜色一胺杂质可以发生反应而产生颜色，采用分光光度法检查。，采用分光光度法检查。苄氟噻嗪苄氟噻嗪本品本品80mg供试品溶供试品溶液液有色溶液有色溶液测定1mol/L盐酸溶液盐酸溶液4亚硝酸钠溶液亚硝酸钠溶液10氨基氨
12、基磺酸铵溶液磺酸铵溶液2二盐酸萘基乙二胺溶液二盐酸萘基乙二胺溶液步骤步骤各试剂各试剂的作用？的作用？（一）紫外吸收光谱法（一）紫外吸收光谱法 在某一波长处杂质有最大吸收，药物无吸收。在某一波长处杂质有最大吸收，药物无吸收。HOOHOHOOHOO二羟基蒽醌二羟基蒽醌地蒽酚地蒽酚二、光谱方法二、光谱方法依据药物和杂质对光选择吸收性质差异进行检查。依据药物和杂质对光选择吸收性质差异进行检查。示例示例 地蒽酚中二羟基蒽醌的检查地蒽酚中二羟基蒽醌的检查HOOHOHOOHOO均有紫外吸收均有紫外吸收 432nm 地蒽酚地蒽酚 无吸收无吸收二羟基蒽醌二羟基蒽醌 有最大吸收有最大吸收 规定规定0.01%地蒽酚
13、氯仿溶液地蒽酚氯仿溶液A432nm 结果判断结果判断A晶型晶型C晶型晶型640cm-1 有强吸收有强吸收 吸收很弱吸收很弱 662cm-1 吸收很弱吸收很弱 有强吸收有强吸收 （三）原子吸收分光光度法（三）原子吸收分光光度法 通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药收发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待测元素的物中待测元素的 含量。含量。限量检查限量检查对照品液：供试品对照品对照品液：供试品对照品a供试品液供试品液bb(a-b) 不合格不合格吸光度吸光度 三、色谱法（三、色谱法（chromatography
14、） 药物中的有机杂质的结构和性质往往和药物相近，药物中的有机杂质的结构和性质往往和药物相近，色谱法可以利用药物与杂质在色谱性质的差异，能有色谱法可以利用药物与杂质在色谱性质的差异，能有效的将杂质与药物进行分离和检测。效的将杂质与药物进行分离和检测。常用的方法常用的方法TLCHPLCGC样品对照品（一）（一） TLC 法法1. 杂质对照品法杂质对照品法适用于已知杂质并能制适用于已知杂质并能制备杂质对照品的情况。备杂质对照品的情况。 示例示例 枸橼酸乙胺嗪中枸橼酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的检查甲基哌嗪的检查判断结果判断结果供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑
15、点，其颜色与对照溶液品溶液主斑点比较，不得更深。对照溶液品溶液主斑点比较，不得更深。 供试品溶液：枸橼酸乙胺嗪（供试品溶液：枸橼酸乙胺嗪（50mg/ml）对照品溶液：对照品溶液： N-甲基哌嗪对照品甲基哌嗪对照品(50 g/ml)点样点样 展开展开 晾干薄层板晾干薄层板检视斑点检视斑点 2. 供试品溶液自身稀释对照法供试品溶液自身稀释对照法适用于杂质的结构不能确定，或无杂质对照品的情况。适用于杂质的结构不能确定，或无杂质对照品的情况。限于杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色相同或相近的限于杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色相同或相近的情况下使用。情况下使用。样品对照品结果判断结果判断供试品溶液所显杂质斑
