1、实验一、实验一、白细胞计数白细胞计数 n1.原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。液中白细胞数。n2.试剂器材试剂器材 白细胞稀释液：冰乙酸白细胞稀释液：冰乙酸 2.0ml 10g/L亚甲蓝亚甲蓝 3滴滴 加蒸馏水加蒸馏水 至至100ml器材器材 改良牛鲍血细胞计数板及改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、专用盖片、微量吸管、带孔吸头、带孔吸头、1ML刻度刻度移液管、小试管、洁移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、净软
2、纱布、干棉球、光学显微镜。光学显微镜。毛细血管采血标准操作程序毛细血管采血标准操作程序 操作步骤：操作步骤：n1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜，采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。两侧采血。n2 轻轻按摩采血部位。轻轻按摩采血部位。n3 用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。4 紧捏刺血部位，使其自然充血。紧捏刺血部位，使其自然充血。5 用无菌刺针穿刺取血，动作应迅速，深度用无菌刺针穿刺取血，动作应迅速，深度 23mm，稍加挤压以血液流出为宜。，稍加挤压以血液流出为宜。6 用干棉球擦去
3、第一滴血。用干棉球擦去第一滴血。7 按需要依次采血。按需要依次采血。8 采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。微量吸管的使用微量吸管的使用n1将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；n2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；中指轻微挤压排出适量空气；n3将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有液会吸入吸头），吸
4、取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；n4用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），轻触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度；轻触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度；n5将微量将微量吸管插入小试管底部，吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出三指轻微用力慢慢排出血血液，用上清液冲洗管内液，用上清液冲洗管内余血余血2-3次，轻摇次，轻摇试管试管混匀；混匀；n6拔出微量吸管弃入污物桶。拔出微量吸管弃入污物桶。3.操作步骤操作步骤（1）加稀释液加稀释液 用用移
5、液管移液管向小试管内加入向小试管内加入0.38ml白细胞稀释液白细胞稀释液。（2）采血、稀释用）采血、稀释用微量吸管采血微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试，拭去管外余血，释放于小试 管管底部，用上部底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，稀释液洗净吸管内余血，轻摇轻摇试管试管混匀，静置等其混匀，静置等其溶血。溶血。（3）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。侧支持堤上。（4）充计数池将小试管轻微振荡）充计数池将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白混匀后的
6、白细胞悬液，充入计数池内。细胞悬液，充入计数池内。静置静置2-3min，使细胞沉于，使细胞沉于计计数池底面数池底面。（5）调试显微镜）调试显微镜 将计数板放置载物台上，将计数板放置载物台上，选择（选择（4 ）低倍镜，调节聚低倍镜，调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至低倍镜（低倍镜（10），），调节调节光亮光亮。（6）计数计数 低倍镜下计数四角低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞个大方格内白细胞总数，压线细胞数上数上不数下，数左不数右不数下，数左不数右。4.结果计算结果计算白细胞总数白细胞总数=4大格白细胞数（大格白细胞数（N）/41
7、0 20 106 =N 20 109/L用用.109/L（小数点后一位）表示（小数点后一位）表示5细胞计数原则细胞计数原则n大方格四边压大方格四边压线细胞数左不线细胞数左不数右，数上不数右，数上不数下，数下，n弓形移动弓形移动实验报告内容n原理n试剂器材n操作步骤n实验结果n讨论诊断学 实验二 白细胞分类白细胞分类n1.1.分类原理：白细胞分类计数是分类原理：白细胞分类计数是将血液制备成涂片，瑞氏染色后将血液制备成涂片，瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类进行分类计数。通常分类100100个白个白细胞，计算得出各种白细胞所占细胞，计算得出各种
8、白细胞所占百分比百分比 2.瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，离解为瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性带正电的碱性美兰（美兰（M+）和带负电的酸性和带负电的酸性伊伊红（红（E-）离子。细胞的染色既有离子。细胞的染色既有物理的吸附作物理的吸附作用用，又有，又有化学的亲和作用化学的亲和作用。各种细胞成分的化。各种细胞成分的化学性质不同，对染料的亲和力也不一样，故可学性质不同，对染料的亲和力也不一样，故可呈不同的着色特点。呈不同的着色特点。3.器材器材n光学显微镜光学显微镜n推片，载玻片推片，载玻片试剂试剂nWright染液染液 Wright 1.0g 甲醇甲醇 600mln磷酸盐缓冲
9、液（磷酸盐缓冲液（PH6.46.8）n香柏油香柏油标本来源标本来源nEDTA-K2抗凝全血抗凝全血 单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为1220m，胞体圆形、椭圆形或不规则形；改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、带孔吸头、1ML刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜。静置2-3min，使细胞沉于计数池底面。通常分类计数100个白细胞，计算并报告各种白细胞所占比例。微量吸管的使用Ba 0%1%加蒸馏水 至100ml静置2-3min，使细胞沉于计数池底面。5将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血液，用上清液冲洗管内余血2-3次，轻摇试管混匀；5 用无菌刺针穿刺取血，动作
