1、培训目的培训目的l根据我院近三年微生物培养资料汇总，标本送检阳性率普遍偏低，其中一个主要原因就是送检标本的质量不高。l为了改变这一现状，我们和感染科决定进行微生物标本采集相关知识的培训。一、细菌标本的正确采集和运送的意义一、细菌标本的正确采集和运送的意义l正确采集和运送临床微生物标本，直接影响到微生物培养鉴定结果。是准确的病原学诊断的前提和关键!l微生物学检验的标准化首先应从标本采取,运送和处理的规范化开始。l细菌室工作人员、临床医生和护士必须明白保证标本质量的重要性。l二、临床各种微生物标二、临床各种微生物标本的正确采集方法本的正确采集方法（需氧）（需氧）标本标本采集的采集的普遍原则普遍原则
2、l避免自身菌群的污染，只要可能的话，应该确定一个代表感染过程的标本。l选择正确的解剖部位，采用适当的技术和设备采集标本。l收集标本量要足够，量少可能导致假阴性结果。l每份标本上注明姓名，标本来源，采集部位，时间和日期。l将标本放在设计用于提高可能病原体的生存、无漏、无菌、无潜在安全性问题的容器内。标本转运的原则标本转运的原则l所有标本必须立即送交实验室，最好不要超过2小时，如标本处理不得不延迟，应在合适的条件下储存，但不超过24小时。l对环境敏感的微生物包括志贺氏菌（应立即处理）、淋球菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌（对低温敏感）。脑脊液、生殖器、眼或内耳标本不要冷冻。1.呼吸道标本采集呼吸道标
3、本采集痰培养送检指征痰培养送检指征l咳嗽、咳痰：痰液可为脓性、血性、铁锈色或红棕色胶胨样痰。l咯血：肺结核病人常痰中带血。l呼吸困难l发热l胸痛：当炎症病变累及壁层胸膜时，会发生胸痛。l肺部感染的患者有2550可能发生菌血症，应同时作血培养。目前痰培养问题目前痰培养问题l结果重复性差l感染菌与污染菌不易区分l药敏结果与治疗反应存在差距l主要原因：临床上约半数痰标本不合格！标本采集时间l痰液：以晨痰为好。多数患者晨痰较多，即使对痰量少的患者，也以清晨采集最为容易。对支气管扩张症或与支气管相通的肺空洞患者，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰液。最好在应用抗菌药物之前或停药1天后采集标本。l鼻咽拭
4、子 ： 应于抗菌药物治疗前采集为好。咽部又是呼吸和食物的通路，因此亦以晨起后采集为宜。 痰标本采集方法痰标本采集方法l自然咳痰：清水反复漱口后用力咳痰，从呼吸道深部咳出新鲜痰液于无菌容器送检。如果患者痰液较深不易吐出时，可在咳痰前拍背，协助排痰，采集痰量不少于1ML。l痰量极少者可用45 3%-10%的NaCl溶液25ml先雾化吸入，进行导痰。当NaCl浓度过高时，患者常常不能耐受，所以气道高反应的患者如哮喘患者不宜用此法。l气管穿刺法: 适用于昏迷和咳嗽乏力患者。l纤维支气管镜抽取法: 适用于纤维支气管镜检查或治疗的患者。用纤维支气管镜可直接在病灶部位采集高浓度的感染病原菌，但不能完全避免咽
5、喉部正常菌群感染。l小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，用棉拭子伸入咽部，小儿因压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上，从而获得标本。l双侧肺部感染伴人工气道如气管切开或气管插管患者，可用吸痰管经人工气道估插至叶支气管水平吸引痰液。痰标本运送和保存痰标本运送和保存l标本采集容器：一次性无菌留痰盒。l病人留痰后应在1h内送至实验室l不能及时送检者，可暂存4冰箱。室温下耽搁数小时定植于口咽部的非致病菌呈过度生长，而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率明显降低l未用运送培养基的标本送到实验室后应在30分钟内接种到相应培养基咽拭子及口腔拭子的采集和运送咽拭子及口腔拭子的采集和运送l采集前患者
