1、实验一实验一 普通光学显微镜的构普通光学显微镜的构造、使用方法造、使用方法 - 染色体、核仁组织区、染色体、核仁组织区、染色体带型标本的观察染色体带型标本的观察【实验目的实验目的】1. 了解普通光学显微镜的结构、原理。了解普通光学显微镜的结构、原理。2. 掌握普通光学显微镜的使用方法。掌握普通光学显微镜的使用方法。3. 了解染色体、核仁组织区、染色体带型标本了解染色体、核仁组织区、染色体带型标本制备的原理。制备的原理。4. 掌握人类染色体、核仁组织区、染色体带型掌握人类染色体、核仁组织区、染色体带型的特征。的特征。【实验原理实验原理】 显微镜的主要部分是目镜和物镜，为两组凸透显微镜的主要部分是
2、目镜和物镜，为两组凸透镜。物镜的焦距短，目镜的焦距较长。当被观察物镜。物镜的焦距短，目镜的焦距较长。当被观察物体体AB放在物镜前方的放在物镜前方的12倍焦距之间，光线通过物倍焦距之间，光线通过物镜在镜筒中形成一个倒立的放大实像镜在镜筒中形成一个倒立的放大实像AB，这个实，这个实像恰好位于目镜的焦平面之内，通过目镜后形成一像恰好位于目镜的焦平面之内，通过目镜后形成一个放大的倒立虚像个放大的倒立虚像AB。通过调焦装置使。通过调焦装置使AB落落在人眼睛的明视距离（在人眼睛的明视距离（25mm）内，眼睛看到的物）内，眼睛看到的物体最清晰。体最清晰。AB的视角比眼睛直接看的视角比眼睛直接看AB的视角大的
3、视角大得多，因此我们可以用显微镜看清非常微小的物体。得多，因此我们可以用显微镜看清非常微小的物体。 普通光学显微镜成像原理图普通光学显微镜成像原理图 显微镜的分类显微镜的分类 现代显微镜可以分为两大类：一类是光学现代显微镜可以分为两大类：一类是光学显微镜，另一类是非光学显微镜显微镜，另一类是非光学显微镜 。这两类显。这两类显微镜又可根据不同的情况分成若干类型微镜又可根据不同的情况分成若干类型 。u 普通光学显微镜的基本结构普通光学显微镜的基本结构普通光学显微镜的构造可分为两部分：一为机械装置，普通光学显微镜的构造可分为两部分：一为机械装置，二为光学系统二为光学系统 。机械装置由机械装置由镜座、
4、镜筒、物镜转换器、载物台、推动镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗调节螺旋器、粗调节螺旋和和微调节螺旋微调节螺旋等部件组成。等部件组成。光学系统由光学系统由目镜、物镜、聚光器、光源、滤光片、光目镜、物镜、聚光器、光源、滤光片、光圈圈等组成。等组成。 普通光学显微镜基本构造u 显微镜的显微镜的光路光路光源光源光圈光圈聚光镜聚光镜通光孔通光孔标本（一定要透明）标本（一定要透明）物镜物镜镜筒镜筒目镜目镜眼。眼。1.1.取镜和安放取镜和安放 置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为约为34cm。镜检者姿势要端正。镜检者姿势要端正。 （取、放显微镜时
5、应一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直取、放显微镜时应一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳。切忌用单手拎提；且不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均立、平稳。切忌用单手拎提；且不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察，以减少眼睛疲劳，也便于边观察边绘图或纪应双眼同时睁开观察，以减少眼睛疲劳，也便于边观察边绘图或纪录。）录。） 2.2.低倍镜的操作低倍镜的操作置显微镜于固定的桌上，接通电源，打开光源。置显微镜于固定的桌上，接通电源，打开光源。将标本片放在载物台上，用标本夹夹住，调节推动器，使观将标本片放在载物台上，用标本夹夹住，调节推动器，使观察的目的物处于物镜的正下方。
