1、第五章第五章 中药制剂分析总论中药制剂分析总论药物分析教研室药物分析教研室第一节第一节 中药制剂定性分析中药制剂定性分析目的：目的：检定制剂的真实性。检定制剂的真实性。中药定性分析的方法显微鉴别法显微鉴别法理化鉴别法理化鉴别法 一般化学反应法一般化学反应法升华法升华法荧光法荧光法光谱法光谱法色谱法色谱法 一、中成药的显微鉴别 （一）制片方法一）制片方法 1 1散剂、胶囊剂散剂、胶囊剂 取粉末，直接加水或水合氯醛透化装片。取粉末，直接加水或水合氯醛透化装片。2 2片剂片剂 用刀片直接从药片断面刮取少量粉末或研碎后取少量样品用刀片直接从药片断面刮取少量粉末或研碎后取少量样品 透化装片。透化装片。3
2、 3水丸、锭剂水丸、锭剂 研成粉末后取少量直接透化装片。研成粉末后取少量直接透化装片。4 4蜜丸蜜丸 取蜜丸切碎，加水搅拌，洗涤后，置离心管中离心分离沉取蜜丸切碎，加水搅拌，洗涤后，置离心管中离心分离沉 淀。如此反复处理以除去蜂蜜后透化装片。淀。如此反复处理以除去蜂蜜后透化装片。u 若观察细胞内含物形状，应选用不同试剂制片。若观察细胞内含物形状，应选用不同试剂制片。淀粉粒淀粉粒 水或甘油醋酸试液；水或甘油醋酸试液；糊粉粒糊粉粒 甘油；甘油；水溶性内含物水溶性内含物 乙醇或水合氯醛试液乙醇或水合氯醛试液(不加热不加热)。固定标本片制片方法固定标本片制片方法 取中成药粉末置离心管中，加乙醇浸过上面
3、，取中成药粉末置离心管中，加乙醇浸过上面，玻棒搅拌玻棒搅拌5 51010分钟后离心使粉末沉积，倾去稀醇液，分钟后离心使粉末沉积，倾去稀醇液，再加无水乙醇二次，丙酮一次，丙酮、二甲苯等量混合再加无水乙醇二次，丙酮一次，丙酮、二甲苯等量混合液一次，如前操作，每次液一次，如前操作，每次10102020分钟；最后加入纯二甲分钟；最后加入纯二甲苯，略加搅拌，取处理后的样品微量置载玻片上，滴加苯，略加搅拌，取处理后的样品微量置载玻片上，滴加中性树胶，加盖玻片封藏，贴标签。中性树胶，加盖玻片封藏，贴标签。（二）观察要点（二）观察要点 中成药粉末镜检时，首先要了解处方中的药味组成，明确其中成药粉末镜检时，首先
4、要了解处方中的药味组成，明确其来源的药用植物的部位，才能根据该部位的显微特征来进行检出。来源的药用植物的部位，才能根据该部位的显微特征来进行检出。1.1.根类根类u 木栓组织碎片，表面观多为多角形细胞，木栓组织碎片，表面观多为多角形细胞，排列紧密。排列紧密。u 导管导管 直径、节的长短、末梢壁的穿孔及增厚壁的纹理类型。直径、节的长短、末梢壁的穿孔及增厚壁的纹理类型。u 草酸钙结晶晶形、草酸钙结晶晶形、u 分泌组织、分泌组织、u 淀粉粒的形状、淀粉粒的形状、u 脐点脐点u 层纹层纹 2.2.根茎类根茎类 与根类药材粉末特征相似。而淀粉粒有时较大，有鳞叶组织，退化的与根类药材粉末特征相似。而淀粉粒
5、有时较大，有鳞叶组织，退化的 鳞叶表皮细胞大多狭长，细胞壁平直或波状弯曲。鳞叶表皮细胞大多狭长，细胞壁平直或波状弯曲。3.3.茎类茎类 （1 1）茎类）茎类 表皮细胞及垂周壁的形状，气孔的类型，毛茸的类型及形态；表皮细胞及垂周壁的形状，气孔的类型，毛茸的类型及形态；导管的类型、直径、长短。导管的类型、直径、长短。管胞的形态；管胞的形态；纤维的形状、直径、长短、有无晶纤维等。纤维的形状、直径、长短、有无晶纤维等。草酸钙结晶多为方晶及簇晶，单子叶植物偶见针晶。草酸钙结晶多为方晶及簇晶，单子叶植物偶见针晶。薄壁组织碎片、石细胞。薄壁组织碎片、石细胞。（2 2）皮类）皮类 纤维的直径、长短及形状，是否
6、成束存在，纤维的直径、长短及形状，是否成束存在，细胞壁厚薄、木化与否，能否看到胞腔及壁孔等。细胞壁厚薄、木化与否，能否看到胞腔及壁孔等。石细胞的形状、细胞壁增厚情况。石细胞的形状、细胞壁增厚情况。草酸钙结晶多为方晶及簇晶，砂晶及针晶较少。草酸钙结晶多为方晶及簇晶，砂晶及针晶较少。皮类药材粉末不应含有木质部组织，如导管、管胞等。皮类药材粉末不应含有木质部组织，如导管、管胞等。（3 3）木类）木类 可见导管、管胞、木纤维、木射线及木薄壁细胞。细胞壁可见导管、管胞、木纤维、木射线及木薄壁细胞。细胞壁 通常均木化。不应有木栓细胞及绿色组织等。通常均木化。不应有木栓细胞及绿色组织等。4.4.花类花类 （
