1、色谱学医学知识培训色谱学医学知识培训GSCGLCGASSFCNPRPIECGPCGFCSECColumnTLCPaperPlanarLIQUIDCHROMATOGRAPHY色谱的分类2色谱学医学知识培训1,3:normal saturated chambers;2,4:ultramicro cham2bers(totally closed layer,w ithout overpressure);5,6,7:OPLC chambers(plates w ith11,5,and3m particle sizes,respectively).加压薄层色谱法（Overpressured Layer
2、Chromatography）3色谱学医学知识培训Importance of Theoretical Plates(N)4色谱学医学知识培训HPLC Chromatograph of Muscadine Grape Juice5色谱学医学知识培训Water-Soluble Vitamins 1.Niacinamide 2.Pyridoxine NCONH2 NCH2OHCH2OHHOH3C 3.Riboflavin NNNHNCH2HOCHHOCHHOCHCH2OHOOH3CH3C ClNSNNH3CCH2NH2CH3CH2CH2OH4.Thiamin 6色谱学医学知识培训Water-Solu
3、ble Vitamins05101520Column:u Bondapak C18 Solvent:MeOH Sample:Water-Soluble VitaminsInject12347色谱学医学知识培训高效液相色谱法高效液相色谱法8色谱学医学知识培训HPigherformanceLiquidChromatography9色谱学医学知识培训HPighressureLiquidChromatography10色谱学医学知识培训HPighricedLiquidChromatography11色谱学医学知识培训概述 高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分
4、析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。为了更好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面进行比较：12色谱学医学知识培训 1 1高效液相色谱法与经典液相色谱法高效液相色谱法与经典液相色谱法 高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由于经典色谱是重力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱配备了高压输液设备，流速最高可达 103cmmin
5、-1.例如分离苯的羟基化合物，7个组分只需1min就可完成。对氨基酸分离，用经典色谱法，柱长约170cm，柱径0.9cm，流动相速度为30cm3h-1，需用20多小时才能分离出20种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需lh之内即可完成。又如用25cm0.46cm的LichrosorbODS(5)的柱，采用梯度洗脱，可在不到0.5h内分离出尿中104个组分.13色谱学医学知识培训高效液相色谱法特点：高效液相色谱法特点：1.高压：一般：150300kg/cm2 甚至：500kg/cm22.高速：两相间交换：千分之几秒 分析时间较经典法少很多(几分几十分钟)3 高效：气相：2000塔板/米 液相：500
6、0塔板/米4.高灵敏度：紫外检测器：109g数量级 荧光检测器：1011g(百万分之几）试样量小（几微升）5.高选择性：可分析在性质上极为相似化合物 （手性化合物、同位素、同分异构、空间异构）14色谱学医学知识培训 与气相色谱比较：相同点：都是重要的分离、分析手段 气相的基本理论（塔板理论、定性定量方法）基本术语（色谱参数、色谱图、色谱柱效）不同点：应用范围：气相：易挥发、热稳定 液相：不易挥发、热不稳定但具有一定 溶解性化合物，不适合气体。流动相作用：气相：运载样品，不影响色谱分离 液相：运载样品，参与、影响色谱分离，且起主要作用。分析样品：气相：破坏样品，不能回收。液相：不破坏样品，能回收
7、。说明：15色谱学医学知识培训16色谱学医学知识培训高效液相色谱高效液相色谱IV 应用应用I 高效液相色谱仪高效液相色谱仪 II 液相色谱的分离模式液相色谱的分离模式 III 液相色谱色谱化学键合固定相液相色谱色谱化学键合固定相17色谱学医学知识培训高效液相色谱仪 高效液相色谱仪的结构一般可分为4个主要部分：高压输液系统，进样系统，分离系统和检测系统。此外还配有辅助装置：如梯度淋洗，自动进样及数据处理等。其工作过程如下：首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器