16、点与供试品溶液所显杂质斑点与自身稀释对照溶液或系列自自身稀释对照溶液或系列自身稀释对照溶液所显主斑点身稀释对照溶液所显主斑点比较，不得更深。比较，不得更深。 示例示例 吡罗昔康中有关物质的检查吡罗昔康中有关物质的检查供试品溶液：供试品溶液：20mg/ml对照溶液：对照溶液：0.2mg/ml结果判断：供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液所结果判断：供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液所 显的主斑点比较，不得更深。显的主斑点比较，不得更深。 稀释稀释 3.杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照 法并用法并用 当药物中存在多个杂质当药物中存在多个杂质时，其中已知杂质有对
17、照品时，时，其中已知杂质有对照品时，采用杂质对照品法检查；共存采用杂质对照品法检查；共存的未知杂质或没有对照品的杂的未知杂质或没有对照品的杂质，可采用供试品溶液自身稀质，可采用供试品溶液自身稀释对照法检查。释对照法检查。 样品样品对照品对照品对照对照判断：供试品溶液如显杂质斑点不得多判断：供试品溶液如显杂质斑点不得多于于2个，其中在与对照品溶液相同的位个，其中在与对照品溶液相同的位置上所显杂质斑点的颜色与对照品溶液置上所显杂质斑点的颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深，另一杂质杂质主斑点比较，不得更深，另一杂质杂质的颜色与对照溶液主斑点比较，不得更的颜色与对照溶液主斑点比较，不得更深。深。示例
18、示例 盐酸黄酮哌酯中有关物质的检查盐酸黄酮哌酯中有关物质的检查 供试品溶液：供试品溶液： 20mg/ml对照溶液：对照溶液： 0.10 mg/ml对照品溶液：对照品溶液：3-甲基黄酮甲基黄酮-8-羧酸羧酸0.10 mg/ml稀释稀释 NOOOOCH3HOOOOCH3黄酮哌酯3-甲基黄酮-8-羧酸NOOOOCH3HOOOOCH3黄酮哌酯3-甲基黄酮-8-羧酸 4. 对照药物法对照药物法 当无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂当无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，可用时，可用与供试品相同的药物作
19、为对照品，此对照药与供试品相同的药物作为对照品，此对照药物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。 判断结果：供试品溶液主斑点的位置与颜色应与对判断结果：供试品溶液主斑点的位置与颜色应与对照品溶液的主斑点一致，如显杂质斑点，其颜色不得照品溶液的主斑点一致，如显杂质斑点，其颜色不得深于对照品溶液对应的杂质斑点，并不得有对照品溶深于对照品溶液对应的杂质斑点，并不得有对照品溶液以外的杂质斑点；供试品溶液除主斑点外，不得液以外的杂质斑点；供试品溶液除主斑点外，不得显任何杂质斑点。显任何杂质斑点。示例示例 马来酸麦角新碱中有关物质的检查马来酸麦角新碱中有关物
20、质的检查供试品溶液供试品溶液 ：5mg/ml供试品溶液供试品溶液 ：0.2mg/ml对照品溶液：马来酸麦角新碱对照品，对照品溶液：马来酸麦角新碱对照品， 5mg/ml （二）（二）HPLC 法法1. 外标法测定法外标法测定法 供试品溶供试品溶液液 对照品溶对照品溶液液 进样进样记录色谱记录色谱图：图：AX和和AR计算计算RRXXAA=示例 卡托普利及其片剂中卡托普利二硫化物的检查 供试品溶液：供试品溶液： 0.5mg/ml对照品溶液：卡托普利二硫化物对照品，对照品溶液：卡托普利二硫化物对照品，5 g/ml混合溶液：混合溶液： 卡托普利和卡托普利二硫化物对照品卡托普利和卡托普利二硫化物对照品 0