7、1 1）苞片及花萼）苞片及花萼 构造类同叶片，表面上可见到气孔及毛茸。构造类同叶片，表面上可见到气孔及毛茸。（2 2）花冠）花冠 上表皮细胞常呈乳头状或绒毛状突起而无气孔，上表皮细胞常呈乳头状或绒毛状突起而无气孔，下表皮细胞常不呈乳头状，下表皮细胞常不呈乳头状，细胞壁微波状弯曲。细胞壁微波状弯曲。维管束组织细小。维管束组织细小。（3 3）雄蕊）雄蕊 花粉囊内壁细胞的壁不均匀地增厚，呈网状、螺旋状、花粉囊内壁细胞的壁不均匀地增厚，呈网状、螺旋状、环纹状及点状等；环纹状及点状等；花粉粒具圆形、长圆形或多面形等多种形状。花粉粒具圆形、长圆形或多面形等多种形状。通常具内外两层壁，外壁多数具各种雕纹。通
8、常具内外两层壁，外壁多数具各种雕纹。（4 4）雌蕊）雌蕊 柱头的表皮细胞呈乳头状突起，或分化成绒毛状。柱头的表皮细胞呈乳头状突起，或分化成绒毛状。5.叶类叶类 （1 1）表皮）表皮 上下表皮细胞的形状、大小，角质层的形态，上下表皮细胞的形状、大小，角质层的形态，垂周壁的形状、厚度或增厚情况以及有无气孔、毛茸等。垂周壁的形状、厚度或增厚情况以及有无气孔、毛茸等。（2 2）气孔）气孔 气孔的形状、大小、型式，保卫细胞的形状及内含物，气孔的形状、大小、型式，保卫细胞的形状及内含物，副卫细胞的数目、大小、形状。副卫细胞的数目、大小、形状。（3 3）毛茸）毛茸 注意毛茸的种类。注意毛茸的种类。非腺毛：非
9、腺毛：注意细胞的数目、形状、长短、大小、细胞壁的注意细胞的数目、形状、长短、大小、细胞壁的 厚薄及表面形态等。多为单列性多细胞毛，少为单细胞毛。厚薄及表面形态等。多为单列性多细胞毛，少为单细胞毛。形状一般呈长圆锥形或线形；细胞壁一般较薄，外壁表面大形状一般呈长圆锥形或线形；细胞壁一般较薄，外壁表面大 都光滑。都光滑。腺毛：腺毛：注意头部的形状、大小、细胞的数目、排列情况以注意头部的形状、大小、细胞的数目、排列情况以 及柄部的长短、细胞数目及行列数目等。及柄部的长短、细胞数目及行列数目等。6.6.果实类果实类 （1 1）果皮细胞的形状、大小。）果皮细胞的形状、大小。（2 2）外果皮上可能有非腺毛
10、及腺毛，注意长短、形状。）外果皮上可能有非腺毛及腺毛，注意长短、形状。（3 3）中果皮内的分泌组织）中果皮内的分泌组织 油细胞，油室、油管、石细胞等油细胞，油室、油管、石细胞等 （4 4）内果皮石细胞，大小、细胞壁的厚薄，如为镶嵌层，则）内果皮石细胞，大小、细胞壁的厚薄，如为镶嵌层，则 应注意其排列形式。应注意其排列形式。7.7.种子类种子类 （1 1）种皮）种皮 表皮毛的形状、细胞壁的厚薄、是否木化、有无纹理；表皮毛的形状、细胞壁的厚薄、是否木化、有无纹理；石细胞形状、大小、色泽散布及细胞壁的增厚情况。石细胞形状、大小、色泽散布及细胞壁的增厚情况。栅状细胞及油细胞。栅状细胞及油细胞。（2 2
11、）外胚乳）外胚乳 细胞大小、形状、壁厚、色泽、细胞内含物。细胞大小、形状、壁厚、色泽、细胞内含物。（3 3）内胚乳）内胚乳 细胞形状、厚度、内含物。细胞形状、厚度、内含物。（4 4）胚的子叶）胚的子叶 有无分泌组织及细胞的内含物。有无分泌组织及细胞的内含物。（三）应用实例三）应用实例 六味地黄丸的显微定性鉴别 显微鉴别显微鉴别 取本品置显微镜下观察，取本品置显微镜下观察，(1)(1)薄壁组织棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物。薄壁组织棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物。(熟地黄熟地黄)(2)(2)果皮表皮细胞橙黄色，表面观类多果皮表皮细胞橙黄色，表面观类多 角形，垂周壁略连珠状增厚
12、。角形，垂周壁略连珠状增厚。(山茱山茱 萸萸)(3)(3)淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直 径径2440um2440um，脐点短缝状或人字状。脐点短缝状或人字状。(山药山药)3a)3a草酸钙针晶束草酸钙针晶束3b3b淀粉粒淀粉粒 (4)(4)草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中 ，有时数个排列成行。，有时数个排列成行。(牡丹皮牡丹皮)(5)(5)不规则分枝状团块无色，遇水合不规则分枝状团块无色，遇水合 氯醛溶化；菌丝无色，直径氯醛溶化；菌丝无色，直径4-6um4-6um。(茯苓茯苓)(6)(6)薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，薄壁细胞类圆形，有椭圆