8、，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。18色谱学医学知识培训19载气系统载气系统进样系统进样系统色谱柱色谱柱检测系统检测系统温控系统温控系统进样系统进样系统高压输液装置高压输液装置分离系统分离系统检测系统检测系统色谱仪器系统比较GC System19色谱学医学知识培训I 高效液相色谱仪高效液相色谱仪 高效液相色谱仪的流程 高效液相色谱仪的高压泵 高效液相色谱仪的检测器 高效液相色谱仪的生产厂家 高效液相色谱仪的分离柱20色谱学医学知识培训流 程21色谱学医学知识培训仪器装置仪器装置液相色谱仪可分为四大系统：泵系统泵系统 进样系统进样系统 分离系统分离系统 检测系统检测系统 2
9、2色谱学医学知识培训泵系统23色谱学医学知识培训泵系统发展趋势高效：填料颗粒分离效率 柱压降泵的工作压力分析时间短：更快流速柱压降减少洗脱液用量液相色谱的多元洗脱系统24色谱学医学知识培训泵的分类泵的分类恒流泵恒流泵恒压泵恒压泵往复式柱塞泵往复式柱塞泵注射泵注射泵气动压力放大泵气动压力放大泵25色谱学医学知识培训进样系统 高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多（约530cm），所以柱外展宽（又称柱外效应）较突出。柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起的峰展宽，主要包括进样系统、连接管道及检测器中存在死体积。柱外展宽可分柱前和柱后展宽。进样系统是引起往前展宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对进样技术要求较严
10、。进样阀进样阀26色谱学医学知识培训 六通阀六通阀27色谱学医学知识培训高效液相色谱仪的色谱柱高效液相色谱仪的色谱柱28色谱学医学知识培训球形填料球形填料不规则形填料不规则形填料29色谱学医学知识培训高效液相色谱仪的检测器高效液相色谱仪的检测器 紫外可见分光光度检测器 示差折光检测器 荧光检测器 二极管阵列检测器 质谱检测器 电化学检测器30色谱学医学知识培训 紫外可见分光光度检测器紫外可见分光光度检测器Beer定律定律A=b C 特点特点:应用广泛、灵敏、线性宽应用广泛、灵敏、线性宽温度不敏感温度不敏感流动相流速不敏感、可梯度流动相流速不敏感、可梯度10-9 g/ml31色谱学医学知识培训
11、二极管阵列检测器二极管阵列检测器Beer定律定律A=b C 特点特点:可得到吸收光谱可得到吸收光谱定性功能强定性功能强峰纯度检验峰纯度检验10-8 g/ml32色谱学医学知识培训光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器33色谱学医学知识培训 荧光检测器荧光检测器Stokes荧光荧光 F=2.3 QKI0 bC10-12 g/ml特点特点:特征性强、灵敏特征性强、灵敏34色谱学医学知识培训示差折光检测器示差折光检测器示差折光光路结构示意图R=Z C（ni-n0）10-6 g/ml35色谱学医学知识培训6 高效液相色谱仪的生产厂家高效液相色谱仪的生产厂家WatersAgillentShimadzP
12、erkin ElmerVarian大连依利特公司大连依利特公司北京东西电子研究所北京东西电子研究所36色谱学医学知识培训37色谱学医学知识培训高效液相色谱仪高效液相色谱仪LC-2010HT岛津（香港）有限公司岛津（香港）有限公司38色谱学医学知识培训产品名称：液相色谱仪器大连依利特返回39色谱学医学知识培训II 液相色谱的基本分离模式液相色谱的基本分离模式反相液相色谱反相液相色谱正相液相色谱正相液相色谱离子交换色谱离子交换色谱离子色谱离子色谱亲和作用亲和作用色色谱谱体积排阻色谱体积排阻色谱疏水作用色谱疏水作用色谱40色谱学医学知识培训1 1 含义含义 固定相固定相-极性，流动相极性，流动相-非
13、极性非极性2 2 分离机理分离机理溶质和固定相及流动相之间的分子作溶质和固定相及流动相之间的分子作用力，其中氢键力和静电力起着重要用力，其中氢键力和静电力起着重要的作用的作用正相液相色谱正相液相色谱41色谱学医学知识培训3 3 正相色谱的色谱柱（固定相）正相色谱的色谱柱（固定相）多孔硅胶多孔硅胶键合极性固定相键合极性固定相氰基氰基CNCN、氨基、氨基NH2NH2、二醇基二醇基（OHOH）2 2、硝基、硝基NO2NO2、醚链、醚链OO等等42色谱学医学知识培训NORMAL PHASE 1980 2004 30%5%Silica Gel 47%44%Silica based bonded phas
14、esDiolAminoCyano 3%1%Alumina 20%50%Chiral Bonded Phases43色谱学医学知识培训4 4 正相色谱的流动相正相色谱的流动相常用己烷、环己烷，乙醚、四氯化碳、二氯甲烷、常用己烷、环己烷，乙醚、四氯化碳、二氯甲烷、甲醇、乙腈、异丙醇、四氢呋喃等甲醇、乙腈、异丙醇、四氢呋喃等44色谱学医学知识培训正相色谱常用溶剂的极性参数及其溶剂冲洗强度正相色谱常用溶剂的极性参数及其溶剂冲洗强度溶剂溶解度溶剂极性溶剂强度正己烷7.30.10环己烷8.20.20.03乙醚7.42.80.43四氯化碳8.61.60.11二氯甲烷9.63.10.30甲醇14.55.10.