21、.1mg/ml和和15 g/ml 适用性试验：用混合溶液适用性试验：用混合溶液 R卡托普利和卡托普利二硫化物卡托普利和卡托普利二硫化物大于大于4.0 以峰面积计算其含量，原料药中的二硫化物不得超以峰面积计算其含量，原料药中的二硫化物不得超过过1.0%，片剂中的不得超过卡托普利标示量的，片剂中的不得超过卡托普利标示量的3.0% 2. 加校正因子的主成分自身对照测定法加校正因子的主成分自身对照测定法消除杂质与主成分的响应可消除杂质与主成分的响应可能不同所引起的测定误差能不同所引起的测定误差适用于已知杂质的控制。适用于已知杂质的控制。用杂质对照品测定用杂质对照品测定f杂质杂质，f杂质杂质和相对保留时
22、间直接和相对保留时间直接载入各品种质量标准中，在常规检验时用相对保载入各品种质量标准中，在常规检验时用相对保留时间定位，以留时间定位，以f杂质杂质校正该杂质的实测峰面积。校正该杂质的实测峰面积。 药物对照品的峰面积药物对照品的峰面积 杂质对照品的峰面积杂质对照品的峰面积 RRSS/A/A= f 方法方法调节检测灵敏度：对照溶液调节检测灵敏度：对照溶液 主成分色谱峰的峰高约为满量程的主成分色谱峰的峰高约为满量程的1025供试品溶液的制备供试品溶液的制备对照溶液的制备对照溶液的制备进样：供试品溶液进样：供试品溶液 对照溶液对照溶液 分析时间：主成分色谱峰分析时间：主成分色谱峰 保留时间的保留时间的
23、2倍倍判断：供试品溶液中各杂质的峰面积分别乘以相应的判断：供试品溶液中各杂质的峰面积分别乘以相应的 校正因子后，与对照溶液中主成分的峰面积比较。校正因子后，与对照溶液中主成分的峰面积比较。 稀释稀释 示例示例 红霉素红霉素A中红霉素中红霉素B、C组分及有关组分及有关 物质的检查物质的检查供试品溶液：供试品溶液：4mg/ml对照溶液：对照溶液：0.2mg/ml调节检测灵敏度：对照溶液调节检测灵敏度：对照溶液 主成分色谱峰的峰高约为满量程主成分色谱峰的峰高约为满量程 的的20进样：供试品溶液进样：供试品溶液 对照溶液对照溶液 分析时间：主成分色谱峰保分析时间：主成分色谱峰保 留时间的留时间的4倍倍
24、稀释稀释 结果判断：结果判断：A红霉素红霉素B校正校正 A红霉素红霉素A对照液对照液A红霉素烯醇醚校正红霉素烯醇醚校正 0.6A红霉素红霉素A对照液对照液校正峰面积：校正峰面积： f 红霉素红霉素B 0.7 红霉素烯醇醚红霉素烯醇醚 0.09 杂质杂质1 0.15其他单个杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积其他单个杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积 A红霉素红霉素C校正校正 A红霉素红霉素A对照液对照液A杂质杂质1校正校正 0.6A红霉素红霉素A对照液对照液3. 不加校正因子的主成分自身对照法不加校正因子的主成分自身对照法适用于没有杂质对照品的情况适用于没有杂质对照品的情况 对照溶液：供
25、试品的稀释液对照溶液：供试品的稀释液调节检测灵敏度调节检测灵敏度进样：供试品溶液进样：供试品溶液 对照溶液对照溶液 分析时间：供试品溶液分析时间：供试品溶液 主成分色谱峰保留时间的主成分色谱峰保留时间的2倍倍 供试品溶液中各杂质的峰面积与对照溶液主成供试品溶液中各杂质的峰面积与对照溶液主成分的峰面积比较分的峰面积比较. 自身对照液自身对照液供试品溶液供试品溶液A杂总杂总=A1A2A3 供试品溶液：供试品溶液：1 mg/ml对照溶液：对照溶液： 5g/ml进样：供试品溶液进样：供试品溶液 对照溶液对照溶液分析时间：供试品溶液主成分色谱峰保留时间的分析时间：供试品溶液主成分色谱峰保留时间的4倍倍判