13、形纹孔，集成纹孔群。集成纹孔群。(泽泻泽泻)二、中药制剂的一般理化鉴别法 （一）一般化学反应法一）一般化学反应法 中药制剂一般选择有效成分、特征成分作为鉴别的对象。中药制剂一般选择有效成分、特征成分作为鉴别的对象。一般化学反应鉴别法多在试管中用湿法反应进行，制剂样品一般化学反应鉴别法多在试管中用湿法反应进行，制剂样品要先制成适宜的供试液。一般情形下用要先制成适宜的供试液。一般情形下用5050-70-70乙醇回流提取乙醇回流提取制备供试液。制备供试液。一般化学反应法用于中药制剂鉴别应该注意以下几点：一般化学反应法用于中药制剂鉴别应该注意以下几点：(1)(1)慎重使用专属性不好的分析反应，如泡沫生
14、成反应、三氯慎重使用专属性不好的分析反应，如泡沫生成反应、三氯化铁显色反应等。化铁显色反应等。(2)(2)在分析前对样品进行分离、精制，除去干扰分析反应的物在分析前对样品进行分离、精制，除去干扰分析反应的物质借此改善鉴别方法的专属性。质借此改善鉴别方法的专属性。(3)(3)采用阴性对照和阳性对照的方式，对拟定的鉴别方法进行采用阴性对照和阳性对照的方式，对拟定的鉴别方法进行反复验证，防止出现假阳性。反复验证，防止出现假阳性。实例实例1 1 牛黄解毒片中大黄、黄芩的定性鉴别反应牛黄解毒片中大黄、黄芩的定性鉴别反应 取本品取本品6 6片片(去包衣去包衣)，研细，加乙醇，研细，加乙醇10ml10ml，
15、温热温热1010分钟，过滤，滤液作如分钟，过滤，滤液作如下反应：下反应：(1)(1)取滤液取滤液5ml5ml，加镁粉少量与盐酸加镁粉少量与盐酸0.5ml0.5ml，加热，即显红色。加热，即显红色。（黄芩中有大量黄酮）（黄芩中有大量黄酮）(2)(2)另取滤液另取滤液4ml4ml，加氢氧化钠试液，显红色，再加加氢氧化钠试液，显红色，再加3030过氧化氢溶液，加过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸或酸性时，红色变为黄色。热，红色不消失，加酸或酸性时，红色变为黄色。（大黄中含有羟基蒽醌）（大黄中含有羟基蒽醌）实例实例2 2 牙痛一粒丸中蟾蜍、朱砂、雄黄的定性鉴别反应牙痛一粒丸中蟾蜍、朱砂、雄黄的定性鉴
16、别反应 (1)(1)取本品约取本品约0.1 g0.1 g，研细，加氯仿研细，加氯仿5ml5ml，浸泡浸泡1 1小时，滤过，滤液蒸干，残小时，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酐少量使溶解，再滴加硫酸，初显蓝紫色，渐变为蓝绿色。（蟾蜍）渣加醋酐少量使溶解，再滴加硫酸，初显蓝紫色，渐变为蓝绿色。（蟾蜍）(2)(2)取本品约取本品约0.2g0.2g，研细，加水湿润后，加氯酸钾的硝酸饱和溶液研细，加水湿润后，加氯酸钾的硝酸饱和溶液2ml2ml，振振摇，放冷，离心，取上清液，加氯化钡试液摇，放冷，离心，取上清液，加氯化钡试液0.5ml0.5ml，摇匀，溶液呈白色浑浊，摇匀，溶液呈白色浑浊，离心，弃去上层酸液，再加
17、水离心，弃去上层酸液，再加水2ml2ml，振摇，沉淀不溶解。（雄黄）振摇，沉淀不溶解。（雄黄）(3)(3)取本品适量，研细，用盐酸湿润后，在光洁的铜片上摩擦，铜片表面取本品适量，研细，用盐酸湿润后，在光洁的铜片上摩擦，铜片表面即显银白色光泽，加热烘烤后，银白色消失。（朱砂）即显银白色光泽，加热烘烤后，银白色消失。（朱砂）（二二）显微化学鉴别法）显微化学鉴别法 1.取药材的切片、粉末或中成药粉末，置载玻片上，滴加各种试剂，加盖取药材的切片、粉末或中成药粉末，置载玻片上，滴加各种试剂，加盖玻片玻片 在显微镜下观察产生的结晶或沉淀，以及特殊的颜色等，作为鉴别的在显微镜下观察产生的结晶或沉淀，以及特殊