15、70乙腈12.15.80.52异丙醇12.03.90.60四氢呋喃9.14.10.5345色谱学医学知识培训5 正相色谱的应用正相色谱的应用主要应用于甾醇类、类脂化合物、磷脂类化合物、脂肪酸以及其他有机物46色谱学医学知识培训 环境中有机氯农药残留量分析环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 50m)流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm2.5mm(内径)检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。47色谱学医学知识培训反相色谱reversed phase chromatography,RPC固定相：固定相：非极性的反相介质，即为疏水性介
16、质(R1,R2多为甲基，R为C4，C8，C18烷基或苯基，其中C18硅烷化制备的试剂最多，统称为ODS Octadecyl silica)。烷基化密度：烷基化密度：45%，55%的羟基用的羟基用三甲基氯硅烷覆盖，使表面完全非极性化。溶质在介质上的分配系数处决于溶质的疏水性，疏水性大，溶质在介质上的分配系数处决于溶质的疏水性，疏水性大，m高。高。流动相：流动相：极性有机溶剂的水溶液(甲醇,乙晴,异丙醇、正丙醇和四氢呋喃等)洗脱：洗脱：有机溶剂增加。48色谱学医学知识培训1 1 含义含义 固定相固定相-非极性，流动相非极性，流动相-极性极性A A 溶质在填料表面的烃类和流动相之间进行分配溶质在填料
17、表面的烃类和流动相之间进行分配B B 溶质在吸附于填料表面烃类上的溶质在吸附于填料表面烃类上的“改性固定相改性固定相”和流动相之间进行分配和流动相之间进行分配C C 溶质在吸附于填料表面烃类分子上，类似于吸附色谱溶质在吸附于填料表面烃类分子上，类似于吸附色谱2 分离机理分离机理反相液相色谱反相液相色谱49色谱学医学知识培训3 3 反相色谱的色谱柱（固定相）反相色谱的色谱柱（固定相）常用的固定相常用的固定相-非极性的化学键合相。非极性的化学键合相。C18C18，C8C8，C4C4等。等。多孔硅胶多孔硅胶-球形、不规则形球形、不规则形填料基质填料基质高分子聚合物高分子聚合物-苯乙烯苯乙烯-二乙烯基
18、苯的共聚物二乙烯基苯的共聚物氧化物氧化物-氧化锆、氧化铝等氧化锆、氧化铝等50色谱学医学知识培训反相HPLC-固相载体化学键合相 C-2 Ethyl Silyl -Si-CH2-CH3 CNCyanopropyl Silyl -Si-(CH2)3-CN C-8Octyl Silyl -Si-(CH2)7-CH351色谱学医学知识培训80%80%Octadecylsilica(ODS,C18)Octadecylsilica(ODS,C18)10%10%Octylsilica(C8)Octylsilica(C8)5%5%Butylsilica(C4)Butylsilica(C4)3%3%Pheny
19、lPhenyl2%2%Cyano(CN)Cyano(CN)52色谱学医学知识培训商品牌号商品牌号官能团官能团粒度粒度um备注备注Techsphere C22Finepak sil C18LiChrosorb RP-18Nucleosil C18Bondpark C18Polygosil C18Alltech C18Zorbax C18Partisil-ODS1Partisil-ODS2Partisil-ODS3Superisorb-ODSTechsphere LiChrosorb RP-8Polygosil C8Alltech C8Zorbax C8Nucleosil C8Zorbax TMS
