HSQC实验设计的变化学习培训模板课件.ppt

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1、HSQC实验设计的变化实验设计的变化 PEP-HSQCPEP是”preservation of equivalent pathways”的缩写,在常规的HSQC中S横向磁化在t1期间由于化学位移进动要产生二个相互正交的分量,但是最后的反向INEPT只能将同S90度脉冲相位垂直的分量传递给1H,另一个保留在横向,形成多量子信号而不能被观测到。因此平均地讲,有一半信号没有被利用。PEP类型实验通过检测期前的特别序列实现两个分量的同时检测,因而使信噪比提高。PEP-HSQC PEP-HSQC PEP-HSQC PEP-HSQC PEP-HSQC PEP-HSQC PEP-HSQC 3.PFG-PEP

2、-HSQC通常称为”gradient-enhanced HSQC”,梯度场脉冲可以用于相干传递途径的选择,但经常导致一半信号的损失,因为梯度场脉冲选择信号依据信号的绝对相干阶。但是梯度场脉冲可以同PEP-HSQC结合起来,既保留正交的两个分量,又没有一半传递途径被抑制的问题。PEP-HSQC PEP-HSQC PEP-HSQC PEP-HSQC PEP-HSQC PEP-HSQC 液体NMR技术的发展:TROSY(Transverse relaxation-optimized spectroscopy)偶极偶极弛豫与化学位移各向异性弛豫间的互相关会导致J偶合裂分成的双线有不同的线宽即二个单线成

3、分的弛豫速率不同 1997年Pervushin创造性地设计了一种脉冲序列,该序列抑制弛豫较快的成分,而只保留弛豫较慢的成分。利用这一原理可以大大提高核磁共振可以解析的蛋白质的分子量TROSY TROSY 原始的原始的TROSY序列序列 TROSY TROSY TROSY TROSY 改进的改进的TROSY序列序列ST2-PT同一个时间点采集两个同一个时间点采集两个FID,一个相位是一个相位是1=y,-x;2=-y;4=-y;ref=1,2另一个另一个FID的相位取的相位取1=y,x;2=y;4=y。同时同时g2变号变号TROSY 三.进一步的讨论前面提到当pS时TROSY序列的效果最好。这里p

4、反映了偶极偶极相互作用的大小,而S是化学位移各向异性的大小,与磁场强度成正比。在较低的磁场强度下,主要的弛豫贡献来自偶极偶极相互作用,只有在高场情况下,化学位移各向异性才能与偶极偶极相互作用相抗衡。可见TROSY的效果必须在高场谱仪上才能得到表现。TROSY 具体到15N1H基团,H=-16 ppm,N=-160 ppm,rHN=0.101 nm,且CSA张量的主轴与rHN矢量基本平行,计算表明当磁场强度相当的1H共振频率为1100 MHz时,pS同时pI。满足这样条件时,较窄谱线的线宽便由公式中的其他项决定,这些项的主要来源是其他1H核特别是CH与这对核的偶极偶极相互作用,所以如果将CH上的

5、1H代以2H,TROSY将有非常好的效果。750 MHz下的氘代蛋白质的理论线宽蛋白质分子量1H线宽(窄)1H线宽(宽)15N线宽(窄)15N线宽(宽)150 kDa15 Hz70 Hz5 Hz60 Hz800 kDa50 Hz350 Hz15 Hz300 HzTROSY的效果的效果HSQCTROSY 在较低场强下TROSY效果不明显,而且由于TROSY仅检测双线之一,与常规异核相关谱相比信噪比较低,故一般在高场谱仪上对氘标样品进行。除了这里讨论的15N1H相关谱,芳环上的13C的化学位移各向异性也比较大,故也可记录TROSY类型的13C1H相关谱 Problem set 1 1.请查找Clore MG的顺磁弛豫增强(PRE)相关的相关文献,分析测量基于HSQC的1H PRE的脉冲序列(包括乘积算符,相干阶途径,相位循环,梯度,正交检波);2.HN和HA之间的J耦合对这个序列有何影响?如何改进?作业2周内email给我:,

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