18、的颜色等，作为鉴别的特征。特征。例：例：黄连粉末滴加稀盐酸，放置黄连粉末滴加稀盐酸，放置5 5分钟，可见小檗碱盐酸盐黄色结晶析出。分钟，可见小檗碱盐酸盐黄色结晶析出。穿心莲用水湿润，切成横切片，滴加乙醇后加穿心莲用水湿润，切成横切片，滴加乙醇后加KeddeKedde试液，叶肉组织显紫试液，叶肉组织显紫红色红色(穿心莲内酯成分的不饱和内酯环反应穿心莲内酯成分的不饱和内酯环反应)。丁香切片滴加丁香切片滴加3030氢氧化钠饱和溶液，略放置，可见油室内有针状丁香氢氧化钠饱和溶液，略放置，可见油室内有针状丁香酚钠结晶析出。酚钠结晶析出。肉桂粉末加氯仿肉桂粉末加氯仿2 23 3滴，略浸渍，速加滴，略浸渍，
19、速加2 2盐酸苯肼盐酸苯肼1 1滴，可见黄色针状滴，可见黄色针状或杆状结晶或杆状结晶(肉桂酸反应肉桂酸反应)。2.取药材粗粉加适当的溶剂浸提，将浸提液置载玻片上，滴加取药材粗粉加适当的溶剂浸提，将浸提液置载玻片上，滴加各种试剂，加盖玻片，在显微镜下观察反应。各种试剂，加盖玻片，在显微镜下观察反应。例如：例如：槟榔粉末槟榔粉末0.5g0.5g，加水加水3 34ml4ml及稀盐酸及稀盐酸1 1滴，微热数分钟，滴，微热数分钟，过滤，取滤液过滤，取滤液1 1滴于载玻片上，加碘化铋钾试液滴于载玻片上，加碘化铋钾试液1 1滴，即发生混滴，即发生混浊，放置后可见石榴红球形或方形结晶浊，放置后可见石榴红球形或
20、方形结晶(槟榔碱槟榔碱)。曼陀罗叶少许，加氯仿提取，提取液蒸干，加发烟硝酸曼陀罗叶少许，加氯仿提取，提取液蒸干，加发烟硝酸1 1滴，显黄色，加氢氧化钾滴，显黄色，加氢氧化钾1 1粒，显紫堇色粒，显紫堇色(莨菪烷类成分莨菪烷类成分VitaliVitali反应反应)。3.取药材切片或粉末，滴加各种试剂，直接观察反应现象。取药材切片或粉末，滴加各种试剂，直接观察反应现象。例如：例如：钟乳石少许，加浓盐酸数滴，能产生大量气泡钟乳石少许，加浓盐酸数滴，能产生大量气泡(碳酸盐分解碳酸盐分解 产生产生COCO2 2)。番木鳖胚乳薄片，加番木鳖胚乳薄片，加1 1钒酸铵钒酸铵-硫酸试液硫酸试液1 1滴，胚乳速显
21、紫滴，胚乳速显紫色色 (番木鳖碱番木鳖碱)，另取切片加发烟硝酸，另取切片加发烟硝酸1 1滴，即显橙红色滴，即显橙红色(马钱子马钱子 碱碱 )。大黄粉末少许，置白磁板上，加氢氧化钠液大黄粉末少许，置白磁板上，加氢氧化钠液l l滴，显深红色滴，显深红色(蒽醌钠盐蒽醌钠盐)。（三）升华法三）升华法 操作方法：取金属片安放在有圆孔操作方法：取金属片安放在有圆孔(直径约直径约2cm)2cm)的石棉板上，在的石棉板上，在金属片上放一小金属圈金属片上放一小金属圈(内径约内径约1.5cm1.5cm，高约高约0.8cm)0.8cm)，对准石棉板上对准石棉板上的圆孔，圈内放入预先研细成粉末的中药制剂一薄层，圈上覆
22、盖载的圆孔，圈内放入预先研细成粉末的中药制剂一薄层，圈上覆盖载玻片，在石棉板下圆孔处用酒精灯缓缓加热，至粉末开始变焦，去玻片，在石棉板下圆孔处用酒精灯缓缓加热，至粉末开始变焦，去火待冷，载玻片上有升华物凝集。将载玻片反转后，置显微镜下观火待冷，载玻片上有升华物凝集。将载玻片反转后，置显微镜下观察结晶形状、色泽，或取升华物加试液观察反应。察结晶形状、色泽，或取升华物加试液观察反应。实例实例 牛黄解毒丸微量升华鉴别牛黄解毒丸微量升华鉴别 取本品进行微量升华，先得白色升华物后（冰片），继得黄色取本品进行微量升华，先得白色升华物后（冰片），继得黄色升华物（大黄中蒽醌）。将升华物分别置显微镜下观察：白色
23、升华升华物（大黄中蒽醌）。将升华物分别置显微镜下观察：白色升华物呈不定形的无色片状结晶，加新制的物呈不定形的无色片状结晶，加新制的1 1香草醛硫酸溶液，渐显香草醛硫酸溶液，渐显紫红色，黄紫红色，黄色升华物呈黄色针状结晶或羽状结晶，遇碱显红色，遇色升华物呈黄色针状结晶或羽状结晶，遇碱显红色，遇酸变为黄色。酸变为黄色。（四）荧光法四）荧光法 有些中药材中含有能产生荧光的化学成分，在可见光、紫外有些中药材中含有能产生荧光的化学成分，在可见光、紫外光照射下能发出荧光，或经试剂处理后发出荧光。含有这类药材光照射下能发出荧光，或经试剂处理后发出荧光。含有这类药材的中药制剂可用荧光法进行鉴别。通常的操作方法