20、LiChrosorb RP-2RSIL C3Apex C2Techsil C2Spherisorb C6Hchrom C6Chromegabond C6C22C18C18C18C18C18C18C18C18C18C18C18C8C8C8C8C8C8三甲基三甲基C2C3C2C2C6C6C6105,105,105103,5,105101010105,105,10103,5,7,101053,5,7,101010105,1055,105510%C5%C22%C15%C10%C11%C15%C5%C15%C10%C10%C13%C10%C15%C10%C7%C3%C10%C10%C10%C10%C反相
21、色谱的色谱柱反相色谱的色谱柱53色谱学医学知识培训4 4 反相色谱的流动相反相色谱的流动相 通常用的有水、甲醇、乙醇、乙睛等，通常用的有水、甲醇、乙醇、乙睛等，可用醋酸、磷酸调节可用醋酸、磷酸调节PHPH值，用三乙胺作为值，用三乙胺作为碱性添加剂改善色谱峰的形状。碱性添加剂改善色谱峰的形状。54色谱学医学知识培训溶剂溶剂分子分子量量粘度粘度比重比重折光折光指数指数沸点沸点UV波长波长极性极性四氢呋喃四氢呋喃丙酮丙酮异丙醇异丙醇乙睛乙睛乙醇乙醇甲醇甲醇水水二氧六环二氧六环72.158.160.141.046.132.018.088.10.500.322.390.351.190.581.001.2
22、60.880.790.780.780.780.790.991.031.4081.3591.3751.3421.3591.3261.3331.42066.056.582.082.078.065.01001012103302051902052051702154.15.13.95.84.35.110.2反相色谱常用流动相溶剂的物理性质反相色谱常用流动相溶剂的物理性质55色谱学医学知识培训5 5 反相色谱法具有以下特点反相色谱法具有以下特点（1 1）柱子使用寿命较长）柱子使用寿命较长 （2 2）流动相可灵活选择）流动相可灵活选择（3 3）应用范围特别广泛）应用范围特别广泛 56色谱学医学知识培训反相色
23、谱的保留机理疏溶剂理论双保留机理分离对象：同系物：烷烃数tR 直链tR支链tR化合物极性 tR固定相对组分保留的影响：碳链长度：碳链 tR烷基覆盖量：覆盖量 tR57色谱学医学知识培训反相色谱中流动相选择水有机改善剂常用：甲醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环极性：有机改善剂水洗脱能力：有机改善剂水极性顺序：甲醇乙腈二氧六环四氢呋喃洗脱顺序：水甲醇乙腈二氧六环四氢 呋喃58色谱学医学知识培训反相键合相色谱的优点流动相可选用水溶性 .样品的溶解度范围提高 .流动相可变性大 .柱重现性好固定相表面化学能低 .平衡容易 .梯度洗脱固定相选择多固定相耐溶剂冲洗 热稳定性好59色谱学医学知识培训缺点：流动相PH
24、范围要控制（PH28）PH太低：Si-C键易断裂 PH太高：硅胶基质易溶解游离的硅羟残基影响分离 60色谱学医学知识培训6 6 反相液相色谱的应用反相液相色谱的应用占液相色谱的占液相色谱的70-80%70-80%小分子有机物、农药、氨基酸、低聚核苷酸、肽小分子有机物、农药、氨基酸、低聚核苷酸、肽生物大分子核酸、蛋白质等（生物大分子核酸、蛋白质等（50KD50KD）61色谱学医学知识培训稠环芳烃的分析稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 C 柱 压：70 104
25、Pa 检测器：紫外检测器63色谱学医学知识培训Reversed-Phase vs.Normal Phase05101520250123456789100123456780123456789100510152025012345678910012345678910012345678910Separation of 2-Me-Phenol and 4-Me-Phenol in RP and NPSeparation of 2-Me-Phenol and 4-Me-Phenol in RP and NPReversed-PhaseMeOH/Water,Luna-C18Normal PhaseHexan