6、应用冷开水反复漱口，l拭子的选择：要求无菌、不含抑制剂；l预先沾湿拭子（非常重要）；l由检查者将舌向外拉，使腭垂尽可能向外牵引，将棉拭子通过舌根到咽后壁或腭垂的后侧，涂抹数次以取得标本。l对化脓性扁桃体炎或口腔念珠菌病，直取病灶部位，拭子要避免接触口腔及舌粘膜。减少污染。l立即送检。室温保存。2.血液标本采集血液标本采集血液细菌培养血液细菌培养l临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血流感染的患者，需做血液细菌培养以明确病原。l及时、准确地从患者血液中分离出病原菌，才能正确实施有效地抗菌治疗，从而有助于提高治愈率和降低医疗费用。目前血培养的问题目前血培养的问题采血时机不合适采血时机不合适采血套数不够
7、采血套数不够采血量不足采血量不足只做需氧培养，不同时做厌氧培养只做需氧培养，不同时做厌氧培养采血前或采血时正在使用抗生素治疗采血前或采血时正在使用抗生素治疗采血时机采血时机l在出现临床症状后应尽快抽血作培养，最好在发热初期和高峰或寒战时。l原则上应选择在抗菌药物应用之前，对已应用药物而病情不允许停药的患者也应在下一次用药前采血。采血部位采血部位l通常采血部位为肘静脉。l疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜l多次采血时, 应在不同部位进行。l不要从血管插管内采血。l切忌在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本。 采血次数与间隔采血次数与间隔l急性感染患者： 从两臂分别采2份血样。l感染性心内膜
8、炎患者: 24h内采血3次, 每次间隔不少于30分钟。l发热原因不明患者: 24-48h后可再采血2次,间隔不少于60分钟。采血方法采血方法l采血部位的局部皮肤应严格消毒。将采集的血液注入血培养瓶前，应更换针头或过火消毒针头。但是近年研究表明，更换针头更易导致标本的污染。l采血后立即在床旁接种培养瓶，并迅速轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血 。l血培养瓶口也要消毒，并待酒精挥发后（建议用酒精灯烧灼瓶口）再注入血样。采血量采血量l每次采血量成人510ml，婴幼儿12ml，培养基与血液之比以10：1为宜，以稀释血液中的抗生素。l每增加1ml血量平均提高阳性率3.2%。但并非但并非越多越好
9、。越多越好。送检时机送检时机l采血后立即送检，如不能立即送检可置室温，而不能放置冰箱。冷藏可能导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。3.尿液标本采集尿液标本采集尿培养送检指征尿培养送检指征l有典型的尿路感染症状；l肉眼脓尿或血尿；l尿常规检查表现为白细胞和/或亚硝酸盐阳性；l不明原因的发热，无其他局部症状；l留置导尿管的病人出现发热；l膀胱排空功能受损；l泌尿系统疾病手术前。尿液标本l标本采集时间:应在用药前或停药5天后留取标本以晨起第一次尿为宜使尿液在膀胱内停留6-8h以上(给细菌足够的繁殖时间)。尿液标本采集方法l中段尿：女性采样前应先用肥皂水或0.1%高锰酸钾溶液冲洗外阴部及尿道口。男性须翻转
10、包皮冲洗，用0.1%新洁尔灭消毒尿道口，灭菌纱布擦干。弃前段尿，无菌杯收集中段尿约10ml。 l导尿管导尿无菌操作进行导尿可减少尿道污染。对留置导尿者，可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，用联空针筒的细针斜穿管壁抽吸尿液；或拔去闭式引流的集尿袋，弃去导尿管前段尿液，留无污染的膀胱内尿液约10ml送检。不可从集尿袋的下端管口留取标本。长期留置导尿管者，应在更换新导尿管后留取尿标本 。尿液标本采集方法l膀胱穿刺法: 评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法 ，尤其对厌氧菌检查,但由于是侵入损伤性操作,临床很少用。l肾盂尿采集法: 应请泌尿科医生采取, 左右侧的标本要标明。尿液标本运送和保存l无菌杯立即送检l