24、是取制剂的提的中药制剂可用荧光法进行鉴别。通常的操作方法是取制剂的提取液点在滤纸上或试纸上，置紫外光灯下取液点在滤纸上或试纸上，置紫外光灯下(365nm)(365nm)观察，有时则观察，有时则是加一定的试剂后再进行观察。是加一定的试剂后再进行观察。实例实例l l 元胡止痛片的荧光鉴别元胡止痛片的荧光鉴别 取本品适量，去糖衣，研细，取粉末取本品适量，去糖衣，研细，取粉末1g1g，加加0.25mol0.25molL L硫酸硫酸液液10ml10ml振摇片刻，滤过，取滤液数滴，点于滤纸上，阴干后置紫振摇片刻，滤过，取滤液数滴，点于滤纸上，阴干后置紫外光灯外光灯(365nm)(365nm)下观察，显亮黄
25、色荧光。下观察，显亮黄色荧光。1.可见可见紫外分光光度法紫外分光光度法 不同的药材所含的成分不同，在一定条件下吸收光谱的特征不同的药材所含的成分不同，在一定条件下吸收光谱的特征 可用于鉴别药材。利用这一特点，可见可用于鉴别药材。利用这一特点，可见-紫外分光光度法也紫外分光光度法也 可用于中药制剂的鉴别。可用于中药制剂的鉴别。2.2.红外光谱法红外光谱法（五）光谱法五）光谱法 （六）色谱法六）色谱法 中药制剂可用色谱法鉴定，包括薄层色谱法、纸色谱法、气相色谱法和高效中药制剂可用色谱法鉴定，包括薄层色谱法、纸色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法。液相色谱法。1.1.薄层色谱法薄层色谱法 使用本法鉴定
26、中药制剂，通常是在同一块薄层板上点入样品和适宜的对照物使用本法鉴定中药制剂，通常是在同一块薄层板上点入样品和适宜的对照物 采用同一条件依法层析展开，经显色或用其他方法检出色谱斑点后，将样品与对采用同一条件依法层析展开，经显色或用其他方法检出色谱斑点后，将样品与对照物所得的色谱图进行对比，作出鉴定。照物所得的色谱图进行对比，作出鉴定。（1 1）样品应作适当的预处理）样品应作适当的预处理 对样品进行初步的分离精制。对样品进行初步的分离精制。常用的预处理方法有：升华法，蒸馏法，溶剂提取法，小型层析柱的柱色谱常用的预处理方法有：升华法，蒸馏法，溶剂提取法，小型层析柱的柱色谱法、离子交换法等。法、离子交
27、换法等。（2 2）展开剂的选择）展开剂的选择 选用能突出主要斑点，便于分析比较的展开剂，如果鉴选用能突出主要斑点，便于分析比较的展开剂，如果鉴别的对象相同，应首先试用已有的、较成熟的展开剂。别的对象相同，应首先试用已有的、较成熟的展开剂。如无现有展开剂，可先以无水乙醇如无现有展开剂，可先以无水乙醇-苯（苯（1414）展开，如主要物质的）展开，如主要物质的RfRf在在0.80.8以上，改用苯以上，改用苯-氯仿（氯仿（1313），如主要物质的），如主要物质的RfRf在在0.30.3以下，改用丙酮以下，改用丙酮-甲醇（甲醇（1111）。）。（3 3）对照品的选择）对照品的选择 中国药典中国药典(一部
28、一部)作薄层鉴别用的对作薄层鉴别用的对照物有对照品和对照药材两种。照物有对照品和对照药材两种。TLCTLC用作中药制剂鉴别的另一类对照物是阴阳对照溶液。用作中药制剂鉴别的另一类对照物是阴阳对照溶液。（4 4）薄层色谱的扫描定性鉴别）薄层色谱的扫描定性鉴别 TLCTLC展开后，斑点的检展开后，斑点的检识方法，有通用性的，如在紫外光灯下观察出现的荧光，或识方法，有通用性的，如在紫外光灯下观察出现的荧光，或用碘蒸气、稀硫酸、磷钼酸显色等，这类方法专属性不强用碘蒸气、稀硫酸、磷钼酸显色等，这类方法专属性不强。另一类是专属性较好的显色剂，例如碘化铋钾试液，茚三酮另一类是专属性较好的显色剂，例如碘化铋钾试
29、液，茚三酮试液和三氯化铝试液等，一般可依次说明斑点归属。试液和三氯化铝试液等，一般可依次说明斑点归属。还可用薄层扫描仪将薄层板上的斑点转换绘制成峰形色谱还可用薄层扫描仪将薄层板上的斑点转换绘制成峰形色谱图，这种色谱图以斑点展开后移动的距离为横坐标，斑点对图，这种色谱图以斑点展开后移动的距离为横坐标，斑点对光辐射的吸收强度或发射荧光的强度为纵坐标的峰形曲线图光辐射的吸收强度或发射荧光的强度为纵坐标的峰形曲线图谱。谱。应用实例应用实例 1.1.大黄及含大黄的成药大黄及含大黄的成药 (1)(1)供试液制备供试液制备 取各样品适量，加甲醇取各样品适量，加甲醇20ml20ml浸渍浸渍1h1h，过滤，取滤