6、察的目的物处于物镜的正下方。调节粗调螺旋，使物镜（调节粗调螺旋，使物镜（1010）与标本靠近，眼睛在侧向注）与标本靠近，眼睛在侧向注视物镜，防止物镜和载玻片相碰。视物镜，防止物镜和载玻片相碰。张开双眼向物镜里观察，如果见到目的物，但不十分清楚，张开双眼向物镜里观察，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细准焦螺旋，至目的物清晰为止。可用细准焦螺旋，至目的物清晰为止。通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各部分，找通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各部分，找到合适的目的物，仔细观察并记录所观察到的结果。到合适的目的物，仔细观察并记录所观察到的结果。 3.3.高倍镜的操作高倍镜的操作使用高
7、倍镜前，必须先用低倍镜观察，发现目的物后将它移至使用高倍镜前，必须先用低倍镜观察，发现目的物后将它移至视野正中处。视野正中处。旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动，旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动，这说明原来低倍镜并没有调准，目的物并没有真正找到，必这说明原来低倍镜并没有调准，目的物并没有真正找到，必须用低倍镜重新调节。如果高倍镜下观察目的物有点模糊，须用低倍镜重新调节。如果高倍镜下观察目的物有点模糊，调节细准焦螺旋，直到视野清晰。调节细准焦螺旋时要注意调节细准焦螺旋，直到视野清晰。调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与载物台上升或下降的关系，防止镜头与载玻片强旋
8、转方向与载物台上升或下降的关系，防止镜头与载玻片强力接触，损坏镜头或载玻片。力接触，损坏镜头或载玻片。4.4.油镜的操作油镜的操作如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。先用低倍镜和高倍镜如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。先用低倍镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。检查标本片，将目的物移到视野正中。在载玻片上滴一滴香柏油，将油镜移至正中，缓慢调节粗调螺旋在载玻片上滴一滴香柏油，将油镜移至正中，缓慢调节粗调螺旋使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。然后再用细准焦螺旋使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。然后再用细准焦螺旋微微向上调（切忌不用粗准焦螺旋）即可。微微向上调（切忌不用粗准焦螺旋）
9、即可。油镜观察完毕，用油镜纸将镜头上的油揩净，另用擦镜纸蘸少许油镜观察完毕，用油镜纸将镜头上的油揩净，另用擦镜纸蘸少许二甲苯揩拭镜头，再用擦镜纸揩干。二甲苯揩拭镜头，再用擦镜纸揩干。（应特别注意不要在下降镜头时用力过猛，或者调焦时误将粗调（应特别注意不要在下降镜头时用力过猛，或者调焦时误将粗调节螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片）节螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片）5.5.换片换片 观察完一个标本后，如果想要再观察另一标本时，需先将高观察完一个标本后，如果想要再观察另一标本时，需先将高倍物镜（或油镜）转回到低倍物镜，取出标本，按放片的方倍物镜（或油镜）转回到低倍物镜，取出标本，按放片的方法换
10、上新片，即可观察。千万不可在高倍物镜（或油镜）下法换上新片，即可观察。千万不可在高倍物镜（或油镜）下换片，以防损坏镜头。换片，以防损坏镜头。6 6 显微镜使用后的整理显微镜使用后的整理 观察结束后，调节光源到最小再关掉电源开关。调节粗调观察结束后，调节光源到最小再关掉电源开关。调节粗调螺旋，使载物台下降到最低，取下玻片，擦干净镜体，罩上螺旋，使载物台下降到最低，取下玻片，擦干净镜体，罩上防尘罩，然后放回原处。防尘罩，然后放回原处。显微镜的保养及注意事项显微镜的保养及注意事项（1 1）油镜使用完毕，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再取一张擦）油镜使用完毕，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再取一张擦镜纸，滴上