26、e/IPA,Luna-Si90/1060/4095/598/264色谱学医学知识培训R1CH3R2OHOCH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3TocopherolsTocopherolsOCH3CH3CH3CH3CH3OHCH3R1R2TocopherolsTocopherolsTocotrienolsTocotrienolsR R1 1R R2 2a-Tocopherol(a-T)a-Tocotrienol(a-3)_MeMeb-Tocopherol(b-T)b-Tocotrienol(b-3)MeHg-Tocopherol(g-T)g-Tocotrienol(g-3)HMed-Toco
27、pherol(d-T)d-Tocotrienol(d-3)HHTocotrienolsGenesis silica column(250 x 4.6 mm,4 m).Mobile phase:Hexane-1,4-dioxane(96:4).J.Chromatogr.A,881(2000)217-227Separation of synthetic tocopherols by reversed phase HPLC(280 nm):1)d-tocopherol,2)g-tocopherol,3)b-tocopherol,4)a-tocopherol,5)a-tocopheryl acetat
28、eFood Chemistry,76(2002)357 362.Experimental Comparison of NP and RP HPLC65色谱学医学知识培训 液液色谱法的固定相液液色谱法的固定相 由载体与固定液构成由载体与固定液构成 载体载体:全多孔型或薄壳型全多孔型或薄壳型 涂渍适当的固定液涂渍适当的固定液 化学键合固定相化学键合固定相液液-液分配色谱法固定相液分配色谱法固定相66色谱学医学知识培训67色谱学医学知识培训利用化学反应的方法通过化学键把各种不同的有机分子（固利用化学反应的方法通过化学键把各种不同的有机分子（固定液）键合到载体表面，这样制得的填料称化学键合相，简定液）
29、键合到载体表面，这样制得的填料称化学键合相，简称键合相。其优点是：称键合相。其优点是：使用过程中固定液不遗失；化学性能稳定，在使用过程中固定液不遗失；化学性能稳定，在pH28的的溶液中不变质；热稳定性好，一般在溶液中不变质；热稳定性好，一般在70以下稳定；选以下稳定；选择性好；利于梯度洗脱。择性好；利于梯度洗脱。化学键合固定相化学键合固定相68色谱学医学知识培训 这类键合相表面键合的是极性很小的烃基，如十八这类键合相表面键合的是极性很小的烃基，如十八烷基烷基(C18）、辛烷基（）、辛烷基（C8）、甲基与苯基等。其中以十）、甲基与苯基等。其中以十八烷基硅烷键合硅胶（或称八烷基硅烷键合硅胶（或称O
30、DS）应用最为广泛，在）应用最为广泛，在化学键合相中约占化学键合相中约占 80。它适合分离非极性或极性小。它适合分离非极性或极性小的试样。在应用中可选用极性较强的溶剂，如水。甲的试样。在应用中可选用极性较强的溶剂，如水。甲醇、乙醇或无机盐的缓冲液作流动相。醇、乙醇或无机盐的缓冲液作流动相。十八烷基键合相（十八烷基键合相（ODS键合相）是将十八烷基氯硅键合相）是将十八烷基氯硅烷试剂与硅胶表面的硅羟基，经多步反应生成烷试剂与硅胶表面的硅羟基，经多步反应生成ODS键键合相。合相。非极性键合相非极性键合相69色谱学医学知识培训 H H H O O O O Si Si-O-Si Si O Si 游离型硅