26、断：判断：单个杂质的峰面积不得大于对照溶液的主峰面单个杂质的峰面积不得大于对照溶液的主峰面积（积（0.5%），各杂质的峰面积的和不得大于对照溶），各杂质的峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积的液的主峰面积的4倍（倍（2.0%）示例示例 甲氨蝶呤中有关物质的检查甲氨蝶呤中有关物质的检查稀释稀释 适用于粗略测量供试品中杂质的含量。适用于粗略测量供试品中杂质的含量。计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积（含药物计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积（含药物的峰面积，而不含溶剂峰面积）的百分率。的峰面积，而不含溶剂峰面积）的百分率。 该法一般不宜用于微量杂质的检查。该法一般不宜用于微量杂质的检查。 4. 面积
27、归一化法面积归一化法%100%主AAALii检测器的选择：应根据对杂质结构的分析进行有检测器的选择：应根据对杂质结构的分析进行有目的的选择。对于在紫外光区吸收较弱或无吸收的目的的选择。对于在紫外光区吸收较弱或无吸收的杂质，可采用其他通用型检测器（如蒸发光散射检杂质，可采用其他通用型检测器（如蒸发光散射检测器、质谱检测器等）。二极管阵列检测器测器、质谱检测器等）。二极管阵列检测器(diode array detector ，DAD)是杂质研究，特别是复方制是杂质研究，特别是复方制剂中杂质研究的有效手段。通过该检测器可获得各剂中杂质研究的有效手段。通过该检测器可获得各杂质的光谱信息，有助于判断杂质
28、检测波长选择的杂质的光谱信息，有助于判断杂质检测波长选择的合理性，并可进行峰纯度检查。合理性，并可进行峰纯度检查。注意以下问题注意以下问题检测波长的选择：应选用对各杂质均有较强吸收检测波长的选择：应选用对各杂质均有较强吸收的波长作为检测波长，当一个测定波长无法兼顾所有的波长作为检测波长，当一个测定波长无法兼顾所有杂质时，可选用不同波长分别测定。杂质时，可选用不同波长分别测定。例如在氯喹那多（例如在氯喹那多（chlorquinaldol）及有关物质的）及有关物质的HPLC分析分析中，用中，用DAD检测器选择测定波长，氯喹那多在检测器选择测定波长，氯喹那多在251 nm和和360 nm处有最大吸收
29、，有关物质的最大吸收分别在处有最大吸收，有关物质的最大吸收分别在251, , 253，254 nm处，为了兼顾氯喹那多的含量测定，选择测定波长在处，为了兼顾氯喹那多的含量测定，选择测定波长在251 nm处。处。(三三) 气相色谱法气相色谱法 主要用于药物中挥发性杂质的检查。主要用于药物中挥发性杂质的检查。方法方法 ：方法同方法同HPLC标准溶液加入法标准溶液加入法 标准溶液加入法标准溶液加入法杂质对照品液杂质对照品液+供试液供试液外标法或外标法或内标法内标法测定测定总量总量总量加入的杂质对照品的量杂质的量总量加入的杂质对照品的量杂质的量 采用下列公式计算：采用下列公式计算：x 供试品中组分供试
30、品中组分X的浓度；的浓度；Ax 供试品中组分供试品中组分X的色谱峰面积；的色谱峰面积；x 加入的已知浓度的待测加入的已知浓度的待测 组分对组分对 照品的浓度；照品的浓度；Ais 加入对照品后组分加入对照品后组分X的色谱峰面的色谱峰面 积积 L=Cx/C样100% XXXXis+=AA 1)A/A(=XisXX- 示例示例 异氟烷中的有关物质的检查异氟烷中的有关物质的检查 供试品溶液：供试品溶液：0.1%（v/v） 系统适用性试验：系统适用性试验：理论板数按异氟烷峰计算不低于理论板数按异氟烷峰计算不低于 15000异氟烷峰与相邻杂质峰的分离度异氟烷峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。应符合要求。判
