1、微生物的实验室培养医学知识二二.实验操作实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌大肠杆菌2微生物的实验室培养医学知识（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g将上述物质溶解后，添加水，定容至1000mL3微生物的实验室培养医学知识（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算：计算：根据配方比例，计算根据配方比例，计算100mL100mL培养基各成分用量培养基各成分用量牛肉膏：0.5g蛋白胨
2、：1.0gNaCl：0.5g琼脂：2.0g2.2.称量：称量：准确称取各成分准确称取各成分4微生物的实验室培养医学知识电子天平（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基2.2.称量：称量：准确称取各成分准确称取各成分注意：称取牛肉膏和蛋白胨时注意：称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖称后要及时盖上瓶盖牛肉膏：0.5g蛋白胨：1.0gNaCl：0.5g琼脂：2.0g5微生物的实验室培养医学知识（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基3.3.溶化：溶化：加水加热溶化牛肉膏加水加热溶化牛肉膏牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，溶化后取出
3、称量纸牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，溶化后取出称量纸加入蛋白胨和氯化钠，玻棒搅拌溶解加入蛋白胨和氯化钠，玻棒搅拌溶解加入琼脂，加入琼脂，不断搅棒不断搅棒熔解熔解用蒸馏水定容到用蒸馏水定容到100mL100mL目的：防止琼脂糊底而导致烧杯破裂目的：防止琼脂糊底而导致烧杯破裂6微生物的实验室培养医学知识（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基4.4.调调 pHpH：用用1mol/L1mol/L的的NaOHNaOH溶液调节溶液调节pHpH至至偏碱性偏碱性（pH7.6pH7.6）pH试纸7微生物的实验室培养医学知识（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
4、5.5.灭菌：灭菌：v将配置好的将配置好的培养基培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭高压蒸气灭菌锅菌锅内灭菌内灭菌151530min30min8微生物的实验室培养医学知识（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基5.5.灭菌：灭菌：v将配置好的将配置好的培养基培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭高压蒸气灭菌锅菌锅内灭菌内灭菌151530min30minv将将培养皿培养皿用旧报纸包紧，放入用旧报纸包紧
5、，放入干热灭菌箱干热灭菌箱内灭内灭菌菌2h2h9微生物的实验室培养医学知识（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基6.6.倒平板：倒平板：待培养基冷却到待培养基冷却到5050左右左右时，在时，在酒精灯火焰酒精灯火焰附近附近倒平板倒平板讨论讨论1 1：你用什么办法来估计培养基的温度？用手触摸锥形瓶，感觉温度刚好不烫手用手触摸锥形瓶，感觉温度刚好不烫手10微生物的实验室培养医学知识倒平板操作倒平板操作1 11.1.右手右手拿装有培养拿装有培养基的锥形瓶，基的锥形瓶，左手左手拨出棉塞拨出棉塞11微生物的实验室培养医学知识倒平板操作倒平板操作2 22.2.右手拿锥形瓶，右手拿锥
6、形瓶，使使瓶口瓶口迅速通过火迅速通过火焰焰讨论讨论2 2：为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？进行灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基进行灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基12微生物的实验室培养医学知识倒平板操作倒平板操作3 33.3.用左手的拇指和用左手的拇指和食指将培养皿打开食指将培养皿打开一条一条稍大于瓶口的稍大于瓶口的缝隙缝隙，右手将锥形，右手将锥形瓶中的培养基瓶中的培养基(约约10-20mL)10-20mL)倒入培养倒入培养皿，左手皿，左手立即盖上立即盖上培养皿的皿盖培养皿的皿盖13微生物的实验室培养医学知识倒平板操作倒平板操作4 44.4.等待平板等待平板冷却凝冷却凝固固（大约（大
7、约5-10min5-10min）后后，将平板，将平板倒过来倒过来放置放置讨论讨论3 3：平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结出水珠，凝固后的培平板冷凝后，皿盖上会凝结出水珠，凝固后的培养基表面的温度较高，将平板倒置，养基表面的温度较高，将平板倒置，既可防止皿盖上既可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，又可避免培养基中水的水珠落入培养基，造成污染，又可避免培养基中水分过快地挥发分过快地挥发14微生物的实验室培养医学知识讨论讨论4 4：在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？不能，空气中的微生物可能在皿盖与皿底不能，
8、空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，造成污染之间的培养基上滋生，造成污染注意：倒平板时，不能将培养基溅在皿盖与皿注意：倒平板时，不能将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位底之间的部位倒平板操作倒平板操作15微生物的实验室培养医学知识（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌1.1.微生物的分离与纯化：微生物的分离与纯化：从从混杂混杂微生物群体中获得微生物群体中获得只含只含某一种或某某一种或某一株一株微生物的过程微生物的过程，称为微生物的分离与纯化 利用固体培养基，将混杂细菌分散或稀释成单个细胞，使其繁殖成单个菌落2.2.微生物接种方法：微生物接种方法：平板划线法平板划线法 稀释涂布平板法稀释
9、涂布平板法 工具：接种环17微生物的实验室培养医学知识平板划线操作平板划线操作18微生物的实验室培养医学知识平板划线操作平板划线操作19微生物的实验室培养医学知识平板划线操作平板划线操作土壤稀释液土壤稀释液20微生物的实验室培养医学知识平板划线操作平板划线操作21微生物的实验室培养医学知识平板划线操作平板划线操作22微生物的实验室培养医学知识平板划线操作平板划线操作23微生物的实验室培养医学知识平板划线操作平板划线操作用力不能过大24微生物的实验室培养医学知识平板划线操作平板划线操作25微生物的实验室培养医学知识平板划线操作平板划线操作区域一区域二区域三区域四区域五26微生物的实验室培养医学知识平板划线操作平板划线操作27微生物的实验室培养医学知识思考：思考：平板划线操作的整个过程，是如何实现纯化大肠杆菌的？28微生物的实验室培养医学知识平板划线操作平板划线操作区域一区域二区域三区域四区域五菌种多菌种多菌种少菌种少菌种减少菌种减少菌种减少菌种减少菌种减少菌种减少菌种最少菌种最少29微生物的实验室培养医学知识30微生物的实验室培养医学知识