10、应迅速，深度 23mm，稍加挤压以血液流出为宜。加蒸馏水 至100ml大方格四边压线细胞数左不数右，数上不数下，淋巴细胞（Ly）：胞体呈圆形，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，核大呈深紫色致密而浓染，胞浆量极少；109/L（小数点后一位）表示10g/L亚甲蓝 3滴4 紧捏刺血部位，使其自然充血。6 用干棉球擦去第一滴血。瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性美兰（M+）和带负电的酸性伊红（E-）离子。改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、带孔吸头、1ML刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜。（2）采血、稀释用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试 管底部，
11、用上部稀释液洗净吸管内余血，轻摇试管混匀，静置等其溶血。3 3白细胞分类：白细胞分类：细胞分布均匀的体尾交界处，滴细胞分布均匀的体尾交界处，滴加香柏油一滴，加香柏油一滴，油镜油镜下分类计数。下分类计数。分类时要有分类时要有秩序秩序的连续进行，避的连续进行，避免主观选择视野。通常分类计数免主观选择视野。通常分类计数100100个白细胞，计算并报告各种白个白细胞，计算并报告各种白细胞所占比例。细胞所占比例。q中性粒细胞（中性粒细胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圆形，胞浆：在瑞氏染色血涂片上呈圆形，胞浆染粉红色，核形一叶（杆状核）至五叶不等，以三叶者多染粉红色，核形一叶（杆状核）至五叶不等，以三叶者
12、多见，染成深紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。见，染成深紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。各类成熟白细胞的形态学：各类成熟白细胞的形态学：q嗜酸性粒细胞（嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。色时呈桔红色，有折光性。q嗜碱性粒细胞（嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中
13、粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。q淋巴细胞（淋巴细胞（Ly）：胞体呈圆形，在成人血涂片中以小淋：胞体呈圆形，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，核大呈深紫色致密而浓染，胞浆量极少；巴细胞为多见，核大呈深紫色致密而浓染，胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，呈清澈的淡蓝色，可见少量嗜大淋巴细胞胞浆量较多，呈清澈的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较苯胺蓝颗粒，胞核圆或
14、椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。深。单核细胞（单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为：在瑞氏染色涂片上为1220m，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒。细小尘土样颗粒。正常成人外周血白细胞分类参考值：正常成人外周血白细胞分类参考值：Ne 50%70%Ly 20%40%Mo 3%8%Eo 0.5%5%Ba 0%1%实验报告n原理n方法n各类细胞百分比报告n讨论 3.操作步
15、骤操作步骤（1）加稀释液加稀释液 用用移液管移液管向小试管内加入向小试管内加入0.38ml白细胞稀释液白细胞稀释液。（2）采血、稀释用）采血、稀释用微量吸管采血微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试，拭去管外余血，释放于小试 管管底部，用上部底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，稀释液洗净吸管内余血，轻摇轻摇试管试管混匀，静置等其混匀，静置等其溶血。溶血。（3）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。侧支持堤上。（4）充计数池将小试管轻微振荡）充计数池将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取，立
16、即以一次性微量吸管吸取混匀后的白混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。细胞悬液，充入计数池内。静置静置2-3min，使细胞沉于，使细胞沉于计计数池底面数池底面。（5）调试显微镜）调试显微镜 将计数板放置载物台上，将计数板放置载物台上，选择（选择（4 ）低倍镜，调节聚低倍镜，调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至低倍镜（低倍镜（10），），调节调节光亮光亮。（6）计数计数 低倍镜下计数四角低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞个大方格内白细胞总数，压线细胞数上数上不数下，数左不数右不数下，数左不数右。改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、
17、带孔吸头、1ML刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜。4 紧捏刺血部位，使其自然充血。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比（4）充计数池将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。（3）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。6 用干棉球擦去第一滴血。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比38ml白细胞稀释液。实验一、白细胞计数原
18、理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。=N 20 109/LEo 0.3 用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。微量吸管的使用加蒸馏水 至100ml1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。加蒸馏水 至100ml 109/L（小数点后一位）表示静置2-3min，使细胞沉于计数池底面。4.结果计算结果计算白细胞总数白细胞总数=4大格白细胞数（大格白细胞数（N）/410 20 106 =N 20 109/L用用.109/L（小数点后一位）表示（小数点后一位）表示实验报告内容n原理n试剂器材