31、断：各杂质峰面积的和不得大于总峰面积的判断：各杂质峰面积的和不得大于总峰面积的0.5%。 进样：供试品溶液进样：供试品溶液检查方法与高效液相色谱法相同。检查方法与高效液相色谱法相同。（四）毛细管电泳法（四）毛细管电泳法示例示例 盐酸头孢吡肟中盐酸头孢吡肟中N-甲基吡咯烷的检查甲基吡咯烷的检查电泳条件：电泳条件：弹性石英毛细管（内径弹性石英毛细管（内径75m，有效长度，有效长度56 cm），柱温），柱温25，操作缓冲溶液为，操作缓冲溶液为pH4.7 咪唑咪唑-醋酸缓冲溶液，检测波长醋酸缓冲溶液，检测波长214nm，操，操 作电压作电压30kV，压力进样。，压力进样。 供试品溶液：供试品溶液：20
32、mg/ml ，内标物，内标物 0.1mg/ml 对照品溶液对照品溶液 ： N-甲基吡咯烷对照品甲基吡咯烷对照品， 0.1mg/ml 进样：供试品溶液进样：供试品溶液 对照品溶液对照品溶液按内标法以峰面积计算，不得过按内标法以峰面积计算，不得过0.3%系统适用性试验：迁移顺序：乙胺和系统适用性试验：迁移顺序：乙胺和N-甲基吡咯烷，甲基吡咯烷， N-甲基吡咯烷峰与乙胺峰的分离度甲基吡咯烷峰与乙胺峰的分离度 应大于应大于2.0，进样数次，进样数次，RSD不得过不得过 5.0%。(一）热重分析法一）热重分析法(thermogravimetric analysis, TGA) 在程序升温下，测量物质的质
33、量与温度的关系，在程序升温下，测量物质的质量与温度的关系，研究物质在加热同时失重的情况下，所发生的质的变研究物质在加热同时失重的情况下，所发生的质的变化。化。应用：药物稳定性的研究；应用：药物稳定性的研究； 贵重和易氧化药物的干燥失重测定；贵重和易氧化药物的干燥失重测定； 药物结晶水和吸附水的区别以及结晶水含量的药物结晶水和吸附水的区别以及结晶水含量的 测定。测定。 四、四、 热分析法热分析法TABCTiTfW1W2W反应区间反应区间= Tf Ti减失重量减失重量=W1-W2 方法：将样品置热天平中，按一定速度升温，记录方法：将样品置热天平中，按一定速度升温，记录 样品重量随温度的变化，即热重
34、曲线。样品重量随温度的变化，即热重曲线。吸附水失去为渐进过程；吸附水失去为渐进过程；结晶水失去在特定温度发生突跃，可以区分。结晶水失去在特定温度发生突跃，可以区分。 4080： CuSO45H2OCuSO43H2O+2H2O80120 ：CuSO43H2OCuSO4H2O+2H2O200250：CuSO4H2OCuSO4+H2O4080120200250（失重失重14.4） （失重失重28.8） （失重失重36） ( (二）二）差示热分析差示热分析(differential thermal analysis, DTA) 是在程序升温下，测量被测物质和参比物之是在程序升温下，测量被测物质和参比物
35、之间的温差与温度关系的一种技术。间的温差与温度关系的一种技术。参比物是一种参比物是一种惰性物质，在加热过程中不发生相变和化学变化惰性物质，在加热过程中不发生相变和化学变化。因此温差因此温差(T)只与被测物质的变化有关。只与被测物质的变化有关。T=0 被测物未发生吸热或放热反应；被测物未发生吸热或放热反应；T= - 为吸热峰为吸热峰(负峰负峰) ；T = + 为放热峰为放热峰(正峰正峰)。 典型的差热曲线典型的差热曲线TT+放热峰放热峰吸热峰吸热峰峰宽峰宽峰高峰高外推起始点外推起始点（与熔点相当）（与熔点相当） DTA在药物分析中的应用在药物分析中的应用测定药物的熔点测定药物的熔点药物的定性分析
36、药物的定性分析尖峰为物理变化尖峰为物理变化宽峰为化学变化宽峰为化学变化估测药物的纯度估测药物的纯度 134226CaC2O4H2OCaC2O4+ H2O 398478CaC2O4CaCO3+CO 635838CaCO3CaO+CO2 示例：草酸钙在加热过程中的变化 （三）差示扫描热分析（三）差示扫描热分析（differential scanning calorimetry, DSC ） 在程序升温下，维持样品和参比物的温度相同，在程序升温下，维持样品和参比物的温度相同，测量输给待测物质和参比物的能量差与温度测量输给待测物质和参比物的能量差与温度(或时间或时间)关系。关系。DSC与与DTA的区别