11、少量的二甲苯擦拭，然后再取另一张新擦镜纸将镜纸，滴上少量的二甲苯擦拭，然后再取另一张新擦镜纸将镜头上残留的二甲苯擦净。否则粘固透镜的胶质会被二甲苯镜头上残留的二甲苯擦净。否则粘固透镜的胶质会被二甲苯溶解，日久镜片易移位脱落。溶解，日久镜片易移位脱落。（2 2）下降聚光器，打开光圈，使反光镜垂直于镜座，以免积聚）下降聚光器，打开光圈，使反光镜垂直于镜座，以免积聚灰尘。灰尘。（3 3）用绸布将镜身擦拭干净（切不可用手擦拭），除去灰尘、）用绸布将镜身擦拭干净（切不可用手擦拭），除去灰尘、油污、水汽，以免生锈长霉。油污、水汽，以免生锈长霉。（4）使显微镜的各部件恢复回原位，下降镜筒，使物镜呈）使显微镜
12、的各部件恢复回原位，下降镜筒，使物镜呈“八八”字形置于载物台上，然后将显微镜送回镜箱中。字形置于载物台上，然后将显微镜送回镜箱中。（5）显微镜应存放在干燥阴凉的地方，不要放在强烈的日光）显微镜应存放在干燥阴凉的地方，不要放在强烈的日光下暴晒，霉雨季节应在显微镜箱内放置干燥剂（硅胶），下暴晒，霉雨季节应在显微镜箱内放置干燥剂（硅胶），如长时间不用，则光学部分应卸下放在干燥器中，以免受如长时间不用，则光学部分应卸下放在干燥器中，以免受潮生霉。潮生霉。（6）显微镜应严禁与挥发性药品或腐蚀性药品放在一起，如）显微镜应严禁与挥发性药品或腐蚀性药品放在一起，如碘片、盐酸、硫酸等药品。碘片、盐酸、硫酸等药品
13、。操作练习操作练习 观察人染色体、核仁组织区、染色体带型切片。先在观察人染色体、核仁组织区、染色体带型切片。先在低倍镜下观察，选择染色体分散良好，无重叠的分裂中期低倍镜下观察，选择染色体分散良好，无重叠的分裂中期细胞（此时已看不到细胞膜与核膜）。然后转至高倍镜下细胞（此时已看不到细胞膜与核膜）。然后转至高倍镜下仔细观察分析，最后换油镜观察。首先计数该细胞染色体仔细观察分析，最后换油镜观察。首先计数该细胞染色体总数，再注意观察染色体的形态大小，每条染色体含有两总数，再注意观察染色体的形态大小，每条染色体含有两条染色单体，两染色单体连接处为着丝粒，注意每条染色条染色单体，两染色单体连接处为着丝粒，
14、注意每条染色体的大小和着丝粒的位置。区分中央着丝粒染色体、亚中体的大小和着丝粒的位置。区分中央着丝粒染色体、亚中央着丝粒染色体、亚端着丝粒染色体和端着丝粒染色体。央着丝粒染色体、亚端着丝粒染色体和端着丝粒染色体。观察核仁组织区在染色体上的位置，在染色体组中的分布。观察核仁组织区在染色体上的位置，在染色体组中的分布。观察染色体带型特征。观察染色体带型特征。 向培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚，向培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐溶液（一般是溶液（一般是0.075mol/
15、L的的KCl）处理，使其中的红细胞及）处理，使其中的红细胞及分裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气干法制片，可分裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气干法制片，可获得较好的获得较好的染色体染色体标本。标本。 核仁组织区核仁组织区（NOR）就是染色体上编码）就是染色体上编码5.8SrRNA、18SrRNA和和28SrRNA的基因（的基因（rDNA）所在的部位。染色质）所在的部位。染色质上具有转录活性或已转录过的上具有转录活性或已转录过的rRNA基因部位伴有丰富的酸基因部位伴有丰富的酸性蛋白，含有性蛋白，含有SH基团和二硫键，可将基团和二硫键，可将AgNO3中的中的Ag+还原成还原成黑色的黑色的