30、液过滤，取滤液5ml5ml，蒸蒸干，加水干，加水10ml10ml使溶解，再加使溶解，再加HClHCl 1ml 1ml，水浴加热水浴加热30min30min，立即冷却，乙醚提取两次立即冷却，乙醚提取两次，20ml/20ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿溶解成次，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿溶解成1ml1ml。(2)(2)对照液制备对照液制备 取大黄对照药材取大黄对照药材0.1g0.1g按供试液制备作为对照药材溶液；按供试液制备作为对照药材溶液；另取芦荟大黄素，大黄酸，大黄素，大黄素甲醚，大另取芦荟大黄素，大黄酸，大黄素，大黄素甲醚，大黄酚对照品，加甲醇制成黄酚对照品，加甲醇制成1mg/ml1
31、mg/ml的溶液，作为对照品溶液。的溶液，作为对照品溶液。(3)(3)薄层板薄层板 硅胶硅胶H H加加0.30.3CMC-NaCMC-Na溶液的自制板；厚度：溶液的自制板；厚度：300um300um (4)(4)点样点样 分别点样分别点样4uL4uL。(5)(5)展开剂展开剂 石油醚石油醚(30(3060)-60)-甲酸乙酯甲酸乙酯-甲酸甲酸(1551)(1551)放置后的上层溶放置后的上层溶液。液。(6)(6)展开方式展开方式 上行展开；展距：上行展开；展距：7cm7cm。(7)(7)显色显色 置紫外光灯置紫外光灯(365nm)(365nm)下检视。下检视。(8)(8)色谱识别色谱识别 紫外
32、光灯紫外光灯(365nm)(365nm)下，供试品色谱中，在与下，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点 (9)(9)备注备注 在部分成药样品的色谱中，除大黄的五个蒽醌在部分成药样品的色谱中，除大黄的五个蒽醌成分的斑点外，尚有其它荧光斑点，为处方中的其它成分。成分的斑点外，尚有其它荧光斑点，为处方中的其它成分。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 样品：样品：1 1芦荟大黄素；芦荟大黄素；2 2大黄酸；大黄酸；3 3大黄素；大黄素；4 4大黄素甲醚；大黄素甲醚；
33、5 5大黄酚；大黄酚；6 6大黄大黄(掌叶大黄掌叶大黄)对照药材；对照药材；7 7大黄大黄(唐古特大黄唐古特大黄)对照药材；对照药材；8 8大黄流浸膏；大黄流浸膏；9 9小儿化毒散；小儿化毒散；1010槟榔四消丸；槟榔四消丸；1111木香槟榔丸；木香槟榔丸；1212枳实导滞丸；枳实导滞丸；1313牛黄上清丸；牛黄上清丸；1414清宁丸；清宁丸；1515一捻金；一捻金；1616牛黄解毒片；牛黄解毒片；1717牛黄解毒丸牛黄解毒丸 2.黄连、黄柏及含黄连、黄柏的成药黄连、黄柏及含黄连、黄柏的成药 (1)(1)供试液制备供试液制备 取各品种药粉适量，加甲醇取各品种药粉适量，加甲醇5ml5ml，置水浴
34、回流置水浴回流15min15min，过滤滤过滤滤液浓缩至液浓缩至1ml1ml。(2)(2)对照液制备对照液制备 取盐酸香槟酒小檗碱，硫酸黄连碱，硫酸表小檗碱，非取盐酸香槟酒小檗碱，硫酸黄连碱，硫酸表小檗碱，非 洲防己碱，药根碱，盐酸巴马汀对照品，加甲醇制成每洲防己碱，药根碱，盐酸巴马汀对照品，加甲醇制成每0.5mg/ml0.5mg/ml的溶液，作为的溶液，作为 对照品溶液。对照品溶液。(3)(3)薄层板薄层板 硅胶硅胶G G自制板；厚度：自制板；厚度：500um500um (4)(4)点样点样 分别点样分别点样1-2ul1-2ul (5)(5)展开剂展开剂 苯苯-醋酸乙酯醋酸乙酯-甲醇甲醇-异
35、丙醇异丙醇-浓氨试液浓氨试液 (631.51.50.5)(631.51.50.5)另槽中加入与展开剂等体积浓氨试液另槽中加入与展开剂等体积浓氨试液(6)(6)展开方式展开方式 展开箱预平衡展开箱预平衡1515分钟；上行展开；展距：分钟；上行展开；展距：8cm8cm(7)(7)显色显色 置紫外光灯置紫外光灯(365nm)(365nm)下检视。下检视。(8)(8)色谱识别色谱识别 中国药典黄连项下收载有味连，雅连，云连三中国药典黄连项下收载有味连，雅连，云连三 种，总体分析黄连可见种，总体分析黄连可见4 45 5个主要的黄色荧光斑点，自下个主要的黄色荧光斑点，自下 而上，分别为而上，分别为l.l.