37、：记录方式不同，的区别：记录方式不同，DSC记录系统记录系统供给的能量；吸热供给能量，放热减少供给的能量。供给的能量；吸热供给能量，放热减少供给的能量。DSC-TG常联合用。常联合用。 (一一)氯化物的检查法氯化物的检查法1. 原理原理比较浊度比较浊度Cl- Ag+AgCl（白色浑浊）（白色浑浊）稀硝酸稀硝酸2. 方法方法 标准氯化钠溶液：以标准氯化钠溶液：以50ml中中 含含5080 g的的Cl为宜为宜 酸度以酸度以50ml供试溶液中含稀供试溶液中含稀 硝酸硝酸10ml为宜为宜 SRS：供试品溶液：供试品溶液R：标准溶液：标准溶液 五、药物中杂质检查示例五、药物中杂质检查示例以药物中的无机杂
38、质和残留溶剂的检查为例进行讨论。以药物中的无机杂质和残留溶剂的检查为例进行讨论。3. 干扰的排除干扰的排除（1）供试品有色）供试品有色采用内消色法，按采用内消色法，按ChP附录规定的方法处理。附录规定的方法处理。供试品供试品溶液溶液供试品供试品溶液溶液AgNO3放置放置10min反复过滤反复过滤澄清溶液澄清溶液AgNO3水水标准标准NaCl溶液溶液水水对照溶液对照溶液暗处放置暗处放置5min后比浊后比浊 二、硫酸盐检查法二、硫酸盐检查法SO42- Ba2+BaSO4（白色浑浊）（白色浑浊）HCl1. 原理原理比较浊度比较浊度2. 方法方法 SO42- 0.1mg0.5mg/50ml, 即即 相
39、当于标准硫酸钾溶液相当于标准硫酸钾溶液15ml 酸度酸度 稀盐酸稀盐酸2ml/50ml 3. 干扰的排除干扰的排除有色供试品采用内消色法排除干扰。有色供试品采用内消色法排除干扰。SR 三、铁盐检查法三、铁盐检查法1. 原理原理Fe3+6SCN-Fe(SCN)63-(红色红色)标准铁溶液标准铁溶液: 以硫酸铁铵配制。加入硫酸，防止鉄以硫酸铁铵配制。加入硫酸，防止鉄 盐水解。盐水解。50ml溶液中含溶液中含Fe3为为590 g 时，溶液的吸收度与浓度呈良好线性时，溶液的吸收度与浓度呈良好线性 关系。关系。 2. 方法方法 HCl盐酸酸性盐酸酸性: 防止防止Fe 3的水解的水解 3. 干扰的排除干扰
40、的排除（1）当有）当有Fe2+存在时，加氧化剂过硫酸铵将存在时，加氧化剂过硫酸铵将Fe2 氧化成氧化成Fe3 24424382242SOSO)NH(Fe2OS)NH(Fe2OHSCNNOHSCNHNO22 用硝酸氧化时，需加热用硝酸氧化时，需加热（红色）（红色）（2）当供试溶液管与标准溶液管色调不一致时，或）当供试溶液管与标准溶液管色调不一致时，或所呈硫氰酸铁颜色较浅不便比较时所呈硫氰酸铁颜色较浅不便比较时, 可分别移入分液可分别移入分液漏斗，各加正丁醇或异戊醇提取，分别取提取液比色。漏斗，各加正丁醇或异戊醇提取，分别取提取液比色。 四、重金属检查法四、重金属检查法重金属重金属在规定实验条件下
41、能与硫代乙酰胺或硫化在规定实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、钠作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等。在药品生产过程铜、镉、锡、锑、铋等。在药品生产过程中遇到铅的机会较多，铅在体内又易积蓄中遇到铅的机会较多，铅在体内又易积蓄中毒，故检查时以铅为代表。中毒，故检查时以铅为代表。ChP2010 收载三种检查方法收载三种检查方法第一法第一法 硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法第二法第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法炽灼后的硫代乙酰胺法第三法第三法 硫化钠法硫化钠法 1. 原理原理 CH3CSNH2+ H2OCH3CONH2 + H2SH2S + Pb2+pH3.5Pb