16、Ag颗粒，银染强度与颗粒，银染强度与rRNA的转录活性有关。的转录活性有关。 G-显带显带 ： Giemsa染料使染色体的不同区段出染料使染色体的不同区段出现亮暗相间带纹。现亮暗相间带纹。 DNA上含高比例二硫键的氧化上含高比例二硫键的氧化态蛋白质区域，经过一系列处理后显示暗带，而另态蛋白质区域，经过一系列处理后显示暗带，而另一些含巯基的还原态蛋白质区域，为亲水性蛋白质，一些含巯基的还原态蛋白质区域，为亲水性蛋白质，对染料的亲和力低，所以不易显色，为明带区。对染料的亲和力低，所以不易显色，为明带区。人类染色体人类染色体 人类染色体 人类染色体人类染色体染色体带型图谱染色体带型图谱 second
17、ary constriction(次缢次缢痕痕)：染色体上除主缢痕外染色体上除主缢痕外的缢缩部位。的缢缩部位。Nucleolar organizing region (NOR, 核仁组织区核仁组织区)：细胞细胞核特定染色体的次缢痕处，核特定染色体的次缢痕处，含有含有rRNA基因的一段染色基因的一段染色体区域，与核仁的形成有关。体区域，与核仁的形成有关。satellite(随体随体) ：位于染色体位于染色体末端、圆形或圆柱形的染色末端、圆形或圆柱形的染色体片段，通过次缢痕与染色体片段，通过次缢痕与染色体的主要部分相连。体的主要部分相连。Telomere(端粒端粒)Functions:For th
18、e complete replication of chromosomeProtect the chromosomes from nuclease influencePrevent the ends of chromosomes from fusing Human mitotic chromosomes and karyotype(核型核型) and banding pattern(带型带型)Chromosome painting=multicolor FISH实验报告格式实验报告格式一、实验项目名称一、实验项目名称二、实验目的二、实验目的三、实验原理三、实验原理四、主要仪器设备及耗材四、主要
19、仪器设备及耗材五、实验步骤五、实验步骤六、实验数据及处理结果六、实验数据及处理结果七、思考讨论题或体会或对改进实验的建议七、思考讨论题或体会或对改进实验的建议显微结构图的绘制显微结构图的绘制 生物绘图中绘出的图要清楚，并正确的表示出形态构造的特点，生物绘图中绘出的图要清楚，并正确的表示出形态构造的特点，绘图注意事项如下：绘图注意事项如下： (1) 绘图要用黑色硬铅笔，不要用软铅笔或有色铅笔，一般用绘图要用黑色硬铅笔，不要用软铅笔或有色铅笔，一般用 2H 铅笔为宜。铅笔为宜。 (2) 图的大小及在纸上分布的位置要适当。一般画在靠近中央图的大小及在纸上分布的位置要适当。一般画在靠近中央稍偏左方，并
20、向右方引出注明各部名称的线条。各引出线条稍偏左方，并向右方引出注明各部名称的线条。各引出线条要整齐平列，各部名称写在线条右边。图的下方写图的名称要整齐平列，各部名称写在线条右边。图的下方写图的名称及放大倍数（及放大倍数（ 目镜倍数目镜倍数物镜倍数）。物镜倍数）。【作业作业】1绘制中期人染色体图，显示染色体的大小、数目绘制中期人染色体图，显示染色体的大小、数目和形态。和形态。2记录染色体总数，具有核仁组织区的染色体数。记录染色体总数，具有核仁组织区的染色体数。3说明说明G-显带原理。显带原理。4概述显微镜使用的注意事项。概述显微镜使用的注意事项。(3) 画图时先用轻淡小点或轻线条画出轮廓，再依照
21、轮廓一笔画图时先用轻淡小点或轻线条画出轮廓，再依照轮廓一笔画出与物象相符的线条。线条要清晰，比例要准确。较长的画出与物象相符的线条。线条要清晰，比例要准确。较长的线条要向顺手的方向运笔，或把纸转动再画。同一线条粗细线条要向顺手的方向运笔，或把纸转动再画。同一线条粗细相同，中间不要有断线或开叉痕迹，线条也不要涂抹。相同，中间不要有断线或开叉痕迹，线条也不要涂抹。 (4) 绘出的图要正确，观察时要把混杂物、破损、重叠等现象绘出的图要正确，观察时要把混杂物、破损、重叠等现象区别清楚，不要把这些现象绘上。区别清楚，不要把这些现象绘上。 (5) 图的明暗及浓淡，应用细点表示，不要采用涂抹方法。点图的明暗及浓淡，应用细点表示，不要采用涂抹方法。点细点时，要点成圆点，不要点成小撇。细点时，要点成圆点，不要点成小撇。 (6) 整个图要美观、整洁，还要特别注意准确性。整个图要美观、整洁，还要特别注意准确性。