31、羟基 氢基化硅羟基 硅氧桥 图 4-8 硅胶的表面结构 晶体电阵计算晶体电阵计算:硅胶表面的硅羟基密度为硅胶表面的硅羟基密度为8个个/nm2。化学法测定化学法测定:5个个/nm2，70色谱学医学知识培训 Si-OH+HO-R Si-OR+H2O 它的反应条件是在它的反应条件是在150-250度下反应度下反应3-8小时小时HPLC早期的一种正相键合填料早期的一种正相键合填料Si-O-Si键型（硅胶与醇类物质反应）键型（硅胶与醇类物质反应）71色谱学医学知识培训 Si-OH+SOCl2 Si-Cl+SO2+HCl Si-Cl+R-NH2 Si-NHR+HClSi-N键型（硅胶与胺类物质反应）键型（
32、硅胶与胺类物质反应）72色谱学医学知识培训 利用格里亚反应合成固定相。利用格里亚反应合成固定相。Si-Cl+RXMg Si-R+MgXCl 稳定性相当好稳定性相当好!Si-C键型（硅胶与卤代烷反应）键型（硅胶与卤代烷反应）73色谱学医学知识培训 Si-OH+X-Si(R)(R1)(R2)Si-O-Si(R)(R1)(R2)+HX反应式中，反应式中，X为为Cl、CH3O或或C2H5O，R1、R2可以与可以与X相同，也可以是甲基。相同，也可以是甲基。主导键合类型，具有良好热、化学稳定性，主导键合类型，具有良好热、化学稳定性，pH 2-9Si-O-Si-C键型（硅胶与有机硅烷反应）键型（硅胶与有机硅
33、烷反应）74色谱学医学知识培训75色谱学医学知识培训表 4-3 常用硅烷化试剂 名称 分子式 分子量 沸点 度/kPa 备注 三甲基氯硅烷（CH3）3SiCl 108.7 57/101 丁基二甲基氯硅烷 C4H9（CH3）2SiCl 150.7 140/101 C2反相 辛基二甲基氯硅烷 C8H17（CH3）2SiCl 206.7 105/3 C8反相 十八烷基二甲基氯硅烷 C18H37（CH3）2SiCl 346.7 140-5/0.013 C2反相 苯基二甲基氯硅烷 C6H5（CH3）2SiCl 170.5 87/2.4 二甲基二氯硅烷（CH3）2SiCl2 129.1 70 二丁基二氯硅
34、烷（C4H9）2SiCl2 213.2 212 辛基甲基二氯硅烷 C8H17（CH3）SiCl2 227.3 94/4.8 十八烷基甲基二氯硅烷 C18H37（CH3）SiCl2 367.5 185/0.35 苯基甲基二氯硅烷 C6H5（CH3）SiCl2 191.1 205 甲基三氯硅烷（CH3）SiCl3 149.0 66 丁基三氯硅烷（C4H9）2SiCl3 191.6 142-3 辛基三氯硅烷 C8H17 SiCl3 247.7 224/97.3 十八烷基三氯硅烷 C18H37SiCl3 388.0 160-2/0.4 苯基三氯硅烷 C6H5 SiCl3 211.6 201 环氧丙氧基
35、丙基三乙氧基硅烷（C2H5O）3Si（CH3）2 O CH2（C2H3O）263.3 260 凝胶离子交换 氰基乙基二甲基氯硅烷 CNC2H4（CH3）2SiCl 146.6 83/2.4 氨丙基三乙氧基硅烷 NH2（CH2）3Si（OC2H5）3 221.4 g-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷 CH2C（CH3）COO（CH2）3 Si（OCH3）3 248.3 g-巯基丙基三乙氧基硅烷 HS（CH2）3Si（OC2H5）3 238.3 亲和 六甲基二硅氮烷（CH3）3SiNHSi（CH3）3 151.3 76色谱学医学知识培训表4-4 十八烷基键合固定相反应条件 反应时间（h）0.8 2.5 5 6.5 18 24 C（%）表面浓度（mol/m2）3.0 3.6 4.2 6.5 10.5 11 0.36 0.45 0.52 0.84 1.46 1.54 反应温度（度）110 138 170 反应溶剂 C（%）反应时间（h）甲苯 二甲苯 硅烷本身 10 15 23 18 15 2 77色谱学医学知识培训