36、非洲防己碱非洲防己碱+药根碱药根碱(量少量少)；2.2.巴马汀；巴马汀；3.3.小檗碱；小檗碱；4.4.表小檗碱表小檗碱(云连不含，雅连含量低云连不含，雅连含量低)；5.5.黄连碱黄连碱(味连含量高味连含量高)。黄柏主要检出巴马汀及小檗碱，可与黄连区。黄柏主要检出巴马汀及小檗碱，可与黄连区 别。别。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 样品：样品：1.1.黄连黄连(味连味连)；2.2.黄连；黄连；3.3.黄连黄连(雅连雅连)；4.4.黄连黄连(云连云连)；5.5.黄连黄连(野连野连)；6.6.黄连黄连(日本黄连日本黄连)；7.7.小儿化毒散；
37、小儿化毒散；8.8.万应锭；万应锭；9.9.大补阴丸；大补阴丸；10.10.木香槟榔丸；木香槟榔丸；11.11.香连丸；香连丸；12.12.黄柏；黄柏；13.13.非洲防己碱；非洲防己碱；14.14.药根碱；药根碱；15.15.巴马汀；巴马汀；16.16.小檗碱；小檗碱；17.17.表小檗碱；表小檗碱；18.18.黄连碱。黄连碱。2.2.纸色谱法纸色谱法 3.3.气相色谱法气相色谱法 气相色谱法的分离效能高，检测器种类多而且灵敏度高，气相色谱法的分离效能高，检测器种类多而且灵敏度高，是混合物鉴别的有效方法。该法目前主要是用于含挥发是混合物鉴别的有效方法。该法目前主要是用于含挥发 油和挥发性成分
38、的制剂分析。油和挥发性成分的制剂分析。4.4.高效液相色谱法高效液相色谱法 主要是利用化合物在特定的色谱柱上，在一定条件下的主要是利用化合物在特定的色谱柱上，在一定条件下的 保留值，将某一样品与其对照品在同一条件下，进行保保留值，将某一样品与其对照品在同一条件下，进行保 留时间的直接比较作为鉴别依据。对于复杂未知成分，留时间的直接比较作为鉴别依据。对于复杂未知成分，也可以加入对照品，观察被测峰是否增高，以初步作定也可以加入对照品，观察被测峰是否增高，以初步作定 性结论。对于复杂组分尚可采用联机技术，如本法与质性结论。对于复杂组分尚可采用联机技术，如本法与质 谱联用，先分离后再作定性鉴别。谱联用
39、，先分离后再作定性鉴别。第二节第二节 中药制剂杂质检查中药制剂杂质检查中制药制剂检查包括的主要内容：中制药制剂检查包括的主要内容：u制剂通则检查制剂通则检查u一般杂质检查一般杂质检查u特殊杂质检查特殊杂质检查u微生物限度检查微生物限度检查一、杂质的来源：一、杂质的来源：中药制剂中存在的杂质，来源于三个方面：中药制剂中存在的杂质，来源于三个方面：u由中药材原料中带入；由中药材原料中带入；u在生产制备过程中引入；在生产制备过程中引入；u贮存过程中受外界条件的影响而使中药制剂贮存过程中受外界条件的影响而使中药制剂 的理化性质改变而产生。的理化性质改变而产生。u一般杂质：一般杂质：指在自然界中分布较广
40、泛，在指在自然界中分布较广泛，在多种药材的采集、收购、加工以及制剂的多种药材的采集、收购、加工以及制剂的生产或贮存过程中容易引入的杂质。生产或贮存过程中容易引入的杂质。u特殊杂质：特殊杂质：指在该制剂的生产和贮存过程指在该制剂的生产和贮存过程中，根据其来源、生产工艺及药品的性质中，根据其来源、生产工艺及药品的性质有可能引入的杂质。有可能引入的杂质。杂质的分类：杂质的分类：二、杂质的限量检查二、杂质的限量检查 u杂质限量：杂质限量：药物中所含杂质的最大允许量，通常药物中所含杂质的最大允许量，通常用百分之几或百万分之几来表示。用百分之几或百万分之几来表示。u限量检查：限量检查：规定一定限度，要求所
41、检样品中某组规定一定限度，要求所检样品中某组分含量不超过此限度。分含量不超过此限度。三、杂质限量计算方法三、杂质限量计算方法%100 样样品品量量杂杂质质最最大大允允许许量量杂杂质质限限量量%100%100 SCVLSCVL）样样品品量量（）标标准准溶溶液液的的浓浓度度（）标标准准溶溶液液的的体体积积（）杂杂质质限限量量（例：重金属限量计算：例：重金属限量计算：取供试品取供试品1.0g1.0g与标准铅溶液与标准铅溶液2.0ml2.0ml制成制成的对照液比较，计算重金属限量。的对照液比较，计算重金属限量。百百万万分分之之二二十十%0020.0%1000.1100.12%100)()/()(6gS
42、mlgCmlVL第三节第三节 一般杂质检查方法一般杂质检查方法 一、重金属检查法：一、重金属检查法：（一）基本原理（一）基本原理1 1、在弱酸性条件下：、在弱酸性条件下：CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S Pb2+H2SPbS+2H+Pb2+H2SPbS+2H+2 2、在碱性条件下：、在碱性条件下：Pb2+S2-PbSPb2+S2-PbS（二）检查方法（二）检查方法 中国药典中国药典20052005版规定重金属检查方法有四种。版规定重金属检查方法有四种。第一法第一法 适用于供试品不经有机破坏，在酸性溶液中显色的重金属限量适用于供试
43、品不经有机破坏，在酸性溶液中显色的重金属限量检查检查 取两支纳氏比色管取两支纳氏比色管甲管甲管乙管乙管标准铅溶液标准铅溶液+醋酸盐缓醋酸盐缓冲液（冲液（pH3.5pH3.5）2ml+2ml+水水或各药品项下规定的或各药品项下规定的溶剂稀释成溶剂稀释成25ml 25ml 供试品溶供试品溶液液25ml25ml硫代乙酰胺试液各硫代乙酰胺试液各2ml 2ml 摇匀摇匀 放置放置2min 2min 同置白纸上同置白纸上,自上向下透视自上向下透视 乙管中显出的颜色不得比甲管更深乙管中显出的颜色不得比甲管更深第二法第二法 适于供试品需灼烧破坏，取炽灼残渣项下遗留的残渣，经处理适于供试品需灼烧破坏，取炽灼残渣
