1、疟疾镜检专题知识讲疟疾镜检专题知识讲座座疟疾镜检专题知识讲座2二、血片制作及染色二、血片制作及染色疟疾镜检专题知识讲座3 用推片的左下角刮取血液用推片的左下角刮取血液4-5l4-5l（约火柴头大小），（约火柴头大小），将血滴涂于载片的中央偏右，将血滴涂于载片的中央偏右，由里向外划圈涂成直径为由里向外划圈涂成直径为0.8-10.8-1厘米的厚薄均匀的圆厘米的厚薄均匀的圆形厚血膜。形厚血膜。疟疾镜检专题知识讲座4用棉球抹净角上的血渍，用棉球抹净角上的血渍，再刮取血液再刮取血液1.5l1.5l约约1/41/4火柴头大小火柴头大小)，将推片的，将推片的一端置于血滴之前，当血一端置于血滴之前，当血液在载
2、玻片与推片之间向液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约两侧扩展至约2cm2cm宽时，宽时，使两玻片保持使两玻片保持25-3525-35角，角，从右向左迅速向前推成舌从右向左迅速向前推成舌状薄血膜，长约状薄血膜，长约2.5CM2.5CM。（一）薄血膜的涂制：（一）薄血膜的涂制：疟疾镜检专题知识讲座5疟疾镜检专题知识讲座6疟疾镜检专题知识讲座7疟疾镜检专题知识讲座8疟疾镜检专题知识讲座9疟疾镜检专题知识讲座10疟疾镜检专题知识讲座11疟疾镜检专题知识讲座12疟疾镜检专题知识讲座13疟疾镜检专题知识讲座15 染色较好的血片，肉眼看上去呈淡紫红色（不染色较好的血片，肉眼看上去呈淡紫红色（不应该出现蓝应该出
3、现蓝绿色或红色）；绿色或红色）；镜检红细胞呈淡红色，嗜酸性细胞的颗粒呈鲜镜检红细胞呈淡红色，嗜酸性细胞的颗粒呈鲜红色，淋巴细胞及疟原虫的胞浆呈蓝色或淡蓝红色，淋巴细胞及疟原虫的胞浆呈蓝色或淡蓝色，白细胞的核呈紫蓝色；色，白细胞的核呈紫蓝色；疟原虫的核呈红色，疟色素清晰可见，在显微疟原虫的核呈红色，疟色素清晰可见，在显微镜下仅有小量染液沉淀。镜下仅有小量染液沉淀。疟疾镜检专题知识讲座16疟疾镜检专题知识讲座17疟疾镜检专题知识讲座18(5)稀释和冲洗用水：稀释和冲洗用水：疟疾镜检专题知识讲座19疟疾镜检专题知识讲座20疟疾镜检专题知识讲座21疟疾镜检专题知识讲座22（4）染液的稀释浓度与染色时间
4、）染液的稀释浓度与染色时间 染液的浓染液的浓度高其着色就快而深，染色时间相对缩短，疟度高其着色就快而深，染色时间相对缩短，疟原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著，但颜色常原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著，但颜色常偏蓝；染液浓度过低则染色时间相对长一些，偏蓝；染液浓度过低则染色时间相对长一些，颜色偏酸红，薛氏点不明显或消失。颜色偏酸红，薛氏点不明显或消失。（5）稀释和冲洗用水：稀释和冲洗用水：为使厚、薄血膜着色为使厚、薄血膜着色较好，应使稀释的染液呈中性或稍偏碱性，故较好，应使稀释的染液呈中性或稍偏碱性，故应用应用pH7.0pH7.2的水稀释。当染色太蓝，可的水稀释。当染色太蓝，可用用pH较低的缓冲水冲
5、洗；如染色太红，则用较低的缓冲水冲洗；如染色太红，则用pH较高的缓冲液冲洗；如染色太深，可延长冲较高的缓冲液冲洗；如染色太深，可延长冲洗时间，予以校正。洗时间，予以校正。疟疾镜检专题知识讲座23中性白细胞酸性球血小板大单核球淋巴球红血球疟疾镜检专题知识讲座24（三）（三）厚薄血膜的优缺点及其适用范围厚薄血膜的优缺点及其适用范围薄血膜薄血膜 用血量约为2l，涂制成2cm宽4cm长面积的薄血膜。由于在制备过程中，血片通常经甲醇固定，使红细胞及其内疟原虫的形态保持完整，便于疟原虫虫种的鉴定。惟由于用血量少，为保证检测的敏感性，常耗时较多，似不适用于大规模调查。即使在医院的化验室，由于要求在短时间内作
6、出诊断，因而极有可能出现漏诊。疟疾镜检专题知识讲座25 厚血膜厚血膜 用血量约为10l20l。涂制成直径1cm的厚血膜由于在制备过程中红细胞已溶解，疟原虫在形态上仍可分辨，但胞浆和胞核不可避免地形成一定程度的固缩。受影响较大的有大滋养体、裂殖体的形态。在镜检厚血膜时，一般门诊须检查2001 000个油镜视野（相当于0.52.5l血量），才能确保镜检的敏感性和可重复性。通常的敏感性可达约1020个原虫/l血。由于厚血膜与薄血膜相比血量大，须查范围小，节省时间，阳性检出率较高。厚血膜能查出疟原虫数是薄血膜的1525倍。所以，我们推荐疟疾诊断应以检查厚血膜为主。在普查时均应查完整个厚血膜，未查见疟原
7、虫则判为阴性。疟疾镜检专题知识讲座26疟疾镜检专题知识讲座27 三、三、厚血膜的疟原虫计数厚血膜的疟原虫计数 根据预先测定的白细胞数目计算出每微升血液中疟原虫的数目。根据预先测定的白细胞数目计算出每微升血液中疟原虫的数目。在制作厚血膜的同时，使用在制作厚血膜的同时，使用CoulterCoulter计数器或血球计确定每微升血计数器或血球计确定每微升血液中的白细胞数。然后镜检厚血膜，计数同一视野中的疟原虫数和液中的白细胞数。然后镜检厚血膜，计数同一视野中的疟原虫数和白细胞数，直到所计数的白细胞数达到确定的数值为止白细胞数，直到所计数的白细胞数达到确定的数值为止(如果疟原如果疟原虫密度较高，计数虫密度较高，计数100100200200个白细胞即可，但在疟原虫密度很低时，个白细胞即可，但在疟原虫密度很低时，计数白细胞数需达计数白细胞数需达10001000个个)。用下式算出疟原虫密度：用下式算出疟原虫密度：疟原虫数疟原虫数/白细胞数白细胞数白细胞数白细胞数/l/l血血=疟原虫数疟原虫数/l/l血。血。如果无法进行白细胞计数，则可按常规估计白细胞数。国外最如果无法进行白细胞计数，则可按常规估计白细胞数。国外最常采用的数值是常采用的数值是80008000白细胞白细胞/l/l血血,国内常用国内常用60006000白细胞白细胞/l/l血。血。疟疾镜检专题知识讲座28疟疾镜检专题知识讲座29