42、S + 2H+ 适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物，是最常用的适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物，是最常用的方法。方法。 第一法第一法 硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法2. 方法方法 Pb2 10g 20g/25ml，相当于标准铅溶液，相当于标准铅溶液 1 2ml。酸度酸度 pH3.03.5 当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管中显出当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。如丙管中显出的的颜色与甲管比较，不得更深。如丙管中显出的颜色浅于甲管，应取样按第二法重新检查。颜色浅于甲管，应取样按第二法重新检查。SRS+R甲甲乙乙丙丙（1）供试品有色：可采用）供试品有色：可采用外消色法外消
43、色法消除干扰。消除干扰。标准溶液标准溶液稀焦糖溶液稀焦糖溶液标准溶液标准溶液调色后的调色后的样品溶液样品溶液检查检查3. 干扰的排除干扰的排除 （2）供试品中有微量）供试品中有微量Fe3+H2SFe3+弱酸性弱酸性S混浊，对比色有影响混浊，对比色有影响排除排除 Fe3+Fe2+ Vc或或盐酸羟胺盐酸羟胺干扰干扰 适用于含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸及乙适用于含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸及乙醇的有机药物。醇的有机药物。第二法第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法炽灼后的硫代乙酰胺法 原理原理 重金属可能会与芳环、杂环形成较牢固的价键，重金属可能会与芳环、杂环形成较牢固的价键， 需先将供试品炽灼（需先将供
44、试品炽灼（ 500600 ）破坏，残渣）破坏，残渣 加硝酸进一步破坏，蒸干。加盐酸转化为易溶加硝酸进一步破坏，蒸干。加盐酸转化为易溶 于水的氯化物，再按第一法进行检查。于水的氯化物，再按第一法进行检查。 炽灼温度应在炽灼温度应在500600。温度过高，重金属损失。温度过高，重金属损失。 加硝酸加热处理后，必须蒸干，除尽氧化氮，加硝酸加热处理后，必须蒸干，除尽氧化氮， 否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色。否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色。 消除盐酸或其他试剂中可能夹杂重金属的影响。消除盐酸或其他试剂中可能夹杂重金属的影响。 对于含钠盐或氟的有机药物，应用铂坩埚或硬质玻对于含钠盐或氟的有
45、机药物，应用铂坩埚或硬质玻璃蒸发皿。璃蒸发皿。2. 注意事项注意事项 原理原理 在碱性条件下用硫化钠作显色剂。在碱性条件下用硫化钠作显色剂。Pb 2 S2- PbS 第三法第三法 硫化钠法硫化钠法 适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物。即生成沉淀的药物。硫化钠试液应临用新制。硫化钠试液应临用新制。 五、砷盐检查法五、砷盐检查法 砷盐是剧毒物质，多由药物生产过程中所使用砷盐是剧毒物质，多由药物生产过程中所使用的无机溶剂引入。的无机溶剂引入。 ChP JP USP BP 古蔡氏法古蔡氏法 Ag-DDC法法 次磷酸法次磷酸法 各国药典砷