44、项下遗留的残渣，经处理后在酸性溶液中显色的重金属限检查。后在酸性溶液中显色的重金属限检查。取炽灼残渣项取炽灼残渣项下遗留的残渣下遗留的残渣 移置纳氏移置纳氏比色管中比色管中 蒸干至氧化蒸干至氧化氮蒸汽除尽氮蒸汽除尽 加硝酸加硝酸0.5ml0.5ml放放冷冷 加水加水15ml 15ml 置水浴置水浴上蒸干上蒸干 滴加氨试液至对滴加氨试液至对酚酞指示液显中性酚酞指示液显中性 加醋酸盐缓冲液加醋酸盐缓冲液（pH3.5pH3.5）2ml 2ml 加盐酸加盐酸2ml2ml微热微热溶解溶解 加水稀释加水稀释成成25ml 25ml 另取配制供试另取配制供试品溶液的试剂品溶液的试剂 置瓷皿中蒸干置瓷皿中蒸干
45、加醋酸盐缓冲液加醋酸盐缓冲液（pH3.5pH3.5）2ml 2ml 加水加水15ml 15ml 移置纳氏移置纳氏比色管中比色管中 微热微热溶解溶解 加标准铅加标准铅溶液一定量溶液一定量 用水稀释用水稀释成成25ml 25ml 以上两管溶液，以上两管溶液，照上述第一法检查照上述第一法检查 第三法第三法 适用于检查能溶于碱而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）适用于检查能溶于碱而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的药品中的重金属检查。的药品中的重金属检查。置纳氏比色管中硫化钠试液置纳氏比色管中硫化钠试液5 5滴，摇匀滴，摇匀 甲管甲管乙管乙管标准铅溶液适量标准铅溶液适量氢氧化钠试液氢氧化钠试液5ml
46、5ml水水20ml20ml硫化钠试硫化钠试液液5 5滴，摇匀滴，摇匀 供试品适量供试品适量氢氧化钠氢氧化钠试液试液5ml5ml水水20ml20ml溶解溶解 乙管中显出的颜色不得比甲管更深乙管中显出的颜色不得比甲管更深第四法第四法 适用于有色溶液或重金属限量低的品种。适用于有色溶液或重金属限量低的品种。用微孔滤膜过滤，使重金属硫化物深沉富集用微孔滤膜过滤，使重金属硫化物深沉富集成色斑后与一定量标准铅溶液获得的色斑进行比成色斑后与一定量标准铅溶液获得的色斑进行比较检查较检查 二、砷盐检查法二、砷盐检查法 砷盐检查法系指用于药品中微量砷（以砷盐检查法系指用于药品中微量砷（以AsAs计计算）限量检查的
47、方法。算）限量检查的方法。（一）古蔡法（一）古蔡法 1.1.基本原理：基本原理：AsOAsO3 33 3+3Zn+9H+3Zn+9H+AsHAsH3 3+3Zn+3Zn2+2+3H+3H2 2O O 产生的砷化氢与溴化汞试纸作用产生的砷化氢与溴化汞试纸作用:AsH3+2HgBr22HBr+AsH(HgBr)2 (AsH3+2HgBr22HBr+AsH(HgBr)2 (黄色黄色)AsH3+3 HgBr23HBr 3+As(HgBr)3 (AsH3+3 HgBr23HBr 3+As(HgBr)3 (棕色棕色)五价五价砷在酸性溶液中也能被金属锌砷在酸性溶液中也能被金属锌还还原原为砷化氢，但生成砷化氢
48、为砷化氢，但生成砷化氢比三价砷慢比三价砷慢。2.2.检查方法：检查方法：A A为为100ml100ml标准磨口锥形瓶标准磨口锥形瓶B B为中空的标准磨口塞为中空的标准磨口塞 C C为导气管为导气管,全长约全长约180mm180mmD D为具孔的有机玻璃旋塞为具孔的有机玻璃旋塞 E E为中央具有圆孔的有机玻璃旋塞盖为中央具有圆孔的有机玻璃旋塞盖古蔡法装置古蔡法装置 顶端平面上放一片溴化汞试纸顶端平面上放一片溴化汞试纸 盖上旋塞盖上旋塞E E并旋紧并旋紧 样品溶液样品溶液中装入醋酸铅棉花中装入醋酸铅棉花60mg60mg（装管高度为（装管高度为606080mm80mm）(2)(2)标准砷斑的制备标准
49、砷斑的制备 精密量取标准砷溶液精密量取标准砷溶液2ml2ml，置，置A A瓶中，瓶中，加盐酸加盐酸5ml5ml与水与水2ml2ml，再加碘化钾试液，再加碘化钾试液5ml5ml与与酸性氯化亚锡试液酸性氯化亚锡试液5 5滴，在室温放置滴，在室温放置1010分钟分钟后，加锌粒后，加锌粒2g2g，立即将照上法装妥的导气，立即将照上法装妥的导气管管C C密塞于密塞于A A瓶上，并将瓶上，并将A A瓶置瓶置25254040水浴水浴中反应中反应4545分钟，取出溴化汞试纸，即得。分钟，取出溴化汞试纸，即得。(3)(3)检查法检查法 取按各药品项下规定方法制成的供试取按各药品项下规定方法制成的供试品溶液，置品
50、溶液，置A A瓶中，照标准砷斑的制备，自瓶中，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液再加碘化钾试液5ml”5ml”起，依法操作。将起，依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，不得更深。生成的砷斑与标准砷斑比较，不得更深。（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDCAg-DDC法）法）1.1.基本原理：基本原理：AsH3 C2H5NSSHC2H5CSSAgAg63+AsC2H5NC2H5CSS+N CSSC2H5NC2H5C3+6 二乙基二硫代氨基甲酸银二乙基二硫代氨基甲酸银 二乙基二硫代氨基甲酸二乙基二硫代氨基甲酸（简称（简称Ag-DDCAg-DDC）（简称（简称HD