19、n操作步骤n实验结果n讨论3 3白细胞分类：白细胞分类：细胞分布均匀的体尾交界处，滴细胞分布均匀的体尾交界处，滴加香柏油一滴，加香柏油一滴，油镜油镜下分类计数。下分类计数。分类时要有分类时要有秩序秩序的连续进行，避的连续进行，避免主观选择视野。通常分类计数免主观选择视野。通常分类计数100100个白细胞，计算并报告各种白个白细胞，计算并报告各种白细胞所占比例。细胞所占比例。q嗜碱性粒细胞（嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水
20、或因功能活动而脱有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。6拔出微量吸管弃入污物桶。细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。109/L（小数点后一位）表示单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为1220m，胞体圆形、椭圆形或不规则形；Ba 0%1%中性粒细胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圆形，胞浆染粉红色，核形一叶（杆状核）至五叶不等，以三叶者多见，染成深紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。6 用干棉球擦去第一滴血。静置2-3min，使细胞沉于计数池底面。嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性
21、粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。109/L（小数点后一位）表示（1）加稀释液 用移液管向小试管内加入0.白细胞总数=4大格白细胞数（N）/410 20 106静置2-3min，使细胞沉于计数池底面。=N 20 109/L磷酸盐缓冲液（PH6.（1）加稀释液 用移液管向小试管内加入0.38ml白细胞稀释液。Ly 20%40%（6）计数 低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞数上不数下，数左不数右。（4）充计数池
22、将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。甲醇 600ml核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒。6 用干棉球擦去第一滴血。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；6拔出微量吸管弃入污物桶。38ml白细胞稀释液。细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。3 用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。白细胞总数=4大格白细胞数（N）/410 20 106单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为1220m，胞体圆形、椭圆形或不规则形；6拔出微量吸管
23、弃入污物桶。5将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血液，用上清液冲洗管内余血2-3次，轻摇试管混匀；6 用干棉球擦去第一滴血。核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。加蒸馏水 至100ml毛细血管采血标准操作程序 109/L（小数点后一位）表示嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。甲醇 600ml10g/L亚甲蓝 3滴核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒。4 紧捏刺血部位，使其自然充血。细胞的染色
24、既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。实验一、白细胞计数嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。10g/L亚甲蓝 3滴5将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血液，用上清液冲洗管内余血2-3次，轻摇试管混匀；（4）充计数池将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。4 紧捏刺血部位，使其自然充血。加蒸馏水 至100ml6 用干棉球擦去第一滴血。（4）充计数池将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液，充入
25、计数池内。Ly 20%40%磷酸盐缓冲液（PH6.Ba 0%1%10g/L亚甲蓝 3滴分类原理：白细胞分类计数是将血液制备成涂片，瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。静置2-3min，使细胞沉于计数池底面。白细胞总数=4大格白细胞数（N）/410 20 106毛细血管采血标准操作程序（4）充计数池将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。4 紧捏刺血部位，使其自然充血。各种细胞成分的化学性质不同，对染料的亲和力也不一样，故可呈不同的着色特点。分类原理：白细胞分类计数是将血液制备成涂片，瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。
26、嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为1220m，胞体圆形、椭圆形或不规则形；嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。10g/L亚甲蓝 3滴1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。38ml白细胞稀释液。微量吸管的使用细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。Wright 1.109/L（小数点后一位）表示4 紧捏刺血部位，使其自然充血。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；大方格四边压线细胞数左不数右，数上不数下，38ml白细胞稀释液。单核细胞（单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为：在瑞氏染色涂片上为1220m，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒。细小尘土样颗粒。