46、盐检查法比较各国药典砷盐检查法比较 1. 原理原理As3+3Zn3H+3Zn2+AsH3AsO33-3Zn9H3Zn2+3H2OAsH3AsH33HgBr23HBrAs(HgBr)3(黄色黄色)2As(HgBr)3AsH33AsH(HgBr)2(棕色棕色)As(HgBr)3AsH33HBrAs2Hg3(黑色黑色)AsO43-4Zn11H+4Zn2+4H2OAsH3五、砷盐检查法五、砷盐检查法（一）古蔡（一）古蔡(Gutzeit)氏法氏法 2. 2. 装置与试剂作用装置与试剂作用（1 1）验砷仪）验砷仪样品样品 对照对照 KI-SnCl2试液试液AsO43-2I-2H+AsO33-I2H2OAs
47、O43-Sn2+2H+AsO33-Sn4+H2OI2Sn2+2I-Sn4+4I-Zn2+ZnI42-有利于有利于H3As的形成的形成 氯化亚锡在锌粒表面形成氯化亚锡在锌粒表面形成Zn-Sn齐，起去极化齐，起去极化的作用，有利于的作用，有利于H2均匀连续发生。均匀连续发生。 Pb(Ac)2棉棉S2- + 2H+ H2S H2S + HgBr2 2HBr + HgSH2S + Pb(Ac)2 2HAc + PbS 锌粒及供试品中可能含有少量硫化物，在酸性液锌粒及供试品中可能含有少量硫化物，在酸性液中能产生硫化氢气体，与溴化汞作用生成硫化汞中能产生硫化氢气体，与溴化汞作用生成硫化汞的色斑，干扰试验结
48、果，故用醋酸铅棉花吸收硫的色斑，干扰试验结果，故用醋酸铅棉花吸收硫化氢。化氢。3. 干扰的排除干扰的排除供试品为供试品为S2-、SO32-、S2O32-S2-、SO32-、S2O32-H2SSO42-H+HNO3干扰砷斑检查干扰砷斑检查 除去干扰除去干扰 HgBr2试纸试纸HgS, Hg（黑色）（黑色）氧化氧化例例:解毒药硫代硫酸钠中解毒药硫代硫酸钠中 砷盐的检查砷盐的检查 供试品为铁盐供试品为铁盐 （Fe3+）干扰：消耗干扰：消耗KI、SnCl2，氧化，氧化AsH3排除：可以先加足量的排除：可以先加足量的KI或先加入酸性氯化亚锡试或先加入酸性氯化亚锡试 液，将液，将Fe3+还原为还原为Fe2
49、+。例：枸橼酸铁铵中砷盐检查例：枸橼酸铁铵中砷盐检查 含锑药物含锑药物 例如：葡萄糖酸锑钠例如：葡萄糖酸锑钠SbH3 + HgBr2 SbH2(HgBr) + HBr（灰色）（灰色）改用改用白田道夫白田道夫(Betterdorff)法。法。干扰：干扰：排除排除:白田道夫法白田道夫法 2As3+ 3SnCl2+ 6HCl2As+ 3SnCl4 + 6H (棕褐色的胶态砷棕褐色的胶态砷 )与一定量标准砷溶液用同法处理后的颜色比较与一定量标准砷溶液用同法处理后的颜色比较 干扰砷斑检查干扰砷斑检查 环状药物须进行有机破坏，方法有：环状药物须进行有机破坏，方法有： 碱破坏法碱破坏法 样品加样品加Ca(O
50、H)2小火灼烧，再于小火灼烧，再于500 600炽灼至完全灰化。炽灼至完全灰化。 例：酚磺酞、呋塞米检查中砷盐检查例：酚磺酞、呋塞米检查中砷盐检查 碱融破坏法碱融破坏法 适用于环状结构的有机酸碱金属盐用适用于环状结构的有机酸碱金属盐用 石灰法不能破坏完全的情况。以无水石灰法不能破坏完全的情况。以无水 Na2CO3无水碳酸钠进行碱融破坏无水碳酸钠进行碱融破坏 例：苯甲酸钠中砷盐检查例：苯甲酸钠中砷盐检查 环状药物环状药物 （二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法 （Ag-DDC法）法）1. 1. 原理原理 利用砷化氢与利用砷化氢与Ag-DDC吡啶溶液作用，使吡啶溶液作用，使A