11、室温下尿标本耽搁稍久可导致尿内细菌数量明显增加,而影响病原菌与污染菌的区分和细菌定量。l不能立即送检者，可暂存4冰箱。4.粪便标本采集粪便标本采集粪便送检指征粪便送检指征 l急性腹泻：大便次数明显增多，腹痛，里急后重，往往伴有发热，大便性状为粘液便或脓血便。l慢性腹泻：大便次数多，多为稀便，伴有全身乏力等症状。l无痛性大量水样便或米泔样稀便。l先吐后泻：恶心、呕吐、腹痛、腹泻。有集体发病史，多为细菌性食物中毒所致。l抗生素治疗后腹泻：常发生于长期抗生素治疗后，糊状便，排便次数增加。l高热惊厥：通常为中毒性痢疾，多见于婴幼儿和小儿。粪便标本采集粪便标本采集l应在发病早期并且尽量在用抗生素治疗前采
12、集。l排便后，挑取有脓血、黏液部分的粪便（液状粪便则取絮状物），稀便不少于1mlml，固体便不少于1克，无便患者可用直肠拭子。l对不易获取粪便者或婴幼儿，可用肛拭采集。将拭子前端用无菌甘油水湿润。然后插入肛门约45cm（幼儿约23cm）处，轻轻旋转擦取直肠表面黏液后退出，置运送培养基内送检。l除婴儿和有活动性腹泻症状的患者外不推荐用拭子做常规病源检查。粪便粪便标本注意事项标本注意事项l标本要采集新鲜的，陈旧标本影响阳性检出率；l切忌粪尿混合；l若要分离阿米巴，标本要立即送检并注意保温。l一般认为用抗菌药三天后，标本培养病原菌阴性。 5. 手术创口、烧伤创面与脓液处理手术创口、烧伤创面与脓液处理
13、l无菌生理盐水擦洗病灶表面后，用棉拭子采取病灶深部的脓液和分泌物，置运送培养基内送检。采2个拭子，一个培养，一个涂片。 l开放性脓肿：尽可能抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样。从脓肿底部或脓肿壁取样最好。l封闭性脓肿：宜用碘酒、酒精消毒皮肤后，无菌注射器抽取脓液送检，最好做厌氧培养。l采样前病灶局部应避免用抗菌药物或消毒剂。l2h内送检，不能及时送检可放室温。6.胸腹水及脑脊液标本胸腹水及脑脊液标本l采集: 以无菌操作穿刺抽取，直接注入培养瓶内。胸腹水可收集5-10ml,心包液、关节液收集2-5ml 。脑脊液3-5ml（细菌1ml，真菌2ml抗酸杆菌2ml ）l运送: 若床边没有接种，用带
14、盖的无菌容器送检。 收集脑脊液标本后，常温下15分钟内送到实验室。脑脊液标本不可放冰箱保存，会使一些细菌死去（如脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和嗜血杆菌）。脑脊液培养送检指征脑脊液培养送检指征 l成人：发热、头痛、恶心、呕吐、颈强直和反射增强等症状，怀疑为脑膜炎的患者。l儿童：因儿童和新生儿的临床表现不明确，因此对于婴儿不明原因发热，应怀疑为脑膜炎，采取脑脊液。l*作脑脊液培养的患者，建议同时做血培养。7.生殖道、尿道标本采集生殖道、尿道标本采集l男性患者:尿道标本:l2h不排尿l清洗龟头后,用碘伏等消毒,挤出分泌物或以专用细拭子插入尿道口1-2cm旋转采取分泌物立即送检。l前列腺液标本: 应由医师
15、按摩前列腺,以无菌操作自尿道口采取前列腺液放在无菌杯内送检。生殖道、尿道标本采集生殖道、尿道标本采集l女性患者: 成年患者: 应在扩阴器的支持下,以无菌棉拭子擦去分泌物，再用新的无菌拭子紧贴宫颈内道采样送检。未成年患者: 不应使用扩阴器, 应以无菌拭子在阴道口处采取分泌物送检。尿道：2h不排尿，拭去尿道口渗出物，再插入尿道口1-2cm旋转采取分泌物立即送检。生殖道、尿道标本处理生殖道、尿道标本处理l立即送检l普通培养和淋球菌培养：室温保存l支原体、衣原体：4保存8.静脉导管末端培养静脉导管末端培养l标本采集酒精清洗导管周围皮肤无菌方法从病人体内拔出静脉导管，剪下导管尖端5cm，放入无菌瓶中。 立即送检15min，防干燥4保存
